羅進(jìn)芳 劉 明 楊 虹 錢海兵 （貴州中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院藥理學(xué)教研室，貴陽(yáng) 550025）

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis， RA）是一種慢性炎癥性自身免疫性疾病，基因和環(huán)境因素均會(huì)影響其發(fā)生發(fā)展［1］。RA 疾病發(fā)展過(guò)程中，多種因素會(huì)打破處于動(dòng)態(tài)平衡的M1/M2 型巨噬細(xì)胞，引起數(shù)量和比例失衡，導(dǎo)致M1 型促炎巨噬細(xì)胞不斷增多，從而加劇炎癥反應(yīng)［2-3］。

M1巨噬細(xì)胞主要分泌促炎細(xì)胞因子，如TNF-α引起關(guān)節(jié)損傷，抑制M1 型巨噬細(xì)胞極化可以改善關(guān)節(jié)炎［4］。M2 巨噬細(xì)胞釋放大量抗炎細(xì)胞因子促進(jìn)組織重塑和修復(fù)，抑制RA 的進(jìn)展［5］。因而，研究中醫(yī)藥調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞極化發(fā)揮抗炎作用治療RA 具有重要臨床指導(dǎo)意義和研究?jī)r(jià)值。

續(xù)斷，又名川續(xù)斷，是川續(xù)斷科植物川續(xù)斷（Dispsalus asper wall.ex.Henry）的干燥根，具有補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨等療效［6］。續(xù)斷常作為骨傷科用藥被用于骨折愈合、風(fēng)濕痹痛等的治療［7］。研究表明，續(xù)斷總皂苷對(duì)膝骨關(guān)節(jié)炎模型大鼠具有明顯的保護(hù)作用［8］。川續(xù)斷皂苷Ⅵ是續(xù)斷的主要有效成分之一，研究表明，川續(xù)斷皂苷Ⅵ可以抑制一氧化氮合酶（iNOS）和一氧化氮（NO）發(fā)揮其抗炎作用［9］。

但目前未見川續(xù)斷皂苷Ⅵ通過(guò)調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞極化發(fā)揮其抗炎作用的研究報(bào)道。本研究以巨噬細(xì)胞RAW264.7 為實(shí)驗(yàn)研究對(duì)象，探討川續(xù)斷皂苷Ⅵ對(duì)脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）或IL-4 誘導(dǎo)條件下RAW264.7 巨噬細(xì)胞向M1/M2 極化的調(diào)節(jié)作用和機(jī)制，為川續(xù)斷皂苷Ⅵ抗炎作用提供更多參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 細(xì)胞株 RAW264.7 細(xì)胞株為小鼠來(lái)源巨噬細(xì)胞株，購(gòu)自武漢大學(xué)中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心。

1.1.2 主要試劑 川續(xù)斷皂苷Ⅵ，分析標(biāo)準(zhǔn)品，HPLC≥98%，購(gòu)于德斯特生物技術(shù)有限公司；胎牛血清、DMEM購(gòu)于Gibco公司；LPS購(gòu)于Sigma公司；IL-4購(gòu)于Peprotech 公司；TNF-α 和IL-6 ELISA 檢測(cè)盒購(gòu)于eBioscience 公司；RNA 提取試劑盒、BCA 蛋白濃度測(cè)定試劑盒、SDS-PAGE 凝膠制備試劑盒購(gòu)于北京索萊寶公司；RNA 逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、SYBR Green qPCR Master Mix 均購(gòu)于Roche 公司；精氨酸酶-1（Arginase-1，Arg-1）、iNOS、TNF-α、HO-1 及內(nèi)參βactin 引物均由生工生物工程股份有限公司合成；iNOS一抗購(gòu)于Cell Signaling Technology公司；β-actin一抗購(gòu)于Santa Cruz BioTechnology 公司；山羊抗兔二抗、山羊抗鼠二抗購(gòu)于Absin；StarSignal 超敏化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒購(gòu)于北京索萊寶公司。

1.2 方法

1.2.1 RAW264.7 細(xì)胞培養(yǎng) RAW264.7 細(xì)胞用含有10%胎牛血清、1 000 U/L 青霉素和鏈霉素的完全DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)，置于5%CO2、37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱進(jìn)行常規(guī)傳代培養(yǎng)。RAW264.7細(xì)胞生長(zhǎng)至90%左右融合狀態(tài)時(shí)進(jìn)行傳代。常規(guī)傳代培養(yǎng)3 次后，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.2.2 MTT 方法檢測(cè)川續(xù)斷皂苷Ⅵ對(duì)RAW264.7細(xì)胞增殖活性影響 巨噬細(xì)胞按照1.4×104個(gè)/孔接種到96 孔細(xì)胞培養(yǎng)板內(nèi)，每孔添加100 μl細(xì)胞懸浮液，培養(yǎng)過(guò)夜后，棄上清液，加入含有1.25、2.5、5、10、20、40 μmol/L 川續(xù)斷皂苷Ⅵ的細(xì)胞培養(yǎng)液各100 μl，置于37 ℃培養(yǎng)箱內(nèi)孵育培養(yǎng)18 h后，取出培養(yǎng)板，每孔分別加入10 μl MTT 溶液（5 g/L），37 ℃繼續(xù)培養(yǎng)4 h，然后加100 μl 10%SDS-HCl 溶液。酶標(biāo)儀測(cè)定570 nm（參比波長(zhǎng)為650 nm）OD 值。計(jì)算細(xì)胞存活率。細(xì)胞存活率（%）=（實(shí)驗(yàn)組OD 值-空白對(duì)照組OD）/（對(duì)照組OD 值-空白對(duì)照組OD）×100%。

1.2.3 川續(xù)斷皂苷Ⅵ作用于LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期RAW264.7 細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)后，調(diào)整細(xì)胞密度，按3×105個(gè)/ml 密度2 ml/孔接種于6 孔板，實(shí)驗(yàn)分組設(shè)正常組、LPS 組、LPS+ASD（5 μmol/L）組、LPS+ASD（10 μmol/L）組、LPS+ASD（20 μmol/L）組，培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)至80% 融合狀態(tài)時(shí)，按照實(shí)驗(yàn)分組給藥組加入川續(xù)斷皂苷Ⅵ至終濃度分別為5 μmol/L、10 μmol/L、20 μmol/L，加藥1 h 之后，LPS 組與給藥組均加LPS 至終濃度為100 ng/ml，正常組加等體積的培養(yǎng)基，加入LPS 后繼續(xù)培養(yǎng)18 h 后，分別收集培養(yǎng)基、細(xì)胞、細(xì)胞上清液于-70 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.4 川續(xù)斷皂苷Ⅵ作用于IL-4 誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期RAW264.7細(xì)胞計(jì)數(shù)后，調(diào)整細(xì)胞密度，按3×105個(gè)/ml 的密度，2 ml/孔接種于6 孔板，實(shí)驗(yàn)分組設(shè)正常組、IL-4 組、IL-4+ASD（5 μmol/L）組、IL-4+ASD（10 μmol/L）組、IL-4+ASD（20 μmol/L）組。培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)至90%融合狀態(tài)時(shí)給藥組加入不同濃度的川續(xù)斷皂苷Ⅵ至終濃度分別為5 μmol/L、10 μmol/L、20 μmol/L，加藥干預(yù)1 h之后，IL-4 組與給藥組均加IL-4 至終濃度10 ng/ml，正常組加等體積的培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)6 h 后，收集細(xì)胞于-70 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.5 檢測(cè)細(xì)胞上清中TNF-α、IL-6 和NO 分泌量 收集1.2.3 中細(xì)胞培養(yǎng)上清液，參照ELISA 檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書分別檢測(cè)細(xì)胞上清中TNF-α、IL-6含量。參照Griess 試劑盒說(shuō)明書檢測(cè)細(xì)胞上清中NO的含量。

1.2.6 熒光定量PCR檢測(cè)TNF-α、IL-6、HO-1、Arg-1和SOCS2 基因表達(dá) 按照實(shí)驗(yàn)分組收集細(xì)胞，按照提取RNA 試劑盒說(shuō)明書步驟提取細(xì)胞總RNA，將RNA 按照按逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明書操作步驟，各組取1 μg RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)按照SYBR Green qPCR Master Mix 試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行，反應(yīng)條件為：95 ℃、30 s（預(yù)變性），95 ℃、5 s（變性），60 ℃、30 s（退火），40 個(gè)循環(huán)，β-actin 為內(nèi)參對(duì)照。反應(yīng)體系包括：SYBR Green 染料10 μl、正反向引物各1 μl、PCR 專用的無(wú)菌水7 μl、cDNA 模板1 μl。采用2-ΔΔCt法分析各組樣本中TNF-α、IL-6、HO-1、Arg-1和SOCS2 mRNA相對(duì)表達(dá)水平（目的基因相對(duì)表達(dá)均進(jìn)行歸一化處理）。熒光定量PCR 引物序列見表1。

表1 熒光定量PCR引物序列Tab.1 Fluorescence quantitative PCR primer sequences

1.2.7 Western blot 檢測(cè)iNOS 和p-p65 蛋白表達(dá)按照1.2.3 實(shí)驗(yàn)分組，加不同濃度的川續(xù)斷皂苷Ⅵ處理細(xì)胞1 h之后，按照實(shí)驗(yàn)分組分別加入LPS共同孵育，加LPS 刺激細(xì)胞30 min，檢測(cè)p-p65 蛋白或18 h檢測(cè)iNOS 蛋白后，分別收集提取加藥處理后的細(xì)胞，按照RIPA 試劑說(shuō)明書提取細(xì)胞總蛋白，BSA法進(jìn)行蛋白定量后，按照50 μg/孔的蛋白上樣量經(jīng)SDS-PAGE 電泳將蛋白分離轉(zhuǎn)至PVDF 膜，用5%脫脂奶粉室溫孵育2 h，經(jīng)TBST 洗滌3 次，分別加一抗，4 ℃孵育過(guò)夜，經(jīng)TBST 洗滌3 次，每次5 min；室溫二抗（辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記，稀釋比例為1∶2 000）孵育1～2 h，TBST 沖洗，ECL 顯影發(fā)光。以 Image 分析條帶的灰度值。β-actin 作為參照，用目的蛋白灰度值除以內(nèi)參蛋白灰度值，并進(jìn)行歸一化處理后，分析計(jì)算iNOS、p-p65蛋白相對(duì)表達(dá)水平。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用 GraphPad Prism7統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，組間比較采用單因素方差分析，數(shù)據(jù)用±s表示，P<0.05 表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 川續(xù)斷皂苷Ⅵ對(duì)RAW264.7 細(xì)胞活力的影響 不同濃度川續(xù)斷皂苷Ⅵ作用于RAW264.7 巨噬細(xì)胞后，MTT 結(jié)果顯示（圖1），1.25～20 μmol/L 的川續(xù)斷皂苷Ⅵ對(duì)RAW264.7 巨噬細(xì)胞無(wú)明顯細(xì)胞毒性作用，40、80 μmol/L 川續(xù)斷皂苷Ⅵ明顯抑制RAW264.7 巨噬細(xì)胞增殖，說(shuō)明高濃度川續(xù)斷皂苷Ⅵ對(duì)RAW264.7 巨噬細(xì)胞有明顯細(xì)胞毒性作用，選擇5、10、20 μmol/L安全濃度的川續(xù)斷皂苷Ⅵ用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)研究。

圖1 川續(xù)斷皂苷Ⅵ對(duì)RAW264.7巨噬細(xì)胞活力的影響Fig.1 Effect of Asperosaponin Ⅵ on cell viability of RAW264.7 cells

2.2 川續(xù)斷皂苷Ⅵ對(duì)LPS 誘導(dǎo)下RAW264.7 細(xì)胞TNF-α、IL-6 基因和蛋白表達(dá)的影響 與正常對(duì)照組細(xì)胞比較，加LPS 刺激細(xì)胞6 h后明顯增加TNF-α和IL-6 基因表達(dá)水平，與LPS 組比較，加入5、10、20 μmol/L川續(xù)斷皂苷Ⅵ組均可不同程度抑制TNF-α和IL-6 基因表達(dá)，且隨著川續(xù)斷皂苷Ⅵ藥物濃度增加，對(duì)TNF-α 和IL-6 基因表達(dá)水平的抑制作用越明顯，其中10、20 μmol/L 川續(xù)斷皂苷Ⅵ組明顯抑制TNF-α和IL-6基因表達(dá)水平（P<0.01），見圖2A、B。與正常對(duì)照組比較，LPS 刺激RAW264.7 細(xì)胞18 h后明顯增加細(xì)胞上清中TNF-α和IL-6蛋白分泌量，與LPS組比較，加入5、10、20 μmol/L 川續(xù)斷皂苷Ⅵ組可不同程度抑制TNF-α 和IL-6 蛋白分泌量，且隨著川續(xù)斷皂苷Ⅵ藥物濃度增加，對(duì)TNF-α和IL-6的蛋白抑制作用越明顯（圖2C、D），10、20 μmol/L 川續(xù)斷皂苷Ⅵ組明顯抑制TNF-α 和IL-6 蛋白分泌（P<0.01）。

圖2 川續(xù)斷皂苷Ⅵ對(duì)LPS 誘導(dǎo)下RAW264.7 巨噬細(xì)胞TNF-α和IL-6蛋白和基因水平的影響Fig.2 Effect of Asperosaponin Ⅵ on TNF-α and IL-6 protein and gene levels in LPS stimulated RAW264.7 cells

2.3 川續(xù)斷皂苷Ⅵ對(duì)LPS 誘導(dǎo)下RAW264.7 細(xì)胞iNOS和p-p65蛋白表達(dá)的影響 與正常對(duì)照組細(xì)胞比較，LPS 刺激細(xì)胞18 h 后明顯增加RAW264.7 細(xì)胞iNOS 蛋 白 表 達(dá)，與LPS 組 比 較，加 入5、10、20 μmol/L 濃度的川續(xù)斷皂苷Ⅵ均可不同程度抑制iNOS 蛋白表達(dá)水平，且隨著川續(xù)斷皂苷Ⅵ藥物濃度增加，對(duì)iNOS 蛋白的抑制作用越明顯（圖3A），10、20 μmol/L 的川續(xù)斷皂苷Ⅵ組明顯抑制LPS 誘導(dǎo)下iNOS蛋白表達(dá)（P<0.01）。

圖3 川續(xù)斷皂苷Ⅵ對(duì)LPS 誘導(dǎo)下RAW264.7 巨噬細(xì)胞iNOS和p-p65蛋白水平的影響Fig.3 Effect of Asperosaponin Ⅵ on iNOS and p-p65 protein in LPS stimulated RAW264.7 cells

與正常對(duì)照組細(xì)胞比較，加LPS 刺激細(xì)胞30 min后明顯增加RAW264.7細(xì)胞p-p65蛋白表達(dá)，與LPS組比較，提前1 h加入5、10、20 μmol/L 的川續(xù)斷皂苷Ⅵ可不同程度抑制p-p65 蛋白表達(dá)水平，且隨著川續(xù)斷皂苷Ⅵ藥物濃度增加，對(duì)p-p65 蛋白的抑制作用越明顯（圖3B），10、20 μmol/L 的川續(xù)斷皂苷Ⅵ抑制LPS誘導(dǎo)下p-p65蛋白表達(dá)（P<0.05）。

2.4 川續(xù)斷皂苷Ⅵ對(duì)LPS 誘導(dǎo)下RAW264.7 細(xì)胞HO-1基因表達(dá)和NO分泌的影響 與正常對(duì)照組細(xì)胞比較，LPS 刺激細(xì)胞6 h 后增加HO-1 基因表達(dá)水平，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與LPS 組比較，加入5、10、20 μmol/L 川續(xù)斷皂苷Ⅵ組均可不同程度增加HO-1基因表達(dá)，且隨著川續(xù)斷皂苷Ⅵ藥物濃度增加，對(duì)HO-1 基因表達(dá)水平的增加作用越明顯（圖4A），10、20 μmol/L 川續(xù)斷皂苷Ⅵ組明顯增加LPS 誘導(dǎo)下HO-1基因表達(dá)（P<0.01）。與正常對(duì)照組細(xì)胞比較，加LPS 刺激細(xì)胞18 h后明顯增加細(xì)胞上清中NO 分泌量（P<0.01），與LPS 組比較，加入5、10、20 μmol/L 川續(xù)斷皂苷Ⅵ組均可不同程度地抑制NO 釋放量，且隨著川續(xù)斷皂苷Ⅵ藥物濃度增加，對(duì)NO 的抑制作用越明顯（圖4B），10、20 μmol/L 川續(xù)斷皂苷Ⅵ組明顯抑制LPS誘導(dǎo)下NO的分泌量（P<0.01）。

圖4 川續(xù)斷皂苷Ⅵ對(duì)LPS 誘導(dǎo)下RAW264.7 巨噬細(xì)胞HO-1基因和NO水平的影響Fig.4 Effect of Asperosaponin Ⅵ on HO-1 gene and NO levels in LPS stimulated RAW264.7 cells

2.5 川續(xù)斷皂苷Ⅵ對(duì)IL-4 誘導(dǎo)下RAW264.7 細(xì)胞Arg-1 和SOCS2 基因表達(dá)的影響 與正常對(duì)照組細(xì)胞比較，加IL-4 刺激細(xì)胞6 h 后明顯增加Arg-1 和SOCS2 基因表達(dá)，與IL-4 組比較，加入5、10、 20 μmol/L 川續(xù)斷皂苷Ⅵ組均可不同程度增加Arg-1（圖5A）和SOCS2（圖5B）基因表達(dá)，Arg-1 和SOCS2基因表達(dá)水平與川續(xù)斷皂苷Ⅵ濃度呈依賴性增長(zhǎng)，20 μmol/L 川續(xù)斷皂苷Ⅵ組增加IL-4誘導(dǎo)下Arg-1的基因表達(dá)（P<0.05）。10、20 μmol/L 川續(xù)斷皂苷Ⅵ組明顯增加IL-4 誘導(dǎo)下SOCS2 的基因表達(dá)（P<0.01）。

圖5 川續(xù)斷皂苷Ⅵ對(duì)IL-4 誘導(dǎo)下RAW264.7 巨噬細(xì)胞Arg-1和SOCS2基因水平的影響Fig.5 Effect of Asperosaponin Ⅵ on Arg-1 and SOCS2 gene levels in IL-4 stimulated RAW264.7 cells

3 討論

巨噬細(xì)胞是一類重要的免疫細(xì)胞，在體內(nèi)外不同環(huán)境影響下可極化為不同表型從而參與免疫調(diào)控［10］。巨噬細(xì)胞極化是一個(gè)動(dòng)態(tài)變化、可被逆轉(zhuǎn)的過(guò)程，其參與了眾多免疫炎癥性疾病的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程［11］。

LPS 是革蘭陰性菌細(xì)胞壁主要成分之一，具有較強(qiáng)的免疫刺激能力［12］。LPS 可誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞向M1 型分化，產(chǎn)生促炎癥細(xì)胞因子，IL-4 可以誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞向M2型分化［13］。

川續(xù)斷皂苷Ⅵ是中藥川續(xù)斷的主要活性成分，具有保護(hù)神經(jīng)、抗骨質(zhì)疏松、抗細(xì)胞凋亡等藥理作用［14］，雖然川續(xù)斷皂苷Ⅵ在藥理作用方面應(yīng)用前景廣泛，但在炎癥方面的報(bào)道卻不多。有研究表明，M1巨噬細(xì)胞促進(jìn)炎癥反應(yīng)，LPS可以通過(guò)激活NF-κB等信號(hào)通路，促進(jìn)M1 型巨噬細(xì)胞標(biāo)志物TNF-α 表達(dá)［15-17］。iNOS、TNF-α、IL-6是M1型巨噬細(xì)胞的促炎因子，被證實(shí)會(huì)增強(qiáng)炎癥反應(yīng)［18］。

本研究發(fā)現(xiàn)，以LPS 刺激小鼠RAW264.7 細(xì)胞可致其M1 型巨噬細(xì)胞標(biāo)志分子TNF-α、IL-6 分泌量增多及iNOS基因和蛋白表達(dá)升高；川續(xù)斷皂苷Ⅵ能明顯抑制LPS 誘導(dǎo)下小鼠RAW264.7 細(xì)胞分泌TNF-α 和IL-6，同時(shí)抑制iNOS 和TNF-α 基因表達(dá)水平。M1 型巨噬細(xì)胞產(chǎn)生大量NO，川續(xù)斷皂苷Ⅵ能顯著抑制M1 型巨噬細(xì)胞iNOS 蛋白表達(dá)，從而進(jìn)一步下調(diào)NO 產(chǎn)生。以上研究結(jié)果表明川續(xù)斷皂苷Ⅵ可以通過(guò)抑制LPS 誘導(dǎo)下小鼠RAW264.7 細(xì)胞的M1型極化發(fā)揮其抗炎作用。機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)，川續(xù)斷皂苷Ⅵ能抑制NF-κB 通路中p-p65 蛋白磷酸化水平，說(shuō)明川續(xù)斷皂苷Ⅵ能抑制NF-κB 信號(hào)通路發(fā)揮其對(duì)M1 型巨噬細(xì)胞的抑制作用，從而發(fā)揮其抗炎作用。

核因子E2 相關(guān)因子2（nuclear factor erythroid 2-related factor 2，Nrf2）通路的激活可以抑制炎癥反應(yīng)，Nrf2 通路可以通過(guò)與各種炎癥相關(guān)基因的近端調(diào)控區(qū)結(jié)合，直接抑制M1 型巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)表達(dá)的炎癥基因［19-20］。激活Nrf2 信號(hào)通路可以抑制M1 巨噬細(xì)胞極化的同時(shí)促進(jìn)M2 型巨噬細(xì)胞極化［21］。本研究發(fā)現(xiàn)，川續(xù)斷皂苷Ⅵ能增加LPS 誘導(dǎo)狀態(tài)下細(xì)胞中Nrf2 通路下游的血紅素加氧酶1（heme oxygenase-1，HO-1）基因水平，說(shuō)明川續(xù)斷皂苷Ⅵ很可能通過(guò)激活Nrf2 下游HO-1 基因表達(dá)發(fā)揮其對(duì)M1 巨噬細(xì)胞極化的抑制作用。

此外，Arg-1是M2型巨噬細(xì)胞的標(biāo)志性分子［22］，本研究以IL-4 刺激小鼠RAW264.7 細(xì)胞致其M2 型巨噬細(xì)胞標(biāo)志分子Arg-1 基因表達(dá)升高；在IL-4 誘導(dǎo)的M2 型細(xì)胞模型下，川續(xù)斷皂苷Ⅵ能增加Arg-1基因表達(dá)。提示川續(xù)斷皂苷Ⅵ能促進(jìn)IL-4 誘導(dǎo)下小鼠RAW264.7細(xì)胞向M2型極化。M2型巨噬細(xì)胞參與組織修復(fù)，有研究表明細(xì)胞因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制蛋 白-2（suppressor of cytokine signaling protein-2，SOCS2）缺失的巨噬細(xì)胞向M1 極化［23］。SOCS2 是調(diào)節(jié)M2 極化的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子，可以促進(jìn)巨噬細(xì)胞向M2 極化［24］。本研究發(fā)現(xiàn)川續(xù)斷皂苷Ⅵ能促進(jìn)IL-4誘導(dǎo)下小鼠RAW264.7 細(xì)胞高表達(dá)SOCS2 基因，提示川續(xù)斷皂苷Ⅵ可能通過(guò)調(diào)節(jié)SOCS2 信號(hào)通路促進(jìn)RAW264.7細(xì)胞向M2型極化。

綜上所述，川續(xù)斷皂苷Ⅵ可以抑制RAW264.7巨噬細(xì)胞向M1 型極化，同時(shí)促進(jìn)其向M2 型極化。川續(xù)斷皂苷Ⅵ可通過(guò)以上作用來(lái)調(diào)節(jié)M1/M2 型巨噬細(xì)胞極化發(fā)揮其抗炎免疫調(diào)節(jié)作用，但是川續(xù)斷皂苷Ⅵ對(duì)M1/M2 型巨噬細(xì)胞極化的調(diào)節(jié)作用機(jī)制仍有待后續(xù)深入研究。