趙林杰 孫嵐英 婁利梅

非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)是源于支氣管黏膜或腺體的惡性腫瘤疾病,是最常見的肺癌種類,肺癌的發(fā)病率和致死率已上升至全球癌癥的首位[1]。尋找一種科學(xué)、高效診斷NSCLC的生物活性標(biāo)志物已成為研究的重點(diǎn)。近年來,有研究發(fā)現(xiàn)血漿中的微小RNA(microRNA,miRNA)具有高穩(wěn)定性,參與調(diào)控腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程,有望成為新型腫瘤活性標(biāo)記物[2-3]。微小核糖核酸-92a(microRNA-92a,miR-92a)是一種促癌基因,在肺癌組織中高度表達(dá),對(duì)肺癌的發(fā)生發(fā)展及其預(yù)后有著重要作用[4]。微小核糖核酸-143(microRNA-143,miR-143)位于人類第5號(hào)染色體,通過作用于多個(gè)靶基因調(diào)節(jié)腫瘤的發(fā)生發(fā)展[5]。微小核糖核酸-196b(microRNA-196b,miR-196b)已被研究證實(shí)參與胃癌、宮頸癌、結(jié)直腸癌、肺癌等多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移[6]。目前,血清miR-92a、miR-143、miR-196b在NSCLC中表達(dá)及預(yù)后的相關(guān)研究較少。因此,本文擬對(duì)NSCLC 患者血清miR-92a、miR-143、miR-196b水平進(jìn)行檢測(cè),旨在為早期NSCLC的預(yù)后提供臨床參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年1月至2019年2月在本醫(yī)院收治的70例NSCLC患者為NSCLC組,NSCLC組男性36例,女性34例,年齡52～86歲,平均年齡(65.46±4.58)歲。病理組織類型:鱗癌34例,腺癌33例,其他肺癌3例。根據(jù)肺癌TNM分期標(biāo)準(zhǔn)(第8版)[7]對(duì)NSCLC患者進(jìn)行臨床分期,15例Ⅰ期,22例Ⅱ期,23例Ⅲ期,10例Ⅳ期。根據(jù)世界衛(wèi)生組織(world health organization,WHO)肺癌病理學(xué)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行組織分化,其中低分化23例,中分化24例,高分化23例。根據(jù)淋巴結(jié)是否發(fā)生轉(zhuǎn)移分為無轉(zhuǎn)移患者42例,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者28例。另隨機(jī)選取同期在本院收治的肺部良性病變患者70例為對(duì)照組,男性37例,女性33例,對(duì)照組年齡51～85歲,平均年齡(66.18±4.37)歲。NSCLC組和對(duì)照組患者性別、年齡等一般資料無明顯差異(P>0.05)。

1.2 排納標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn):①經(jīng)病理檢查及CT確診為NSCLC患者;②患者術(shù)前未進(jìn)行手術(shù)治療、免疫學(xué)治療、放化療等。

排除標(biāo)準(zhǔn):①合并心、肝、腎等嚴(yán)重功能不全者、自身免疫性疾病和其他惡性腫瘤患者;②合并既往有胸部放療史者、惡性胸腔積液患者。

1.3 血清miR-92a、miR-143、miR-196b檢測(cè)方法

抽取NSCLC組和對(duì)照組空腹靜脈血5 mL,離心15 min,取上清液,于-80 ℃凍存。NSCLC組于手術(shù)或放化療前采集血樣。取兩組患者凍存的血清標(biāo)本,采用Trizol試劑盒提取兩組血清樣本總RNA,逆轉(zhuǎn)錄酶轉(zhuǎn)錄成cDNA,應(yīng)用7500實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀(美國(guó)ABI公司)進(jìn)行qRT-PCR擴(kuò)增,經(jīng)歷35個(gè)循環(huán)得到CT值,引物序列見表1。內(nèi)參照:內(nèi)參U6由Ribo Bio公司提供,RT-PCR 反應(yīng)總體系10 μL,反應(yīng)程序:95 ℃ 3 min、95 ℃ 10 s、55 ℃ 30 s、72 ℃ 30 s,合計(jì)35個(gè)循環(huán);72 ℃ 10 min 。實(shí)驗(yàn)進(jìn)行次生物學(xué)重復(fù),以2-△△Ct法計(jì)算miRNA相對(duì)表達(dá)量。

1.4 觀察指標(biāo)

比較對(duì)照組和NSCLC組血清miR-92a、miR-143、miR-196b水平;分析血清miR-92a、miR-143、miR-196b表達(dá)與NSCLC臨床病理特征的關(guān)系,包括TNM 分期、組織學(xué)類型、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等;利用單因素生存分析Kaplan-Meier繪制3年生存曲線;采用Pearson相關(guān)性分析NSCLC組和對(duì)照組血清miR-92a、miR-143、miR-196b水平相關(guān)性關(guān)系。

1.5 隨訪方法

對(duì)本研究的NSCLC患者自入組后進(jìn)行隨訪調(diào)查,隨訪截止日期為2022年3月,共計(jì)隨訪時(shí)間36個(gè)月,每3個(gè)月隨訪一次,每半年門診復(fù)查一次,隨訪記錄患者復(fù)發(fā)情況、生存時(shí)間及隨訪時(shí)狀態(tài)(存活、死亡或其他)等。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 NSCLC組和對(duì)照組血清miR-92a、miR-143、miR-196b水平比較

NSCLC組血清miR-92a、miR-196b表達(dá)水平較對(duì)照組均升高,差異具有顯著性(P<0.05);NSCLC組血清miR-143表達(dá)水平較對(duì)照組顯著下調(diào),差異也具有顯著性(P<0.05),見表2。

表2 血清miR-92a、miR-143、miR-196b表達(dá)水平比較

2.2 血清miR-92a、miR-143、miR-196b表達(dá)與NSCLC臨床病理特征的關(guān)系

單因素分析結(jié)果顯示,NSCLC組血清miR-92a、miR-143、miR-196b 表達(dá)與腫瘤TNM分期、分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05),見表3。

表3 血清miR-92a、miR-143、miR-196b表達(dá)與NSCLC臨床病理特征的關(guān)系

2.3 miR-92a表達(dá)與NSCLC患者預(yù)后的關(guān)系

采用中位數(shù)法,將NSCLC患者分為miR-92a高表達(dá)組和miR-92a低表達(dá)組,各30例。NSCLCmiR-92a低表達(dá)組3年總生存率為66.67%,高表達(dá)組3年總生存率為36.67%,兩組比較具有顯著性差異(Log-rank χ2=6.706,P=0.0096),見圖1。

圖1 miR-92a表達(dá)與NSCLC患者預(yù)后的關(guān)系圖

2.4 miR-196b表達(dá)與NSCLC患者預(yù)后的關(guān)系

采用中位數(shù)法,將NSCLC患者分為miR-196b高表達(dá)組和低表達(dá)組,各30例。miR-196b低表達(dá)組3年總生存率為63.33%,顯著高于miR-196b高表達(dá)組(40.00%),差異具有顯著性(Log-rank χ2=4.83,P=0.0279),見圖2。

圖2 miR-196b表達(dá)與患者總生存率的關(guān)系

2.5 miR-143表達(dá)與NSCLC患者預(yù)后的關(guān)系

采用中位數(shù)法,將NSCLC患者分為miR-143高表達(dá)組和miR-143低表達(dá)組,各30例。miR-143高表達(dá)組3年總生存率為63.33%,高于miR-143低表達(dá)組(46.67%)。見圖3。

圖3 miR-143表達(dá)與患者總生存率的關(guān)系

2.6 NSCLC患者血清miR-92a、miR-196、miR-143的相關(guān)性

Pearson相關(guān)性分析顯示,NSCLC患者血清miR-92a與miR-196b表達(dá)呈正相關(guān)性(γ=0.453,P<0.05),miR-143與miR-92a、miR-196b表達(dá)呈負(fù)相關(guān)性(γ=-0.376,-0.356,P<0.05)。

3 討論

近幾年,隨著我國(guó)分子生物學(xué)領(lǐng)域的不斷發(fā)展,miRNA的發(fā)現(xiàn)為惡性腫瘤疾病的診斷和預(yù)后帶來了新方向,miRNA是一類具有調(diào)控基因表達(dá)功能的非編碼小分子RNA,有著高穩(wěn)定性、高保守性、組織特異性等優(yōu)點(diǎn),作為腫瘤診斷和預(yù)后的分子標(biāo)志物具有積極優(yōu)勢(shì)[8]。已有研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)多種miRNA參與了NSCLC腫瘤細(xì)胞的增殖、分化的調(diào)控,且發(fā)揮致癌基因或抑癌基因的作用,又或同時(shí)具有致癌和抑癌兩種功能[9]。本研究探討了血清miR-92a、miR-143和miR-196b 水平在 NSCLC腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)及其預(yù)后關(guān)系,對(duì)NSCLC的早期預(yù)防和術(shù)后診斷有著重要作用。

miR-92a、miR-196b屬于促癌基因,與NSCLC腫瘤細(xì)胞的增殖、分化、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[10]。miR-143-3p屬于miR-143家族基因,miR-143表達(dá)量的顯著降低可能影響腫瘤細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移和侵襲能力[11]。研究實(shí)驗(yàn)證明,miR-143-3p在胃癌、卵巢癌、骨肉瘤等多種腫瘤細(xì)胞中均呈低表達(dá)[12],但miR-143在NSCLC的作用機(jī)制尚部明確,有待深入研究。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),血清miR-92a、miR-196b在NSCLC組的表達(dá)量顯著高于對(duì)照組;而miR-143在NSCLC表達(dá)量低于對(duì)照組。miR-92a、miR-196b高表達(dá)和miR-143低表達(dá)與腫瘤TNM分期、低分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均有關(guān),這與既往研究結(jié)果基本一致。提示miR-92a、miR-196b在NSCLS中呈高表達(dá),miR-143呈低表達(dá),且血清miR-92a、miR-196b、miR-143均有可能參與NSCLC腫瘤的發(fā)生發(fā)展。

研究表明,肺癌組織中miR-92a、miR-143、miR-196b水平可能與患者總生存率有關(guān)。分析血清水平與NSCLC患者3年生存率之間的關(guān)系,結(jié)果顯示,血清miR-92a、miR-196b低表達(dá)組NSCLC患者3年生存率高于高表達(dá)組,血清miR-143高表達(dá)組NSCLC患者3年生存率高于低表達(dá)組,進(jìn)一步分析Pearson相關(guān)性,血清miR-92a與miR-196b表達(dá)量呈正相關(guān),血清miR-143與miR-92a、miR-196b呈負(fù)相關(guān)。臨床分期、組織分化和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是NSCLC主要病理特征,可能是影響肺癌預(yù)后的關(guān)鍵因素,提示miR-92a、miR-143、miR-196b可作為評(píng)估NSCLC病情的潛在生物標(biāo)志物。

綜上所述,NSCLC患者組織中血清miR-92a、miR-196b表達(dá)均上調(diào),miR-143表達(dá)下調(diào),且與患者總生存率相關(guān),miR-92a、miR-143、miR-196b的表達(dá)可作為NSCLC臨床病情評(píng)估和預(yù)后的重要依據(jù)。