王晨燕,周 峰,邵國青,3,侯 博*

(1.福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所/福建省畜禽疫病疾病防治工程技術(shù)研究中心,福州 350013; 2.佛山科學(xué)技術(shù)學(xué)院生命科學(xué)與工程學(xué)院,佛山 528231;3.江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院獸醫(yī)研究所,南京 210014)

滑液囊支原體(Mycoplasmasynoviae,MS)是一種禽主要呼吸道病的病原,雞群感染可引起氣囊炎和滑液囊炎。MS可在輸卵管中定植[1],產(chǎn)蛋雞感染MS還可引起產(chǎn)蛋率和蛋孵化率下降,給養(yǎng)禽業(yè)帶來了很大的困難。MS水平傳播的潛伏期為11～21 d[2],垂直傳播的潛伏期為6 d[3],雞群感染MS后可終身帶菌。自2010年開始,我國16個(gè)省份9 774個(gè)多日齡混養(yǎng)肉雞群中檢測(cè)出MS感染,MS在種雞胚胎中的陽性率高達(dá)16.29%[4]。Xue等[5]發(fā)現(xiàn),463個(gè)未免疫商品雞群的MS抗體陽性率為80.99%,Gole等[6]發(fā)現(xiàn)蛋雞雞胚中卵黃抗體的MS陽性率為69%。2009年有報(bào)道證實(shí),蛋殼頂端異常(eggshell abonormalities,EAA)與MS感染有關(guān)[7],雞感染從輸卵管中分離的MS后更易出現(xiàn)EAA現(xiàn)象[1]。

目前,臨床可使用MS活疫苗MS-H株或MS滅活疫苗用于預(yù)防感染。活疫苗的使用不僅可以顯著降低MS的水平傳播速率[8],還可減少氣囊損傷和降低EAA蛋的數(shù)量[9],然而MS活疫苗的使用要求為必須免疫陰性雞群,且不論是活疫苗還是滅活疫苗都不能完全阻止MS野毒菌株在氣管中的定植[8,10-11]。此外,雞群感染MS后至少需要3周才能從血清中檢測(cè)到MS抗體[12],抗體產(chǎn)生時(shí)雞群可能已經(jīng)大范圍感染MS,臨床檢測(cè)已發(fā)現(xiàn)肉雞5周內(nèi)和蛋雞4周內(nèi)存在MS早期感染[4,13-14],這些都給疫苗使用造成嚴(yán)重的困擾。

對(duì)于已經(jīng)感染MS的雞群臨床主要采用藥物來控制感染。體外研究表明,MS對(duì)部分抗生素敏感[15],其中包括泰萬菌素、泰樂菌素、泰妙菌素、替米考星、林可/大觀霉素等,抗生素治療雖很難徹底根除MS感染[16],卻可以有效減少氣囊炎的發(fā)病率。有報(bào)道通過多輪交替抗生素治療可徹底根除MS感染,但花費(fèi)巨大[17],因而如何正確合理使用抗生素成為MS感染治療的一大難題。考慮到食品安全問題和按國家法律法規(guī)規(guī)定,蛋雞在產(chǎn)蛋期禁止使用抗生素,臨床中迫切需要一種可以長(zhǎng)期添加且能夠預(yù)防和治療MS的藥物。血根堿、白屈菜紅堿、原阿片堿和別隱品堿作為博落回的主要活性成分,已開發(fā)注冊(cè)為二類新中獸藥((2011)新獸藥證字34號(hào)和(2019)新獸藥證字62號(hào)),并被國家農(nóng)業(yè)農(nóng)村部批準(zhǔn)可長(zhǎng)期在飼料中添加使用,成為飼料添加劑抗生素替代產(chǎn)品之一[18]。有研究報(bào)道在雪峰烏骨雞飼料中添加博落回可顯著增加蛋殼的強(qiáng)度和厚度,極顯著增加血清中谷胱甘肽濃度,并顯著提高黃體酮、促卵泡激素、雌二醇等激素水平[19]。博落回中有效成分血根堿具有抗炎作用[20],可抑制炎癥反應(yīng)的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子NF-κB的激活[21],同時(shí)還顯示出對(duì)白色念珠菌較強(qiáng)的抗菌作用[22]。此外,血根堿與氨基糖苷類抗生素共同使用具有協(xié)同效應(yīng),可顯著提高細(xì)胞內(nèi)活性氧(reactive oxygen species,ROS)和DNA氧化水平,消除細(xì)菌的生物被膜[23]。

本試驗(yàn)通過臨床癥狀觀察,上顎裂拭子、輸卵管膨大部和子宮部拭子的MS病原檢測(cè),血清的MS抗體檢測(cè),蛋雞產(chǎn)蛋數(shù)量和蛋品質(zhì)以及病理切片等研究分析博落回提取物和抗生素聯(lián)合用藥對(duì)蛋種雞滑液囊支原體自然感染病例的治療效果,為臨床MS自然感染提供新的治療思路和效果評(píng)估參考。

1 材料與方法

1.1 蛋種雞及藥物來源

80只117日齡、體重相近的海蘭褐父母代蛋種雞和全價(jià)日糧購自國內(nèi)某種雞公司,其雞群在65日齡通過上顎裂拭子采樣檢測(cè)發(fā)現(xiàn)MS病原陽性率為52%。

鹽酸多西環(huán)素、林可-大觀霉素、酒石酸泰樂菌素、酒石酸泰萬菌素、磷酸替米考星和延胡索酸泰妙菌素均購自國內(nèi)或進(jìn)口品牌,博落回散(規(guī)格:100 g:3.75 g)和博普總堿散(規(guī)格:含原阿片堿和別隱品堿的總量不得少于1.5%,其中原阿片堿不得少于1.0%)均由湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)曾建國教授饋贈(zèng)。

1.2 試驗(yàn)試劑

MS抗體檢測(cè)試劑盒購自BioChek公司;細(xì)菌DNA提取試劑盒購自天根生化科技(北京)有限公司;pClone007質(zhì)粒、TreliefTM5α感受態(tài)細(xì)胞、2×T5 Fast qPCR Mix(Probe)均購自北京擎科生物科技有限公司;質(zhì)粒提取試劑盒購自QIAGEN公司;引物和探針由北京擎科生物科技有限公司合成。

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)及采樣

蛋種雞預(yù)飼養(yǎng)7 d后,采用兩次隨機(jī)數(shù)法將80只雞隨機(jī)分為8個(gè)組,每組10只,其中G2組為未處理的對(duì)照組,繼續(xù)正常飼喂,其余各組為用藥組,具體用藥情況見表1。各組雞只開產(chǎn)后每天記錄產(chǎn)蛋數(shù),并且對(duì)開產(chǎn)后第4、5和6周的雞蛋進(jìn)行蛋品質(zhì)測(cè)定。

各組分別在用藥前(124日齡)以及用藥后第17天(140日齡)、第24天(147日齡)、第38天(161日齡)和第59天(182日齡)采集所有雞的上顎裂拭子;在用藥前和用藥后第17天(140日齡)、第31天(154日齡)和第59天(182日齡)對(duì)所有雞只翅下靜脈采血;用藥后第59天(182日齡)處死所有雞后,剖檢觀察并記錄氣囊炎、輸卵管炎以及腳墊腫脹的發(fā)病情況,并用植絨拭子在輸卵管的膨大部和子宮部反復(fù)擦拭3次采集拭子樣本,同時(shí)采集氣管、輸卵管膨大部和子宮部于10%中性福爾馬林中固定。

表1 MS感染用藥方法Table 1 The treatment therapies of MS infection

1.4 上顎裂、輸卵管膨大部和子宮部拭子MS病原檢測(cè)

將采集的上顎裂、輸卵管膨大部和子宮部的拭子置于含有1 mL PBS的離心管中,混勻成懸液,參照中華人民共和國行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《禽支原體PCR檢測(cè)技術(shù)》[24](NY/T 553—2015)的樣品處理方式,將懸液2 000 r·min-1,離心5 min;取上清液1 mL置于1.5 mL離心管中,12 000 r·min-1,4 ℃離心30 min,仔細(xì)吸取所有上清液棄去,將沉淀采用細(xì)菌DNA提取試劑盒提取基因組DNA,-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

MS熒光檢測(cè)方法參照已發(fā)表的文獻(xiàn)[13]進(jìn)行檢測(cè),并利用上述引物,以MS FZ株的基因組DNA為模板,將PCR擴(kuò)增物克隆至pClone007質(zhì)粒中,并轉(zhuǎn)化至感受態(tài)細(xì)胞。根據(jù)PCR方法擴(kuò)增選擇陽性克隆子,并進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng),使用QIAGEN質(zhì)粒提取試劑盒從50 mL菌液中提取質(zhì)粒,使用NanoDrop 2000分光光度計(jì)對(duì)獲得DNA質(zhì)粒進(jìn)行濃度測(cè)定和分析。將上述測(cè)定濃度的質(zhì)粒溶液用無核酸酶的水稀釋至108拷貝數(shù)每4 μL,分裝為50 μL·管-1,并對(duì)質(zhì)粒DNA進(jìn)行10倍連續(xù)稀釋(107～102),通過Cq值與以10為底取對(duì)數(shù)(lg)的比值生成標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定待測(cè)樣品的載量。同時(shí)設(shè)置陰性和陽性提取對(duì)照品同時(shí)提取核酸進(jìn)行檢測(cè),該檢測(cè)方法的最低檢測(cè)限為100拷貝數(shù)·反應(yīng)-1。

1.5 MS血清抗體檢測(cè)

將采集的血液按常規(guī)方法分離血清后,采用Biochek MS抗體檢測(cè)試劑盒,按照說明書對(duì)血清樣品進(jìn)行檢測(cè),當(dāng)S/P值≥0.500(抗體滴度≥594),判為MS抗體陽性,否則判為MS抗體陰性。

1.6 產(chǎn)蛋數(shù)量與蛋品質(zhì)測(cè)定

開產(chǎn)后直至試驗(yàn)結(jié)束,記錄開產(chǎn)后第1周至第6周每天的產(chǎn)蛋數(shù),計(jì)算各組周日均產(chǎn)蛋數(shù)。

取開產(chǎn)后第4周(162～168日齡)、第5周(169～175日齡)和第6周(176～182日齡)各組所產(chǎn)雞蛋全部用于檢測(cè)蛋品質(zhì),包括蛋重、蛋白高度、哈氏單位、蛋形指數(shù)、蛋殼強(qiáng)度和蛋殼厚度,當(dāng)天檢測(cè)完畢。采用美國ORKA蛋品質(zhì)分析儀(EA-01)測(cè)定蛋白高度,重復(fù)測(cè)定2次,并計(jì)算哈氏單位;利用游標(biāo)卡尺測(cè)定雞蛋縱徑和橫徑,計(jì)算蛋形指數(shù);采用北京天翔科技有限公司TENOVO蛋殼強(qiáng)度測(cè)定儀(KQ-1A)測(cè)定蛋殼強(qiáng)度;使用千分尺測(cè)定蛋殼厚度(鈍端、中端和尖端);利用電子天平稱量蛋重和蛋殼重,其中根據(jù)海蘭褐2021年新版飼養(yǎng)管理手冊(cè)中歐洲標(biāo)準(zhǔn)按蛋重(n)范圍分別計(jì)算小蛋占比率(43 g

1.7 病理切片

將固定的氣管、輸卵管膨大部和子宮部經(jīng)酒精脫水、透明、浸蠟、包埋、切片、常規(guī)蘇木精-伊紅染色法(Hematoxylin-Eosin staining,HE)染色,脫水、透明和封固后,在光鏡下觀察病理損傷情況。

1.8 統(tǒng)計(jì)分析

使用GraphPad Prism 5軟件對(duì)上顎裂拭子載量、血清抗體滴度和蛋品質(zhì)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析,當(dāng)P<0.001時(shí),表示差異極顯著;當(dāng)P<0.01時(shí),表示差異顯著。

2 結(jié) 果

2.1 上顎裂拭子MS載量

與用藥前相比,用藥后第17天G4、G6、G7和G8的上顎裂拭子MS病原陽性率下降,最低為G4組(20%),其中G4組相較于G2組上顎裂拭子MS載量極顯著下降(P<0.001),G6和G7組相較于G2組上顎裂拭子MS載量顯著下降(P<0.01);用藥后第24天,G4、G6和G7上顎裂拭子MS病原陽性率開始上升,G1和G8組陽性率分別下降為90%和70%,其中G4組相較于G2組上顎裂拭子MS載量顯著下降(P<0.01);用藥后第38天,G1、G5和G8組的上顎裂拭子MS病原陽性率開始上升。G3組上顎裂拭子MS病原陽性率用藥后無變化。結(jié)果表明:單獨(dú)使用博落回提取物或博落回提取物聯(lián)合抗生素可在一段時(shí)間內(nèi)降低自然感染MS的雞群上顎裂拭子載量和病原陽性率,具體結(jié)果見表2。

表2 上顎裂拭子MS陽性率及載量Table 2 MS positive rates and loads of cleft palate swabs

2.2 血清MS抗體檢測(cè)

各組血清在用藥前的MS抗體平均滴度均高于12 000,各組間無顯著差異(P>0.05),且各組在用藥前以及用藥后第17天、第31天和第59天的MS抗體平均滴度均不存在顯著差異(P>0.05)。用藥后第59天,G1和G4組的MS抗體平均滴度相較于用藥前下降約60%,其中G4組有1只雞的血清抗體檢測(cè)為陰性。結(jié)果表明:雞群自然感染MS采用博落回提取物或博落回提取物聯(lián)合抗生素治療可在一段時(shí)間內(nèi)降低MS抗體滴度(圖1)。

圖1 用藥前、后血清MS抗體平均滴度結(jié)果Fig.1 The result of average titer of MS antibody from serum before and after treatment

2.3 剖檢癥狀

用藥后第59天,剖檢觀察發(fā)現(xiàn)G1、G3、G4、G6和G7組沒有肉眼可見的輸卵管病變(圖2C),G2組觀察到1只雞右側(cè)輸卵管囊腫(圖2A);G5和G8組各有1只雞右側(cè)卵泡發(fā)育不全,輸卵管長(zhǎng)度變短(圖2B)。G2和G6組分別觀察到1只雞有氣囊炎,其中G2組腹氣囊增厚,G6組除腹氣囊增厚外,胸骨還出現(xiàn)明顯囊腫,其余各組雞只均未觀察到有氣囊炎。此外,各組均未觀察到腳墊腫脹(表3)。

表3 輸卵管炎、氣囊炎和腳墊腫脹發(fā)病率Table 3 The morbidities of salpingitis, air sacculitis and swelling of foot pad

2.4 輸卵管膨大部和子宮部拭子MS病原檢測(cè)

用藥后第59天,各組的輸卵管子宮部拭子均未檢測(cè)到MS病原,G2、G4、G5、G7和G8組的輸卵管膨大部拭子檢測(cè)到MS病原,陽性率最高為G2組和G8組(20%),G4、G5和G7組均為10%,其他組均未檢測(cè)到。結(jié)果表明可從輸卵管膨大部中檢測(cè)到MS病原(表4),這或許是造成MS垂直傳播的原因。

2.5 病理變化

各組氣管黏膜固有層均可見不同程度的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)(圖3A),輸卵管的膨大部和子宮部的組織結(jié)構(gòu)正常(圖3B、3C),未見變性、壞死等病理變化,結(jié)果表明MS感染沒有對(duì)輸卵管造成明顯病理損傷,各組氣管表現(xiàn)明顯病理損傷。

表4 輸卵管膨大部和子宮部拭子MS病原陽性率Table 4 The positive rates of MS antigens in the swabs of magnum and uterus of oviduct

A. 氣管,箭頭指示有炎細(xì)胞浸潤(rùn);B.輸卵管膨大部;C. 輸卵管子宮部A. Trachea, arrow indicated inflammatory cellular infiltration; B. Magnum of oviduct; C. Uterus of oviduct圖3 氣管、輸卵管膨大部和子宮部的組織病理學(xué)損傷Fig.3 Histopathologic lesions in trachea and the magnum and uterus of oviduct

2.6 周日均產(chǎn)蛋數(shù)

各組周日均產(chǎn)蛋數(shù)均隨開產(chǎn)周齡增加而增加,增加幅度有所差異。開產(chǎn)后第1周,G2組每周日均產(chǎn)蛋數(shù)相較于其他處理組最少,僅為2枚。開產(chǎn)后第4周,各組周日均產(chǎn)蛋率均超過50%。開產(chǎn)后第6周,G1、G3、G4和G6組的周日均產(chǎn)蛋數(shù)已增至8枚以上,最高為G6組9枚;G2和G7組均為7.5枚;G5和G8組最少,分別為6.6和6.5枚。結(jié)果表明G1、G3、G4和G6組用藥后相較于G2組周日均產(chǎn)蛋數(shù)隨開產(chǎn)周齡增加而明顯增加,開產(chǎn)后具體產(chǎn)蛋數(shù)量見表5。

表5 開產(chǎn)后各組周日均產(chǎn)蛋數(shù)Table 5 Average daily egg production per week for each group after delivery 枚

2.7 蛋品質(zhì)測(cè)定

產(chǎn)蛋后第4 周,G8組的平均蛋重顯著低于G2組(P<0.01),其余各組產(chǎn)蛋后第4、5和6周蛋品質(zhì)均無明顯差異,具體結(jié)果見表6、7和8。

各組的中蛋相對(duì)豐度占比隨產(chǎn)蛋周齡增加而增加,產(chǎn)蛋后6周內(nèi)沒有任何一組出現(xiàn)大蛋。產(chǎn)蛋后第4周,G4和G6組的中蛋占比最高,但不超過30%;產(chǎn)蛋后第5周,G2、G4、G5和G6組的中蛋占比最高,約50%;產(chǎn)蛋后第6周,G4組的中蛋占比最高為60%。G1、G7和G8組在產(chǎn)蛋后第4、5和6周,中蛋占比均沒有超過50%(圖4)。

表6 產(chǎn)蛋后第4周的蛋品質(zhì)測(cè)定Table 6 The egg quality at 4th week after laying

表7 產(chǎn)蛋后第5周的蛋品質(zhì)測(cè)定Table 7 The egg quality at 5th week after laying

表8 產(chǎn)蛋后第6周的蛋品質(zhì)測(cè)定Table 8 The egg quality at 6th week after laying

圖4 產(chǎn)蛋后第4(A)、5(B)和6周(C)的不同蛋重相對(duì)豐度占比Fig.4 The proportion of relative abundance of different egg weights at 4th (A), 5th (B) and 6th (C) week after laying

3 討 論

自2010年開始,國內(nèi)雞群陸續(xù)開始出現(xiàn)MS感染情況,臨床主要表現(xiàn)為呼吸道癥狀和關(guān)節(jié)炎[25]。前期通過對(duì)2018～2020年福建省內(nèi)未免疫雞群感染調(diào)查發(fā)現(xiàn),MS病原和抗體陽性率隨日齡增加而增加[13]。有研究表明,多日齡混養(yǎng)較全進(jìn)全出雞群飼養(yǎng)更易出現(xiàn)MS感染[26]。本試驗(yàn)動(dòng)物為商品化的蛋種雞群,來源于多日齡混養(yǎng)的雞場(chǎng),雞群65日齡通過上顎裂拭子檢測(cè)發(fā)現(xiàn)MS病原陽性率為52%,用藥前MS感染率至少80%,并且具有較高水平的MS載量,MS抗體陽性率全群為100%,抗體滴度均超過12 000,屬于MS自然感染較長(zhǎng)時(shí)間且較為嚴(yán)重的蛋種雞群。用藥后第59天,G2組即無處理組通過剖檢觀察存在10%輸卵管炎和10%氣囊炎,但未發(fā)現(xiàn)有腳墊腫脹,表明上顎裂拭子檢測(cè)出陽性并未100%表現(xiàn)出明顯的臨床癥狀,提示臨床未表現(xiàn)出氣囊炎或輸卵管炎的雞也可能存在MS感染。用藥后第59天輸卵管子宮部拭子均未檢測(cè)出MS,G2組在輸卵管膨大部拭子中檢測(cè)出20%陽性率,提示臨床可以在輸卵管膨大部采集拭子進(jìn)行MS病原檢測(cè),病理結(jié)果表明MS感染未造成對(duì)輸卵管膨大部和子宮部的病理損傷,結(jié)果與其他報(bào)道一致[1],提示輸卵管膨大部的MS病原存在可能是造成MS垂直傳播的原因。部分雞雖未表現(xiàn)出臨床癥狀,但MS感染可造成氣管出現(xiàn)明顯病理損傷,增加了其他病原的易感性,臨床應(yīng)重視MS感染對(duì)雞群的危害。此外,MS具有較強(qiáng)的水平傳播能力,有研究報(bào)道MS菌株可在氣管中檢測(cè)到,但不是所有MS菌株都能在輸卵管中定植[1],不同MS菌株具有不同組織嗜性,本研究根據(jù)拭子病原檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn),G2組出現(xiàn)輸卵管炎、氣囊炎及膨大部檢測(cè)為陽性的雞并不是來源于同一只雞,然而上顎裂拭子檢測(cè)均為陽性,推測(cè)該試驗(yàn)雞群有可能感染了具有呼吸道或生殖道不同組織嗜性的MS菌株。

采用最低抑制濃度(minimum inhibitory concentration,MIC)分析發(fā)現(xiàn),MS國內(nèi)分離株對(duì)大環(huán)內(nèi)酯類抗生素和林可/大觀霉素較為敏感[27],Morrow等[15]同樣發(fā)現(xiàn),MS亞洲分離株對(duì)泰樂菌素、泰妙菌素和四環(huán)素類抗生素較為敏感,對(duì)替米考星的耐藥性增加,MS體外連續(xù)傳代10代可獲得對(duì)紅霉素和泰樂菌素的高水平耐藥性[28]。中獸藥博落回含有血根堿和白屈菜紅堿等有效生物堿成分,體外試驗(yàn)表明這兩種生物堿可對(duì)耐甲氧西林和多重耐藥的金黃色葡萄球菌具有一定的生長(zhǎng)抑制作用[29],博落回可長(zhǎng)期在飼料中添加且沒有休藥期,更適合產(chǎn)蛋雞使用。本試驗(yàn)選取臨床常用以及對(duì)MS較為敏感的抗生素,并首次將博落回提取物和抗生素聯(lián)合使用,開展動(dòng)物體內(nèi)試驗(yàn)分析藥物對(duì)蛋雞群MS自然感染的治療效果。通過對(duì)上顎裂拭子的病原檢測(cè)發(fā)現(xiàn),抗生素聯(lián)合博落回提取物可顯著降低MS載量,該結(jié)果同單獨(dú)使用抗生素效果一致[30],然而用藥后第38和59天上顎裂拭子的MS載量開始恢復(fù)用藥前的感染水平。有研究表明MS可黏附并侵入宿主細(xì)胞,這可能是抗生素治療很難根除MS感染的原因[16]。Stanley 等[31]通過血凝抑制(hemagglutination inhibition,HI)試驗(yàn)檢測(cè)發(fā)現(xiàn),MG的HI抗體降低約40%左右,表明采用恩諾沙星治療雞毒支原體(Mycoplasmagalliscepticum,MG)感染有效。本研究通過血清抗體檢測(cè)發(fā)現(xiàn),G1組和G4組用藥后第59天的抗體滴度較用藥前下降60%左右,令人意外的是,G4組有1只雞抗體轉(zhuǎn)為陰性,同時(shí),G4和G6組有1或2只雞用藥前上顎裂拭子檢測(cè)MS為陽性雞轉(zhuǎn)為陰性,表明聯(lián)合使用博落回提取物和抗生素對(duì)治療MS感染有效,因此在臨床生產(chǎn)實(shí)踐中用藥后應(yīng)定期監(jiān)測(cè)至少6周的血清MS抗體水平和至少4周的上顎裂拭子MS病原陽性率,考慮以抗體滴度和病原陽性率下降對(duì)用藥效果進(jìn)行分析。

有證據(jù)表明蛋雞感染MS可引起產(chǎn)蛋量下降[1,32],短時(shí)間抗生素使用如泰樂菌素可暫時(shí)提高產(chǎn)蛋量[33],本研究蛋雞群在藥物使用后第17天開產(chǎn),各組雞只的產(chǎn)蛋量都隨著產(chǎn)蛋周齡增加而增加,其中G1、G3、G4和G6組通過藥物治療在開產(chǎn)后的周日均產(chǎn)蛋量都較G2組高,用藥組與無處理組的周日均產(chǎn)蛋量不存在顯著差異,藥物治療對(duì)于產(chǎn)蛋量的影響仍然需要大規(guī)模的飼養(yǎng)試驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證。MS感染還可出現(xiàn)EAA蛋[33],用掃描電子顯微鏡檢查可見蛋殼鈣化區(qū)的乳頭層缺失以及內(nèi)蛋殼膜增厚,對(duì)蛋品質(zhì)有影響,特別表現(xiàn)在蛋殼強(qiáng)度和蛋殼厚度[7],有報(bào)道產(chǎn)蛋后第55周開始在雞蛋中觀察EAA現(xiàn)象,蛋破損率增加[34],此外,雞群感染MS不一定能出現(xiàn)EAA現(xiàn)象,但是從輸卵管中分離得到的MS重新感染雞后更易出現(xiàn)EAA現(xiàn)象,一旦有傳染性支氣管炎病毒(infectious bronchitis virus,IBV)感染,EAA現(xiàn)象加重[7]。本研究中試驗(yàn)雞未達(dá)到產(chǎn)蛋高峰,尚未觀察到EAA蛋現(xiàn)象,這可能與飼養(yǎng)周期較短或感染的菌株不同而有關(guān),或許也與未有其他致病因素協(xié)同相關(guān)。盡管各組蛋重差異不顯著(除第4 周的G2和G8組),但通過對(duì)不同蛋重相對(duì)豐度占比進(jìn)行統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)各組存在差異,G4組的中蛋比率相較于其他組更高(60%),推測(cè)MS感染可能出現(xiàn)蛋重或蛋大小參差不齊,但不排除是否有其他病原影響,需要在生產(chǎn)實(shí)踐中引起重視。

4 結(jié) 論

綜上所述,MS感染可在輸卵管膨大部中定植,但并未造成病理損傷,單獨(dú)使用博落回提取物或者抗生素和博落回提取物聯(lián)合使用可降低上顎裂拭子MS病原載量和陽性率,以及血清中MS抗體滴度,同時(shí)產(chǎn)蛋前期周日均產(chǎn)蛋數(shù)明顯增加,抗生素和博落回提取物聯(lián)合使用還可提高中蛋的相對(duì)豐度。因此,生產(chǎn)實(shí)踐中在產(chǎn)蛋前合理單獨(dú)使用博落回提取物或者博落回提取物和抗生素聯(lián)合使用,產(chǎn)蛋期持續(xù)使用博落回提取物可改善MS感染對(duì)蛋種雞產(chǎn)蛋前期生產(chǎn)性能的影響。