陳德力，馬國(guó)需，2，劉會(huì)梅，王燦紅，劉洋洋，楊云*，魏建和，2*

1.中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 藥用植物研究所 海南分所/海南省南藥資源保護(hù)與開發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，海南 ?？?570311；

2.中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 藥用植物研究所，北京 100193

沉香為 瑞香科（Thymelaeaceae）沉 香屬（Aquilariaspp.）和擬沉香屬（Gyrinopsspp.）植物含樹脂的木材，作為名貴中藥材和傳統(tǒng)天然香料，在醫(yī)藥、日化、工藝品、宗教文化等領(lǐng)域廣泛應(yīng)用[1-3]。沉香作為藥材，始載于漢魏時(shí)期陶弘景的《名醫(yī)別錄》，列為上品[4]?！吨腥A人民共和國(guó)藥典》2020 年版中規(guī)定的沉香基原植物為白木香Aquilaria sinensis（Lour.）Gilg，主產(chǎn)于海南、廣東、廣西、云南和臺(tái)灣等地，其味辛、苦，性微溫，具有行氣止痛、溫中止嘔、納氣平喘的功效，用于治療胸腹脹悶疼痛、胃寒嘔吐呃逆、腎虛氣逆喘急等病證[5]。近年來，廣東和海南等地大量種植的奇楠種質(zhì)是采用嫁接普通白木香的方式繁育、通過鉆孔法生產(chǎn)的沉香，因其獨(dú)特的氣味和性狀可與普通沉香相區(qū)分，且與記載的奇楠沉香相似，現(xiàn)已開始批量上市銷售，其物種仍為白木香，是一種新的化學(xué)型[6-7]。

對(duì)普通沉香化學(xué)成分和藥理作用已有大量研究，其主要化學(xué)成分為倍半萜和色酮類化合物，具有抗菌、抗炎、抗腫瘤和抗焦慮等藥理活性[8-12]。奇楠沉香化學(xué)成分的研究報(bào)道較少，僅見從其乙醚提取物中分離鑒定出少量的2-(2-苯乙基)色酮類和倍半萜類化合物[13-19]。超臨界CO2提取工藝環(huán)保高效，已被廣泛應(yīng)用于奇楠沉香揮發(fā)性成分的提取，但其提取物的化學(xué)成分研究尚未見報(bào)道。為了解奇楠沉香超臨界提取物的化學(xué)成分，本研究利用硅膠柱色譜、薄層色譜及半制備高效液相色譜對(duì)其超臨界提取物的化學(xué)成分進(jìn)行了分離純化，采用譜學(xué)技術(shù)手段鑒定17 了個(gè)化合物（圖1），包括倍半萜12 個(gè)、色酮類4個(gè)及其他類化合物1 個(gè)，分別為12,15-二酮基-α-芹子烯（12,15-dioxo-α-selinen，1）、15-酮基-桉葉烷-4,11(13)-二烯-12-甲酯[methyl-15-oxo-eudesmane-4,11(13)-dien-12-oate，2]、petafolia A（3）、12-羥基-4(5),11(13)-桉葉二烯-15-醛[12-hydroxy-4(5),11(13)-eudesmadien-15-al，4]、12,15-二酮基-芹子-4,11-二烯（12,15-dioxo-selina-4,11-dine，5）、(7S,8R,10S)-(+)-8,12-二羥基-芹子-4,11-二烯-14-醛[(7S,8R,10S)-(+)-8,12-dihydroxy-selina-4,11-dien-14-al，6]、白 木香酸（7）、1α-羥基-7βH-荒漠木-9,11-二烯-8-酮（1αhydroxy-7βH-eremophil-9,11-dien-8-one，8）、7α-H-9(10)-烯-11,12-環(huán)氧-8-氧代荒漠木烷 [7α-H-9(10)-ene-11,12-epoxy-8-oxoeremophilane，9]、petafolia B（10）、11-羥基-瓦倫-1(10)-烯-2-酮[11-hydroxy-valenc-1(10)-en-2-one，11]、白木香醇（baimuxinol，12）、2-(2-苯乙基)色酮（13）、奇楠沉香酮A（qinanone A，14）、4'-甲氧基-2-(2-苯乙基)色酮（15）、6-甲氧基-2-[2-(4'-甲氧基苯乙基)色酮（16）和丁香醛（17），其中化合物1～7 為桉烷型倍半萜、化合物8～11 為艾里莫芬烷型倍半萜、化合物12 為沉香螺烷型倍半萜、化合物13～16 為色酮類化合物。同時(shí)，體外評(píng)價(jià)化合物對(duì)皮質(zhì)酮（CORT）誘導(dǎo)的PC12 細(xì)胞損傷的保護(hù)作用，發(fā)現(xiàn)化合物2、4 和5 具有顯著保護(hù)皮質(zhì)酮誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞損傷的活性。

圖1 奇楠沉香超臨界提取物中分離鑒定的化合物1～17的化學(xué)結(jié)構(gòu)

1 材料

1.1 試藥

奇楠沉香CO2超臨界提取物（100.0 g）由瑜豐沉香匯（廣東）科技有限公司提供（批號(hào)：QN2021042205）；水（杭州娃哈哈集團(tuán)有限公司）；常規(guī)分析純（AR）試劑石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇等均購(gòu)于廣州化學(xué)試劑廠。

1.2 儀器與耗材

Avance Ⅲ 600 型核磁共振波譜儀（德國(guó)布魯克公司）；Xevo G2-XS Qtof 型高分辨質(zhì)譜儀（美國(guó)沃特世公司）；Nicolet iS5 FT-IR 型傅里葉紅外光譜儀（美國(guó)賽默飛公司）；Photophysics Chirascan 型圓二色譜儀（英國(guó)應(yīng)用光物理公司）；MCP200 型自動(dòng)旋光儀（德國(guó)安東帕公司）；BS110S 型分析天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）；P230 型高效液相色譜儀、DAD230+二極管陣列檢測(cè)器（大連依利特分析儀器有限公司）；SB-Phenyl 色譜柱（250 mm×9.4 mm，5 μm，安捷倫公司）；柱色譜用硅膠（100～200 目），薄層色譜用硅膠G、H、GF254均購(gòu)于青島海洋化工有限公司。

2 提取與分離

奇楠沉香CO2超臨界提取物100.0 g 經(jīng)硅膠柱色譜分離，使用石油醚-乙酸乙酯溶劑系統(tǒng)進(jìn)行梯度系統(tǒng)洗脫（40∶1、30∶1、20∶1、15∶1、10∶1、8∶1、6∶1、3∶1、1∶1、0∶1），得Fr.A～Fr.J。Fr.A 經(jīng)硅膠柱色譜分離，以石油醚-乙酸乙酯（100∶1、80∶1、60∶1、40∶1、20∶1、1∶1）梯度洗脫得Fr.A1～Fr.A6，其中Fr.A5 經(jīng)半制備液相色譜分離，以65%甲醇等度洗脫得化合物7（1.5 mg，tR=21.3 min）。Fr.B經(jīng)半制備液相色譜分離純化，乙腈-水（55∶45）等度洗脫，得到化合物1（20.3 mg，tR=25.3 min）和混合物Fr.B2；Fr.B2以乙腈-水（60∶40）等度洗脫，得到化合物2（2.6 mg，tR=38.5 min）。Fr.C 經(jīng)半制備液相色譜分離，以60%甲醇等度洗脫得到混合物Fr.C-1，進(jìn)一步使用45%甲醇等度洗脫得到化合物9（1.6 mg，tR=45.0 min）。

Fr.D 部位經(jīng)硅膠柱色譜，以石油醚-乙酸乙酯（100∶1、50∶1、10∶1、8∶1、4∶1、2∶1、1∶1、0∶1）梯度洗脫，得Fr.D1～Fr.D8。Fr.D1經(jīng)半制備液相色譜分離，以60%甲醇等度洗脫得到化合物13（5.8 mg，tR=55.9 min）。Fr.D2 經(jīng)半制備液相色譜，以60%甲醇等度洗脫得到化合物5（22.9 mg，tR=45.3 min）和13（449.0 mg，tR=55.0 min）。Fr.D4經(jīng)半制備液相色譜分離，以60%甲醇等度洗脫得到化合物15（95.7 mg，tR=57.3 min）。Fr.D5 經(jīng)半制備液相色譜分離，以70%甲醇等度洗脫得到混合物Fr.D5-1、化合物15（930.6 mg，tR=27.3 min）和化合物16（6.9 mg，tR=34.8 min）。Fr.D5-1 經(jīng)55%甲醇等度洗脫得到化合物3（17.8 mg，tR=48.4 min）和8（3.3 mg，tR=32.1 min）。Fr.D7 經(jīng)半制備液相色譜分離，以55%甲醇等度洗脫得到化合物12（13.3 mg，tR=38.5 min）。Fr.E經(jīng)半制備液相色譜分離，以60%甲醇等度洗脫得到化合物4（1.9 mg，tR=11.5 min）。Fr.F經(jīng)重結(jié)晶，得到Fr.FA 和Fr.FB。Fr.FA 經(jīng)半制備液相色譜分離，以60%甲醇等度洗脫，得化合物17（1.5 mg，tR=9.0 min）和混合物Fr.F-1?；旌衔颋r.F-1 經(jīng)45%甲醇等度洗脫，得到化合物11（6.4 mg，tR=38.6 min）。Fr.FB 經(jīng)半制備液相色譜分離，以60%甲醇等度洗脫得到化合物10（2.9 mg，tR=30.0 min）和11（3.9 mg，tR=33.2 min）。Fr.G 經(jīng)半制備液相色譜分離，以70%甲醇等度洗脫，得化合物14（8.06 mg，tR=17.3 min）。Fr.I 經(jīng)半制備液相色譜分離，以60%甲醇等度洗脫，得到混合物Fr.I-1，進(jìn)一步使用50%甲醇等度洗脫，得到化合物6（8.1 mg，tR=28.4 min）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：無色油狀物，分子式為C15H20O2，電噴霧離子源-質(zhì)譜法（ESI-MS）m/z: 233.2 [M+H]+。1H-NMR (600 MHz,CDCl3)δ: 9.51 (1H,s,12-CHO),6.27 (1H,s,H-13),5.97 (1H,s,H-13),0.84 (3H,s,H-14),9.40 (1H,s,15-CHO)；13C-NMR (150 MHz,CDCl3)δ: 39.7 (C-1),16.0 (C-2),142.2 (C-3),153.8(C-4),32.3 (C-5),27.2 (C-6),37.1 (C-7),27.2 (C-8),43.6 (C-9),36.6 (C-10),154.9 (C-11),133.8 (C-12),195.3 (C-13),26.6 (C-14),195.0 (C-15)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[20]，故鑒定化合物1 為12,15-二酮基-α-芹子烯。

化合物2：淡黃色油狀物，分子式為C16H22O3，ESI-MSm/z: 263.2 [M+H]+。1H-NMR (600 MHz,CDCl3)δ: 6.25 (1H,s,H-13α),5.63 (1H,s,H-13β),1.21 (3H,s,H-14),10.17 (1H,s,15-CHO),3.77 (3H,s,12-OCH3);13C-NMR (150 MHz,CDCl3)δ: 39.5 (C-1),18.0 (C-2),24.0 (C-3),133.2 (C-4),163.5 (C-5),30.0 (C-6),41.6 (C-7),27.4 (C-8),41.5 (C-9),36.8(C-10),144.4 (C-11),167.5 (C-12),123.8 (C-13),25.4 (C-14),191.1 (C-15),52.1 (12-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[21-22]，故鑒定化合物2 為15-酮基-桉葉烷-4,11(13)-二烯-12-甲酯。

化合物3：無色油狀物，分子式為C15H24O2，ESI-MSm/z: 237.2 [M+H]+。1H-NMR (600 MHz,CDCl3)δ: 5.31 (1H,t,J=1.8 Hz,H-3),2.00 (1H,m,H-5),2.05 (1H,m,H-7),3.90 (1H,m,H-8),4.10 (2H,m,H-12),5.22 (1H,s,H-13),5.08 (1H,s,H-13),1.59(3H,s,CH3-14),0.85 (3H,s,CH3-15);13C-NMR(150 MHz,CDCl3)δ: 37.8 (C-1),22.9 (C-2),121.5(C-3),134.1 (C-4),46.6 (C-5),30.1 (C-6),51.6 (C-7),70.7 (C-8),48.5 (C-9),34.1 (C-10),151.1 (C-11),112.9 (C-12),66.1 (C-13),21.5 (C-14),16.9 (C-15)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[23-24]，故鑒定化合物3為petafolia A。

化合物4：無色油狀物，分子式為C15H22O2，ESI-MSm/z: 235.2 [M+H]+。1H-NMR (600 MHz,CDCl3)δ: 1.39 (1H,m,H-1α),1.60 (1H,m,H-1β),1.65 (2H,m,H-2),2.35 (1H,m,H-3α),2.15 (1H,m,H-3β),1.50 (1H,m,H-6α),3.43 (1H,dd,J=10.8,1.8 Hz,H-6β),2.18 (1H,m,H-7),1.70 (1H,m,H-8α),1.15 (1H,m,H-8β),2.08 (2H,m,H-9),5.12 (1H,s,H-12α),5.00 (1H,s,H-12β),4.17 (2H,br s,H-13),1.21 (3H,s,CH3-14),10.17 (1H,s,H-15);13C-NMR(150 MHz,CDCl3)δ: 41.7 (C-1),17.9 (C-2),24.0 (C-3),133.0 (C-4),164.1 (C-5),29.8 (C-6),43.3 (C-7),27.8 (C-8),39.5 (C-9),36.9 (C-10),152.6 (C-11),65.4 (C-12),109.2 (C-13),25.3 (C-14),191.0 (C-15)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[20,25]，故鑒定化合物4為12-羥基-4(5),11(13)-桉葉二烯-15-醛。

化合物5：無色油狀物，分子式為C15H20O2，ESI-MSm/z: 233.2 [M+H]+。1H-NMR (600 MHz,CDCl3)δ: 9.54 (1H,s,12-CHO),6.33 (1H,s,H-13),6.06 (1H,s,H-13),1.21 (3H,s,H-14),10.14 (1H,s,15-CHO);13C-NMR (150 MHz,CDCl3)δ: 39.5 (C-1),17.9 (C-2),23.9 (C-3),133.3 (C-4),163.1 (C-5),29.1 (C-6),38.5 (C-7),26.9 (C-8),41.4 (C-9),36.6(C-10),153.6 (C-11),194.5 (C-12),133.8 (C-13),25.3 (C-14),191.1 (C-15)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[20]，故鑒定化合物5 為12,15-二酮基-芹子-4,11-二烯。

化合物6：無色油狀物，分子式為C15H22O3，ESI-MSm/z: 251.2 [M+H]+。1H-NMR (600 MHz,CDCl3)δ: 1.42 (1H,m,H-1α),1.60 (1H,m,H-1β),1.65 (2H,m,H-2),2.34 (1H,m,H-3α),2.05 (1H,m,H-3β),1.49 (1H,m,H-6α),3.37 (1H,dd,J=14.4,3.6 Hz,H-6β),2.15 (1H,t,J=3.0 Hz,H-7),4.02 (1H,td,J=10.8,3.0 Hz,H-8),2.02 (1H,dd,J=10.2,4.2 Hz,H-9α),1.42 (1H,d,J=10.2 Hz,H-9β),5.29 (1H,s,H-12α),5.15(1H,s,H-12β),4.15 (1H,br s,H-13α),4.20 (1H,br s,H-13β),1.25 (3H,s,CH3-14),10.14(1H,s,H-15);13C-NMR (150 MHz,CDCl3)δ: 39.2 (C-1),17.6 (C-2),23.8 (C-3),133.5 (C-4),161.3 (C-5),29.1 (C-6),51.6 (C-7),69.5 (C-8),49.1 (C-9),38.1(C-10),149.3 (C-11),65.9 (C-12),114.5 (C-13),26.2(C-14),191.3 (C-15)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[26]，故鑒定化合物6 為 (7S,8R,10S)-(+)-8,12-二羥基-芹子-4,11-二烯-14-醛。

化合物7：無色油狀物，分子式為C15H24O3，ESI-MSm/z: 275.2 [M+Na]+。1H-NMR (600 MHz,CDCl3)δ: 2.81 (1H,dd,J=13.2,4.2 Hz,H-4),1.25(3H,s,H-12),1.48 (3H,s,H-13),1.02 (3H,s,H-15);13C-NMR (150 MHz,CDCl3)δ: 37.0 (C-l),20.4 (C-2),28.3 (C-3),47.8 (C-4),86.5 (C-5),36.5 (C-6),43.8(C-7),24.4 (C-8),35.6 (C-9),38.2 (C-10),84.8 (C-11),23.4 (C-12),30.8 (C-13),175.3 (C-14),23.5 (C-15)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[27]，故鑒定化合物7為白木香酸。

化合物8：無色油狀物，分子式為C15H22O2，ESI-MSm/z: 235.2 [M+H]+。1H-NMR (600 MHz,CDCl3)δ: 4.44 (1H,t,J=3.0 Hz,H-1),1.60 (1H,m,H-4),3.02 (1H,dd,J=5.4,10.2 Hz,H-7),5.88 (1H,s,H-9),1.79 (3H,s,H-12),4.94 (1H,m,H-13),4.81(1H,m,H-13),1.30 (3H,s,CH3-14),0.97 (3H,d,J=6.6 Hz,CH3-15);13C-NMR (150 MHz,CDCl3)δ: 74.8(C-1),32.5 (C-2),25.5 (C-3),40.7 (C-4),38.6 (C-5),42.6 (C-6),51.0 (C-7),200.8 (C-8),125.0 (C-9),168.1 (C-10),143.9 (C-11),21.4 (C-12),113.8 (C-13),21.3 (C-14),16.0 (C-15)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[28]，故鑒定化合物8 為1α-羥基-7βH-荒漠木-9,11-二烯-8-酮。

化合物9：無色油狀物，分子式為C15H22O2，ESI-MSm/z: 235.2 [M+H]+。1H-NMR (600 MHz,CDCl3)δ: 1.85 (1H,m,H-4),2.00 (1H,m,H-7),5.74(1H,s,H-9),1.28 (3H,s,CH3-12),2.70 (1H,d,J=1.2 Hz,H-13),2.82 (1H,d,J=3.6 Hz,H-13),1.10(3H,s,CH3-14),0.95 (3H,d,J=4.8 Hz,CH3-15);13CNMR (150 MHz,CDCl3)δ: 33.3 (C-1),29.9 (C-2),30.4 (C-3),38.0 (C-4),40.4 (C-5),34.2 (C-6),49.7(C-7),197.0 (C-8),122.5 (C-9),173.6 (C-10),56.4(C-11),17.5 (C-12),56.2 (C-13),21.3 (C-14),16.4(C-15)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[29]，故鑒定化合物9為7α-H-9(10)-烯-11,12-環(huán)氧-8-氧代荒漠木烷。

化合物10：無色油狀物，分子式為C15H22O2，ESI-MSm/z: 235.2 [M+H]+。1H-NMR (600 MHz,CDCl3)δ: 3.67 (1H,m,H-2),1.85 (1H,m,H-4),3.01 (1H,m,H-7),5.83 (1H,s,H-9),1.77 (3H,s,CH3-12),4.73(1H,t,J=1.8 Hz,H-13),4.95 (1H,t,J=1.8 Hz,H-13),1.00 (3H,s,CH3-14),0.97 (3H,d,J=7.2 Hz,CH3-15);13C-NMR (150 MHz,CDCl3)δ: 42.4 (C-1),71.8 (C-2),37.1 (C-3),35.9 (C-4),39.4 (C-5),39.6 (C-6),50.7(C-7),199.6 (C-8),125.1 (C-9),166.5 (C-10),143.7(C-11),20.9 (C-12),114.1 (C-13),20.1 (C-14),15.9(C-15)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[23-24]，故鑒定化合物10為petafolia B。

化合物11：無色油狀物，分子式為C15H24O2，ESI-MSm/z: 237.2 [M+H]+。1H-NMR (600 MHz,CDCl3)δ: 5.76 (1H,s,H-1),2.20～2.30 (2H,m,H-3),1.98(1H,m,H-4),2.03 (1H,m,H-6α),0.99 (1H,m,H-6β),1.72 (1H,m,H-7),1.18 (2H,m,H-8),2.47 (2H,m,H-9),1.19 (3H,s,CH3-12),1.21 (3H,s,CH3-13),1.08 (3H,s,CH3-14),0.97 (3H,d,J=6.6 Hz,CH3-15);13C-NMR (150 MHz,CDCl3)δ: 124.7 (C-1),200.1 (C-2),42.3 (C-3),40.8 (C-4),39.4 (C-5),39.8 (C-6),44.1 (C-7),27.9 (C-8),33.2 (C-9),171.1 (C-10),72.7 (C-11),27.1 (C-12),27.6 (C-13),17.2 (C-14),15.2 (C-15)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[30]，故鑒定化合物11為11-羥基-瓦倫-1(10)-烯-2-酮。

化合物12：無色油狀物，分子式為C15H26O2，ESI-MSm/z: 239.2 [M+H]+。1H-NMR (600 MHz,CDCl3)δ: 5.63 (1H,t,J=3.0 Hz,H-7),4.12 (2H,s,H-14),2.08 (1H,m,H-8a),2.05 (1H,m,H-3),1.95(1H,m,H-8b),1.75 (1H,m,H-4a),1.72 (1H,m,H-1a),1.70 (1H,m,H-9a),1.68 (1H,m,H-4b),1.67(1H,m,H-2a),1.61 (1H,m,H-10),1.43 (1H,m,H-9b),1.42 (1H,m,H-1b),1.38 (1H,m,H-2b),1.20(6H,s,CH3-12/13),0.90 (3H,d,J=6.6 Hz,CH3-15);13C-NMR (150 MHz,CDCl3)δ: 35.9 (C-1),27.6 (C-2),53.1 (C-3),39.6 (C-4),47.6 (C-5),144.2 (C-6),122.7 (C-7),22.4 (C-8),27.1 (C-9),39.3 (C-10),72.1 (C-11),28.4 (C-12),28.4 (C-13),64.9 (C-14),15.5 (C-15)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[24]，故鑒定化合物12為白木香醇。

化合物13：淡黃色粉末，分子式為C17H14O2，ESI-MSm/z: 251.1 [M+H]+。1H-NMR (600 MHz,CDCl3)δ: 8.18 (1H,m,H-5),7.34 (8H,m,H-6～8,2'～6'),6.16 (1H,s,H-3),3.00 (4H,m,H-11/12);13CNMR (150 MHz,CDCl3)δ: 168.7 (C-2),110.5 (C-3),178.6 (C-4),125.2 (C-5),125.9 (C-6),133.8 (C-7),118.1 (C-8),123.9 (C-9),156.7 (C-10),36.4 (C-11),33.2 (C-12),139.9 (C-1'),128.9 (C-2'/6'),128.5 (C-3'/5'),126.8 (C-4')。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[31]，故鑒定化合物13為2-(2-苯乙基)色酮。

化合物14：白色粉末，分子式為C18H16O4，ESIMSm/z: 297.1 [M+H]+。1H-NMR (600 MHz,CDCl3)δ: 6.14 (1H,s,H-3),8.17 (1H,dd,J=1.8,7.8 Hz,H-5),7.38 (1H,t,J=6.6 Hz,H-6),7.65 (1H,m,H-7),7.44 (1H,d,J=8.4 Hz,H-8),2.89 (2H,m,H-11),2.95 (2H,m,H-12),6.65 (1H,dd,J=1.8,7.8 Hz,H-2'),6.75 (1H,d,J=7.8 Hz,H-3'),6.79 (1H,d,J=1.8 Hz,H-6'),3.85 (3H,s,4'-OCH3);13C-NMR(150 MHz,CDCl3)δ: 168.8 (C-2),110.4 (C-3),178.6(C-4),125.8 (C-5),125.2 (C-6),133.8 (C-7),118.1(C-8),156.6 (C-9),123.8 (C-10),36.5 (C-11),32.5(C-12),133.1 (C-1'),119.8 (C-2'),110.9 (C-3'),145.5 (C-4'),145.9 (C-5'),114.7 (C-6'),56.1 (4'-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[13]，故鑒定化合物14為奇楠沉香酮A。

化合物15：淡黃色粉末，分子式為C18H16O3，ESI-MSm/z: 281.1 [M+H]+。1H-NMR (600 MHz,CDCl3)δ: 6.13 (1H,s,H-3),8.17 (1H,d,J=6.6 Hz,H-5),7.63 (1H,t,J=8.4 Hz,H-6),7.35 (1H,t,J=15.0 Hz,H-7),7.43 (1H,d,J=8.4 Hz,H-8),3.00(2H,t,J=6.0 Hz,H-11),2.91 (2H,t,J=6.0 Hz,H-12),6.82 (2H,d,J=7.8 Hz,H-2'/6'),7.11 (2H,d,J=7.8 Hz,H-3'/5'),3.80 (3H,s,4'-OCH3);13C-NMR(150 MHz,CDCl3)δ: 168.6 (C-2),110.2 (C-3),178.3(C-4),125.0 (C-5),125.6 (C-6),133.6 (C-7),117.9(C-8),123.7 (C-9),156.4 (C-10),36.4 (C-11),32.1(C-12),131.7 (C-1'),129.3 (C-2'/6'),114.0 (C-3'/5'),158.2 (C-4'),55.2 (4'-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[31]，故鑒定化合物15 為4'-甲氧基-2-(2-苯乙基)色酮。

化合物16：淡黃色粉末，分子式為C19H18O4，ESI-MSm/z: 311.1 [M+H]+。1H-NMR (600 MHz,CDCl3)δ: 6.13 (1H,s,H-3),7.54 (1H,s,H-5),7.25(1H,dd,J=3.6,9.0 Hz,H-7),7.37 (1H,d,J=9.0 Hz,H-8),2.89 (2H,m,H-11),3.00 (2H,m,H-12),7.11(2H,d,J=8.4 Hz,H-2'/6'),6.82 (2H,d,J=8.4 Hz,H-3'/5'),3.80 (3H,s,4'-OCH3),3.89 (3H,s,6-OCH3);13C-NMR (150 MHz,CDCl3)δ: 168.6 (C-2),109.7 (C-3),178.5 (C-4),104.9 (C-5),151.5 (C-6),123.8 (C-7),119.5 (C-8),157.0 (C-9),124.5 (C-10),36.6 (C-11),32.4 (C-12),132.0 (C-1'),129.5 (C-2'/6'),114.2 (C-3'/5'),158.4 (C-4'),55.5 (4'-OCH3),56.2(6-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[32]，故鑒定化合物16 為6-甲氧基-2-[2-(4'-甲氧基苯乙基)色酮。

化合物17：白色粉末，分子式為C9H10O4，ESIMSm/z: 183.1 [M+H]+。1H-NMR (600 MHz,CDCl3)δ: 9.82 (1H,s,-CHO),7.16 (2H,s,H-2/6),3.98 (6H,s,3/5-OCH3);13C-NMR (150 MHz,CDCl3)δ: 191.1(-CHO),128.3 (C-1),106.9 (C-2/6),147.5 (C-3/5),142.3 (C-4),56.7 (3/5-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[33-34]，故鑒定化合物17為丁香醛。

4 神經(jīng)保護(hù)活性篩選

采用體外法測(cè)定化合物對(duì)CORT 誘導(dǎo)的PC12 細(xì)胞損傷的保護(hù)作用[35]。PC12 細(xì)胞按常規(guī)方法培養(yǎng)，在96孔板中接種對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，使細(xì)胞濃度為5×104個(gè)/mL，每孔加入100 μL，置于37 ℃含5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h。設(shè)置空白組、模型組、陽性對(duì)照地西泮組、實(shí)驗(yàn)組?？瞻捉M中加入不完全培養(yǎng)基200 μL，不做任何處理；模型組用CORT 200 μL（終濃度為200 μmol·L-1）處理；地西泮組加入3.125 μg·mL-1地西泮100 μL（地西泮產(chǎn)生毒性的血藥質(zhì)量濃度為30 μg·mL-1，故給藥劑量設(shè)其1/10劑量）處理細(xì)胞；實(shí)驗(yàn)組以CORT 100 μL（終濃度為200 μmol·L-1）和相應(yīng)藥物（預(yù)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)化合物對(duì)PC12 細(xì)胞存活率影響，化合物以質(zhì)量濃度50.000 0、25.000 0、12.500 0、6.250 0、3.125 0、1.562 5 μg·mL-1給藥）。各組細(xì)胞置于37 ℃含5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，精密吸取含藥培養(yǎng)基100 μL，加入CCK-8 10 μL，置于37 ℃含5% CO2的培養(yǎng)箱中孵育1～2 h 后，將96 孔板置于酶標(biāo)儀450 nm 波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度（A），按照公式（1）計(jì)算細(xì)胞存活率。結(jié)果見表1。

表1 化合物對(duì)CORT誘導(dǎo)PC12細(xì)胞存活率的影響（±s,n=3）

表1 化合物對(duì)CORT誘導(dǎo)PC12細(xì)胞存活率的影響（±s,n=3）

注：與對(duì)照組比較，##P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。

結(jié)果發(fā)現(xiàn)，CORT 誘導(dǎo)細(xì)胞損傷后的細(xì)胞存活率為48.78%，給予受試藥物后不同化合物不同質(zhì)量濃度下細(xì)胞存活率出現(xiàn)不同程度升高，存活率為50.35%～91.36%，表明化合物對(duì)CORT 誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞有明顯的保護(hù)作用，其中化合物2和4活性較強(qiáng)。

5 討論

本研究對(duì)奇楠種質(zhì)產(chǎn)奇楠沉香的超臨界提取物化學(xué)成分進(jìn)行分離與純化研究，共得到17 個(gè)化合物，其中12個(gè)倍半萜類化合物和4個(gè)色酮類化合物。從結(jié)構(gòu)類型上分析，桉烷型和艾里莫芬烷型是奇楠沉香超臨界提取物中芳香倍半萜的主要成分，2-(2-苯乙基)色酮母核及其4'-甲氧基-2-(2-苯乙基)色酮是奇楠沉香中色酮類的大量成分。從結(jié)構(gòu)特點(diǎn)上分析，桉烷型倍半萜普遍在C-12 位或C-15 位有醛基存在，艾里莫芬烷型倍半萜普遍存在α,β-不飽和酮片段。通過奇楠沉香超臨界提取物與水蒸氣蒸餾揮發(fā)油成分的研究比較[36-37]，發(fā)現(xiàn)2 種提取物均富含2-(2-苯乙基)色酮類化合物，其中2-(2-苯乙基)色酮與2-[2-(4'-甲氧基苯乙基)色酮的含量較高；但其倍半萜類成分存在差異，水蒸氣蒸餾的揮發(fā)油中倍半萜類成分有莫芬烷型、愈創(chuàng)木烷型及桉烷型等，而奇楠沉香超臨界提取物中倍半萜主要是按烷型、艾里莫芬烷型及沉香螺烷型，未見愈創(chuàng)木烷型倍半萜類成分。本研究豐富了奇楠沉香的化學(xué)成分?jǐn)?shù)據(jù)，發(fā)現(xiàn)了化合物1、2、4 和5 具有較強(qiáng)的保護(hù)CORT 誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞損傷活性，為奇楠沉香的進(jìn)一步開發(fā)和利用提供了參考。