劉云哲 , 趙 格 , 趙建梅 , 王 琳 , 楊騰騰 , 高玉斌 , 黃秀梅 , 張青青 ,張喜悅 , 劉俊輝 , 耿國芹 , 王君瑋 , 鄒 明

[1. 中國動(dòng)物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心致病微生物監(jiān)測(cè)室 , 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部畜禽產(chǎn)品質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估實(shí)驗(yàn)室(青島) , 山東 青島 266032 ; 2. 青島農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院 , 山東 青島 266109 ; 3. 臨沂市畜牧技術(shù)推廣站 , 山東 臨沂 276000]

在我國,由沙門菌引發(fā)的食源性疾病占到全國報(bào)告的食源性病例的70%～80%,其中,豬肉是最主要的歸因食品[1]。生豬養(yǎng)殖過程中,由于抗生素的不規(guī)范大量使用,細(xì)菌耐藥現(xiàn)象持續(xù)增加,并且隨著生豬進(jìn)入屠宰鏈,促使細(xì)菌耐藥基因水平傳播,從而造成屠宰環(huán)節(jié)中豬肉的耐藥細(xì)菌污染問題日益嚴(yán)重。據(jù)Wang 等[2]報(bào)道,豬肉被耐藥細(xì)菌污染的風(fēng)險(xiǎn)最高可達(dá)59%,這也對(duì)消費(fèi)者的健康造成嚴(yán)重威脅。

多位點(diǎn)序列分型(Multilocus sequence typing,MLST)方法由于其可重復(fù)性好、可比性強(qiáng),常用于對(duì)細(xì)菌進(jìn)化分析和分子流行病學(xué)調(diào)查研究[3,4]。與脈沖場(chǎng)凝膠電泳(Pulsed-field gel electrophoresis,PFGE)相比,MLST更適于菌株的進(jìn)化關(guān)系和微生物群體遺傳學(xué)分析,可用于廣義的流行病學(xué)研究[5]。

為評(píng)估沙門菌污染及其耐藥對(duì)生豬屠宰過程豬肉產(chǎn)品的風(fēng)險(xiǎn),本試驗(yàn)對(duì)山東省生豬屠宰場(chǎng)沙門菌的污染和耐藥性情況進(jìn)行采樣檢測(cè),并通過分離菌株耐藥狀況和MLST溯源分析,進(jìn)一步厘清不同規(guī)模生豬屠宰場(chǎng)、不同樣品類型、屠宰不同環(huán)節(jié)的沙門菌污染和危害風(fēng)險(xiǎn)狀況,為屠宰企業(yè)采取有效的風(fēng)險(xiǎn)控制措施提供科學(xué)的參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品來源 2020年于山東省5個(gè)代表性生豬屠宰場(chǎng)(3個(gè)大型屠宰場(chǎng):日屠宰量1 000頭以上;2個(gè)中小型屠宰場(chǎng):日屠宰量1 000頭以下)采集棉拭子樣品共552份(大型屠宰場(chǎng):340份;中小型屠宰場(chǎng):212份)。其中包括肛拭子106份、屠宰環(huán)境拭子(包括工人手部、屠宰間地面和屠宰器具)138份、水樣品27份和屠宰環(huán)節(jié)豬肉胴體拭子281份(包括剝皮后沖淋前、剝皮后沖淋后、燙煺毛后沖淋前、燙煺毛后沖淋后、凈膛后沖淋前、凈膛后沖淋后、預(yù)冷前和預(yù)冷后)。

1.1.2 主要材料 細(xì)菌瓊脂粉和哥倫比亞血瓊脂培養(yǎng)基(北京陸橋技術(shù)股份有限公司),沙門菌顯色培養(yǎng)基[法國科瑪嘉(The Chromogenic Media Pionner)公司],胰蛋白胨大豆肉湯(Trypticase soy broth,TSB)、緩沖蛋白胨水(Buffered peptone water,BPW)和亞硒酸鹽胱氨酸(Selenite cystine,SC)增菌液(青島高科技工業(yè)園海博生物技術(shù)有限公司),基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(Matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)檢測(cè)配套試劑(鄭州安圖生物工程股份有限公司),GoTaq?Green Master Mix和DNA Marker DL2 000[寶日醫(yī)生物技術(shù)(北京)有限公司],BIOWEST西班牙瓊脂糖(上海仝元生物科技有限公司),BIOFOSUN革蘭陰性需氧菌藥敏檢測(cè)板(上海星佰生物技術(shù)有限公司),美國Biotium GelRed核酸凝膠染料和50×TAE核酸電泳緩沖液(上海索橋生物科技有限公司)。

大腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株 (ATCC 25922),購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。

1.1.3 主要儀器和設(shè)備 MALDI-TOF質(zhì)譜儀(鄭州安圖生物工程股份有限公司),快速渦勻器(中外合資深圳天南海北有限責(zé)任公司);生物安全柜(萬心順昌科技有限公司);電熱恒溫水浴鍋(DK-98-1)(天津市泰斯特儀器有限公司);恒溫培養(yǎng)箱(上海艾朗儀器有限公司);PCR 儀(杭州博日 BIOER GeneMax PCR 基因擴(kuò)增儀、賽默飛 Thermo Arktik 多功能 PCR 儀);凝膠成像分析儀(Tanon 2500 BR)(上海天能科技有限公司);電泳儀(北京六一儀器廠);移液器(德國艾本德股份公司)。

1.2 菌株分離培養(yǎng)和鑒定 按照國家標(biāo)準(zhǔn)《食品微生物學(xué)檢驗(yàn)》(GB4789.4—2016)[6]進(jìn)行細(xì)菌的分離和鑒定。將采集的樣本接入BPW預(yù)增菌液中,37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中孵育12～24 h。取200 μL預(yù)增菌液加入SC增菌液中,37 ℃培養(yǎng)24 h。用接種環(huán)蘸取增菌液接種于沙門菌顯色培養(yǎng)基中,37 ℃培養(yǎng)24 h。挑選紫色的可疑單菌落,再次接種于沙門菌顯色培養(yǎng)基中進(jìn)行純化。利用MALDI-TOF MS對(duì)篩選出的可疑菌落進(jìn)行鑒定。

1.3 藥敏試驗(yàn) 根據(jù)美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(Clinical and Laboratory Standards Institute,CLSI)標(biāo)準(zhǔn)[7],采用微量肉湯稀釋法測(cè)定分離獲得沙門菌的藥物敏感性,根據(jù)BIOFOSUN革蘭陰性需氧菌藥敏檢測(cè)板說明書對(duì)藥敏板結(jié)果進(jìn)行判讀,同時(shí)以大腸桿菌(ATCC 25922)作為陽性對(duì)照,得到最小抑菌濃度(Minimum inhibitory concentration,MIC)值,獲得相應(yīng)的敏感、中度敏感和耐藥結(jié)果。

共檢測(cè)14種抗菌藥物的敏感性,分別是青霉素類:氨芐西林(Ampicillin,AMP)、奧格門丁(阿莫西林/克拉維酸,Amoxicillin-Clavulanic acid,A/C)、美羅培南(Meropene M,MEM);頭孢類:頭孢噻呋(Ceftiofur,CEF)、頭孢他啶(Ceftazidime,CAZ);氨基糖苷類:慶大霉素(Gentamicin,GEN)、大觀霉素(Spectinomycin,SPT);四環(huán)素類:四環(huán)素(Tetracycline,TET);酰胺醇類:氟苯尼考(Florfenicol,FFC);磺胺類:復(fù)方新諾明(甲氧芐啶/磺胺甲噁唑:Sulfamethoxazole-Trimethoprim,SXT)、磺胺異噁唑(Sulfafurazole,SF);氟喹諾酮類:恩諾沙星(Enrofloxacin,ENR)、氧氟沙星(Ofloxacin,OFL);其他:黏桿菌素(Colistin,CL)。

1.4 多位點(diǎn)序列分型 將屠宰環(huán)節(jié)分離獲得的沙門菌進(jìn)行MLST試驗(yàn)。根據(jù) MLST 網(wǎng)站(https://pubmlst.org/databases/)提供的用于沙門菌 MLST試驗(yàn)的7對(duì)管家基因(aroC、dnaN、hemD、hisD、purE、sucA和thrA)設(shè)計(jì)引物序列(表1),并送至北京擎科生物公司進(jìn)行引物合成。應(yīng)用熱裂解法提取DNA,無菌條件下,吸取1 mL選擇性增菌液于1.5 mL無菌EP管中,10 000 r/min離心5 min,棄上清,加入80 μL DEPC水懸浮沉淀,煮沸10 min,冰浴5 min,12 000 r/min離心5 min,收集上清即為DNA。PCR反應(yīng)體系為25 μL:GoTaq?Green Master Mix 12.5 μL,上、下游引物各1 μL,DNA模板1 μL,無核酸酶水 9.5 μL;反應(yīng)程序參照表2。

表1 沙門菌7個(gè)管家基因的引物序列Table 1 Primer sequences of seven housekeeping genes in Salmonella

表2 沙門菌7個(gè)管家基因的PCR反應(yīng)程序Table 2 PCR reaction programs for seven housekeeping genes of Salmonella

PCR擴(kuò)增產(chǎn)物送北京擎科生物科技股份有限公司測(cè)序,用MegAlign、EdiSeq軟件讀取測(cè)序結(jié)果,置于數(shù)據(jù)庫(https://pubmlst.org/bigsdb?db=pubmlst _salmonella_seqdef&page=batchSequenceQuery)查詢每個(gè)等位基因的數(shù)值序號(hào),最終7個(gè)序號(hào)輸入到網(wǎng)址(https:// pubmlst.org/bigsdb?db=pubmlst_salmonella_seqdef&page=profiles)中確定每個(gè)菌株的ST型。

1.5 數(shù)據(jù)處理 利用SPSS軟件分析耐藥性檢測(cè)結(jié)果。通過卡方檢驗(yàn),分析不同規(guī)模、不同屠宰拭子、不同屠宰環(huán)節(jié)拭子中的沙門菌在耐藥性和多重耐藥性方面的差異,P<0.01表示極顯著性差異,P<0.05表示顯著性差異,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。使用BioNumerics 7.6 軟件對(duì)沙門菌的MLST結(jié)果進(jìn)行聚類分析,以Categorical 法計(jì)算相似性系數(shù),構(gòu)建最小生成樹,探討不同ST型菌株間的親緣關(guān)系。

2 結(jié)果

2.1 沙門菌污染狀況分析 經(jīng)細(xì)菌分離培養(yǎng)和鑒定,共獲得58株沙門菌(10.5%,58/552)。大型屠宰場(chǎng)(7.4%,25/340)沙門菌檢出率明顯低于中小型屠宰場(chǎng)(15.6%,33/212),存在顯著性差異(P=0.02<0.05)(圖1)。不同種樣品類型中肛拭子檢出率最高,為15.1%(16/106),屠宰過程中豬肉胴體拭子沙門菌檢出率為10.0%(28/281),屠宰環(huán)境拭子沙門菌檢出率為10.1%(14/138),水樣品中未檢出沙門菌(圖2)。

圖1 不同規(guī)模屠宰場(chǎng)拭子樣品中沙門菌檢出率Fig.1 Salmonella detection rates in different swab samples from slaughterhouses of different scale

圖2 不同類型拭子樣品中沙門菌檢出率Fig.2 Salmonella detection rates in different types of swab samples

不同屠宰環(huán)節(jié)豬肉胴體拭子樣品中,剝皮后沖淋后環(huán)節(jié)沙門菌檢出率最低(2.5%,1/40),預(yù)冷前環(huán)節(jié)檢出率最高(26.7%,8/30),其次依次是凈膛后沖淋前(12.7%,7/55)、凈膛后沖淋后(11.8%,6/51)、燙煺毛后沖淋前(10.0%,1/10)、剝皮后沖淋前(7.5%,3/40)、預(yù)冷后(5.7%,2/35)、燙煺毛后沖淋后(5.0%,1/20);預(yù)冷前豬肉胴體沙門菌檢出率與剝皮后沖淋前(P=0.03)、剝皮后沖淋后(P=0.03)、預(yù)冷后(P=0.02)各環(huán)節(jié)之間有顯著性差異(P<0.05)(圖3)。

圖3 不同屠宰環(huán)節(jié)豬肉胴體拭子樣品的沙門菌檢出率Fig.3 Salmonella detection rates in swab samples of pork carcass at different slaughtering stages剝皮后沖淋前、剝皮后沖淋后、預(yù)冷后拭子樣品分別與預(yù)冷前拭子樣品比較,*:P<0.05The swab samples after peeling and before rinsing,after peeling and rinsing, after pre-cooling were compared with the swab samples before pre-cooling,*:P<0.05

2.2 沙門菌分離株耐藥性分析 58株沙門菌對(duì)14種抗菌藥物中耐藥率最高的為AMP(96.6%);其次為TET和SF(94.8%);對(duì)SXT、SPT和FFC的耐藥率均高于89.0%,但對(duì)A/C、CEF、CAZ、MEM和CL較為敏感(表3)。

表3 58株沙門菌分離株的耐藥性分析Table 3 Drug resistance analysis of 58 Salmonella isolates

2.2.1 不同規(guī)模屠宰場(chǎng)沙門菌分離株耐藥性分析 沙門菌分離株對(duì)FFC(P=0.02)、SF(P=0.04)、SXT(P=0.01)、CEF和A/C(P=0.04)5種抗菌藥物的耐藥率在不同規(guī)模(大型和中小型)屠宰場(chǎng)間存在顯著性差異(P<0.05);對(duì)其他抗菌藥物的耐藥率在不同規(guī)模屠宰場(chǎng)間差異不顯著(P>0.05)(圖4)。

圖4 不同規(guī)模生豬屠宰場(chǎng)沙門菌分離株的耐藥率比較Fig.4 Comparison of drug resistance rates of Salmonella isolates from slaughterhouses of different scale同一藥物在大型屠宰場(chǎng)與中小型屠宰場(chǎng)的耐藥率比較,*:P<0.05Comparison of drug resistance rates between large and small and medium-scale slaughterhouses for the same drug,*:P<0.05

2.2.2 不同類型樣品沙門菌分離株耐藥性分析 不同類型樣品(肛拭子、豬肉胴體拭子、屠宰環(huán)境拭子)沙門菌分離株的耐藥率結(jié)果如表4所示。MEM抗菌藥物耐藥率在豬肉胴體拭子樣品和屠宰環(huán)境拭子樣品中有顯著性差異(P=0.04),其他藥物的耐藥率在各種類型樣品中無顯著性差異(P>0.05)(圖5)。將屠宰環(huán)境中的屠宰器具拭子、工人手部拭子和屠宰間地面拭子的耐藥情況進(jìn)行差異性比較,結(jié)果顯示,MEM和CL在工人手部與屠宰器具中表現(xiàn)出顯著性差異(P=0.03<0.05),其他藥物耐藥率在工人手部、屠宰見地面、屠宰器具中無顯著性差異(P>0.05)(圖6)。

圖5 不同類型樣品沙門菌分離株的耐藥率比較Fig.5 Comparison of drug resistance rates of Salmonella isolates from different sample types豬肉胴體拭子與屠宰環(huán)境拭子對(duì)MEM的耐藥率比較,*:P<0.05Comparison of resistance rates to MEM between pork carcass swabs and slaughtering environment swabs,*:P<0.05

圖6 屠宰環(huán)境不同類型拭子樣品沙門菌分離株的耐藥率比較Fig.6 Comparison of drug resistance rates of Salmonella isolates from different types of swab samples in the slaughter environment工人手部與屠宰器具拭子對(duì)MEM和CL的耐藥率比較,*:P<0.05Comparison of resistance rates to MEM and CL in swabs of workers' hands and slaughter equipment,*:P<0.05

表4 不同類型樣品沙門菌分離株的耐藥率Table 4 Drug resistance rates of Salmonella isolates in different sample types

2.2.3 屠宰過程不同環(huán)節(jié)沙門菌分離株耐藥性分析 燙煺毛后沖淋后(100%,1/1)和預(yù)冷前(0%,0/8)環(huán)節(jié)對(duì)CEF的耐藥率有顯著性差異(P=0.008<0.05),燙煺毛后沖淋后與凈膛后沖淋后環(huán)節(jié)對(duì)OFL的耐藥率有顯著性差異(P=0.008<0.05),燙煺毛后沖淋后(100%,1/1)與凈膛后沖淋前(0%,0/7)(P=0.005<0.05)、凈膛后沖淋后(0%,0/6)(P=0.008<0.05)、預(yù)冷前(0%,0/8)(P=0.008<0.05)對(duì)CL的耐藥率表現(xiàn)出顯著性差異(P<0.05)(圖7)。

圖7 生豬屠宰各環(huán)節(jié)沙門菌分離株的耐藥率比較Fig.7 Comparison of drug resistance rate of Salmonella isolates at various stages of pig slaughtering

2.3 沙門菌分離株多重耐藥性分析 58株沙門菌分離株中多重耐藥(≥3)菌株為56株,多重耐藥率為 96.6%(56/58)。5耐菌株數(shù)最多,為40株(69.0%,40/58);其次為 6耐,共10株(17.2%,10/58)(圖8)。在各屠宰環(huán)節(jié)拭子樣品中,多重耐藥菌株數(shù)最多的為預(yù)冷前,共8株(14.3%,8/56),其次為凈膛后沖淋前,共6株(10.7%,6/56)。中小型屠宰場(chǎng)的多重耐藥率(58.9%,33/56)高于大型屠宰場(chǎng)(41.1%,23/56)(P=0.007)。屠宰豬肉胴體拭子(46.4%,26/56)和肛拭子(28.6%,16/56)分離株的多重耐藥率高于屠宰環(huán)境拭子(25.0%,14/56)。

圖8 生豬屠宰場(chǎng)沙門菌分離株多重耐藥性分析Fig.8 Analysis of multi-drug resistance in Salmonella isolates from pig slaughterhouse

2.4 沙門菌MLST分型 58株沙門菌共鑒定出6個(gè)ST型,分別為ST19、ST40、ST469、ST358、ST155和ST34。其中ST40(n=26)為主要流行ST型,其次是ST19(n=11)、ST155(n=9)、ST469(n=7)和ST358(n=4),ST34僅有1株。

不同規(guī)模屠宰場(chǎng)的分離株的最小生成樹聚類分析結(jié)果如圖9A所示,ST19在大型和中小型屠宰場(chǎng)中共有11株,其中10株(90.9%,10/11)來自大型屠宰場(chǎng);ST40共26株,其中僅7株(26.9%,7/26)來自大型屠宰場(chǎng)?？梢?ST19是大型屠宰場(chǎng)的優(yōu)勢(shì)型,ST40是中小型屠宰場(chǎng)的優(yōu)勢(shì)型。不同類型樣品的分離株的聚類分析結(jié)果如圖9B所示,ST19多數(shù)(72.8%,8/11)來自肛拭子;ST19、ST40和 ST358在肛拭子、豬肉胴體拭子和屠宰環(huán)境拭子三類不同樣品中均存在。可見,屠宰過程沙門菌存在垂直接觸傳播的風(fēng)險(xiǎn)。屠宰不同環(huán)節(jié)樣品的分離株的聚類分析結(jié)果如圖9C所示,ST19和ST34來自剝皮后沖淋前后環(huán)節(jié);ST40在燙煺毛環(huán)節(jié)(2/15,13.3%)開始存在,隨后在凈膛環(huán)節(jié)(11/15,73.3%)、預(yù)冷環(huán)節(jié)(2/15,13.3%)均有檢出;ST155在凈膛后開始存在,在隨后各環(huán)節(jié)一直存在。

圖9 生豬屠宰過程沙門菌分離株基因型聚類分析Fig.9 Gene typing cluster analysis of Salmonella isolates during pig slaughteringA:不同規(guī)模屠宰場(chǎng)拭子樣品; B:不同類型拭子樣品; C:不同屠宰環(huán)節(jié)拭子樣品每個(gè)圓圈代表一種 ST,粗實(shí)線表示2個(gè)ST型相差1個(gè)等位基因,虛線表示2個(gè)ST型相差3個(gè)及以上等位基因A: Different scale slaughterhouse swab samples; B: Different types of swab samples; C: Swab samples from different slaughtering stagesEach circle represents an ST, thick solid lines indicate a difference of one allele between two ST types, dashed lines indicate a difference of three or more alleles between two ST types

3 討論

本試驗(yàn)通過對(duì)不同規(guī)模生豬屠宰場(chǎng)各樣品中沙門菌污染及其耐藥狀況進(jìn)行監(jiān)測(cè),以期明晰導(dǎo)致豬肉污染的主要致病微生物及其耐藥性在屠宰過程的傳播規(guī)律,為屠宰環(huán)節(jié)豬肉微生物風(fēng)險(xiǎn)防控提供指導(dǎo)。本試驗(yàn)監(jiān)測(cè)結(jié)果顯示,屠宰環(huán)節(jié)沙門菌的總陽性檢出率為10.5%,其中肛拭子檢出率為15.1%、豬肉胴體拭子檢出率為10.0%、屠宰環(huán)境拭子檢出率為10.1%;與酒躍光[8]報(bào)道的生豬屠宰場(chǎng)沙門菌總檢出率(13.30%)、屠宰環(huán)境樣品檢出率(8.9%～15.2%)和屠宰胴體檢出率(9.1%～14.5%)的調(diào)查數(shù)據(jù)差異不大;與謝建華等[9]屠宰環(huán)節(jié)(7.27%)的調(diào)查數(shù)據(jù)較接近;低于劉鮮鮮等[10](32.67%)和黃秀梅等[11](20.14%)的屠宰胴體檢出率,這說明屠宰企業(yè)、采樣量、屠宰環(huán)節(jié)的不同,沙門菌污染情況也會(huì)出現(xiàn)一定程度的差異;此外,生豬的來源和本身的帶菌量也是造成這種差異的原因。本試驗(yàn)肛拭子檢出率較高,說明可能待宰豬體本身攜帶致病菌;同時(shí)環(huán)境樣品和凈膛環(huán)節(jié)、預(yù)冷前環(huán)節(jié)沙門菌污染較為嚴(yán)重,在屠宰過程中凈膛環(huán)節(jié)可能會(huì)造成內(nèi)臟破裂進(jìn)而污染胴體,而且屠宰環(huán)節(jié)中的器具等屠宰環(huán)境與胴體直接接觸增加了交叉污染的概率。因此,在生豬屠宰環(huán)節(jié)應(yīng)加強(qiáng)對(duì)器具等清洗和消毒的次數(shù),對(duì)屠宰過程中的人員操作也應(yīng)嚴(yán)格把控,防止通過工人手、器具等污染環(huán)境和胴體。

抗生素的廣泛使用和濫用導(dǎo)致沙門菌等對(duì)抗菌藥物的耐藥情況也日益嚴(yán)重[12],世界各地報(bào)道多重耐藥沙門菌的分離率也越來越高[13]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示,沙門菌對(duì)氨芐西林(96.6%)、四環(huán)素(94.8%)、磺胺異噁唑(94.8%)的耐藥率較高;氨芐西林的耐藥率結(jié)果高于曹正花等[14](80.77%)、方忠意等[15](73.33%)和王娟等[16](51.68%)的耐藥結(jié)果,四環(huán)素耐藥率結(jié)果高于張金飛[17](80%)、賀恒旭等[18](72.61%)和劉雪杰等[19](67.88%)的研究結(jié)果。另外,多黏菌素作為治療革蘭陰性菌的最后一道防線[20],且頭孢他啶屬于人用頭孢菌素[18],但此次結(jié)果數(shù)據(jù)中均表現(xiàn)一定程度的耐藥。說明在生豬養(yǎng)殖環(huán)節(jié)存在一定程度的不規(guī)范用藥,因此必須采取多種監(jiān)管和控制措施以降低耐藥沙門菌的出現(xiàn),對(duì)于抗菌藥物的使用要給予足夠的重視。

本試驗(yàn)結(jié)果顯示,豬肉樣品中ST19和ST40是最主要的基因型。倪培恩[21]對(duì)上海的豬肉樣品的檢測(cè)結(jié)果顯示,ST40廣泛存在于豬肉樣品中;蔡銀強(qiáng)[22]在揚(yáng)州市生豬屠宰場(chǎng)、零售豬肉和人源沙門菌分離株中發(fā)現(xiàn)ST40基因型存在較為普遍,沙門菌可通過屠宰鏈向人類進(jìn)行傳播;酒躍光[8]發(fā)現(xiàn),生豬屠宰場(chǎng)的ST型分布主要是ST40(48.8%)、ST469(27.7%) 和ST34(13.2%),屠宰環(huán)節(jié)樣品中也出現(xiàn)這3種ST型,而且ST19 和 ST34 沙門菌可以引發(fā)人類和動(dòng)物的沙門菌病,給臨床治療帶來困難[23,24],同時(shí)常表現(xiàn)出有較高的致死率,這也是國內(nèi)外研究人員關(guān)注的問題[25-27]。在本次試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),菌株ST型為ST19和ST34的沙門菌多數(shù)都對(duì)氨芐西林、四環(huán)素和磺胺類藥物耐藥,也有少數(shù)菌株對(duì)黏菌素和頭孢他啶耐藥;不同規(guī)模、不同樣品類型、不同屠宰環(huán)節(jié)中,優(yōu)勢(shì)ST型一直存在,說明沙門菌在整個(gè)屠宰鏈中存在水平傳播,而且胴體與環(huán)境之間交叉?zhèn)鞑サ娘L(fēng)險(xiǎn)較嚴(yán)重。

綜上所述,生豬屠宰企業(yè)應(yīng)加強(qiáng)對(duì)待宰豬來源的管控,加強(qiáng)對(duì)屠宰環(huán)境的消毒,嚴(yán)格管控各屠宰環(huán)節(jié),特別是燙煺和凈膛環(huán)節(jié),以防引入致病微生物風(fēng)險(xiǎn)并通過下游食物鏈傳播給人類,對(duì)人類健康造成威脅。