許光勇

(1.北京奶牛中心 , 北京 朝陽(yáng) 100192 ; 2.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所 , 北京 海淀 100193 ;3.北京中育種豬有限責(zé)任公司 , 北京 海淀 100194)

非洲豬瘟(African swine fever,ASF)是由非洲豬瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)感染豬引起的一種熱性、出血性和高度接觸性傳染病,感染后豬群可能出現(xiàn)精神萎靡、采食量下降、全身性出血、體溫升高和母豬流產(chǎn)等典型特征[1]。世界動(dòng)物衛(wèi)生組織將ASF規(guī)定為法定報(bào)告動(dòng)物疫病,我國(guó)將其列為一類傳染病。ASF在我國(guó)已然存在近4年時(shí)間,其對(duì)生豬養(yǎng)殖行業(yè)發(fā)展影響巨大,同時(shí)造成了生豬價(jià)格的大幅波動(dòng)。截至目前,沒(méi)有任何有效的疫苗和藥物可以控制ASF,生物安全是當(dāng)前最有效的防控措施。自2018年以來(lái),首農(nóng)集團(tuán)北京中育種豬有限責(zé)任公司發(fā)揮科技型人才團(tuán)隊(duì)優(yōu)勢(shì),積極探索高效規(guī)模化豬場(chǎng)生物安全防控措施以阻止ASF的傳入,經(jīng)3年養(yǎng)豬現(xiàn)場(chǎng)實(shí)踐,基本形成了以“五級(jí)分區(qū) 三級(jí)管理 二級(jí)洗烘”為標(biāo)準(zhǔn)的首農(nóng)規(guī)?；i場(chǎng)生物安全體系,該體系能夠有效地防控以ASF為代表的豬場(chǎng)常見(jiàn)重要疾病,為保障首農(nóng)集團(tuán)生豬養(yǎng)殖高質(zhì)量健康發(fā)展提供強(qiáng)而有力的技術(shù)支撐。

1 材料與方法

1.1 主要試劑 ZTLYB-Y64 Ex-DNA/RNA病毒核酸提取試劑盒(磁珠法),西安天隆科技有限公司;ASFV核酸定量PCR檢測(cè)試劑盒,北京明日達(dá)科技發(fā)展有限責(zé)任公司。

1.2 主要儀器 NP968-C全自動(dòng)核酸提取儀、96R實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀和PANA9600S全自動(dòng)核酸工作站,西安天隆科技有限公司。

1.3 采樣方法 首農(nóng)規(guī)?；i場(chǎng)生物安全體系構(gòu)建和運(yùn)行過(guò)程中,圍繞車輛、人員、物資、豬群和環(huán)境五大關(guān)鍵要素開(kāi)展樣品采集工作,分為定期和即時(shí)采樣2種方式,其中車輛、人員和物資為隨時(shí)發(fā)生隨時(shí)采樣,各個(gè)關(guān)口、飼養(yǎng)區(qū)域、生活辦公區(qū)域等環(huán)境為每周定時(shí)采樣,豬群根據(jù)疾病發(fā)生狀況靈活安排采樣。使用長(zhǎng)棉簽、紗布擦拭和紗布滾輪等方法進(jìn)行樣品采集操作。

1.4 ASFV核酸檢測(cè) 按照Z(yǔ)TLYB-Y64 Ex-DNA/RNA病毒核酸提取試劑盒說(shuō)明書(shū)步驟提取ASFV核酸。按照ASFV核酸定量PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)步驟應(yīng)用熒光定量PCR檢測(cè)ASFV核酸。熒光定量PCR反應(yīng)條件:50 ℃ 2 min;95 ℃ 3 min;95 ℃ 10 s,60 ℃ 20 s,40個(gè)循環(huán)。試驗(yàn)成立條件:陽(yáng)性對(duì)照Ct值≤30,有明顯指數(shù)增長(zhǎng),呈典型S型曲線;陰性對(duì)照無(wú)Ct值,無(wú)明顯指數(shù)增長(zhǎng)期和平臺(tái)期。結(jié)果判定:檢測(cè)樣品Ct值≤40,有明顯指數(shù)增長(zhǎng),則測(cè)定為ASFV核酸陽(yáng)性;無(wú)Ct值判定為陰性。

2 結(jié)果

2.1 首農(nóng)豬場(chǎng)生物安全體系構(gòu)建 通過(guò)3年豬場(chǎng)實(shí)踐,已經(jīng)形成了以“五級(jí)分區(qū) 三級(jí)管理 二級(jí)洗烘”為標(biāo)準(zhǔn)的首農(nóng)規(guī)?；i場(chǎng)生物安全體系,對(duì)首農(nóng)集團(tuán)規(guī)?；i場(chǎng)的日常運(yùn)營(yíng)起到保駕護(hù)航的重要作用。

2.1.1 五級(jí)分區(qū) 將公司與豬場(chǎng)和周邊環(huán)境人為劃定為5個(gè)不同等級(jí)的生物安全區(qū)域,分別采用紅色、橙色、黃色、藍(lán)色和綠色表示(圖1)。紅區(qū)表示公司與豬場(chǎng)外部不可控區(qū)域,一般是指社會(huì)公共區(qū)域;橙區(qū)表示公司與豬場(chǎng)辦公區(qū)域、洗消烘中心、豬場(chǎng)圍墻周邊的可控區(qū)域,該區(qū)域通常與外部頻繁對(duì)接,是阻止外源性風(fēng)險(xiǎn)傳入的第一道屏障;黃區(qū)表示豬場(chǎng)內(nèi)部生產(chǎn)人員的生活區(qū)域,該區(qū)域主要包括生產(chǎn)人員宿舍、員工食堂、娛樂(lè)場(chǎng)所;藍(lán)色表示豬場(chǎng)內(nèi)除去生活區(qū)和豬舍的場(chǎng)內(nèi)其他作業(yè)區(qū)域,包含場(chǎng)內(nèi)道路、料塔、車輛洗消點(diǎn)、電工房和出豬臺(tái)等;綠區(qū)表示豬舍、豬舍連廊和轉(zhuǎn)豬連廊內(nèi)部區(qū)域。每跨過(guò)一個(gè)區(qū)域即為一個(gè)關(guān)口,分別為一、二、三、四和五級(jí)關(guān)口,經(jīng)過(guò)每個(gè)關(guān)口必須執(zhí)行有效控制措施,并且遵循單向流動(dòng)不可逆原則。

圖1 生物安全五級(jí)分區(qū)示意圖Fig.1 Schematic diagram of biosafety at 5 levels

2.1.2 三級(jí)管理 基于ASF防控需求,結(jié)合北京中育種豬有限責(zé)任公司實(shí)際管理狀況,提煉出三級(jí)管理的創(chuàng)新理念,即公司總部統(tǒng)一管理為第一級(jí)管理、豬場(chǎng)后勤運(yùn)營(yíng)保障管理為第二級(jí)管理和豬場(chǎng)內(nèi)部生產(chǎn)運(yùn)營(yíng)管理為第三級(jí)管理,各級(jí)具有明確分工,各司其職。一級(jí)管理職責(zé)為推行公司各項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)和管理措施,是阻止外源性風(fēng)險(xiǎn)的第一道防線,設(shè)有辦公、初級(jí)隔離、初級(jí)洗消烘和物資配送等功能;二級(jí)管理職責(zé)為對(duì)應(yīng)豬場(chǎng)的管理,對(duì)接公司總部的各項(xiàng)措施落地,阻止外源性風(fēng)險(xiǎn)直接傳入豬場(chǎng)內(nèi),是阻止外源性風(fēng)險(xiǎn)的第二道防線,設(shè)有豬場(chǎng)辦公、二次隔離、二次洗消烘、物資接收消毒和配送、待售豬只中轉(zhuǎn)銷售等功能;三級(jí)管理主要職責(zé)為生產(chǎn),即保證生產(chǎn)正常穩(wěn)定運(yùn)營(yíng)。

2.1.3 二級(jí)洗烘 根據(jù)當(dāng)前ASF流行態(tài)勢(shì)和大環(huán)境影響,北京中育種豬有限責(zé)任公司建立了2個(gè)等級(jí)洗消中心,分別為社會(huì)(一級(jí))洗消中心和內(nèi)部(二級(jí))洗消中心,其功能主要為社會(huì)車輛和豬場(chǎng)內(nèi)部車輛提供清洗、消毒和烘干。通過(guò)二級(jí)洗消烘操作,可以阻止前往中轉(zhuǎn)區(qū)域的社會(huì)車輛攜帶ASFV,以及切斷豬場(chǎng)內(nèi)部車輛將外部風(fēng)險(xiǎn)傳入場(chǎng)內(nèi)的途徑。

2.2 建立生物安全管理團(tuán)隊(duì) 良好的豬場(chǎng)生物安全體系需要人員執(zhí)行,中育種豬公司組建了一支專業(yè)化獸醫(yī)技術(shù)團(tuán)隊(duì),設(shè)立了生物安全總督導(dǎo)、生物安全督導(dǎo)員、生物安全員和檢測(cè)專員的崗位,分別負(fù)責(zé)公司策略落地和推廣、漏洞排查和改進(jìn)、生物安全運(yùn)行效果審計(jì)等工作,整個(gè)團(tuán)隊(duì)保證了生物安全體系在豬場(chǎng)的高效運(yùn)轉(zhuǎn)。

2.3 生物安全體系運(yùn)行效果 2019—2021年,已構(gòu)建的高級(jí)別生物安全體系的各項(xiàng)防控措施在北京中育種豬有限責(zé)任公司下屬規(guī)?；i場(chǎng)落地執(zhí)行。為評(píng)估生物安全體系對(duì)ASF的防控效果,按制定計(jì)劃進(jìn)行樣品采集和ASFV核酸檢測(cè)工作,結(jié)果如表1所示,2019—2021年共收集樣品120 919份,車輛、人員、物資和環(huán)境樣品均能檢出ASFV核酸陽(yáng)性,對(duì)比發(fā)現(xiàn)車輛是檢出ASFV核酸陽(yáng)性率最高的環(huán)節(jié),豬群均為ASFV核酸陰性。結(jié)合豬場(chǎng)2019—2021年生產(chǎn)成績(jī)和穩(wěn)定狀況,表明生物安全體系的執(zhí)行能夠有效阻止車輛、人員、物資和環(huán)境等載體攜帶外源性ASFV傳入豬場(chǎng)感染豬群,生物安全體系為保障豬群健康發(fā)揮了重要作用。

表1 非洲豬瘟病毒核酸檢測(cè)Table 1 Nucleic acid detection of African swine fever virus [%(n/n)]

3 討論

北京中育種豬有限責(zé)任公司構(gòu)建的高級(jí)別規(guī)?；i場(chǎng)生物安全體系在本公司下屬豬場(chǎng)實(shí)踐成果顯著,較大程度上阻止了外源性ASFV的傳入,確保了豬群的健康穩(wěn)定。生物安全五級(jí)分區(qū)明確了5個(gè)不同等級(jí)風(fēng)險(xiǎn),劃定了作業(yè)區(qū)域界線,設(shè)立了關(guān)口,以提醒員工開(kāi)展物資消毒等各項(xiàng)操作,切斷各類疾病傳入和循環(huán)傳播的途徑。生物安全三級(jí)管理涵蓋了北京中育種豬有限責(zé)任公司總部、豬場(chǎng)外勤和豬場(chǎng)內(nèi)部共3個(gè)維度的管理,重點(diǎn)針對(duì)物資周轉(zhuǎn)和消毒、返場(chǎng)人員隔離和檢測(cè)等方面開(kāi)展工作,使進(jìn)入豬場(chǎng)生產(chǎn)區(qū)的物資和人員所攜帶的病原風(fēng)險(xiǎn)逐漸減小。生物安全二級(jí)洗烘重點(diǎn)管控拉豬車輛,已建成2個(gè)功能性洗消中心,分別服務(wù)于社會(huì)車輛和內(nèi)部車輛的清洗、消毒和烘干,以確保全部車輛ASFV攜帶零風(fēng)險(xiǎn)。2018年8月ASF首次在我國(guó)出現(xiàn)[2],短期內(nèi)對(duì)生豬養(yǎng)殖行業(yè)造成巨大損失,部分豬場(chǎng)按照發(fā)病清群的思路防控ASF,導(dǎo)致全國(guó)生豬存欄量有所下降。鑒于無(wú)有效的疫苗和藥物來(lái)防控ASF,以及二次復(fù)養(yǎng)失敗的慘痛教訓(xùn),致使部分養(yǎng)殖公司產(chǎn)生“提非色變”的心理陰影。2019年,由牧原食品股份有限公司等集團(tuán)化生豬養(yǎng)殖企業(yè)牽頭,其他規(guī)?；i養(yǎng)殖公司共同參與,進(jìn)行了ASF防控技術(shù)研討會(huì),探索生物安全對(duì)ASF防控的效果,經(jīng)實(shí)踐證明生物安全能夠有效地防控ASF,同時(shí)也是最有效的控制措施。同期,北京中育種豬有限責(zé)任公司也參與到全國(guó)的豬場(chǎng)生物安全體系研究和推廣工作中,并形成了以“五級(jí)分區(qū)、三級(jí)管理和二級(jí)洗烘”為標(biāo)準(zhǔn)的首農(nóng)豬場(chǎng)生物安全體系,歷經(jīng)3年多現(xiàn)場(chǎng)實(shí)踐,豬場(chǎng)生產(chǎn)始終保持穩(wěn)定狀態(tài),表明構(gòu)建的首農(nóng)豬場(chǎng)生物安全體系在防控ASF方面比較科學(xué)和高效。

良好的生物安全體系最終靠專業(yè)化的獸醫(yī)技術(shù)團(tuán)隊(duì)來(lái)執(zhí)行與監(jiān)督,因此組建生物安全管理團(tuán)隊(duì)十分必要,北京中育種豬有限責(zé)任公司分別設(shè)立了生物安全總督導(dǎo)、生物安全督導(dǎo)員、生物安全員和檢測(cè)專員相關(guān)崗位來(lái)保障公司各項(xiàng)生物安全措施的落地,以及生物安全體系的不斷升級(jí)。2019年,牧原食品股份有限公司等公司將具備碩士研究生及以上學(xué)歷的技術(shù)人員安排在豬場(chǎng)門(mén)衛(wèi)等生物安全崗位,開(kāi)展進(jìn)入豬場(chǎng)的物資、人員和車輛等關(guān)鍵環(huán)節(jié)的周轉(zhuǎn)、消毒和管控工作,由此可見(jiàn),生物安全工作在豬場(chǎng)得到前所未有的重視,也進(jìn)一步說(shuō)明生物安全對(duì)ASF防控的重要性,甚至可以決定生豬養(yǎng)殖公司生產(chǎn)經(jīng)營(yíng)的成敗。

在生物安全管理團(tuán)隊(duì)的精準(zhǔn)實(shí)施下,首農(nóng)規(guī)?；i場(chǎng)生物安全體系保持高效運(yùn)行狀態(tài),2019—2021年日常采集和監(jiān)測(cè)樣品數(shù)量分別為30 779、36 826和53 314份,主動(dòng)識(shí)別出ASFV核酸陽(yáng)性事件達(dá)60、112和48次,通過(guò)采取車輛棄用或二次消毒、人員管控、物資再處理、環(huán)境消殺和豬群淘汰等關(guān)鍵措施,有效阻止了ASFV傳入豬場(chǎng)及在豬群內(nèi)循環(huán)傳播,在一定程度上降低豬場(chǎng)疫情的發(fā)生,為企業(yè)穩(wěn)定生產(chǎn)經(jīng)營(yíng)作出巨大貢獻(xiàn)。從生物安全防控五大要素分析發(fā)現(xiàn),車輛仍然是ASFV攜帶風(fēng)險(xiǎn)最高的載體,核酸陽(yáng)性率達(dá)3.52%,其次是人員為1.39%,物資和環(huán)境分別為0.52%和0.02%,此結(jié)果與現(xiàn)場(chǎng)實(shí)際情況較為符合。眾所周知,拉豬車輛尤其是社會(huì)拉豬車輛運(yùn)輸范圍廣,可能裝運(yùn)各類豬群,檢出ASFV核酸陽(yáng)性的概率較大,因此車輛尤其是拉豬車輛務(wù)必應(yīng)做到百分之百檢測(cè),合格后方可使用。人員因休假前往集貿(mào)市場(chǎng)或超市等,或是新招聘其他豬場(chǎng)離職員工,被動(dòng)污染攜帶是存在的,因此,休假返場(chǎng)或新招聘進(jìn)場(chǎng)人員需開(kāi)展流行病學(xué)調(diào)查、隔離和檢測(cè)處理,2次檢測(cè)ASF呈陰性方可進(jìn)入生產(chǎn)區(qū)。物資包括獸藥、疫苗、袋裝飼料、食材、五金耗材和勞保用品等,是進(jìn)入豬場(chǎng)或豬舍內(nèi)數(shù)量最多或頻次最高的,近年來(lái)隨著公共區(qū)域環(huán)境被污染面積逐漸增加,外包裝通過(guò)運(yùn)輸?shù)拳h(huán)節(jié)交叉污染也逐漸嚴(yán)重,故嚴(yán)格控制物資周轉(zhuǎn)和消毒等流程十分必要,豬場(chǎng)現(xiàn)場(chǎng)采取了“采樣—消毒—拆除外包裝—再消毒”的處理辦法,以確保進(jìn)舍物資的絕對(duì)安全。2019—2021年,北京中育種豬有限責(zé)任公司所屬豬場(chǎng)的豬群未檢出ASFV核酸陽(yáng)性,說(shuō)明豬群沒(méi)有感染ASFV,間接表明首農(nóng)豬場(chǎng)生物安全體系在防控ASF方面卓有成效。