亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        不同檢測(cè)方法對(duì)奶牛嗜血支原體病流行病學(xué)的調(diào)查

        2023-12-24 09:05:58劉志彬
        中國(guó)乳業(yè) 2023年11期
        關(guān)鍵詞:染色法壓片嗜血

        劉志彬

        香河縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局,河北廊坊 065400

        0 引言

        嗜血支原體(Mycoplasma wenyonii)是一種無(wú)細(xì)胞核、細(xì)胞壁和細(xì)胞器的原核生物,活動(dòng)能力較強(qiáng),形態(tài)多樣,大多寄生于紅細(xì)胞表面、血漿和骨髓中。嗜血支原體自1928年首次在切除脾的鼠體中發(fā)現(xiàn)以來(lái),已在牛、豬、犬、兔、羊、雞等多種動(dòng)物和人體內(nèi)發(fā)現(xiàn)[1]。該病原體早期稱附紅細(xì)胞體,歸為立克次氏體目,但根據(jù)電鏡觀察及16S rRNA基因序列分析結(jié)果,因與肺炎支原體密切相關(guān),被劃為支原體屬[2,3]。奶牛嗜血支原體病是由牛嗜血支原體引起的以發(fā)熱、黃疸、貧血為主要癥狀的人獸共患病,可經(jīng)血液、消化道、蟲媒介等多種途徑傳播,四季流行,夏季多發(fā)。各年齡階段奶牛均可感染發(fā)病,出現(xiàn)體重下降,生長(zhǎng)阻滯,懷孕奶牛流產(chǎn)或胎衣不下,泌乳牛產(chǎn)奶量明顯減少的多樣化臨床癥狀。感染奶牛通常發(fā)病較慢,呈隱性感染,是潛在病原體的攜帶者和重要傳染源,往往被養(yǎng)殖者忽視。同時(shí),由于長(zhǎng)期攜帶病原體,導(dǎo)致感染奶牛機(jī)體免疫力降低,容易造成其他病原微生物侵入而繼發(fā)或混合感染疾病。該病在奶牛養(yǎng)殖場(chǎng)流行較廣,感染率可達(dá)86.2%[4],嚴(yán)重影響奶牛養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)效益和健康發(fā)展。

        準(zhǔn)確鑒定病原體對(duì)及時(shí)預(yù)防和治療該病具有重要作用。目前,實(shí)驗(yàn)室診斷該病方法較多,如鏡檢方法(包括直接血液涂片法、懸滴壓片法、姬姆薩染色法、瑞氏染色法)、血清學(xué)檢測(cè)方法、聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)法等?;鶎荧F醫(yī)臨床多采用鏡檢方法作為常規(guī)檢測(cè)手段,但容易出現(xiàn)誤診,準(zhǔn)確度不如PCR等分子生物技術(shù)高,要準(zhǔn)確檢測(cè)病原體需進(jìn)一步借助分子生物技術(shù)。因此,需尋求更接近PCR技術(shù)的常規(guī)檢測(cè)方法應(yīng)用于臨床診斷,必要時(shí)進(jìn)一步采用PCR確診。河北省香河縣奶牛養(yǎng)殖有一定規(guī)模,但針對(duì)該病的流行情況缺乏系統(tǒng)、全面調(diào)查。為了解該病在本地區(qū)的感染態(tài)勢(shì),本研究于2021年3月—2022年7月在香河縣采集9 家奶牛養(yǎng)殖場(chǎng)2 562頭奶牛血樣,采用鏡檢和PCR結(jié)合方法進(jìn)行嗜血支原體病原學(xué)檢測(cè),分析感染情況,為防治奶牛嗜血支原體病提供參考。

        1 材料和方法

        1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

        2021年3—4月在香河縣8 家奶牛養(yǎng)殖場(chǎng)選取泌乳牛781 頭,每頭牛頸靜脈部位采集全血10 mL,裝入含3.8%檸檬酸鈉的離心管,-20 ℃保存?zhèn)溆谩2捎弥苯油科?、血液懸滴壓片法、姬姆薩染色法、瑞氏染色法和PCR方法分別對(duì)781 份血樣檢測(cè)嗜血支原體,通過(guò)比對(duì)陽(yáng)性率,選擇與PCR方法陽(yáng)性率接近的鏡檢方法,同時(shí)對(duì)奶牛不同年齡階段、不同季節(jié)和垂直傳播的感染情況進(jìn)行調(diào)查。2021年5月,在6 家奶牛養(yǎng)殖場(chǎng)根據(jù)不同年齡階段(犢牛、青年牛、泌乳牛)選取810 頭奶牛檢測(cè)嗜血支原體。2021年6月—2022年7月,在9 家奶牛養(yǎng)殖場(chǎng)選取971 頭奶牛根據(jù)不同季節(jié)分類檢測(cè)嗜血支原體。同時(shí),另選取30 頭病原體陽(yáng)性的妊娠奶牛,分別于產(chǎn)前7 d尾靜脈采血、產(chǎn)后新生犢牛臍靜脈采血,檢測(cè)垂直傳播的感染情況。

        1.2 主要試劑

        全血基因組DNA提取試劑盒購(gòu)自Promega公司;r Taq DNA聚合酶、DL2000 DNA Marker、d NTP等PCR相關(guān)試劑購(gòu)自TaKaRa公司;瑞氏染色液、姬姆薩染色液等試劑購(gòu)自南昌雨露實(shí)驗(yàn)器材有限公司。

        1.3 引物

        根據(jù)GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)收錄的嗜血支原體 16S rRNA基因序列(登錄號(hào):AY946266),利用Primer5.0軟件設(shè)計(jì)一對(duì)種特異性引物。上游引物F:5'-CGAACGAGTGGAACTTGTTCTGC-3',下游引物R:5'-TAGTACCATCAAGGCGTGCTC-3',由上海英駿生物技術(shù)有限公司合成。預(yù)計(jì)擴(kuò)增片段大小為415 bp。

        1.4 鏡檢方法

        參考楊紅英[4]等報(bào)道的方法對(duì)血液樣本分別采用血液懸滴壓片法、直接涂片法、姬姆薩染色法、瑞氏染色法進(jìn)行嗜血支原體鏡檢,并觀察結(jié)果。陰陽(yáng)性結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn):每份血液樣本在4×100 倍光鏡下觀察20 個(gè)視野,紅細(xì)胞中可見(jiàn)1 個(gè)嗜血支原體者,判為陽(yáng)性,未觀察到嗜血支原體者,判為陰性。

        感染強(qiáng)度判定標(biāo)準(zhǔn):每份血樣記數(shù)100 個(gè)紅細(xì)胞,紅細(xì)胞感染率≤25%者為“+”;25%<紅細(xì)胞感染率≤50%者為“++”;50%<紅細(xì)胞感染率≤75%者為“+++”;75%<紅細(xì)胞感染率≤100%者為“++++”[5]。

        1.5 PCR 檢測(cè)

        取血液樣本以3 500 r/min離心5 min,收集上清液,按照全血基因組DNA提取試劑盒說(shuō)明書提取DNA,以DNA為模板,利用P1/P2引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增檢測(cè)。50 μL擴(kuò)增體系25 μL:d NTP 5 μL,MgCL2 3 μL,r Taq DNA聚合酶1.25 μL,模板DNA 2 μL,上、下游引物各1 μL,加無(wú)菌水至25 μL。反應(yīng)條件:94 ℃預(yù)變性10 min;94 ℃變性30 s、55 ℃退火30 s、72 ℃延伸90 s,運(yùn)行共32 個(gè)循環(huán),最后,72 ℃終延伸10 min。PCR產(chǎn)物經(jīng)1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè),在凝膠成像系統(tǒng)上觀察目的片段。

        1.6 統(tǒng)計(jì)分析

        采用SPSS 20.0軟件對(duì)不同檢測(cè)方法結(jié)果進(jìn)行方差檢驗(yàn),P<0.05表示差異顯著。

        2 結(jié)果

        2.1 不同方法檢測(cè)奶牛嗜血支原體陽(yáng)性率的結(jié)果比較

        采用4 種不同方法對(duì)7 8 1 頭奶牛血樣進(jìn)行嗜血支原體檢測(cè),結(jié)果發(fā)現(xiàn)(表1),懸滴壓片法、姬姆薩染色法、瑞氏染色法獲得血樣陽(yáng)性率均高于PCR法,但各組之間差異不顯著(P>0.05)。直接涂片法顯著高于其他檢測(cè)方法(P<0.05)。

        表1 不同方法檢測(cè)奶牛嗜血支原體陽(yáng)性率的結(jié)果比較

        2.2 不同年齡階段的奶牛嗜血支原體陽(yáng)性率和發(fā)病率比較

        懸滴壓片法和PCR法檢測(cè)泌乳牛感染的陽(yáng)性率和發(fā)病率均顯著高于犢牛和青年牛(P<0.05)。不同年齡階段的PCR感染陽(yáng)性率和發(fā)病率依次為:泌乳牛>犢牛>青年牛(表2)。

        表2 不同年齡階段的奶牛嗜血支原體陽(yáng)性率和發(fā)病率比較

        2.3 不同季節(jié)的奶牛嗜血支原體陽(yáng)性率和發(fā)病率比較

        夏季奶牛嗜血支原體陽(yáng)性率最高(表3),P C R 檢測(cè)陽(yáng)性率6 0.8 5%,與其他季節(jié)差異顯著(P<0.05);秋季顯著高于春季和冬季(P<0.05)。

        表3 不同季節(jié)的奶牛嗜血支原體陽(yáng)性率和發(fā)病率比較

        2.4 奶牛嗜血支原體的垂直傳播情況

        選擇無(wú)任何臨床癥狀的陽(yáng)性妊娠奶牛所產(chǎn)的30 頭新生犢牛,采用血液懸滴壓片法檢測(cè)嗜血支原體陽(yáng)性率為83.33%,PCR法陽(yáng)性率73.33%,妊娠奶牛、新生犢牛發(fā)病率分別13.33%、10.00%(表4),兩者無(wú)顯著性差異(P>0.05),結(jié)果表明嗜血支原體可由妊娠奶牛垂直傳播給犢牛。

        表4 奶牛嗜血支原體的垂直傳播情況

        3 討論

        近年來(lái),我國(guó)奶牛養(yǎng)殖規(guī)?;潭戎鸩教岣?,飼養(yǎng)管理走向精細(xì)化,但一些奶牛養(yǎng)殖場(chǎng)的飼養(yǎng)管理技術(shù)和疫病防治手段還無(wú)法徹底遏制嗜血支原體病的傳染,尤其是大量散養(yǎng)模式生產(chǎn)進(jìn)一步增加了防控難度。此外,從該病流行特點(diǎn)看,感染奶牛多無(wú)臨床表現(xiàn),發(fā)病率不高,而嗜血支原體陽(yáng)性率仍較高,流行廣泛,且病原體可經(jīng)母體垂直傳播,這給該病凈化防控帶來(lái)很大困難。因此,在嗜血支原體感染奶牛早期,采取科學(xué)有效的診斷方法發(fā)現(xiàn)并及時(shí)確診,對(duì)了解奶牛感染水平和實(shí)施疫病凈化措施尤為重要。

        目前,常規(guī)的奶牛嗜血支原體病原學(xué)診斷方法主要為血液鏡檢方法和PCR法[6]。血液鏡檢方法是診斷附紅細(xì)胞體病常用方法之一,但存在許多不足,容易造成誤診[7]。本研究采用4 種不同檢測(cè)方法對(duì)781 頭奶牛血樣進(jìn)嗜血支原體檢測(cè),發(fā)現(xiàn)直接涂片法、血液懸滴壓片法、姬姆薩染色法、瑞氏染色法獲得血樣陽(yáng)性率均高于PCR法,這與周作勇等[8]報(bào)道一致。分析原因主要有:一是直接涂片法和血液懸滴壓片法都容易導(dǎo)致紅細(xì)胞變形而被誤判為陽(yáng)性血樣,出現(xiàn)假陽(yáng)性樣本,造成感染率高于實(shí)際數(shù)量。瑞氏染色法和姬姆薩染色法也都可能存在染色液顆粒沉著于紅細(xì)胞表面而被誤判為嗜血支原體。二是奶??赡芡瑫r(shí)感染嗜血支原體和其他形態(tài)相似于嗜血支原體的血液寄生蟲(如無(wú)形體),鏡檢時(shí)很難區(qū)別[8]。作為現(xiàn)代分子生物技術(shù)的PCR法具有靈敏性高、特異性、準(zhǔn)確性可靠的特點(diǎn)[9],適合群體性檢測(cè),可作為實(shí)驗(yàn)室確診手段之一。本研究結(jié)果顯示,血液懸滴壓片法最接近PCR法的檢測(cè)結(jié)果,臨床上可采用該法作為早期診斷,必要時(shí)結(jié)合PCR法確診,有助于提高感染率準(zhǔn)確性。

        奶牛感染嗜血支原體不分年齡階段,但年齡差異影響陽(yáng)性率高低。黃占欣等[5]報(bào)道,邯鄲地區(qū)奶牛附紅細(xì)胞體感染率和發(fā)病率中,犢牛感染率最高為62.3%、發(fā)病率為9.2%,其次是泌乳牛感染率為52.6%、發(fā)病率為1.9%,而青年牛感染率和發(fā)病率相對(duì)較低,分別為48.2%和0.0%。本研究結(jié)果顯示,不同年齡階段PCR感染陽(yáng)性率和發(fā)病率依次為:泌乳牛>犢牛>青年牛,其中泌乳牛與犢牛、青年牛具有顯著差異。上述研究結(jié)果可能與自然飼養(yǎng)環(huán)境、奶牛感染強(qiáng)度、檢測(cè)方法等因素有關(guān)。

        季節(jié)性也是影響奶牛感染嗜血支原體的重要因素,雖然該病發(fā)生無(wú)明顯季節(jié)性,但吸血節(jié)肢動(dòng)物(螨、蜱、虱、蚊、蚤、螫蠅、蠓等)是動(dòng)物嗜血支原體傳播擴(kuò)散的主要媒介,若在夏秋季節(jié),即吸血節(jié)肢動(dòng)物的孳生時(shí)期,在應(yīng)激因素影響下可能引起地方性流行[10]。本研究結(jié)果顯示,夏季是該病感染的高發(fā)期,顯著高于其他季節(jié)(P<0.05),其次為秋季。雖然夏季發(fā)病率最高,但與其他季節(jié)無(wú)差異顯著性(P>0.05)。夏季氣溫高,多雨潮濕,圈舍環(huán)境易滋生蜱、螨等吸血節(jié)肢動(dòng)物,奶牛感染嗜血支原體與體外寄生蟲密切相關(guān)。因此,建議在每年夏季來(lái)臨前、夏季感染高峰期間和初秋3 個(gè)時(shí)間節(jié)點(diǎn)集中進(jìn)行藥物防治和衛(wèi)生消毒。本研究發(fā)現(xiàn)感染嗜血支原體的奶牛陽(yáng)性率高,而發(fā)病率相對(duì)偏低,表明嗜血支原體致病力較弱,這與彭海生等[11]研究一致。

        垂直傳播是奶牛嗜血支原體感染途徑之一。本研究中30 頭妊娠母牛均感染嗜血支原體,發(fā)病率13.33%,經(jīng)過(guò)分娩,30 頭新生犢牛血液懸滴壓片法的檢測(cè)陽(yáng)性率為83.33%、PCR法的陽(yáng)性率為73.33%,表明無(wú)論發(fā)病或隱性感染,妊娠奶牛都可通過(guò)垂直傳播感染新生犢牛。這與李玉文等[12]、李子平等[13]和閆振貴等[14]報(bào)道一致。

        4 小結(jié)

        本研究發(fā)現(xiàn),在常規(guī)的血液鏡檢方法中,血液懸滴壓片法準(zhǔn)確度最接近PCR法,可用于奶牛嗜血支原體的臨床確診。采用這兩種方法檢測(cè)香河縣奶牛感染嗜血支原體情況,結(jié)果顯示奶牛感染率偏高而發(fā)病率低,夏季多發(fā),泌乳牛感染率和發(fā)病率顯著高于犢牛和青年牛。建議根據(jù)該病流行特點(diǎn),加強(qiáng)疫病凈化,減少傳播風(fēng)險(xiǎn)。

        猜你喜歡
        染色法壓片嗜血
        番茄復(fù)合壓片糖果粉末直接壓片工藝
        壓片糖果的制備方法及產(chǎn)品開(kāi)發(fā)研究進(jìn)展
        抗酸染色法、細(xì)菌培養(yǎng)法和實(shí)時(shí)熒光PCR法在分枝桿菌檢查中的應(yīng)用比較
        壓片玉米使用中的幾個(gè)誤區(qū)
        淺述豬副嗜血桿菌病的綜合防治
        小腦組織壓片快速制作在組織學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中的應(yīng)用
        PCR技術(shù)、抗酸染色法在肺結(jié)核病理學(xué)診斷中應(yīng)用比較
        副豬嗜血桿菌病及其診治體會(huì)
        河市某規(guī)模豬場(chǎng)副豬嗜血桿菌病的診斷與防治
        改良抗酸染色法在結(jié)核性漿膜炎臨床診斷中的價(jià)值
        色婷婷久久一区二区三区麻豆| 国产精品老熟女乱一区二区| 精品无人区无码乱码毛片国产| 最新亚洲人成网站在线观看 | 隔壁老王国产在线精品| 国产成人免费一区二区三区| 久久综合视频网站| 国产一区二区三区乱码在线| 免费国产自拍在线观看 | 成人做爰69片免费看网站| 国产高清天干天天视频| 亚洲精品国产综合久久| 草草地址线路①屁屁影院成人| 亚洲中文字幕无码专区| 99久久精品国产片| 精品私密av一区二区三区| 99久久免费只有精品国产| 99久久久无码国产aaa精品| 国产一区二区内射最近人| 日韩人妻中文字幕专区| 丁香六月久久婷婷开心| 国产精品亚洲一区二区无码国产| 最新国产av网址大全| 久久精品熟女亚洲av麻| 亚洲综合区图片小说区| 国产69口爆吞精在线视频喝尿| 亚洲av综合av国一区二区三区| 中文精品久久久久人妻不卡| 青青青国产精品一区二区| 日韩Va亚洲va欧美Ⅴa久久| 精品日本一区二区三区| 中文字幕aⅴ人妻一区二区| 99热最新在线观看| 91青青草手机在线视频| 精品福利一区二区三区免费视频| 精品一区二区久久久久久久网站 | 成人大片免费视频播放一级| 久久久老熟女一区二区三区| 99国产超薄丝袜足j在线播放| 国产日本精品一区二区| 加勒比hezyo黑人专区|