張居念，連 玲，吳春珠，董 萌，施龍清，解振興，姜照偉，占志雄

（福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院水稻研究所，福州 350018）

水稻是世界上最重要的主糧作物之一，在世界各地普遍種植，全球半數(shù)以上的人口以稻米作為主食[1,2]。水稻主要害蟲稻飛虱屬半翅目Hemiptera，飛虱科Delphacidae，包括褐飛虱Nilaparvatalugens、白背飛虱Sogatellafurcifera和灰飛虱Laodelphaxstriatellus三種，在全球水稻產(chǎn)區(qū)常暴發(fā)成災(zāi)，嚴(yán)重影響全球糧食安全[3]。化學(xué)殺蟲劑的大量持續(xù)、不合理施用等原因，使得稻飛虱對各類殺蟲劑，如有機(jī)磷類、煙堿類、氨基甲酸酯類等農(nóng)藥的抗性逐漸增強(qiáng)[4,5]，部分種群甚至達(dá)到成百上千倍的高水平抗性。化學(xué)農(nóng)藥的使用除導(dǎo)致害蟲產(chǎn)生抗藥性，污染環(huán)境和再猖獗的“3R”問題，還使田間自然天敵種群受到嚴(yán)重?fù)p害，天敵的缺乏致使害蟲失去有效控制而暴發(fā)成災(zāi)。隨著人們對無公害無污染及有機(jī)農(nóng)產(chǎn)品需求量的增加，尋求有效、持久的治蟲方法才是長久之計(jì)。

稻虱纓小蜂AnagrusnilaparvataePang and Wang 是稻飛虱的優(yōu)勢卵寄生蜂，稻田中稻飛虱卵的纓小蜂寄生率普遍很高（20.9%～83.3%）[6-8]，對三種稻飛虱均有明顯的控制作用，但由于稻虱纓小蜂種群的發(fā)展滯后于稻飛虱，在稻飛虱遷入稻田早期，稻虱纓小蜂群體較小，不足以控制稻飛虱的繁殖。若用人工飼養(yǎng)的稻虱纓小蜂進(jìn)行田間釋放，彌補(bǔ)自然種群的不足，則可望實(shí)現(xiàn)生物防治達(dá)到控害的目的。

在生物防治中，積累足量的天敵昆蟲是大規(guī)模釋放時(shí)的前提條件[7]。因此，儲藏技術(shù)對天敵昆蟲的規(guī)?；a(chǎn)極為重要[8,9]。低溫冷藏是積累和保存天敵行之有效的方法[10]。冷藏可以積累天敵的數(shù)量，同時(shí)也可以減少維持天敵種群的成本[9]。稻虱纓小蜂在飼養(yǎng)過程中，經(jīng)常遇到羽化高峰期與寄主飛虱的產(chǎn)卵期不相遇，造成成蟲沒有可寄生的寄主卵，造成浪費(fèi)。通過冷藏調(diào)節(jié)纓小蜂的發(fā)育進(jìn)度，使得每一批寄主飛虱卵都可以與纓小蜂的羽化期相吻合，可提高繁蜂效率，確保天敵種群數(shù)量的充足和穩(wěn)定，還可以延長貨架期保障長距離運(yùn)輸，并且可在稻飛虱遷入產(chǎn)卵期實(shí)現(xiàn)同步釋放。

天敵昆蟲在低溫條件下長時(shí)間貯藏，會發(fā)生冷害和負(fù)面作用，甚至導(dǎo)致天敵昆蟲死亡[10]，因此尋找天敵昆蟲在低溫條件下的適合蟲態(tài)顯得尤為重要。目前國內(nèi)外有關(guān)稻虱纓小蜂人工飼養(yǎng)方面的研究較少，特別是冷藏方面無相關(guān)報(bào)道。本研究以羽化率、性比、雌成蟲寄生飛虱卵數(shù)量、成蟲壽命、繁殖力作為指標(biāo)，測定不同蟲態(tài)稻虱纓小蜂對不同低溫、不同冷藏時(shí)間的耐受反應(yīng)，探索合適的低溫冷藏條件和方法，為稻虱纓小蜂的規(guī)?；曫B(yǎng)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試材料

稻虱纓小蜂于2018 年采自福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院水稻研究所試驗(yàn)稻田，用褐飛虱卵為寄主連續(xù)繼代繁殖50 多代。寄主灰飛虱由福建農(nóng)林大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院病毒研究所提供，用抗寒小麥品種魯原118（網(wǎng)購）繁殖10 多代。

水稻品種TN1 每7 d 播種一次，生長條件：溫度（28±3）℃、光周期16L∶8 D、RH 80%±10%，生長30～40 d，TN1 用于褐飛虱的飼養(yǎng)，所得褐飛虱卵用于稻虱纓小蜂的大量繁殖。小麥抗寒品種魯原118在溫度（26±3）℃，光周期10L∶12D，RH 80%±10%條件下生長30～40 d，作為灰飛虱的產(chǎn)卵載體用于稻虱纓小蜂的冷藏。以褐飛虱或白背飛虱為寄主，以水稻苗為產(chǎn)卵載體的繁殖方法是稻虱纓小蜂理想的大量快速繁殖方法，但由于水稻苗不耐低溫，水稻苗在長期低溫條件下造成死亡，冷藏結(jié)束后取出，在常溫下容易失水或發(fā)霉，造成水稻苗葉鞘內(nèi)的稻虱纓小蜂也即失水而死亡，因此，水稻苗不能作為產(chǎn)卵載體用于稻虱纓小蜂的冷藏。小麥苗具有耐冷性，長期冷藏后可處于鮮活狀態(tài)，從冷藏庫取出后，在常溫條件下，不會因失水造成小麥苗組織內(nèi)的稻虱纓小蜂脫水死亡，是理想的冷藏材料，以灰飛虱為寄主，以小麥苗為產(chǎn)卵載體的冷藏方法能夠大幅度延長稻虱纓小蜂的貯藏時(shí)間，便于蟲源的積累，提高繁蜂效率，實(shí)現(xiàn)規(guī)?；斯わ曫B(yǎng)。

1.2 各發(fā)育歷期的形態(tài)特征觀察

卵：將雌成蟲置于載玻片上，滴加生理鹽水，用解剖針將雌成蟲腹部剖開，將卵轉(zhuǎn)移到另一載玻片上，蓋上蓋玻片，用顯微鏡觀察并拍照。幼蟲：解剖被稻虱纓小蜂寄生3 d、5 d、7 d 的灰飛虱卵，其中的幼蟲即為對應(yīng)的1 d、3 d、5 d 齡的幼蟲，將幼蟲轉(zhuǎn)移到有生理鹽水的凹載玻片上，在幼蟲上滴加少許酒精，使其沉入水中，蓋上蓋玻片，進(jìn)行觀察和拍照。蛹、隱羽化期成蟲、成蟲：直接將蛹、隱羽化期成蟲和成蟲放在體視顯微鏡下觀察和拍照。

1.3 各蟲態(tài)歷期的劃分

參考羅肖南[11]纓小蜂研究的結(jié)果并結(jié)合前期的試驗(yàn)結(jié)果，在溫度26 ℃、光周期14L∶10D，RH 80%±10%條件下，將寄生2 d 內(nèi)的蟲態(tài)劃為卵期，寄生3～7 d 為幼蟲期，寄生8～9 d 為蛹期，寄生10 d 為隱羽化期，羽化出殼后為成蟲期。

1.4 各蟲態(tài)冷藏后對適合度的影響

將小麥苗剝?nèi)S葉老葉，接入懷卵灰飛虱（腹部明顯彭大），每棵麥苗2 只，用直徑20 mm，長20 cm亞克力圓管罩住，上端用100 目尼龍網(wǎng)封口，產(chǎn)卵1 d 后，移除灰飛虱成蟲，接入初羽化稻虱纓小蜂1 對（雌、雄各1 只為1 對），寄生第2 d 去除成蟲，分別在寄生1 d、2 d、3 d、4 d、5 d、6 d、7 d、8 d、9 d、10 d 后，放入溫度為5 ℃、8 ℃、11 ℃、12 ℃、26 ℃（CK），光周期14L∶10D 培養(yǎng)箱中貯藏20 d、40 d、60 d 后取出，用0.02%高錳酸鉀溶液表面消毒后，在體視顯微鏡下將麥苗中的灰飛虱卵用消毒過的鑷子全部挑出，置于滅菌過的載玻片上，放在直徑9 cm 墊有濾紙的培養(yǎng)皿里，加適量無菌水保濕培養(yǎng)。培養(yǎng)條件：溫度26 ℃、光周期14L∶10D，RH 80%±10%。羽化后每天記載羽化數(shù)量和性比，并將當(dāng)天羽化的稻虱纓小蜂1 對轉(zhuǎn)移到前一天產(chǎn)過灰飛虱卵的新麥苗上，讓其寄生，5 d 后剝查寄生數(shù)量（被寄生的卵為橙紅色），調(diào)查子代繁殖力。其余纓小蜂轉(zhuǎn)移到新培養(yǎng)皿里觀察成蟲壽命，每個(gè)處理調(diào)查5 株麥苗，并重復(fù)3 次。成蟲的冷藏：用4.5 mL 四面透明的一次性比色皿收集剛羽化的成蟲，用棉花塞住管口，置3 ℃、5 ℃、8 ℃、11 ℃、12 ℃培養(yǎng)箱貯藏10 d、15 d、20 d，統(tǒng)計(jì)存活率后，將存活的成蟲轉(zhuǎn)移至前一天產(chǎn)過灰飛虱卵的麥苗上，每株麥苗接種1 對成蟲，5 d 后剝查寄生數(shù)量，調(diào)查冷藏后的繁殖力（未經(jīng)冷藏的作為對照），每管比色皿裝10 只成蟲，每個(gè)處理3 管，重復(fù)3 次。為便于描述，以下將溫度26 ℃、光周期14L:10D，RH 80%±10%條件下的培養(yǎng)稱為正常培養(yǎng)。

1.5 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析

用Excel 和SPSS 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，數(shù)值采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤（mean±SE）表示，P值小于0.05表示差異達(dá)顯著水平，圖表中的不同英文小寫字母表示在0.05 水平下差異顯著（LSD 法）。

2 結(jié)果與分析

2.1 稻虱纓小蜂各蟲態(tài)的形態(tài)特征

稻虱纓小蜂的卵呈橢圓形，一端細(xì)長，柄狀。長（含柄）121～186 μm，寬22～28 μm。幼蟲前期（孵化2 d）體色透明，頭部前端鈍平，兩側(cè)有一對無色突起，口器退化，僅一對褐色上顎清晰可見；胸部3節(jié)，腹部分節(jié)不明顯，尾部有一對無色突起，幼蟲后期（孵化3～5 d）形體與前期相似，體內(nèi)油球增多，顏色逐漸加深，呈橙紅色或黃綠色（圖1B、C、D）。蛹為離蛹，橘紅色，頭胸腹分化明顯，單眼紫紅色，位于兩復(fù)眼中間，三角形排列（圖1E）。隱羽化期為羽化未出殼期，此時(shí)蟲體與成蟲無異，觸角、口器、復(fù)眼、單眼、翅、產(chǎn)卵器等均清晰可見（圖1F）。雌成蟲體長0.54 mm，橙紅色，復(fù)眼黑褐色，單眼紅色。觸角9 節(jié)，梗節(jié)扁狀，側(cè)面梨形，內(nèi)側(cè)具若干平行橫斜紋，第3 節(jié)最短，短于梗節(jié)的一半，棒節(jié)紡錘形，長為寬的3 倍。前翅較后翅寬，后翅狹窄。產(chǎn)卵器向前達(dá)腹部基部，向后伸出于腹部末端（圖1G）。雄成蟲形態(tài)與雌成蟲相似，體形略小，觸角13 節(jié)鞭狀，第Ⅲ節(jié)稍短于其遠(yuǎn)端的各節(jié)，第IV～Xlll 各節(jié)基本等長（圖1H）。

2.2 卵期不同冷藏處理對適合度的影響

2.2.1 不同冷藏處理對卵孵化發(fā)育的影響 經(jīng)三因素方差分析，其結(jié)果表明，冷藏溫度（F＝1414.064；P＝0.00）、冷藏時(shí)間（F＝505.445；P＝0.000）和冷藏溫度×冷藏時(shí)間（F＝59.949；P＝0.000）對稻虱纓小蜂卵的孵化發(fā)育產(chǎn)生顯著影響，冷藏卵齡（F＝0.963；P＝0.331）、冷藏溫度×冷藏卵齡（F＝0.569；P＝0.638）、冷藏時(shí)間×冷藏卵齡（F＝1.977；P＝0.149）和冷藏溫度×冷藏時(shí)間×冷藏卵齡（F＝0.442；P＝0.847）均對孵化發(fā)育無顯著影響。

灰飛虱卵被稻飛虱纓小蜂寄生后，正常培養(yǎng)7 d，在體視顯微鏡下，可以清晰地觀察到被寄生卵由半透明基本無色轉(zhuǎn)變成橙紅色或淺黃綠色。在5 ℃條件下，冷藏20 d 以上，再正常培養(yǎng)7 d 后，未剝查到轉(zhuǎn)色的被稻虱纓小蜂寄生的灰飛虱卵，說明稻虱纓小蜂的卵在上述條件下處理后，不能孵化或孵化后不能正常發(fā)育。在8 ℃條件下，冷藏40 d 內(nèi)，有部分寄生卵可正常孵化和發(fā)育，相同冷藏時(shí)間處理的1 d 與2 d卵齡的正常發(fā)育數(shù)量之間無顯著差異。冷藏20 d，寄生卵能正常發(fā)育的數(shù)量與對照相比，只有43.89%。冷藏60 d 后，寄生卵不能正常發(fā)育。在11 ℃條件下，冷藏60 d 內(nèi)，均有部分寄生卵能正常發(fā)育，但隨冷藏時(shí)間的延長，正常發(fā)育的數(shù)量逐漸下降。在12 ℃下冷藏，發(fā)育數(shù)有所增加，但冷藏時(shí)間最短的20 d，正常發(fā)育的數(shù)量也只有對照的76.82%。說明不適合在卵期進(jìn)行冷藏（表1）。

2.2.2 卵期不同冷藏處理對成蟲壽命、成蟲性比和子代數(shù)量的影響 卵期不同冷藏處理經(jīng)三因素方差分析，冷藏溫度（F壽命＝7.999；P壽命＝0.002）和冷藏時(shí)間（F壽命＝97.136；P壽命＝0.000）對成蟲壽命產(chǎn)生顯著影響，卵齡（F壽命＝0.205；P壽命＝0.654）對成蟲壽命無顯著影響，冷藏溫度×卵齡（F壽命＝1.606；P壽命＝0.216）和冷藏溫度×冷藏時(shí)間×卵齡（F壽命＝0.449；P壽命＝0.720）也無顯著影響。

冷藏20 d 內(nèi)，只有12 ℃下的成蟲壽命與對照相比有顯著差異，8 ℃和11 ℃的成蟲壽命與對照相比無顯著差異。8 ℃～12 ℃范圍內(nèi)，成蟲壽命隨溫度的升高而縮短，也隨冷藏時(shí)間的延長而縮短，12 ℃冷藏60 d 后壽命與對照相比顯著縮短，縮短了1.20 d。

卵期不同冷藏處理經(jīng)三因素方差分析，冷藏溫度（F♀＝0.110；P♀＝0.896）、冷藏時(shí)間（F♀＝2.547；P♀＝0.094）和卵齡（F♀＝0.124；P♀＝0.727）對成蟲的性比無顯著影響，雌雄比接近1∶1；冷藏溫度（F子代數(shù)＝0.318；P子代數(shù)＝0.729）、冷藏時(shí)間（F子代數(shù)＝0.458；P子代數(shù)＝0.637）和卵齡（F子代數(shù)＝0.539；P子代數(shù)＝0.468）對子代數(shù)也無顯著影響（表2）。

表2 卵期不同冷藏處理對稻虱纓小蜂成蟲壽命、成蟲性比和子代數(shù)的影響Table 2 Effects of cold storage on Anagrus nilaparvatae adult lifespan, sex ratio and fecundity at egg stage

2.3 幼蟲期不同冷藏處理對適合度的影響

2.3.1 幼蟲期不同冷藏處理對羽化率的影響 稻虱纓小蜂幼蟲期的冷藏處理，經(jīng)三因素方差分析，冷藏溫度（F＝486.942；P＝0.000）和冷藏時(shí)間（F＝1780.897；P＝0.000）對羽化率產(chǎn)生顯著影響，蟲齡（F＝1.285；P＝0.280）對羽化率無顯著影響。冷藏溫度×冷藏時(shí)間（F＝44.823；P＝0.000）對羽化率產(chǎn)生了顯著影響，冷藏溫度×蟲齡（F＝0.745；P＝0.705）、冷藏時(shí)間×蟲齡（F＝0.683；P＝0.706）和冷藏溫度×冷藏時(shí)間×蟲齡（F＝0.778；P＝0.757）均對羽化率無顯著影響。

羽化率隨著冷藏時(shí)間的延長而下降，但在不同溫度下，下降幅度有所不同，溫度越低，下降幅度越大。在相同冷藏溫度下，幼蟲期不同蟲齡之間的羽化率差異不顯著。在5 ℃～12 ℃范圍內(nèi)，11 ℃和12 ℃冷藏的羽化率受低溫時(shí)間的影響最小，冷藏20 d 的平均羽化率高于80.00%，11 ℃和12 ℃冷藏40 d 的平均羽化率分別為64.85%和64.95%，兩者相當(dāng)，但12 ℃冷藏60 d 后的平均羽化率大幅度下降，為34.93%，11 ℃冷藏60 d 后的平均羽化率還可保留有50.69%，因此，從羽化率這個(gè)因素考慮，11 ℃是合適的冷藏溫度（表3）。

表3 稻虱纓小蜂幼蟲期各蟲齡冷藏后的羽化率Table 3 The average eclosion rate of Anagrus nilaparvatae after cold storage at larvae stage (%)

2.3.2 幼蟲期不同冷藏處理對成蟲性比的影響 經(jīng)三因素方差分析，其結(jié)果表明，冷藏溫度（F＝0.883；P＝0.452）、冷藏時(shí)間（F＝0.302；P＝0.740）、蟲齡（F＝0.531；P＝0.713）、冷藏溫度×冷藏時(shí)間（F＝1.445；P＝0.203）、冷藏時(shí)間×蟲齡（F＝0.718；P＝0.675）和冷藏溫度×冷藏時(shí)間×蟲齡（F＝0.518；P＝0.968）均對成蟲的性比無顯著影響。同樣，所有處理的雌蟲比例與對照組均無顯著性差異（表4），雌雄比例接近1∶1。由此可見，幼蟲期低溫貯藏并不會對稻虱纓小蜂的成蟲性比產(chǎn)生影響。

表4 稻虱纓小蜂幼蟲期各蟲齡冷藏后的雌成蟲比例Table 4 Female percentages of Anagrus nilaparvatae after cold storage at larvae stage (%)

2.3.3 幼蟲期不同冷藏處理對成蟲壽命的影響 經(jīng)三因素方差分析結(jié)果表明，冷藏溫度（F＝230.218；P＝0.000）、冷藏時(shí)間（F＝124.196；P＝0.000）和冷藏溫度×冷藏時(shí)間（F＝8.745；P＝0.000）對稻虱纓小蜂的成蟲壽命產(chǎn)生顯著影響，蟲齡（F＝1.042；P＝0.388）、冷藏溫度×蟲齡（F＝1.255；P＝0.255）、冷藏時(shí)間×蟲齡（F＝0.722；P＝0.671）和冷藏溫度×冷藏時(shí)間×蟲齡（F＝1.097；P＝0.358）均對壽命無顯著影響。

在5 ℃～12 ℃范圍內(nèi)，成蟲壽命隨著溫度的升高而縮短，隨冷藏時(shí)間的延長而縮短，不同蟲齡在相同溫度相同冷藏時(shí)間的壽命差異不顯著。雖然不同溫度和不同冷藏時(shí)間之間差異顯著，但下降幅度較小，壽命最短的11 ℃冷藏60 d 的壽命2.46 d，只比對照短了0.66 d（表5）。

表5 稻虱纓小蜂幼蟲期各蟲齡冷藏后的成蟲壽命Table 5 Adult lifespan of Anagrus nilaparvatae after cold storage at larvae stage (d)

2.3.4 幼蟲期不同冷藏處理對子代數(shù)量的影響 經(jīng)三因素方差分析結(jié)果表明，冷藏溫度（F＝0.670；P＝0.572）、冷藏時(shí)間（F＝0.792；P＝0.455）、蟲齡（F＝1.289；P＝0.278）、冷藏溫度×冷藏時(shí)間（F＝0.378；P＝0.892）、冷藏溫度×蟲齡（F＝0.219；P＝0.997）、冷藏時(shí)間×蟲齡（F＝0.399；P＝0.919）和冷藏溫度×冷藏時(shí)間×蟲齡（F＝1.090；P＝0.366）均對子代數(shù)量無顯著影響，所有處理的子代數(shù)量與對照均無顯著性差異（表6），由此可見，幼蟲期低溫貯藏不會對稻虱纓小蜂的子代數(shù)量產(chǎn)生顯著影響。

表6 稻虱纓小蜂幼蟲期各蟲齡冷藏后的子代數(shù)量Table 6 Fecundity of Anagrus nilaparvatae after cold storage at larvae stage

2.4 蛹期不同冷藏處理對適合度的影響

2.4.1 蛹期不同冷藏處理對羽化率的影響 經(jīng)三因素方差分析結(jié)果表明，冷藏溫度（F＝156.211；P＝0.000）、冷藏時(shí)間（F＝643.982；P＝0.000）和冷藏溫度×冷藏時(shí)間（F＝4.264；P＝0.002）對羽化率產(chǎn)生顯著影響，蛹齡（F＝0.343；P＝0.561）、冷藏溫度×蛹齡（F＝0.205；P＝0.893）、冷藏時(shí)間×蛹齡（F＝1.878；P＝0.164）和冷藏溫度×冷藏時(shí)間×蛹齡（F＝1.087；P＝0.384）均對羽化率無顯著影響。

蛹期冷藏后的羽化率隨溫度的降低而下降，隨冷藏時(shí)間的延長而下降，不同蛹齡之間的羽化率沒有顯著差異，在11 ℃下冷藏20 d 的羽化率達(dá)82.81%（兩個(gè)齡期的平均值），冷藏60 d 的羽化率也較高，為46.68%（表7）。

表7 稻虱纓小蜂蛹期冷藏后的羽化率Table 7 The average eclosion rate of Anagrus nilaparvatae after cold storage at pupal stage (%)

2.4.2 蛹期不同冷藏處理對成蟲性比的影響 經(jīng)三因素方差分析結(jié)果表明，冷藏溫度（F＝0.507；P＝0.679）、冷藏時(shí)間（F＝0.743；P＝0.679）、蛹齡（F＝0.806；P＝0.374）、冷藏溫度×冷藏時(shí)間（F＝0.112；P＝0.995）、冷藏溫度×蛹齡（F＝0.998；P＝0.402）、冷藏時(shí)間×蛹齡（F＝0.611；P＝0.547）和冷藏溫度×冷藏時(shí)間×蛹齡（F＝0.125；P＝0.993）均對成蟲性比無顯著影響（表8）。

表8 稻虱纓小蜂蛹期冷藏后的雌成蟲比例Table 8 Female percentages of Anagrus nilaparvatae after cold storage at pupal stage (%)

2.4.3 蛹期不同冷藏處理對成蟲壽命的影響 經(jīng)三因素方差分析結(jié)果表明，冷藏溫度（F＝42.790；P＝0.000）、冷藏時(shí)間（F＝182.843；P＝0.000）和冷藏溫度×冷藏時(shí)間（F＝2.590；P＝0.030）對成蟲壽命產(chǎn)生顯著影響，蛹齡（F＝0.004；P＝0.950）、冷藏溫度×蛹齡（F＝1.552；P＝0.213）、冷藏時(shí)間×蛹齡（F＝0.084；P＝0.420）和冷藏溫度×冷藏時(shí)間×蛹齡（F＝0.911；P＝0.495）對成蟲壽命無顯著影響。

蛹期在5 ℃～12 ℃范圍內(nèi)冷藏后，成蟲壽命隨冷藏溫度的升高而縮短，隨冷藏時(shí)間的延長而縮短。1 d和2 d 兩個(gè)蛹齡之間的成蟲壽命差異不顯著，5 ℃冷藏20 d 與8 ℃冷藏20 d、40 d 和11 ℃冷藏20 d 的成蟲壽命與對照相比差異不顯著（表9）。

表9 稻虱纓小蜂蛹期冷藏后的成蟲壽命Table 9 Adult lifespan of Anagrus nilaparvatae after cold storage at pupal stage (d)

2.4.4 蛹期不同冷藏處理對子代數(shù)的影響 經(jīng)三因素方差分析結(jié)果表明，冷藏溫度（F＝1.127；P＝0.348）、冷藏時(shí)間（F＝0.822；P＝0.446）、蛹齡（F＝0.309；P＝0.581）、冷藏溫度×蛹齡（F＝0.970；P＝0.414）、冷藏溫度×冷藏時(shí)間（F＝0.956；P＝0.465）、冷藏時(shí)間×蛹齡（F＝0.135；P＝0.874）和冷藏溫度×冷藏時(shí)間×蛹齡（F＝0.536；P＝0.778）均對子代數(shù)量無顯著影響（表10）。

表10 稻虱纓小蜂蛹期冷藏后的子代數(shù)量（只）Table 10 Fecundity of Anagrus nilaparvatae after cold storage at pupal or cryptoeclosion stage

2.5 隱羽化期不同冷藏處理對適合度的影響

隱羽化期不同冷藏處理經(jīng)兩因素方差分析，冷藏溫度（F羽化率＝46.523；P羽化率＝0.000）、冷藏時(shí)間（F羽化率＝380.253；P羽化率＝0.000）和冷藏溫度×冷藏時(shí)間（F羽化率＝20.889；P羽化率＝0.000）對羽化率產(chǎn)生顯著影響。隱羽化期冷藏后，羽化率隨著冷藏時(shí)間的延長而下降，在5 ℃～12 ℃范圍內(nèi)，與對照相比，羽化率均顯著低于對照，說明在隱羽化期冷藏，羽化率易受低溫影響，不宜在此階段進(jìn)行冷藏。在不同冷藏溫度下，羽化率下降幅度有所不同，相同冷藏時(shí)間條件下，11 ℃的羽化率下降幅度最小，5 ℃的下降幅度最大。

經(jīng)兩因素方差分析，冷藏溫度（F♀＝0.306；P♀＝0.821）和冷藏時(shí)間（F♀＝0.210；P♀＝0.812）對成蟲的性比無顯著影響，雌雄比接近1∶1；冷藏溫度（F子代數(shù)＝1.426；P子代數(shù)＝0.260）和冷藏時(shí)間（F子代數(shù)＝0.340；P子代數(shù)＝0.715）對子代數(shù)也無顯著影響。

經(jīng)兩因素方差分析，冷藏溫度（F壽命＝204.158；P壽命＝0.000）和冷藏時(shí)間（F壽命＝100.609；P壽命＝0.000）和冷藏溫度×冷藏時(shí)間（F壽命＝2.538；P壽命＝0.048）對成蟲壽命產(chǎn)生顯著影響。冷藏后，在8 ℃～12 ℃范圍內(nèi)，成蟲壽命隨溫度的升高而縮短，也隨冷藏時(shí)間的延長而縮短。5 ℃冷藏20 d 內(nèi)，成蟲壽命與對照相當(dāng)，無顯著差異，其它處理的成蟲壽命均比對照顯著縮短，12 ℃冷藏60 d 的壽命縮短最多，縮短了1.42 d，與對照相比，縮短了53.90%（表11）。

表11 隱羽化期不同冷藏處理對稻虱纓小蜂羽化率、成蟲壽命、成蟲性比和子代數(shù)的影響Table 11 Effects of cold storage on Anagrus nilaparvatae eclosion rate, adult lifespan, sex ratio and fecundity at cryptoeclosion stage

2.6 成蟲冷藏對適合度的影響

2.6.1 成蟲冷藏后的存活率 經(jīng)兩因素方差分析結(jié)果表明，冷藏時(shí)間（F＝2190.736；P＝0.000）對存活率產(chǎn)生顯著影響，冷藏溫度（F＝0.732；P＝0.577）以及冷藏溫度×冷藏時(shí)間（F＝0.998；P＝0.458）對存活率無顯著影響。

在3 ℃～12 ℃范圍內(nèi)，相同冷藏時(shí)間不同冷藏溫度之間的存活率無顯著差異，相同冷藏溫度不同冷藏時(shí)間之間的存活率差異顯著。成蟲冷藏后的存活率隨冷藏時(shí)間的延長而降低，冷藏10 d 的存活率92%以上，冷藏15 d 的存活率82%以上，冷藏20 d 的存活率大幅度下降，存活率低于50%（圖2）。

2.6.2 成蟲冷藏后的繁殖力 經(jīng)兩因素方差分析結(jié)果表明，冷藏溫度（F＝20.517；P＝0.000）、冷藏時(shí)間（F＝1073.391；P＝0.000）以及冷藏溫度×冷藏時(shí)間（F＝5.667；P＝0.000）均對繁殖力有顯著影響。

成蟲在3 ℃～11 ℃范圍內(nèi)，不同溫度相同冷藏時(shí)間的寄生數(shù)量之間無顯著差異，相同溫度不同冷藏時(shí)間的寄生數(shù)量之間存在顯著差異。在3 ℃～12 ℃范圍內(nèi)，寄生數(shù)量隨著冷藏時(shí)間的延長而顯著下降，12 ℃下冷藏的寄生數(shù)量下降幅度大于其它各溫度，并與其它各溫度的寄生數(shù)量均存在顯著差異，冷藏15 d的寄生數(shù)量大幅下降，寄生數(shù)量最多的11 ℃冷藏15 d 處理也只有對照的53.36%。在3 ℃～11 ℃范圍內(nèi)，冷藏10 d 的寄生數(shù)量與對照相比無顯著差異，但在12 ℃下冷藏10 d 的寄生數(shù)量與3 ℃～11 ℃和對照相比均顯著下降。在3 ℃～12 ℃范圍內(nèi)冷藏20 d，成蟲寄生數(shù)量均為0，表明已完全喪失寄生能力（圖3）。

圖3 稻虱纓小蜂成蟲冷藏后的繁殖力Fig.3 Fecundity of Anagrus nilaparvatae after cold storage at adult stage

3 討論

本研究稻虱纓小蜂雌成蟲體長0.54 mm，短于龐雄飛等[12]記載的0.79 mm，差異較大。造成形體大小差異的原因是稻虱纓小蜂寄主較多，褐飛虱、白背飛虱、灰飛虱和小寬頭飛虱等均是其寄主，成蟲形體大小會因寄主卵的大小而發(fā)生變化，寄主卵大的其成蟲體形相應(yīng)較大。本研究中的稻虱纓小蜂是以灰飛虱為寄主飼養(yǎng)的，灰飛虱卵的個(gè)體比褐飛虱卵小，因此，文中所述成蟲體長短于文獻(xiàn)記載的情況是正常的。

低溫貯藏可以延緩昆蟲天敵的發(fā)育進(jìn)度或暫停發(fā)育，能夠延長昆蟲天敵的保存時(shí)間，實(shí)現(xiàn)天敵與寄主寄生期的相遇，有利于天敵的大量積累，保證釋放期有充足的天敵。但冷藏對昆蟲天敵有傷害作用，冷藏溫度和冷藏時(shí)間均可對天敵產(chǎn)生不良影響，不同蟲態(tài)對低溫和冷藏時(shí)間的耐受能力也不同。有些研究表明，略高于昆蟲發(fā)育起點(diǎn)溫度（T0）的低溫是最佳的冷藏溫度，如Anagyrusananatis、Leptomastixdactylopii、Telenomuspodisi的適宜冷藏溫度均略高于發(fā)育起點(diǎn)溫度[13-16]。而有些天敵昆蟲的最適冷藏溫度卻低于發(fā)育起點(diǎn)溫度。Aphidiusgifuensis、Muscidifuraxraptor和Aphidiusmatricariae的適合冷藏溫度均低于發(fā)育起點(diǎn)溫度[14-18]。一般冷藏溫度越低，死亡率越高[15,18]，但也有一些寄生蜂的存活率與冷藏溫度（一定溫度范圍內(nèi)）無顯著相關(guān)[18,24]。在適宜的冷藏溫度下，冷藏效果一般隨冷藏時(shí)間的延長而下降[15,16]。本研究表明，稻虱纓小蜂的適宜冷藏溫度為11 ℃，略高于發(fā)育起點(diǎn)溫度（稻虱纓小蜂的雌雄平均發(fā)育起點(diǎn)溫度為10.61 ℃[17]），在此溫度下，稻虱纓小蜂冷藏適合度的關(guān)鍵因子羽化率（雖然冷藏后成蟲壽命隨著溫度的升高而縮短，隨冷藏時(shí)間的延長而縮短，但對子代數(shù)并不造成影響，而且溫度和冷藏時(shí)間對性比也沒有顯著影響，各蟲齡之間也無顯著差異，因此，冷藏適合度的關(guān)鍵因子為羽化率）受低溫和冷藏時(shí)間的影響最小，冷藏60 d 的平均羽化率還可保留50.69%。稻虱纓小蜂冷藏后的羽化率除受冷藏溫度和冷藏時(shí)間的影響外，冷藏載體小麥苗對稻虱纓小蜂的羽化率也有一定的影響，小麥苗在冷藏過程中部分老葉會枯死，致使其內(nèi)的稻虱纓小蜂失水死亡而降低羽化率。因此，要提高羽化率，還需篩選更耐寒的小麥品種作為稻虱纓小蜂的冷藏載體。

此外，相關(guān)研究表明不同蟲態(tài)的耐寒能力存在差異，草地貪夜蛾不同蟲態(tài)的耐低溫能力依次為卵＜成蟲＜幼蟲＜蛹[18]。雙委夜蛾老熟幼蟲和蛹的耐寒性最強(qiáng)[19]，Trichogrammapintoi在0 ℃～5 ℃范圍內(nèi)以預(yù)蛹期和前蛹期冷藏效果最好[20]，卷蛾分索赤眼蜂Trichogrammabactrae在3 ℃～5 ℃下老熟幼蟲最適合于冷藏[21]，麥蛾繭蜂Habrobraconbebetor則以成蟲更適合冷藏[22,23]，有的寄生蜂在不同的溫度下適合冷藏的蟲態(tài)不同，如松毛蟲赤眼蜂Trichogrammadendrolimi在4 ℃下最適合冷藏的蟲態(tài)是幼蟲期和蛹，在7 ℃下以卵和蛹期冷藏效果最佳[24]。本研究表明在卵期進(jìn)行冷藏，受冷害較嚴(yán)重，部分卵不能正常孵化發(fā)育，損失較大，不適合在卵期進(jìn)行冷藏；在隱羽化期進(jìn)行冷藏其羽化率明顯下降，而成蟲冷藏會喪失寄生能力，說明隱羽化期和成蟲也不適合于冷藏。綜上所述，稻虱纓小蜂以幼蟲期和蛹期進(jìn)行冷藏效果最好，冷藏溫度以11 ℃最為適宜。本研究探索了稻虱纓小蜂的適宜冷藏蟲態(tài)和冷藏溫度，為進(jìn)一步優(yōu)化稻虱纓小蜂的冷藏條件奠定了工作基礎(chǔ)，為稻虱纓小蜂的積累和延長貨架期提供了一定的理論依據(jù)。