高冉冉申 振連夢慧韓 聰李 偉

（1.山東中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)學(xué)院，濟(jì)南 250014；2.山東中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院，濟(jì)南 250014；3.山東中醫(yī)藥大學(xué)，濟(jì)南 250014；4.山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，濟(jì)南 250014）

動物模型最早可追溯到公元前6 世紀(jì)，人類疾病發(fā)生發(fā)展復(fù)雜，借助動物模型間接研究可調(diào)控變量，有助于方便、有效地認(rèn)識人類疾病的發(fā)生發(fā)展規(guī)律，促進(jìn)醫(yī)學(xué)發(fā)展與進(jìn)步［1］。 傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)因其獨特性及病證復(fù)雜性，單純西醫(yī)病理模型不能充分反映其病因及臨床實際，在現(xiàn)代實驗研究中病證結(jié)合動物模型發(fā)揮著重要作用。 近年來有關(guān)中醫(yī)動物模型的研究不斷發(fā)展，逐漸由單純病理模型到病因模型再到病證結(jié)合模型，使動物模型同時具備疾病與證候的特征，更加貼近于中醫(yī)理論特色。 但是目前病證結(jié)合動物模型仍缺乏規(guī)范化的評價體系及可重復(fù)性，建立規(guī)范且具有復(fù)刻性的病證結(jié)合動物模型成為近年來研究的熱點。

氣虛濕瘀是慢性腎?。╟hronic kidney disease，CKD）的常見證候，腎纖維化是CKD 的主要病理特征，胡洪貞等［2］提出CKD 以氣虛為本，血瘀、濕濁為標(biāo)，主要由勞倦、內(nèi)外濕邪及外邪侵襲等所致。 氣虛濕瘀型腎纖維化動物模型的建立有助于把握該證候疾病的本質(zhì)及病理生理變化特點，利于CKD 的研究及更好地指導(dǎo)臨床用藥診療。 目前并無氣虛濕瘀型腎纖維化動物模型造模的先例，本文從病理造模、病因造模及病證結(jié)合造模、模型評價角度出發(fā)，綜述并探討氣虛濕瘀型腎纖維化動物模型的造模方法及模型評價，以期為氣虛濕瘀型腎纖維化動物模型的構(gòu)建及復(fù)制提供參考。

1 氣虛濕瘀

1.1 氣虛血瘀

中醫(yī)認(rèn)為氣為血之帥，氣行則血行、氣止則血止，氣虛無力推動血液運行，血行不暢而致瘀；血為氣之母，血瘀致臟腑失養(yǎng)，生化乏源，進(jìn)一步導(dǎo)致氣虛，氣虛與血瘀二者互為因果，相互關(guān)聯(lián)，臨床多氣虛血瘀并見。 該證候動物模型的構(gòu)建可從其病理及病因角度出發(fā)，單因素與多因素相結(jié)合。

1.1.1 病理造模

氣虛血瘀多表現(xiàn)為免疫學(xué)、血液流變學(xué)及行為學(xué)上的改變?nèi)缑庖吖δ芟陆?、能量代謝紊亂、神疲乏力、血液高凝狀態(tài)、黏度增高、纖維蛋白原含量增高等。 病理造模根據(jù)氣虛血瘀特定的病理表現(xiàn)，運用相關(guān)實驗技術(shù)對動物進(jìn)行造模，使動物表現(xiàn)出該特定的病理改變。

林家茂等［3］通過阿霉素腹腔注射聯(lián)合丙基硫氧嘧啶混懸液灌胃，從血流動力學(xué)方面降低心肌收縮力，減少心排量制備心氣虛兼血瘀證心衰模型，造模6 周后，造模組出現(xiàn)飲食量減少、生長緩慢、精神萎靡、活動力下降、甲狀腺激素T3、T4 降低等氣虛表現(xiàn)以及毛色枯槁、爪甲紫紺、左室射血分?jǐn)?shù)下降、心排量減少等血瘀表現(xiàn)，提示心氣虛兼血瘀證的SD 大鼠模型造模成功。 羅澤飛等［4］以環(huán)磷酰胺腹腔注射使血液呈高凝狀態(tài)制備氣虛血瘀大鼠模型，模型組大鼠全血黏度、血沉、血漿黏度、紅細(xì)胞壓積和內(nèi)皮縮血管肽（endothelin，ET）-1 均明顯高于空白組，NO 含量低于空白組，提示造模成功。 張玉昆等［5］通過注射博來霉素生理鹽水溶液（5 mg／kg）法過表達(dá)TGF-β1，制備氣虛血瘀動物模型，造模結(jié)束后大鼠的中、低、高切變率的全血黏度、血小板聚積性相關(guān)指標(biāo)cGMP、血小板纖溶相關(guān)指標(biāo)PAI-1以及血小板釋放相關(guān)指標(biāo)如β-TG 和PF4 水平均升高，cAMP、TT 縮短，并以方測證，運用行氣活血方丹參飲后，大鼠氣虛血瘀狀態(tài)得到改善。 此外，還有研究采用利血平肌肉注射，消耗小鼠體內(nèi)兒茶酚胺導(dǎo)致脾虛，模型小鼠出現(xiàn)耳緣、腳趾等局部微循環(huán)血流量的降低，表現(xiàn)出氣虛血瘀的臨床及病理改變［6－7］。

1.1.2 病因造模

病因造模指基于中醫(yī)病因?qū)W說和發(fā)病理論將符合單一或多種病因理論的致病因素作用于實驗動物［8］，符合“因－證理論”，符合中醫(yī)機理，具有邏輯性。 氣虛血瘀依據(jù)中醫(yī)“勞則氣耗、饑則氣損”的病因，多采用力竭游泳、疲勞跑步、睡眠剝奪法進(jìn)行“氣虛血瘀”模型構(gòu)建。 扈新剛等［9］以大鼠沉入水中10 s 不能自行浮出水面為力竭標(biāo)準(zhǔn)，制備大鼠氣虛血瘀模型，對大鼠表征進(jìn)行動態(tài)觀察并檢測相關(guān)血液流變學(xué)指標(biāo)，發(fā)現(xiàn)經(jīng)過長期的力竭游泳后均表現(xiàn)出氣虛相關(guān)表征，血液流變學(xué)指標(biāo)符合氣虛血瘀表現(xiàn)。 郝婷婷等［10］通過對大鼠每天睡眠剝奪16 h造成中樞性神經(jīng)疲勞并聯(lián)合長時間站立所致形體疲勞制備氣虛血瘀型大鼠，大鼠出現(xiàn)舌象、足底圖像R、G、B 下降，足底變紫暗、舌呈淡紫，耳廓、足底體表激光多普勒血流灌注量降低等氣虛血瘀表現(xiàn)。后陳進(jìn)成等［11］采用睡眠剝奪法成功復(fù)制氣虛血瘀動物模型。 甘加寬等［12］曾用睡眠剝奪、力竭游泳、睡眠剝奪結(jié)合力竭游泳3 種方法進(jìn)行小鼠造模，對小鼠體重、抓力、舌象、脈搏、脾指數(shù)與胸腺指數(shù)、脾淋巴細(xì)胞亞群進(jìn)行比較，結(jié)果顯示三種造模方式均能引起小鼠乏力，睡眠剝奪與力竭游泳均能引起小鼠脈象變細(xì)，并最終得出睡眠剝奪組為三者間更優(yōu)造模方法。 李雅君等［13］通過饑餓和力竭游泳的方法成功復(fù)制大鼠氣虛血瘀模型，與王晚霞等［14］的實驗結(jié)果基本一致，表現(xiàn)為血液黏度低、纖維蛋白原等凝血因子顯著不足的低流變性型血瘀證。 彭桂原等［15］采用小承氣湯耗氣破氣加饑飽失常（足量給食－限量給食循環(huán)）進(jìn)行氣虛造模后，再用光化學(xué)反應(yīng)法制備氣虛血瘀證耳蝸Corti 器毛細(xì)胞損傷的豚鼠動物模型，造模后豚鼠均出現(xiàn)不同程度的中醫(yī)氣虛證的典型癥狀表現(xiàn)，耳蝸病理切片提示耳蝸血管紋、Corti 器等結(jié)構(gòu)出現(xiàn)不同程度的缺血性病變，體現(xiàn)血瘀表現(xiàn)，提示造模成功。

1.1.3 病證結(jié)合造模

病證結(jié)合造模即在充分考慮氣虛血瘀證類疾病病因的前提下，人為地制造病理產(chǎn)物，使之既符合西醫(yī)病理特點又符合中醫(yī)證候特點，同時使用一些動物體表特征來模擬人類證候特征的生物表征，可更好地體現(xiàn)中醫(yī)理論和評價中藥療效［16］。

楊霓芝等［17］在Thy-1 抗體制備慢性腎炎模型的基礎(chǔ)上采用游泳疲勞實驗制備氣虛血瘀病證結(jié)合模型，模型組大鼠出現(xiàn)氣虛血瘀表征，機體細(xì)胞免疫功能紊亂，血液流變學(xué)異常。 任建勛等［18］依據(jù)“勞則氣耗”理論，采用睡眠剝奪復(fù)合冠狀動脈左前降支結(jié)扎的方法建立心力衰竭氣虛血瘀病證結(jié)合大鼠模型，模型組體重、抓力、脈搏幅度及自主活動總路程和平均速度較空白對照組均明顯下降，主動脈血流速度下降，在多因素復(fù)合干預(yù)下氣虛血瘀病證結(jié)合更為明顯。 王瑾茜等［19］通過控食復(fù)合力竭游泳聯(lián)合結(jié)扎左冠狀動脈前降支造模，造模結(jié)束后分析大鼠舌面RGB 值屬“紫舌”，舌面微血管數(shù)量增加，符合冠心病氣虛血瘀病證結(jié)合模型特點。 戴姣等［20］依據(jù)“生物表征”及“因、脈、證、治”理論通過聲、光、電、夾尾、冰水浴、束縛等消耗正氣，“元氣既虛，必不能達(dá)于血管；血管無氣，必停留而瘀”，從而構(gòu)建氣虛血瘀大鼠模型，通過注射野百合堿誘導(dǎo)肺動脈高壓，大鼠注射部分出現(xiàn)不同程度的紫腫、出血等血液循環(huán)瘀滯表現(xiàn)，同時血流動力學(xué)指標(biāo)體現(xiàn)血瘀。

綜上，氣虛血瘀模型多表現(xiàn)為血流動力學(xué)及肢體行為學(xué)上的改變，可采用化學(xué)法如阿霉素、環(huán)磷酰胺、博來霉素等靶向病理造模，同時采用勞倦過度、飲食失節(jié)的方法進(jìn)行病因造模，病證結(jié)合。

1.2 氣虛濕盛

氣主推動，氣行津行，氣虛氣化無力、氣機阻滯可致運化失司，水濕停聚。 《景岳全書》云“蓋水為至陰，故其本在腎；水化于氣，故其標(biāo)在肺；水唯畏土，故其制在脾”。 腎者水臟，主津液。 腎氣虛，氣化不利，水液輸布失常，則濕濁內(nèi)生。 腎氣虛，邪能客之，外濕客表，久則深入血絡(luò)，導(dǎo)致氣滯濕阻，氣化失司，加重濕濁。 濕濁內(nèi)?；療?，可見濕熱，而濁毒日久損及腎陽，失于溫煦，可致寒濕。 故從濕熱與寒濕兩方面論述。

1.2.1 濕熱證

腎者，胃之關(guān)也，關(guān)門不利，故聚水而從其類也。 腎氣虧虛，失于氣化蒸騰，可見水濕停聚。 徐靈胎云：“有濕則有熱，雖未必盡然，但濕邪每易化熱?！蹦I氣虧虛，津液輸布排泄障礙，水濕停聚，郁久化熱。 腎與脾先后天相互滋生、相互影響，薛生白云“太陰內(nèi)傷，濕飲停聚，客邪再至，內(nèi)外相引，故病濕熱”。 嗜食肥甘厚味、飲酒無度、年老久病或房勞過度損傷脾腎、聚濕生熱，加之外界環(huán)境濕熱氤氳，同氣感召，另受客邪引動致濕熱，故濕熱模型構(gòu)建可從“內(nèi)濕＋外濕＋客邪＋脾腎虧虛”角度出發(fā)，內(nèi)外因結(jié)合。

（1） 病理造模

濕熱證病理多表現(xiàn)為舌苔黃膩、小便黃赤、大便黏滯或溏泄、炎癥因子升高等，杜恒［21］通過在口服并定時尾靜脈注射牛血清白蛋白（BSA）的基礎(chǔ)上注射葡萄球菌腸毒素B 制備大鼠腎炎濕熱證模型，大鼠出現(xiàn)大便溏泄等濕熱證表征同時伴有IL-6 等炎癥因子升高。 齊文杰等［22］、Cao 等［23］通過用膽胰管推注5%?；悄懰徕c、異硫氰酸α－萘酯和四氯化碳進(jìn)行病理造模，呈現(xiàn)濕熱證候。 此外，多研究發(fā)現(xiàn)在肥甘飲食＋恒溫恒濕的基礎(chǔ)上加用水楊酸、大腸桿菌、克林霉素磷酸酯、鼠傷寒沙門氏菌灌胃等生物、化學(xué)因子均可制備濕熱模型［24－27］。

（2） 病因造模

基于飲食不節(jié)、外感濕邪及脾胃不和釀濕生熱病因，季旭明等［28］通過高脂飲食＋游泳內(nèi)外相引制備濕熱證小鼠模型，模型小鼠出現(xiàn)脂質(zhì)代謝紊亂。王婷等［29］通過高蛋白飼料＋糖水＋酒營造內(nèi)濕，恒溫恒濕氣候箱制備外濕，分別用花生油脂模擬肥甘厚膩致脾氣虛、番瀉葉寒涼致脾陽虛，兩種濕熱模型均出現(xiàn)喜聚堆蜷臥、喜閉眼、嗜睡懶動、被毛無光澤、尾部肛周、腹部毛色黯黃、飲水減少、大便溏泄等濕熱證的臨床表現(xiàn)和體征，以及干擾素γ（INFγ）、腫瘤壞死因子α（TNF-α）等炎癥因子的改變和腸道菌群結(jié)構(gòu)的失調(diào)。 周祎青等［30］通過高蛋白飲食＋人工氣候箱＋隔日灌服白酒＋跑步制造“外濕＋內(nèi)濕＋脾虛”的復(fù)合因素造模，模型組小鼠出現(xiàn)濕熱證癥狀，機體發(fā)生炎性改變以及小腸組織黏膜層上皮細(xì)胞破壞，舌組織黏膜層角化增加、舌乳頭排列不均勻等濕熱證的病理表現(xiàn)。

（3） 病證結(jié)合造模

病證結(jié)合模型可反映疾病病理與濕熱證候特征，熊寧寧等［31］早在1991 年就報道了采用給家兔注射血清白蛋白并加用大腸桿菌內(nèi)毒素感染造成免疫復(fù)合物沉積模仿人類反復(fù)感染后導(dǎo)致的濕熱型進(jìn)行性腎炎，制備腎炎濕熱病證結(jié)合模型。 劉曉鷹等［32］復(fù)刻腎炎濕熱動物模型，通過在對Wistar 大鼠口服并定時尾靜脈注射牛血清白蛋白的基礎(chǔ)上，分別施以葡萄菌腸毒素B 或高糖高脂飲食聯(lián)合恒溫恒濕外環(huán)境影響構(gòu)建濕熱模型動物，造模中晚期動物出現(xiàn)血尿、蛋白尿、血清膽固醇、三酰甘油、血肌酐、尿素氮等升高，彌漫性腎小球系膜區(qū)增寬、系膜細(xì)胞、系膜基質(zhì)增生、腎小管間質(zhì)炎細(xì)胞浸潤等類似于腎炎濕熱證的生化及病理改變。

1.2.2 寒濕證

疾病日久，損及腎陽，腎陽不足，命門火衰，火不暖土，寒濕內(nèi)生，另加之外受寒邪影響，內(nèi)外寒濕互病。 勞則耗氣、飲食失節(jié)、苦寒藥物、年老久病等損傷脾腎、寒濕內(nèi)生，外界寒濕環(huán)境、寒濕邪氣乘虛而入，內(nèi)外因相互影響導(dǎo)致寒濕證候。 故寒濕模型構(gòu)建可基于“內(nèi)傷＋外感”，病因病理相結(jié)合。

寒濕證病理多表現(xiàn)為畏寒肢冷、膚色青暗、大便稀溏、體重下降、炎癥因子升高、血清皮質(zhì)醇下降等，病因多與飲食不節(jié)、苦寒瀉下、年老久病氣耗陽損、外感寒濕侵襲等有關(guān)。 戴冰等［33］基于抑制下丘腦－垂體－腎上腺軸原理通過給予25 mg／kg 氫化可的松灌胃10 d 后小鼠出現(xiàn)肢尾冷、體重下降、大便稀溏等寒濕表征。 劉同林［34］、吳君等［35］選取老年大鼠與青年大鼠比較，發(fā)現(xiàn)老年大鼠具有體溫下降、尿量增多、血清皮質(zhì)醇下降等陽虛寒濕表現(xiàn)。靳荃等［36］以冷水游泳力竭聯(lián)合人工氣候箱模擬外界寒濕環(huán)境制備小鼠寒濕證疼痛模型，造模后小鼠出現(xiàn)尾巴皮膚青暗、體重增長變慢等寒濕證病理特征。 雷鳴等［37］基于外濕病因以溫度4℃，濕度60%構(gòu)建外濕環(huán)境進(jìn)行寒濕痹阻模型造模，大鼠皮下膠原及肌組織出現(xiàn)肌纖維變性、壞死，纖維化伴淋巴細(xì)胞浸潤提示造模成功。 王常松等［38］通過采取寒濕環(huán)境＋寒涼飲食＋高脂飼料的多因素造模，在外在表現(xiàn)及尿D－木糖排泄率、血漿胃動素等微觀指標(biāo)上均符合寒濕證模型特征。

綜上，氣虛濕盛證候模型分為濕熱與寒濕兩個方面。 濕熱證主要根據(jù)中醫(yī)“肥甘厚膩，釀濕生熱”“濕熱膠著，內(nèi)外相引”理論再加以生活因素、生物化學(xué)因素等影響而建立，大致可概括為“內(nèi)外濕熱＋脾腎虧虛＋致病因子”的多因素病證結(jié)合造模。 氣虛陽損可見寒濕，寒濕證動物模型可通過糖皮質(zhì)激素等抑制下丘腦－垂體－腎上腺軸靶向病理聯(lián)合中醫(yī)寒濕“內(nèi)生＋外感”病因建立。

2 腎纖維化病理模型

腎纖維化發(fā)生發(fā)展機制復(fù)雜，涉及多細(xì)胞及多條細(xì)胞信號通路，其動物模型的制備方式多樣。 胡安康等［39］通過大鼠腎大部分切除（Platt 法）和腺嘌呤（Yokozawa 法）灌胃法制備腎衰竭模型，兩組大鼠腎均見局灶性間質(zhì)纖維化，伴大量淋巴和單核細(xì)胞的浸潤。 麻志恒等［40］成功復(fù)刻5／6 腎切除慢性腎纖維化小鼠模型，可見腎小球明顯腫大、增生，系膜細(xì)胞增殖變大變厚，局部粘連和硬化，基底膜增寬明顯，腎小管管腔不完整，有蛋白管型，膠原纖維增生。 李藝文等［41］單側(cè)輸尿管結(jié)扎大鼠后，大鼠腎盂擴張、皮質(zhì)變薄，上皮標(biāo)志物E-cadherin 表達(dá)下降，肌成纖維細(xì)胞標(biāo)志α-SMA 表達(dá)增加，EMT 形成，提示腎纖維化模型成功。 Han 等［42］用環(huán)孢素（30 mg／kg）灌胃配合低鹽飲食建立環(huán)孢素腎毒性小鼠模型，造模后小鼠體質(zhì)量減輕，腎功能下降，腎小球基底膜增厚、腎小管擴張，空泡化或萎縮。 高健［43］通過單側(cè)腎切除加阿霉素尾靜脈注射制作大鼠腎小球硬化模型，模型組可見腎小球局灶節(jié)段性腎小球硬化，腎小球毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞和足細(xì)胞腫脹、足突融合消失，加重病理進(jìn)展，最終致腎纖維化。 多項實驗研究采用鏈脲佐菌素均成功制備糖尿病腎病腎纖維化模型，方便穩(wěn)定且對組織器官的毒性小，相對安全，實驗動物的死亡率?。?4－47］。

綜上，腎纖維化造模方式多樣，主要基于其病理變化可通過腎大部分切除、單側(cè)輸尿管結(jié)扎等外科手術(shù)方法及腺嘌呤、環(huán)孢素A 灌胃，阿霉素尾靜脈注射、鏈脲佐菌素腹腔注射等化學(xué)方法造成腎功能和結(jié)構(gòu)的損害，最終導(dǎo)致腎纖維化。

3 “氣虛濕瘀”腎纖維化模型造模方法

氣虛無力推動運化水濕，水液輸布代謝障礙可致水濕停滯，濕飲停聚，客邪再至內(nèi)外相引，故病濕濁。 濕濁阻滯氣機加之熱傷陰損絡(luò)、寒凝絡(luò)阻，使血瘀加重，濕瘀又可耗傷人體正氣，故氣虛濕瘀相互影響，互為因果。

目前并無氣虛濕瘀型腎纖維化造模先例，基于以上氣虛血瘀、濕熱、寒濕證及腎纖維化造模方法，總結(jié)氣虛濕瘀型腎纖維化模型可通過勞則氣耗或饑則氣損聯(lián)合內(nèi)外濕邪及多因素破壞腎結(jié)構(gòu)及功能的原理制備，具體造模方法見表1。

表1 氣虛濕瘀型腎纖維化模型構(gòu)建方法Table 1 Method for constructing kidney fibrosis model of qi deficiency and dampness stasis type

4 “氣虛濕瘀”腎纖維化模型評價

4.1 宏觀表征

動物模型所指宏觀表征常涵蓋習(xí)性、一般生活狀態(tài)、生命體征、外觀形態(tài)及舌象等多個方面［48］。氣虛運化失?？梢婏嬍硿p少、體重下降以及消瘦等癥狀。 氣為“神之母”，氣充則神明，氣虛則神衰，故氣虛可見精神倦怠、眼光無神、活動性差。 脾氣虧虛，脾失健運，肌肉毛發(fā)失于濡養(yǎng)可見皮毛色暗、無光；脾氣虧虛轉(zhuǎn)運不利、清濁不分可見大便稀溏。氣虛無力推動血行，血液瘀滯，氣虛血瘀常并見，血瘀多見舌質(zhì)紫暗，舌面瘀斑瘀點，實驗小鼠尾部可出現(xiàn)不同程度的瘀紫或青斑［49］。 濕熱內(nèi)蘊舌苔多黃膩，熏蒸水液常見小便黃赤，濕熱壅阻大腸，大腸傳導(dǎo)失?？梢姶蟊沅缧?。 濕熱下注而為蛋白尿，久則耗血傷陰，終致腎氣匱乏，腎陽耗損，腎虛無力主水、司開合，而見尿少等癥。 腎陽虛衰、失于溫煦見畏寒肢冷、膚色青暗、大便稀溏、體重下降等癥。 同時根據(jù)《中醫(yī)臨床診療術(shù)語證候部分（修訂版）》、《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則》概括動物模型宏觀表征主要為：（1）氣虛：倦怠嗜睡，精神萎靡，四肢蜷縮，活動性差，對外界刺激反應(yīng)遲鈍；進(jìn)食量逐漸減少，消瘦，大便稀??；皮毛色暗、蓬松無光；（2）血瘀：舌面瘀點，舌質(zhì)淡紫；尾部出現(xiàn)不同程度瘀紫或青斑。 （關(guān)于舌象分析多采用Adobe Photoshop CS5 軟件進(jìn)行，選取舌面3 點，讀取像素區(qū)域R（紅色）、G（綠色）及B（藍(lán)色）分量值進(jìn)行比較）；（3）濕熱：小便黃赤、量少、泡沫尿；大便溏泄或黏滯；體溫不變或升高；舌苔黃厚；（4）寒濕：畏寒肢冷、倦怠乏力、食少納呆、小便清長，肢體水腫，大便溏泄，舌苔白膩。

4.2 實驗室指標(biāo)

所謂“正氣存內(nèi)，邪不可干”，有研究表明氣虛證與機體免疫能力紊亂有關(guān)，臨床上氣虛患者多伴有免疫功能低下，CD4＋、CD19＋等免疫指標(biāo)及血漿免疫球蛋白IgG、IgA 下降［50－52］。 2021 年國際血瘀證診斷指南［53］將血流動力學(xué)、血液流變學(xué)、血小板功能、凝血功能、纖溶功能列為血瘀證的主要診斷標(biāo)準(zhǔn)。 血瘀證血液流變學(xué)特征主要包括濃、黏、凝、聚四個方面，體現(xiàn)在血液黏度增高、血小板黏附率增高、凝血時間縮短、纖維蛋白原含量增高等。 Ran 等［54］采用血液流變學(xué)指標(biāo)評價血瘀證大鼠模型，血瘀證大鼠的全血黏度和血漿黏度較正常大鼠顯著增加。

鐘云良等［55］綜述見腎系疾病濕熱證與感染之間存在一定的相關(guān)性，濕熱證C－反應(yīng)蛋白（CRP）、腫瘤壞死因子（TNF-α）、白細(xì)胞介素－2（IL-2）、白細(xì)胞介素－6（IL-6）水平明顯高。 此外，慢性腎病濕熱病理可表現(xiàn)蛋白尿、血尿、膽固醇血癥、氮質(zhì)潴留、血流變異常等［56］。 李威瑩等［57］得出脾胃濕熱證模型評價多涉及血糖血脂、氧化應(yīng)激、炎癥細(xì)胞、水通道蛋白等指標(biāo)。 陳佳美等［58］制定了濕熱證動物的模型評價指征，通過評估氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）等氧化指標(biāo)，IgM、IgG、CD4＋T、CD8＋T等免疫指標(biāo)，CRP、TGF-α、IFN-γ、IL-6 等炎癥指標(biāo)，水通道蛋白（AQP2、AQP3、AQP4）等水液代謝相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行評價。 糖尿病腎病寒濕證可見血清MCP-1、IL-6 等炎癥因子升高［59］，在腎陽氣虛寒濕證中血清皮質(zhì)醇及三碘甲狀腺原氨酸（T3）、甲狀腺素（T4）下降［34］。 此外，血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）、尿NAG 酶（NAG）、尿蛋白／肌酐比值升高，eGFR 下降是CKD 的主要表現(xiàn)。

4.3 病理表現(xiàn)

腎固有細(xì)胞凋亡，炎細(xì)胞浸潤，肌成纖維細(xì)胞異常增殖，ECM 過度沉積最終形成腎纖維化，主要病理表現(xiàn)是腎小球的硬化、腎小管間質(zhì)的纖維化以及腎內(nèi)血管的硬化或堵塞等。 李春慶等［56］綜述各醫(yī)家研究，認(rèn)為系膜細(xì)胞增生和基質(zhì)增多、纖維素樣壞死及炎細(xì)胞浸潤是腎小球疾病濕熱證的特異性表現(xiàn)。 寒濕證可表現(xiàn)為系膜細(xì)胞增生，小管上皮空泡樣變，腎間質(zhì)炎細(xì)胞浸潤［60］。 局灶增生硬化、腎小球肥大在慢性原發(fā)性腎小球疾病氣虛證中多見［61］。 血瘀證主要表現(xiàn)為膠原纖維增生、毛細(xì)血管襻內(nèi)微血栓形成［62］。

綜上，氣虛濕瘀腎纖維化的模型評價標(biāo)準(zhǔn)主要涉及宏觀表征、實驗室指標(biāo)以及病理改變3 個方面，宏觀表征主要表現(xiàn)為氣虛、血瘀與濕熱、寒濕證的癥狀與體征；化學(xué)指標(biāo)與病理改變通過現(xiàn)代分析檢測技術(shù)，明確疾病引起的微觀改變，將評價指標(biāo)量化，具體評價標(biāo)準(zhǔn)見表2。

表2 氣虛濕瘀型腎纖維化模型評價標(biāo)準(zhǔn)Table 2 Evaluation criteria of kidney fibrosis model of qi deficiency and dampness stasis syndrome

5 總結(jié)與展望

“病證結(jié)合”動物模型以中醫(yī)理論為基礎(chǔ)，要求不僅符合西醫(yī)各種疾病的病理特征，具備與臨床疾病相似的演變和發(fā)展過程，而且要與中醫(yī)臨床病證特點相結(jié)合，是中醫(yī)藥基礎(chǔ)研究的重要手段。

氣虛濕瘀型病證結(jié)合腎纖維化的造模方法基于中醫(yī)病因并結(jié)合西醫(yī)病理制備，可通過腎大部分切除、單側(cè)輸尿管結(jié)扎等外科手術(shù)方法或腺嘌呤、環(huán)孢素A 灌胃，阿霉素尾靜脈注射、鏈脲佐菌素腹腔注射等化學(xué)方法建立西醫(yī)腎纖維化模型，結(jié)合饑餓、力竭游泳、疲勞跑步、睡眠剝奪、高糖高脂飲食、外濕環(huán)境、灌服白酒、注射藥物、選擇年老體虛動物等單一或者復(fù)合手段建立氣虛濕瘀模型，此模型同時滿足病證特征，符合中醫(yī)與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)理論，具有可行性。 此外，模型評價從疾病與證候分而論之，將中醫(yī)臨床表現(xiàn)與西醫(yī)微觀指標(biāo)結(jié)合，多維度、標(biāo)準(zhǔn)化、具體化。 但是本證候模型無先例，造模中考慮條件眾多，需下一步實驗驗證。 制備穩(wěn)定有效，成本低，操作簡便的氣虛濕瘀型腎纖維化模型，可為氣虛濕瘀型腎纖維化的研究提供有效的模型支持，并進(jìn)一步促進(jìn)其基礎(chǔ)及臨床研究，更有效地發(fā)揮中醫(yī)藥在腎纖維化中的治療作用。