郝甜甜，于朝磊，孫永智，李寶山，王曉艷，王成強(qiáng)，李 璐，黃炳山

（1.山東省海洋資源與環(huán)境研究院/山東省海水漁用飼料工程技術(shù)研究中心/水生動(dòng)物營養(yǎng)與飼料研發(fā)創(chuàng)新示范平臺(tái)/山東省海洋生態(tài)修復(fù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/煙臺(tái)市海珍品質(zhì)量安全控制與精深加工重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東 煙臺(tái) 264006；2.煙臺(tái)經(jīng)海海洋漁業(yè)有限公司，山東 煙臺(tái) 264003）

許氏平鲉（Sebastes schlegelii），隸屬于鲉形目(Scorpaeniformes) 鲉科 (Scorpaenidae) 平鲉屬(Sebastes)，具有肉質(zhì)鮮美、營養(yǎng)豐富、抗病力強(qiáng)等優(yōu)勢，隨著國家政策的支持和消費(fèi)市場的日益成熟，已成為我國北方沿海地區(qū)深水網(wǎng)箱養(yǎng)殖對(duì)象，為具有開發(fā)前景的海水魚類養(yǎng)殖魚種之一[1]。近年來，本課題組在許氏平鲉配合飼料氮脂比[2]、不飽和脂肪酸[3]、維生素[4]等方面開展研究，而許氏平鲉在深水網(wǎng)箱養(yǎng)殖中受風(fēng)浪、潮汐和水溫、季節(jié)等環(huán)境因素影響，導(dǎo)致飼料中的蛋白、脂肪等能量物質(zhì)更多應(yīng)用于環(huán)境應(yīng)激而不是用于生長，嚴(yán)重影響許氏平鲉深遠(yuǎn)海網(wǎng)箱養(yǎng)殖的經(jīng)濟(jì)效益。因此，開發(fā)功能性飼料添加劑，通過營養(yǎng)調(diào)控實(shí)現(xiàn)許氏平鲉將營養(yǎng)物質(zhì)更多轉(zhuǎn)化為生長而不是應(yīng)激供能是目前面臨的課題。

胍基乙酸（guanidinoacetic acid，GAA）又稱胍乙酸、乙酸胍，N-咪基甘氨酸，是一種甘氨酸衍生物，也是肌酸合成的唯一前體物質(zhì)，與磷酸肌酸一起通過三磷酸腺苷（ATP）再生參與細(xì)胞能量代謝[5]。GAA 目前已被歐盟納入飼料添加劑目錄。已有研究表明，飼料中添加胍基乙酸具有提高動(dòng)物生長性能[6]、機(jī)體氨基酸代謝、肌酸合成、抗應(yīng)激和抗氧化等諸多功能[7-8]。Lim 等[9]報(bào)道，GAA 結(jié)合磷酸基團(tuán)形成的GAA-p 能使卷吻沙蠶（Glycera chirori）在海底火山沉積物這種極端環(huán)境中瞬時(shí)供能，趨利避害；王子苑等[10]發(fā)現(xiàn)在肉牛日糧中補(bǔ)充GAA 能提高磷酸肌酸和ATP 等高等能量物質(zhì)的存貯量或利用效率；Degroot 等[11]在肉仔雞實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，在精氨酸不足的飼料中添加GAA，GAA 對(duì)內(nèi)源精氨酸具有保留效應(yīng)，可使精氨酸更多的用于蛋白質(zhì)合成，從而提高動(dòng)物機(jī)體的生長性能。但目前GAA 在飼料中的應(yīng)用研究多見于畜禽，水產(chǎn)方面僅見于草魚（Ctenopharyngodon idella）[12]、建鯉（Cyprinus carpiovarjian）[13]等淡水魚，而GAA 在海水魚上的研究鮮有報(bào)道。因此，本實(shí)驗(yàn)研究GAA對(duì)許氏平鲉生長性能、消化吸收、代謝及抗氧化能力的影響，評(píng)估GAA在實(shí)用飼料中的適宜添加水平，旨在為GAA在許氏平鲉網(wǎng)箱養(yǎng)殖配合飼料中的應(yīng)用提供理論依據(jù)和技術(shù)支撐。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與飼料制作

以魚粉、大豆?jié)饪s蛋白、發(fā)酵豆粕和發(fā)酵棉粕為主要蛋白源，魚油和豆油為主要脂肪源，設(shè)計(jì)粗蛋白質(zhì)量分?jǐn)?shù)為44.00%、粗脂肪質(zhì)量分?jǐn)?shù)為9.00%的基礎(chǔ)飼料配方。在基礎(chǔ)飼料中分別添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.00%、0.01%、0.02%、0.04%、0.08%的胍基乙酸（GAA，純度≥99%，購自湖南泰仁藥業(yè)有限公司），配成5種等氮等脂的配合飼料，分別命名為D0、D1、D2、D3 和D4 組，其中D0 組為對(duì)照組。制作飼料時(shí)，所有飼料原料粉碎過孔徑0.25 mm篩，按飼料配方表（表1）混合均勻，加入魚油、豆油及適量水，再次混勻，經(jīng)螺旋擠壓機(jī)加工成粒徑6 mm 的飼料顆粒，60 ℃烘干后放置-20 ℃冰箱備用。表2 為實(shí)驗(yàn)飼料營養(yǎng)組成。

表1 基礎(chǔ)飼料組分質(zhì)量分?jǐn)?shù)Table 1 Mass fraction of basic diets components %

表2 實(shí)驗(yàn)飼料常規(guī)營養(yǎng)水平（干基）Table 2 Nutrient levels of experimental diets(dry mass basis)

1.2 實(shí)驗(yàn)用魚和實(shí)驗(yàn)條件

實(shí)驗(yàn)魚購自煙臺(tái)經(jīng)海海洋漁業(yè)有限公司，養(yǎng)殖地點(diǎn)為山東省長島縣離岸網(wǎng)箱養(yǎng)殖區(qū)。正式開始實(shí)驗(yàn)之前將實(shí)驗(yàn)魚放入置于網(wǎng)箱（3 m×2 m×1 m）中暫養(yǎng)1 周，暫養(yǎng)期間投喂對(duì)照組飼料。暫養(yǎng)結(jié)束后，禁食24 h，挑選體格健壯，規(guī)格均一的許氏平鲉[初始體質(zhì)量（125.00±1.00）g]隨機(jī)分成5 組，每組3個(gè)網(wǎng)箱（1 m×1 m×1 m），每個(gè)網(wǎng)箱20 尾魚。養(yǎng)殖時(shí)間為2023 年9 月28 日至11 月15 日，共49 d，每天投喂2 次（8:00、17:00），日投喂量為魚體質(zhì)量的1.5%～2.0%，觀察每日攝食情況，按實(shí)際攝食情況調(diào)整投喂量。養(yǎng)殖期間如有死魚記錄數(shù)量并稱質(zhì)量。整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間，自然海水溫度（14～22 ℃）。

1.3 樣品采集

樣品采集過程嚴(yán)格按照山東省海洋資源與環(huán)境研究院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)要求執(zhí)行，符合動(dòng)物保護(hù)、動(dòng)物福利和倫理原則。養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，實(shí)驗(yàn)魚禁食24 h，采用質(zhì)量濃度為30 mg/L 丁香酚（純度≥98%）麻醉，以網(wǎng)箱為單位稱質(zhì)量，記錄每網(wǎng)箱實(shí)驗(yàn)魚的數(shù)量和體質(zhì)量，計(jì)算成活率、增重率、特定生長率和飼料系數(shù)。每桶隨機(jī)選擇10尾魚，分別測體質(zhì)量、體長，計(jì)算肥滿度，并抽血后解剖內(nèi)臟分離肝臟；血樣4 ℃靜置4 h，以4 000 r/min 離心10 min，取血清，-70 ℃待測。

1.4 測定指標(biāo)與方法

1.4.1 生長指標(biāo)

式中，m0為實(shí)驗(yàn)開始時(shí)魚體質(zhì)量（g），mt為實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)魚體質(zhì)量（g），t為養(yǎng)殖周期(d)，L為實(shí)驗(yàn)魚體長（cm），mf為攝食量(g)，wp為飼料蛋白質(zhì)量分?jǐn)?shù)，Ni、Nf分別為實(shí)驗(yàn)開始和結(jié)束時(shí)實(shí)驗(yàn)魚存活數(shù)。

1.4.2 營養(yǎng)成分分析 飼料和全魚的營養(yǎng)常規(guī)成分測定按照AOAC 方法測定。水分采用105 ℃恒溫干燥法（GB/T6435—2014），粗蛋白采用凱氏定氮法（GB/T6432—2018），粗脂肪采用索氏抽提法（GB/T6433—2006），粗灰分采用550 ℃失重法（GB/T6438—2007）。飼料能量采用燃燒法測定（IKA，C6000，Germany）。

1.4.3 腸道消化酶活力測定 腸道胰蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶活力均采用南京建成生物工程研究所試劑盒測定，具體操作嚴(yán)格按照各試劑盒說明書執(zhí)行。酶液蛋白質(zhì)濃度采用考馬斯亮藍(lán)法測定。

1.4.4 血清生化指標(biāo)測定 血清中谷草轉(zhuǎn)氨酶（aspartate transaminase,AST）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（alanine aminotransferase,ALT）活力、甘油三酯（triglyceride,TG）、總膽固醇（total cholesterol,TCHO）、高密度脂蛋白膽固醇（high density lipoprotein cholesterol,HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（low density lipoprotein cholesterol,LDL-C）、血糖（glucose,GLU）含量均采用南京建成生物工程研究所試劑盒測定。

1.4.5 肝臟糖代謝酶活力和抗氧化酶活力指標(biāo)測定 將肝臟樣品與無菌生理鹽水按照質(zhì)量（g）體積（mL）比1∶9 冰浴下勻漿，以4 ℃、4 000 r/min 離心10 min，收集上清液獲得肝臟勻漿液，用于肝臟糖代謝酶活及抗氧化酶活指標(biāo)的測定。肝臟丙酮酸激酶（pyruvate kinase，PK）、磷酸果糖激酶（phosphofructokinase，PFK）、肌酸激酶（creatine Kinase，CK）酶活和肌酸（creatine，Cr）活力采用Elisa 試劑盒（南京建成生物工程研究所）測定；肝臟總抗氧化能力（total antioxidant capacity,T-AOC）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活力、丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量、谷胱甘肽過氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-PX）活力采用試劑盒檢測（南京建成生物工程研究所）。肝臟勻漿上清液蛋白質(zhì)濃度采用考馬斯亮藍(lán)法測定。

1.5 數(shù)據(jù)分析

采用SPSS 17.0 對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析(One-Way ANOVA)，差異顯著，則采用Duncan 氏進(jìn)行多重檢驗(yàn)，顯著水平為α=0.05，統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差形式表示。

2 結(jié)果

2.1 胍基乙酸對(duì)許氏平鲉生長性能的影響

由表3 可知，各組間許氏平鲉成活率無顯著差異（P＞0.05）。飼料中添加胍基乙酸顯著提高了魚體的終末質(zhì)量、增重率、特定生長率和蛋白質(zhì)效率（P＜0.05），其中增重率在D3組達(dá)到最高值，比對(duì)照組（D0 組）顯著提高33.48%。飼料系數(shù)則呈相反趨勢，在D1、D2、D3 和D4 組顯著低于D0 組（P＜0.05），并在D3 組達(dá)到最低值。飼料中添加胍基乙酸對(duì)魚體肥滿度無顯著影響（P＞0.05）。

表3 胍基乙酸對(duì)許氏平鲉生長性能和形體指標(biāo)的影響Table 3 Effects of guanidine acetic acid on growth performance and the morphometric parameters of Sebastes schlegelii.

2.2 胍基乙酸對(duì)許氏平鲉全魚體成分的影響

由表4可知，隨飼料中胍基乙酸含量升高，全魚粗蛋白和粗脂肪含量雖有上升趨勢，但各組之間差異不顯著（P＞0.05）。各組之間全魚水分和粗灰分含量無顯著差異（P＞0.05）。

表4 胍基乙酸對(duì)許氏平鲉全魚體成分的影響Table 4 Effect of guanidine acetic acid on proximate composition of the whole body of Sebastes schlegelii

2.3 胍基乙酸對(duì)許氏平鲉腸道消化酶的影響

由表5 可知，飼料中添加胍基乙酸顯著影響了許氏平鲉腸道胰蛋白酶活力、脂肪酶活力和淀粉酶活力（P＜0.05）。胰蛋白酶活力呈先上升后下降趨勢，在D3 組達(dá)到最高值，顯著高于其他各組（P＜0.05）；脂肪酶活力則在D3 和D4 組顯著高于其他3 組（P＜0.05）；淀粉酶活力變化趨勢與胰蛋白酶一致，在D1、D2、D3 和D4 組顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）。

2.4 胍基乙酸對(duì)許氏平鲉血清生化指標(biāo)的影響

由表6 可知，飼料中添加胍基乙酸對(duì)血清中ALT 和AST 活力無顯著影響（P＞0.05）。胍基乙酸顯著提高了血清中TG 含量，其中在D3 組達(dá)到最高值，顯著高于D0—D2 組（P＜0.05），但與D4 組無顯著差異（P＞0.05）；TCHO 含量呈稍上升趨勢，但各組之間無顯著差異（P＞0.05）；高密度脂蛋白膽固醇在D1—D4 組顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）；低密度脂蛋白膽固醇在各組之間無顯著差異（P＞0.05）。各組之間血糖濃度無顯著差異（P＞0.05）。

表6 胍基乙酸對(duì)許氏平鲉血清生化指標(biāo)的影響Table 6 Effect of guanidine acetic acid on serum biochemical indices of Sebastes schlegelii

2.5 胍基乙酸對(duì)許氏平鲉肝臟糖代謝酶活的影響

飼料中添加胍基乙酸對(duì)許氏平鲉肝臟糖代謝酶活產(chǎn)生了顯著影響（P＜0.05）（表7）。PK 活力和CK 活力均在D1、D2、D3 和D4 組顯著低于對(duì)照組（P＜0.05）；PFK 則隨胍基乙酸水平變化呈先下降后上升趨勢，在D3 組達(dá)到最低值，顯著低于對(duì)照組（P＜0.05），其他組則與對(duì)照組無顯著差異（P＞0.05）；Cr 含量則隨胍基乙酸水平變化呈上升趨 勢，在D2—D4 組顯著高于D0 和D1 組（P＜0.05）。

表7 胍基乙酸對(duì)許氏平鲉肝臟糖代謝酶活的影響Table 7 Effect of guanidine acetic acid on carbohydrate metabolic enzymes in the liver of Sebastes schlegelii

2.6 胍基乙酸對(duì)許氏平鲉肝臟抗氧化能力的影響

由表8 可知，飼料中添加胍基乙酸顯著提高了許氏平鲉肝臟的抗氧化能力，其中T-AOC 在D1—D4 組顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），SOD 活力在D2、D3 和D4 組顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）；GSH-PX 活力則隨飼料中胍基乙酸水平的生長呈先上升后下降趨勢，在D2 和D3 組顯著高于D0、D1 和D4 組（P＜0.05）；MDA 含量在D1—D4 組顯著低于對(duì)照組（P＜0.05）。

表8 胍基乙酸對(duì)許氏平鲉肝臟抗氧化能力的影響Table 8 Effect of guanidine acetic acid on antioxidant capacities in the liver of Sebastes schlegelii

3 討論

3.1 胍基乙酸對(duì)許氏平鲉生長性能和體成分的影響

生長性能是衡量深遠(yuǎn)海網(wǎng)箱養(yǎng)殖魚類經(jīng)濟(jì)效益的重要指標(biāo)，提高生長性能對(duì)于提高深遠(yuǎn)海網(wǎng)箱養(yǎng)殖競爭力尤為關(guān)鍵。班博等[14]研究表明，飼料中添加胍基乙酸，可促進(jìn)動(dòng)物機(jī)體能量代謝，減少碳水化合物、脂肪和蛋白質(zhì)分解功能，提升動(dòng)物生產(chǎn)性能，提高飼料利用率。研究發(fā)現(xiàn)，在飼料添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.12%～0.18% 的GAA，尼羅羅非魚（Oreochromis niloticus）增重率顯著提高[15]；飼料中添加300 mg/kg GAA 顯著提高草魚增重率[12]；飼料中添加0.4 g/kg GAA 顯著提高牛蛙（Lithobates catesbeianus）的生長性能[16]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果也表明，飼料中添加GAA（質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.01%～0.08%）顯著提高許氏平鲉增重率和特定生長率，降低了飼料系數(shù)?；趪鴥?nèi)外對(duì)GAA的研究，認(rèn)為其促進(jìn)動(dòng)物生長機(jī)制主要與能量補(bǔ)充、節(jié)約精氨酸和促進(jìn)肌纖維發(fā)育等3 個(gè)方面密切相關(guān)：（1）飼料中補(bǔ)充GAA 可提高磷酸肌酸和肌肉中的肌酸含量，為細(xì)胞能量代謝提供更多ATP，減少了機(jī)體脂肪和蛋白質(zhì)耗能[17]，從而提高魚體生長性能；（2）飼料中添加外源GAA減少了機(jī)體內(nèi)源精氨酸消耗，可促使更多精氨酸用于蛋白質(zhì)合成、細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和激素釋放等生理功能，進(jìn)而促進(jìn)魚體生長[18]；（3）GAA 可通過抑制miR-133a-3p和miR-1a-3p的表達(dá)激活A(yù)kt/mTOR/S6 信號(hào)通路，改善肌肉組織能量，促進(jìn)肌纖維的發(fā)育，進(jìn)而改善動(dòng)物機(jī)體生長性能[19]。肥滿度可以作為衡量魚體能量狀態(tài)的常用形體學(xué)參數(shù)[20]。本研究發(fā)現(xiàn)，飼料中添加GAA對(duì)許氏平鲉肥滿度無顯著影響，推測原因可能與GAA對(duì)能量代謝的調(diào)控能力有關(guān)，使得魚體脂肪的儲(chǔ)備和消耗處于動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)。

李增民[21]研究表明，GAA 可以通過提高肝臟中氨基酸代謝酶（GGT）和核酸代謝酶（ADA）的活力來促進(jìn)機(jī)體蛋白質(zhì)的合成和沉積。但本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，各組間魚體水分、粗蛋白、粗脂肪和粗灰分含量差異不顯著，表明飼料中添加GAA對(duì)魚體營養(yǎng)成分變化無不良影響，與在建鯉[13]、尼羅羅非魚[15]上研究結(jié)果一致。

3.2 胍基乙酸對(duì)許氏平鲉腸道消化酶的影響

魚體腸道消化酶活力反應(yīng)機(jī)體消化吸收和營養(yǎng)利用的能力，與魚體生長發(fā)育息息相關(guān)[22]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，飼料中添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.01%～0.08%GAA 顯著提高了許氏平鲉腸道胰蛋白酶和淀粉酶活力，0.04%和0.08%組顯著提高了腸道脂肪酶活力，說明GAA能夠通過提高腸道消化酶活力來促進(jìn)魚體生長，這與本研究中許氏平鲉的生長結(jié)果一致。GAA 對(duì)魚體腸道消化酶的研究還未見報(bào)道。在畜禽上有研究證實(shí)，GAA 可以通過促進(jìn)有益菌的增殖和增強(qiáng)消化道內(nèi)α-淀粉酶、蛋白酶活力來改善動(dòng)物機(jī)體消化道內(nèi)環(huán)境及pH 值[23]，說明GAA 可以協(xié)同改善腸道菌群及提高消化酶活力來達(dá)到促進(jìn)魚體生長的效果。

3.3 胍基乙酸對(duì)許氏平鲉血清生化指標(biāo)的影響

Abdel-Tawwab 等[24]研究表明血清生化指標(biāo)能反應(yīng)機(jī)體健康狀況。已有研究發(fā)現(xiàn)在畜禽飼料中添加1 200 mg/kg 的GAA 對(duì)動(dòng)物機(jī)體是安全的[25]，但缺少魚體方面數(shù)據(jù)。AST 和ALT 酶活力不僅可以反映機(jī)體代謝程度，還與肝細(xì)胞炎癥和變形密切相關(guān)，因此AST 和ALT 酶活力的高低可以作為判定肝功能是否受到損傷的指標(biāo)[26]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，飼料中添加GAA 對(duì)血清中AST 和ALT 酶活無顯著影響，表明飼料中添加GAA對(duì)許氏平鲉肝臟未造成損傷。血脂主要的代謝指標(biāo)由TG 和TCHO 組成，包括HDL-C 和LDL-C，HDL-C 通過膽固醇逆向轉(zhuǎn)運(yùn)把外周組織及血漿中的膽固醇運(yùn)回肝臟代謝，LDL-C 則是向組織轉(zhuǎn)運(yùn)肝臟合成的內(nèi)源性膽固醇[27-28]。徐超等[29]研究表明，正常狀態(tài)下，魚體脂質(zhì)代謝處于動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)，當(dāng)血脂水平在正常范圍內(nèi)上升時(shí)，表明魚體機(jī)體內(nèi)脂肪轉(zhuǎn)運(yùn)程度相應(yīng)增強(qiáng)，與魚體生長性能密切相關(guān)。張翼等[30]研究發(fā)現(xiàn)，在育肥肉牛飼料中添加GAA后，降低了血清中低密度脂蛋白膽固醇含量。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，飼料中添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.01%～0.08%的GAA 顯著提高了血清TG和HDL-C含量，LDL-C含量有下降趨勢，但差異不顯著，說明飼料中添加GAA能一定程度提高許氏平鲉血清中的脂質(zhì)代謝。推測原因是GAA 通過提高魚體血清脂質(zhì)代謝速率用于提高魚體的生長速度[31]，與本實(shí)驗(yàn)生長數(shù)據(jù)相吻合。

Marco 等[32]早期實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，大鼠體外注射GAA后，能夠激活胰島素信號(hào)通路，而胰島素增加會(huì)導(dǎo)致血糖濃度降低，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，飼料中添加GAA 并沒有顯著影響許氏平鲉的血糖濃度。Polakof 等[33]報(bào)道，血糖濃度變化受多種因素制約，如養(yǎng)殖條件、物種、魚體代謝能力、魚類對(duì)胰島素的敏感性及魚體激活胰島素的能力等，造成以上結(jié)果的差異，可能是因?yàn)槲锓N不同導(dǎo)致其對(duì)胰島素的敏感性及激活胰島素的能力不同。

3.4 胍基乙酸對(duì)許氏平鲉肝臟糖代謝酶活的影響

肝臟是魚類糖脂代謝的主要場所[34]。糖酵解是魚體葡萄糖分解代謝的關(guān)鍵途徑，而PK 和PFK 則是糖酵解途徑中的兩個(gè)關(guān)鍵限速酶[35]。Yang 等[36]報(bào)道，魚類為適應(yīng)環(huán)境脅迫會(huì)采取一系列與糖酵解相關(guān)的酶完成氧化磷酸化過渡到糖酵解轉(zhuǎn)化，這種反應(yīng)是一種進(jìn)化保守，是魚體適應(yīng)環(huán)境脅迫的一種有效策略。如在鯉（Cyprinus carpio）[37]和半滑舌鰨（Cynoglossus semilaevis）[38]研究中發(fā)現(xiàn)，魚體受到環(huán)境脅迫時(shí)會(huì)啟動(dòng)糖酵解途徑以增加葡萄糖攝取用于維持能量需求。李潔蕾等[39]報(bào)道，在保育豬飼料中補(bǔ)喂600 mg/kg GAA 21 d 后顯著增加了血漿中PK 和PFK 酶活力，但本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果顯示，飼料中添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.01%～0.08%GAA顯著降低了許氏平鲉肝臟PK 含量，在0.04%和0.08%水平下顯著降低了肝臟中PFK 含量，說明GAA 可以減少許氏平鲉肝臟中葡萄糖的分解代謝，使葡萄糖更多的以肝糖原形式儲(chǔ)存起來，其原因或許為GAA作為肌酸的前體物質(zhì)，可以直接增加機(jī)體生命活動(dòng)所需的ATP，用以緩解深遠(yuǎn)海網(wǎng)箱養(yǎng)殖面臨的風(fēng)浪、潮汐、水溫等環(huán)境應(yīng)激。關(guān)于GAA 在許氏平鲉養(yǎng)殖中的抗應(yīng)激作用還需進(jìn)一步研究。

肌酸激酶（CK）與肌肉收縮、細(xì)胞能量轉(zhuǎn)運(yùn)和ATP 再生有直接關(guān)系，并在肌酸代謝中發(fā)揮著能量緩沖的作用[40]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，飼料中添加GAA（質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.01%～0.08%）降低了許氏平鲉肝臟中肌酸激酶活力，而在尼羅羅非魚[15]、牛蛙[16]上等研究表明飼料中添加胍基乙酸可以顯著提高CK 活性，與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果不一致，其原因可能為許氏平鲉作為肉食性海水魚類其飼料中動(dòng)物性蛋白源較多，保證了魚體攝入的Cr 含量較為充足，導(dǎo)致額外添加的GAA 在不同營養(yǎng)源下的作用途徑也不一致。肌酸不足時(shí)，GAA 可補(bǔ)充體內(nèi)肌酸的缺乏，參與機(jī)體肌酸代謝進(jìn)而上調(diào)肌酸激酶的活性，用于機(jī)體能量補(bǔ)充[41]；而肌酸充足時(shí)，額外添加的GAA 基本不直接參與肌酸激酶功能[42]，其功能主要使高磷酸肌酸和ATP 等能量物質(zhì)儲(chǔ)存起來[10]，可用于抵抗網(wǎng)箱養(yǎng)殖面臨的風(fēng)浪、潮汐、水溫等環(huán)境因子應(yīng)激。這可能是造成本實(shí)驗(yàn)中許氏平鲉肝臟肌酸激酶活力降低的原因之一。

GAA在肝臟經(jīng)甲基化后轉(zhuǎn)化為Cr，Cr是細(xì)胞內(nèi)能量代謝的重要物質(zhì)，也是能量儲(chǔ)存的臨時(shí)場所[43]。本實(shí)驗(yàn)中，飼料中添加GAA顯著提高了許氏平鲉肝臟中Gr 含量，說明飼料中額外補(bǔ)充的GAA 以Cr 的形式轉(zhuǎn)化和保留，也是許氏平鲉機(jī)體Cr 的潛在來源，與在眼斑擬石首魚（Sciaenops ocellatus）[8]上研究一致。

3.5 胍基乙酸對(duì)許氏平鲉肝臟抗氧化能力的影響

許氏平鲉網(wǎng)箱養(yǎng)殖中常受風(fēng)浪、潮汐、水溫和季節(jié)等因素的影響，魚體在應(yīng)對(duì)環(huán)境應(yīng)激時(shí)會(huì)造成大量活性氧和自由基的積累。因此，在許氏平鲉網(wǎng)箱養(yǎng)殖中增加魚體T-AOC、SOD、GSH-PX 等抗氧化酶活力和降低脂質(zhì)過氧化反應(yīng)中MDA 的含量來緩解氧化應(yīng)激，對(duì)提高許氏平鲉網(wǎng)箱養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)效益具有重要意義。Aziza等[15]研究表明，在尼羅羅非魚飼料中添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.12%～0.18%的GAA，可顯著提高魚體SOD 和GSH 酶活和降低MDA 含量；Zeng等[5]發(fā)現(xiàn)，飼料中添加0.4～0.6 g/kg GAA 可顯著提高牛蛙血清中T-AOC活性，降低MDA含量。在本實(shí)驗(yàn)中，飼料中添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.01%～0.08% GAA 顯著提高了許氏平鲉肝臟中T-AOC活性，降低了MDA含量；SOD活性則在0.02%～0.08%組顯著高于對(duì)照組；GSH-PX活性隨GAA 水平的變化呈先上升后下降趨勢，表明GAA可在一定程度上通過增加內(nèi)源性抗氧化酶活力達(dá)到提高機(jī)體抗氧化能力的效果，與上述研究結(jié)果一致。其作用機(jī)理為：（1）與GAA 的代謝產(chǎn)物Cr有關(guān)，Cr已被證實(shí)可作為外源抗氧化劑來提高動(dòng)物的抗氧化能力[44]；（2）外源GAA 的攝入，魚體節(jié)約的部分內(nèi)源性精氨酸能夠淬滅自由基，發(fā)揮抗氧化作用[45]。

4 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)條件下，以增重率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，許氏平鲉飼料中GAA 的適宜添加量為0.04%；飼料中添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.04%～0.08%GAA 可提高許氏平鲉腸道消化酶活力，并可通過調(diào)節(jié)代謝產(chǎn)物Cr的含量發(fā)揮抗氧化和能量調(diào)節(jié)作用。