曹 旎，楊志娟，胡軍和，鐘 杰，陳 錦，蘇家恩

（1.湖南人文科技學(xué)院 農(nóng)業(yè)與生物技術(shù)學(xué)院，湖南 婁底 417000；2.云南省煙草公司大理市公司，云南 大理 671000；3.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué) 植物保護(hù)學(xué)院，湖南 長(zhǎng)沙 410128；4.湖南省農(nóng)業(yè)環(huán)境生態(tài)研究所，湖南 長(zhǎng)沙 410125）

煙草是云南省的重要經(jīng)濟(jì)作物，種植面積和總產(chǎn)量均位于全國(guó)第一，而煙草病毒病的大幅發(fā)生嚴(yán)重影響了煙草的產(chǎn)量和質(zhì)量，造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失[1-2]。目前在云南地區(qū)已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的煙草病毒病主要有煙草黃瓜花葉病毒（Cucumber mosaic virus，CMV）、番茄斑萎病毒（Tomato spotted wilt virus，TSWV）、煙草蝕紋病毒（Tobacco etch virus，TEV）、煙草叢矮病毒（Tobacco bushy stunt virus，TBSV）、煙草馬鈴薯Y 病毒 （Potato virus y，PVY）、煙草環(huán)斑病毒 （Tobacco ringspot virus，TRSV）和煙草條紋病毒（Tobacco streak virus，TSV）等[3]，這些病毒病均可由傳毒昆蟲(chóng)例如薊馬等介導(dǎo)傳播。

薊馬（Thripidae）是昆蟲(chóng)綱纓翅目（Thysanoptera）的一種銼吸式害蟲(chóng)，其若蟲(chóng)和成蟲(chóng)均可以取食葉片、吸食汁液而直接危害烤煙，同時(shí)該昆蟲(chóng)還可以傳播各種病毒導(dǎo)致煙葉卷曲壞死、煙株矮化、頂芽萎垂等癥狀，影響煙葉的品質(zhì)，使其失去烘烤價(jià)值，且這種間接危害會(huì)給煙草生產(chǎn)帶來(lái)更為嚴(yán)重的損失[4-6]。例如西花薊馬（Frankliniella occidentalis）是番茄斑萎病毒的主要傳播媒介，感染該病毒后通常會(huì)導(dǎo)致作物減產(chǎn)30%～50%，嚴(yán)重時(shí)可減產(chǎn)70%，甚至絕收[7-8]。據(jù)報(bào)道，1996—2006 年西花薊馬曾導(dǎo)致美國(guó)煙草產(chǎn)業(yè)損失近140 萬(wàn)美元[9]。

藍(lán)色粘蟲(chóng)板（即藍(lán)板）對(duì)小型昆蟲(chóng)成蟲(chóng)如薊馬、蠅等有良好的誘殺效果，在我國(guó)廣泛應(yīng)用于蔬菜、果樹(shù)害蟲(chóng)的防治。為了了解大理煙區(qū)西花薊馬的種群數(shù)量動(dòng)態(tài)變化，項(xiàng)目組從烤煙不同生育時(shí)期西花薊馬種群數(shù)量、健康煙株與感病煙株西花薊馬數(shù)量的差異以及藍(lán)板懸掛高度對(duì)西花薊馬的誘集效果3個(gè)方面分析了大理煙區(qū)西花薊馬的種群數(shù)量動(dòng)態(tài)變化，以期優(yōu)化煙田藍(lán)板布局，為煙草薊馬的綜合防治，特別是其傳播煙草病毒病的防控提供參考，為煙草產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展保駕護(hù)航。

1 材料與方法

1.1 西花薊馬種群動(dòng)態(tài)調(diào)查

2022 年5—6 月，在大理白族自治州大理市彎橋鎮(zhèn)種植云煙87 的田塊設(shè)置10 塊藍(lán)板（40 cm×25 cm），采用棋盤(pán)式分布，密度為30 塊/667m2，懸掛高度與煙株頂端持平并根據(jù)煙株長(zhǎng)勢(shì)適時(shí)調(diào)整。以6 d 為1 個(gè)時(shí)間段回收藍(lán)板，隨機(jī)抽取藍(lán)板樣品，共檢測(cè)了10 個(gè)時(shí)間點(diǎn)的10 批藍(lán)板樣品，記錄藍(lán)板是來(lái)自健康煙株還是感病煙株。在藍(lán)板上通過(guò)五點(diǎn)取樣法獲得檢測(cè)樣品，每個(gè)取樣點(diǎn)面積為4 cm×2.5 cm，將其中所有薊馬以單頭蟲(chóng)分別收集后進(jìn)行西花薊馬檢測(cè)。

1.2 藍(lán)板懸掛高度試驗(yàn)

為了確定藍(lán)板放置高度對(duì)西花薊馬誘集效果的影響，設(shè)計(jì)了3 個(gè)藍(lán)板懸掛高度，分別為55 cm、85 cm 以及隨著煙株生長(zhǎng)適時(shí)調(diào)整藍(lán)板高度使其始終與煙株頂端齊平，棋盤(pán)式分布，每個(gè)處理設(shè)置10 個(gè)籃板，密度為30 塊/667m2，檢測(cè)不同放置高度對(duì)西花薊馬誘集效果的影響，從5 月5 日到6 月25 日共收集6 次，每次相隔10 d，隨機(jī)抽取藍(lán)板樣品進(jìn)行西花薊馬檢測(cè)。藍(lán)板樣品獲取方法同上。

1.3 西花薊馬的分子生物學(xué)檢測(cè)

（1）DNA 的提取。參考張鄧壯等[10]的方法， 使 用KAPA DNA 快 速 提 取 試 劑 盒（Kapa Biosystems）提取單頭薊馬基因組DNA。具體操作如下：樣本速凍勻漿后，75℃下水浴10 min 進(jìn)行裂解，然后于95℃水浴5 min 使蛋白失活。所得 基 因 組DNA 于－ 20 ℃保 存 備 用。（2）COI序列擴(kuò)增與測(cè)序。參考湯云霞等[11]的方法，利用西花薊馬mtDNACOI基因設(shè)計(jì)引物（JM-F：5′–ATAATTCGGTAGTAACAGCCC–3′；JM-R：5′–GCTCCTGCTAAAACTGGTAACG–3′），以 提 取 的DNA 樣品為模板進(jìn)行PCR 擴(kuò)增。PCR 反應(yīng)體系：1 μL 模板DNA（100 ng/μL），1 μL JM-F（2 μmol/L），1 μL JM-R（2 μmol/L），12.5 μL 2×Es Taq Master Mix，加入ddH2O 補(bǔ)足至25 μL。PCR 反應(yīng)程序：95℃預(yù)變性3 min；95℃變性30 s，56℃退火30 s，72℃延伸1 min，35 個(gè)循環(huán)；72℃延伸10 min，4℃保存。擴(kuò)增產(chǎn)物用2%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。

2 結(jié)果與分析

2.1 利用西花薊馬特異性引物進(jìn)行PCR 擴(kuò)增的結(jié)果

由圖1 可知，利用西花薊馬特異性引物進(jìn)行PCR 擴(kuò)增，可以獲得預(yù)期大小的目的條帶，說(shuō)明樣品中含有西花薊馬（陰性則不能檢測(cè)到），由此證明通過(guò)收集單頭蟲(chóng)提取DNA 可進(jìn)行西花薊馬的檢測(cè)。

圖1 部分PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物的電泳檢測(cè)結(jié)果

2.2 不同時(shí)期西花薊馬種群數(shù)量比較

如圖2 所示，檢測(cè)時(shí)間段內(nèi)各批次藍(lán)板樣品均能檢測(cè)到西花薊馬，西花薊馬檢出率最高的為5月24 日的第4 批次樣品，達(dá)到（20.79±0.12）%，檢出率最低的為6 月30 日的第10 批次樣品，為（4.22±0.16）%?？偟膩?lái)說(shuō)，5—6 月收集的藍(lán)板上西花薊馬檢出率呈先增加后下降的趨勢(shì)，5 月中下旬達(dá)到高峰。

圖2 大理煙區(qū)2022 年5—6 月10 批次藍(lán)板樣品中西花薊馬的檢出率

調(diào)查還發(fā)現(xiàn)，5 月在樣品中共檢出西花薊馬71頭，占檢測(cè)總數(shù)的16.75%，明顯高于6 月的8.33%（表1），說(shuō)明5 月田間西花薊馬種群數(shù)量較多，危害相對(duì)較重。

表1 大理煙區(qū)2022 年5 和6 月藍(lán)板誘集的西花薊馬數(shù)量比較

2.3 健康煙株與感病煙株西花薊馬數(shù)量的比較

已有研究表明，西花薊馬的流行與煙草病毒病流行具有一定的相關(guān)關(guān)系，筆者收集了5 月下旬的藍(lán)板樣品，統(tǒng)計(jì)樣品來(lái)自健康煙株還是感病煙株，比較了二者西花薊馬的檢出率，結(jié)果如圖3 所示，健康煙株藍(lán)板上的西花薊馬檢測(cè)率極顯著低于感病煙株，表明了西花薊馬的數(shù)量與番茄斑萎病的發(fā)生流行可能存在一定的相關(guān)性。

圖3 健康煙株與感病煙株西花薊馬數(shù)量的比較

2.4 藍(lán)板放置高度對(duì)西花薊馬誘集效果的影響

由圖4 可知，當(dāng)藍(lán)板懸掛高度始終為55 cm 時(shí)，各時(shí)間段的西花薊馬檢出率均是3 個(gè)處理中最低的；烤煙生長(zhǎng)發(fā)育前期（5 月5 日和5 月15 日）煙株較矮小，藍(lán)板高度為55 cm 的處理未檢測(cè)到西花薊馬，而與煙株頂端齊平的處理西花薊馬檢出率最高；5月25 日以后，藍(lán)板高度為85 cm 的處理西花薊馬檢出率最高，其次是與煙株頂端齊平的處理。這說(shuō)明應(yīng)該根據(jù)烤煙的生長(zhǎng)狀況適時(shí)調(diào)節(jié)藍(lán)板的懸掛高度從而得到更好的誘集效果，在生長(zhǎng)發(fā)育前期可以采取與煙株頂端齊平的懸掛高度，5 月下旬以后可以采取85 cm 的懸掛高度。

圖4 不同懸掛高度處理的西花薊馬檢出率比較

3 結(jié)論與討論

薊馬等煙田害蟲(chóng)是番茄斑萎病病毒的主要傳播媒介[12]，煙草育苗棚內(nèi)及周邊懸掛藍(lán)色或黃色粘蟲(chóng)板，可對(duì)薊馬進(jìn)行有效的監(jiān)測(cè)和防治，對(duì)番茄斑萎病具有明顯的防效。薊馬的發(fā)生，易造成煙苗大量死亡以及后期大田煙株感染病毒病，在今后的烤煙病蟲(chóng)害防治工作中應(yīng)引起重視。2022 年5—6 月，試驗(yàn)區(qū)域各批次藍(lán)板上均能檢測(cè)到西花薊馬，西花薊馬檢出率最高的是5 月24 日的第4 批次樣品，檢出率為（20.79±0.12）%，最低的是6 月30 日的第10批次樣品，檢出率為（4.22±0.16）%。從10 批次藍(lán)板樣品中西花薊馬的檢出率可以看出，5—6 月田間西花薊馬種群數(shù)量呈先增加后下降的趨勢(shì)，5 月中下旬達(dá)到高峰，該時(shí)期是防治西花薊馬的關(guān)鍵時(shí)期。對(duì)比5 月和6 月藍(lán)板誘集的西花薊馬檢出率也表明西花薊馬在5 月的危害較嚴(yán)重，可在5 月上旬加強(qiáng)對(duì)其成蟲(chóng)的防治。

利用昆蟲(chóng)對(duì)顏色的趨向性，人類很早就開(kāi)始用色板誘殺害蟲(chóng)。由于薊馬在田間呈聚集分布[13]，因此同一種植區(qū)不同煙田煙株受害率可能有所差異。試驗(yàn)結(jié)果顯示，健康煙株藍(lán)板誘集的西花薊馬檢出率極顯著低于感病煙株的檢出率，由此推測(cè)西花薊馬的數(shù)量與番茄斑萎病的發(fā)生流行可能存在一定的相關(guān)性。因此，防控西花薊馬種群數(shù)量成為減輕煙田病毒病發(fā)生的有效舉措。

研究還對(duì)藍(lán)板適宜懸掛高度進(jìn)行了探索，結(jié)果表明在煙株生長(zhǎng)過(guò)程中，應(yīng)該根據(jù)煙草的生長(zhǎng)狀況適時(shí)調(diào)節(jié)藍(lán)板的懸掛高度，從而得到更好的誘集效果。在生長(zhǎng)發(fā)育前期可以采取與煙株頂端齊平的懸掛高度，5 月下旬以后可以采取85 cm 的懸掛高度。當(dāng)然，該研究只監(jiān)測(cè)了一片煙田的西花薊馬田間發(fā)生種群動(dòng)態(tài)，其結(jié)果有一定的偶然性，因此還需要進(jìn)一步擴(kuò)大監(jiān)測(cè)的時(shí)間和地域范圍，并結(jié)合田間調(diào)查綜合分析。