王友祥，尹向飛，梁小亮

（廈門醫(yī)學院附屬第二醫(yī)院醫(yī)學檢驗科，福建 廈門 361021）

肺癌是發(fā)病率及死亡率最高的惡性腫瘤，按照病理類型分為小細胞癌及非小細胞癌 （NSCLC），其中超過85%的肺癌為NSCLC［1］。多數(shù)肺癌患者的早期癥狀不典型，在確診時已處于晚期，延誤最佳治療時機。近年來隨著治療手段的發(fā)展，肺癌患者的生存時間得以延長，然而部分患者預后仍較差，5年生存率較低［2］。隨著人們健康意識的提高，目前癌癥篩查較為普遍，但臨床常用的標志物如癌胚抗原 （CEA）、 糖類抗原 （CA）19-9 等診斷肺癌的敏感度及特異性較差，臨床亟需靈敏、 準確的標志物用于肺癌的早期診斷，以期改善疾病轉歸［3］。DHX32是一種解螺旋酶，已有研究［4］表明其在多種癌癥患者中異常表達，并參與腫瘤的病理進展過程。本研究探討DHX32 mRNA在肺癌組織中的表達情況及其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2020年8月至2022年5月我院收治的285例肺癌患者為對象。納入標準： ①病理檢查診斷為肺癌； ②ECOG 活動狀況評分表評分＜2 分； ③年齡≥18 歲； ④未接受放療、 化療、 免疫治療等。排除標準： ①合并其他部位惡性腫瘤； ②嚴重心、 肝、 腎功能障礙； ③合并哮喘、 慢阻肺、 急性呼吸窘迫綜合征等； ④妊娠期及哺乳期婦女； ⑤KPS 評分＜30分。285 例患者男性150 例，女性135 例；年齡38 ～75 歲，平均年齡 （63.78 ± 5.91） 歲。

1.2 方法 ①收集患者的基線資料如性別、年齡、 體質(zhì)量指數(shù)、吸煙情況等，記錄腫瘤位置、 病灶數(shù)目、 組織學類型、 病理分期及分化程度等。②RT-PCR 法檢測肺癌患者的DHX32 mRNA相對表達量，用液氮研磨肺癌及癌旁組織，提取組織中總RNA，采用紫外分光光度計檢測RNA 的純度及濃度。取總RNA 4 μL，82 ℃水浴5 min 后加入反轉錄反應液，45 ℃孵育60 min，留取產(chǎn)物。擴增條件為： 95 ℃預變性5 min，95 ℃變性30 s，65 ℃退火15 s，70 ℃延伸30 s，42 個循環(huán)。DHX32 mRNA 正向： 5'-CTCTCACAGTTGAATGTCCTTG-3'； 反向： 5'-CTCCTTGTCAGCAGAATGAAG-3'。以GAPDH 為內(nèi)參，正向：5' -TGACTTCAACAGCGACACCCA -3'； 反向： 5' -CACCCTGTTGCTGTAGCCAAA-3'。以GAPDH 為內(nèi)參，用2-ΔΔCt表示DHX32 mRNA 相對表達量。

1.3 統(tǒng)計學分析 采用SPSS 23.0 統(tǒng)計軟件處理數(shù)據(jù)。計數(shù)資料以n （%） 表示，采用χ2檢驗； 計量資料以±s 表示，采用t檢驗； 采用受試者工作特征 （ROC） 曲線分析DHX32 mRNA診斷肺癌的價值。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 肺癌組織及癌旁組織的DHX32 mRNA 相對表達量 肺癌組織中DHX32 mRNA 相對表達量為1.54 ± 0.26，高于癌旁組織的1.05 ± 0.20，差異有統(tǒng)計學意義 （t ＝25.218，P＜0.001）。

2.2 肺癌組織DHX32 mRNA 診斷肺癌的價值 DHX32 mRNA診斷肺癌的AUC 為0.837 （95%CI： 0.771 ～0.890），敏感度為76.67%，特異性為76.55%，最佳截斷點為1.55。見圖1。

圖1 肺癌組織DHX32 mRNA 診斷肺癌的ROC 曲線

2.3 肺癌組織DHX32 mRNA 與臨床病理特征的關系 DHX32 mRNA 與肺癌患者吸煙情況、 病灶數(shù)目、 組織學類型、 病理分期、 分化程度存在聯(lián)系 （P＜0.05）。見表1。

表1 肺癌組織DHX32 mRNA 與臨床病理特征的關系 （±s）

3 討論

肺癌作為全世界發(fā)病率最高的癌癥，早期明確診斷及預后評估仍缺乏準確、 靈敏的指標［5］。多數(shù)肺癌患者在臨床中確診時已處于中晚期階段，喪失最佳治療時機。隨著人們獲得疾病信息的渠道增多及健康教育的普及，人們對于癌癥的早期篩查重視程度不斷提高。CEA 及CA19－9 等指標作為常用的早期篩查指標，對肺癌的特異性較差，易出現(xiàn)漏診或誤診等。因此，臨床需探索新型、 有效的標志物用于肺癌的診斷。

DHX32 mRNA 是一類短的非編碼RNA，主要發(fā)揮基因調(diào)控作用，參與多種癌癥疾病的發(fā)生及發(fā)展過程。DHX32 mRNA在腫瘤組織中表達異常，而在正常組織中表達較少或不表達，且在個體間的差異較小，在診斷疾病方面具有較高的價值［6］。DHX32 mRNA 具有促進直腸癌細胞增殖、 侵襲的作用，并且過表達的DHX32 mRNA 可降低癌細胞對化療藥物的敏感性，增加癌細胞的抗藥性［7］。此外，有研究［8］表明DHX32 mRNA可通過Wnt 信號通路調(diào)控下游血管內(nèi)皮生長因子受體的表達，促進新生血管的形成，為腫瘤細胞的血行播散及轉移奠定基礎。目前關于DHX32 mRNA 在肺癌患者中的表達情況未有報道，因此本研究對其進行探究。本研究結果顯示，肺癌患者癌組織的DHX32 mRNA 相對表達量高于癌旁組織，提示DHX32 mRNA 在肺癌組織中表達異常，或許可用于肺癌的早期診斷。為明確DHX32 mRNA 在肺癌診斷中的價值，本研究構建DHX32 mRNA 診斷肺癌的ROC 曲線，結果顯示，DHX32 mRNA 診斷肺癌的AUC 為0.837，敏感度為76.67%，特異性為76.55%，提示DHX32 mRNA 在肺癌患者的診斷中價值較高。觀察DHX32 mRNA 與肺癌患者病理特征的關系發(fā)現(xiàn)，DHX32 mRNA 與肺癌患者吸煙情況、 病灶數(shù)目、 組織學類型、 病理分期及分化程度等存在聯(lián)系，表明隨著肺癌患者的病情進展，DHX32 mRNA 表達增多，可為臨床明確肺癌的嚴重程度提供參考。

綜上所述，DHX32 mRNA 在肺癌患者中表達升高，檢測其表達情況可用于肺癌的診斷及病情的評估。