仇思婕,許曉慶

鹽城市疾病預(yù)防控制中心,江蘇 鹽城 224001

免疫印跡試驗(yàn)(WB)由于受到檢測方法本身局限性、生物樣本的復(fù)雜性及其他因素的影響,有一定數(shù)量的HIV抗體為不確定結(jié)果[1],而不確定結(jié)果患者需要進(jìn)行2～4周后隨訪復(fù)檢方可判定最終結(jié)果,這時可能由于隨訪困難而導(dǎo)致潛在的HIV感染者不能被及時發(fā)現(xiàn),不僅存在傳播HIV的風(fēng)險,而且對HIV感染者的干預(yù)與藥物治療也會造成影響。此外,由于結(jié)果不確定,使得艾滋病防治工作者不能及時回應(yīng)檢測者的咨詢,這會給受檢者帶來沉重的心理負(fù)擔(dān)[2]。為此,本文分析了2021—2022年鹽城市疾病預(yù)防控制中心艾滋病確證實(shí)驗(yàn)室WB確證檢測結(jié)果為不確定樣本的人群分布特征,并綜合分析了隨訪到的46例不確定樣本篩查實(shí)驗(yàn)與補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)的結(jié)果,為艾滋病的精準(zhǔn)防控提供實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 對象 2021—2022年鹽城市疾病預(yù)防控制中心艾滋病確證實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行WB確證檢測結(jié)果為HIV抗體不確定者52份,以及隨訪到的46例。本研究通過倫理審查。

1.2 方法 檢測流程依據(jù)《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范(2020年修訂版)》。WB免疫印跡試驗(yàn)出現(xiàn)任何特異性條帶,但不足于被判斷為陽性,判為HIV抗體不確定。對HIV抗體不確定者采取2～4周隨訪抗體檢測以及核酸檢測的策略,如果隨訪檢測無特異性抗體條帶出現(xiàn)則報告確證陰性,如果3個月內(nèi)隨訪結(jié)果仍為不確定,且核酸試驗(yàn)陰性,建議結(jié)合流行病學(xué)史和臨床表現(xiàn)考慮HIV抗體陰性的可能性,3個月后不再隨訪。本文涉及的檢測試劑如下,結(jié)果判定均按照檢測試劑盒使用說明書。

(1)篩查實(shí)驗(yàn):快速檢測實(shí)驗(yàn)(RT)試劑為膠體硒法(HIV)1+2型抗體檢測試劑盒(美艾利爾);酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)試劑為HIV抗原抗體診斷試劑盒(珠海麗珠),所有檢測試劑均在有效期內(nèi)并嚴(yán)格按照各自說明書操作。

(2)補(bǔ)充實(shí)驗(yàn):抗體確證WB試驗(yàn)試劑為安倍生物醫(yī)學(xué)亞太私人有限公司生產(chǎn)的(HIV1+2)型抗體檢測試劑盒(WB免疫印跡法);HIV-1核酸定量試驗(yàn)試劑為Xpert HIV-1核酸檢測試劑盒(實(shí)時熒光PCR法),最低檢測限為40拷貝/ml,檢測值<40拷貝/ml報告為低于檢測限。

1.3 儀器 主要有安圖PHOMO型酶標(biāo)儀和iwo-960型洗板,珠海麗珠CycleBlot48蛋白印跡儀,賽沛全自動醫(yī)用PCR分析儀等。

1.4 統(tǒng)計分析 數(shù)據(jù)錄入Excel建立數(shù)據(jù)庫,應(yīng)用SPSS 20.0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,計數(shù)資料以[n(%)]表示,比較采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不確定標(biāo)本的人群特征 WB確證檢測848份,其中HIV抗體不確定者52份,占6.1%。不確定率女性(13.7%)高于男性(4.6%),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=17.54,P<0.05);不同年齡組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=4.23,P>0.05);來源于艾滋病自愿咨詢檢測(VCT)(22.3%)、孕產(chǎn)期檢測(11.1%)、無償獻(xiàn)血人員檢測(10.0%)的不確定樣本占比較高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=26.24,P<0.05)。見表1。

表1 HIV抗體不確定樣本人群特征[n(%)]

2.2 不確定樣本篩查結(jié)果及隨訪情況 隨訪到的46例(占88.5%)HIV抗體不確定者,其RT試驗(yàn)陽性反應(yīng)39例,30例轉(zhuǎn)陽,陽轉(zhuǎn)率為90.9%;ELISA試驗(yàn)陽性反應(yīng)34例,26例轉(zhuǎn)陽,陽轉(zhuǎn)率為76.5%;RT和ELISA試驗(yàn)雙陽性27例,26例轉(zhuǎn)陽,陽轉(zhuǎn)率高達(dá)96.3%。RT和ELISA試驗(yàn)單陽性19例,陽轉(zhuǎn)4例,陽轉(zhuǎn)率為21.1%,其中7例ELISA(+)RT(-)的樣本,在3個月內(nèi)隨訪結(jié)果仍為不確定,且核酸試驗(yàn)陰性,結(jié)合流行病學(xué)史和臨床表現(xiàn)最終考慮陰性;12例ELISA(-)RT(+)的樣本經(jīng)隨訪最終轉(zhuǎn)陽4例,陽轉(zhuǎn)率33.3%,8例3個月內(nèi)隨訪結(jié)果仍為不確定。

按ELISA試驗(yàn)S/CO值,將隨訪到的46例分為3組,S/CO值>6組、1～6組的陽轉(zhuǎn)率較高,分別為78.6%(11/14)、75.0%(15/20),S/CO值<1組的陽轉(zhuǎn)率低,為33.3%(4/12),3組陽轉(zhuǎn)率差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=7.32,P<0.05)。

2.3 不確定樣本補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)檢測結(jié)果及隨訪情況 隨訪到的46例HIV抗體不確定者中共出現(xiàn)10種帶型。出現(xiàn)帶型最多的是單一的gp160條帶,占41.3%(19/46),4周后隨訪有8例轉(zhuǎn)陽,陽轉(zhuǎn)率為42.1%,且病毒載量均>5000cp/ml,有11例最終考慮陰性,其中1例特異性抗體條帶消失,其余10例在3個月內(nèi)隨訪檢測時條帶沒有發(fā)生變化,期間核酸定量試驗(yàn)低于檢測限,結(jié)合流行病學(xué)史和臨床表現(xiàn)最終考慮陰性。出現(xiàn)帶型gp160的6種組合,以gp160,p24雙帶型為主,gp160帶型陽轉(zhuǎn)率均為100%,僅出現(xiàn)p24帶型的3例樣本,經(jīng)隨訪均判為陰性結(jié)果。

HIV-1核酸定量檢測高于檢測限的30例樣本全部陽轉(zhuǎn),低于檢測限的16例樣本,有1例在第一次隨訪時特異性抗體條帶消失,其余在3個月內(nèi)隨訪檢測時條帶沒有發(fā)生變化,期間病毒載量均低于檢測限,結(jié)合流行病學(xué)史和臨床表現(xiàn)最終均考慮陰性。見表2。

表2 46份不確定樣本補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)檢測結(jié)果與轉(zhuǎn)歸情況

3 討論

本次研究,WB確證檢測848份,HIV抗體不確定者占6.1%,成功隨訪到46例,隨訪率為88.5%。從不確定樣本的人群特征來看,不確定率女性高于男性,來源于VCT檢測、孕產(chǎn)期檢測、無償獻(xiàn)血人員檢測的HIV抗體不確定占比較高。VCT檢測者高的原因,與檢測時多處在的感染時期有關(guān)[3],大部分VCT檢測者是在發(fā)生高危行為后及時主動來進(jìn)行咨詢檢測。無償獻(xiàn)血人員高的原因,與采供血機(jī)構(gòu)多采用第四代酶聯(lián)免疫試劑有關(guān),該試劑敏感性高,特異性弱,且為了保障用血安全而給試驗(yàn)結(jié)果設(shè)立“灰區(qū)”[4],這些都可能造成假陽性的結(jié)果。至于孕產(chǎn)期檢測人群較高的原因可能與生理指標(biāo)的改變,母體會產(chǎn)生與HIV蛋白結(jié)合的自身抗體,導(dǎo)致出現(xiàn)非特異性交叉反應(yīng),還有報道與甲胎蛋白水平和孕激素有關(guān),所以對孕產(chǎn)期出現(xiàn)的不確定的結(jié)果尤其需謹(jǐn)慎對待[5]。

不確定樣本隨訪到的46例,12例ELISA(-)RT(+)的樣本經(jīng)過隨訪檢測最終4例轉(zhuǎn)陽,如果按照《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范(2020年修訂版)》[6],這4例樣本應(yīng)發(fā)篩查陰性報告,但隨訪后轉(zhuǎn)陽,存在一定的風(fēng)險。本實(shí)驗(yàn)室作為確證實(shí)驗(yàn)室對轄區(qū)內(nèi)送檢的復(fù)核樣本一直采用ELISA和RT兩種試驗(yàn)相結(jié)合的方法,有一種方法陽性則進(jìn)行補(bǔ)充試驗(yàn)。在替代策略中可根據(jù)S/CO值的高低判斷陽性,本文中S/CO值>6的陽轉(zhuǎn)率最高,說明S/CO值的大小從側(cè)面可以預(yù)估轉(zhuǎn)陽或者陰性的概率,但是有一位患者S/CO值>6,4周后隨訪發(fā)現(xiàn)特異性抗體條帶消失,所以判斷仍需要謹(jǐn)慎并且及時隨訪。

本文不確定樣本的隨訪補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)采用抗體確證WB試驗(yàn)帶型與HIV-1核酸定量試驗(yàn)相結(jié)合的方法。HIV-1核酸定量試驗(yàn)在感染者臨床進(jìn)展情況的判定和療效觀察上具有極高的價值,對感染早期及特殊免疫性的個體檢測中也發(fā)揮重要作用[7]。本文研究中出現(xiàn)的不確定帶型總共有10種,對于僅出現(xiàn)p24帶型的3例樣本經(jīng)隨訪均判為陰性結(jié)果,提示非特異性反應(yīng)的可能性更大些,應(yīng)盡早排除HIV感染,減輕患者的心理負(fù)擔(dān)。本文中g(shù)p160的6種組合帶型,除了1例艾滋病晚期病人帶型為gp160和gp120,隨訪多次,條帶進(jìn)展不理想,但病毒載量>5000 cp/ml,抗病毒治療1年后確證條帶才達(dá)到了判定標(biāo)準(zhǔn),其余組合帶型4周后隨訪陽轉(zhuǎn)率均為100%。gp160組合帶型中以gp160,p24雙帶型為主,13例隨訪檢測均轉(zhuǎn)陽,其中12例病毒載量大于5000 cp/ml,1例VCT的病人病毒載量值為18.3～5000 cp/ml,咨詢了解到是有男男性行為的高危人群,發(fā)生高危行為不久,提示早期感染的可能性較大,這時需要進(jìn)行陽性方面的傾向咨詢并及時提供2～4周后的隨訪復(fù)檢,以減少二次傳播的風(fēng)險[8]。雖然本文中病毒載量結(jié)果與隨訪后判斷一致,但也有一些特殊情況,如服用抗病毒藥物者、處于窗口期、樣本質(zhì)量不合格或檢測試劑應(yīng)用不當(dāng)?shù)纫蛩?都會致使病毒載量值低于最低檢測限[ 9]。作為檢測人員僅提供準(zhǔn)確可靠的檢測結(jié)果,由醫(yī)生結(jié)合篩查試驗(yàn)與補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)結(jié)果做一個預(yù)判,同時應(yīng)結(jié)合T淋巴細(xì)胞檢測結(jié)果、病毒載量結(jié)果、流行病學(xué)史與臨床癥狀綜合進(jìn)行診斷。