劉愛玲,劉愛勝,凌秀婷,鐘偉傳
目前,急診危重患者越來越多,病情復(fù)雜且變化快,臨床診斷對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果的依賴性不斷增強(qiáng),造成檢驗(yàn)工作量大大增加,并對(duì)檢驗(yàn)質(zhì)量和效率提出更高要求,給檢驗(yàn)工作帶來很大壓力。 為了更好地滿足臨床需要及為患者提供更高、更有效率的服務(wù),深圳市龍華區(qū)人民醫(yī)院急診檢驗(yàn)科購買了一臺(tái)高效檢測(cè)的基蛋生物干式熒光免疫定量分析儀 (Getein 1200,GP 1200)。 根據(jù)國際標(biāo)準(zhǔn)化組織(International Organization for Standardization,ISO)15189 CNAS-CL02:2012《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)基和能力認(rèn)可準(zhǔn)則》[1], 對(duì)新購置的儀器實(shí)驗(yàn)室必須對(duì)其方法學(xué)分析性能予以驗(yàn)證,并對(duì)廠家提供的主要性能評(píng)價(jià)數(shù)據(jù)予以確認(rèn)。 因此,筆者研究參照美國臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)文件(Clinical and Laboratory Standards Institute,CLSI)、ISO 15189《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力的專用要求》 及ISO 17025相關(guān)文件[2~4],并以參與室間質(zhì)評(píng)的DXI 800 全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)為參照,對(duì)GP 1200 檢測(cè)血清降鈣素原(procalcitonin,PCT)、淀粉樣蛋白A(serum amyloid A protein,SAA)及白細(xì)胞介素6(interleukin-6,IL-6)項(xiàng)目的精密度、正確度、攜帶污染率、靈敏度、線性及相關(guān)性等性能進(jìn)行了評(píng)價(jià)。
1.1.1 評(píng)價(jià)標(biāo)本
采用GP 1200 分析儀(基蛋生物,中國)配套使用的精密度參考品、準(zhǔn)確度參考品及不同濃度線性參考品。同時(shí)隨機(jī)收集80 份臨床標(biāo)本,分離血清用于對(duì)比分析。
1.1.2 主要儀器與試劑
GP 1200、校準(zhǔn)品及質(zhì)控品(基蛋生物科技股份有限公司, 中國);DXI 800 分析儀、 校準(zhǔn)品及質(zhì)控品(Bankman 公司,美國);PCT、SAA 及IL-6 試劑盒(基蛋生物,中國)。
1.2.1 質(zhì)控準(zhǔn)備
分析前做好儀器維護(hù)及校準(zhǔn),分析期間做好室內(nèi)質(zhì)控,所有操作均嚴(yán)格按照儀器和試劑說明書及科室標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程 (Standard Operating Procelure,SOP)操作規(guī)程進(jìn)行。以DXI 800 全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)為參照,對(duì)GP 1200 分析儀檢測(cè)項(xiàng)目進(jìn)行評(píng)價(jià)。
1.2.2 檢測(cè)項(xiàng)目
1.2.2.1 精密度 取GP 1200 配套用的精密度參考品反復(fù)測(cè)定8 次,計(jì)算平均值(average value,AV)、標(biāo)準(zhǔn)差(standard deviation,SD)及批內(nèi)變異系數(shù)(coefficient of variation,CV)。
1.2.2.2 正確度 取低、高GP 1200 配套的正確度參考品各1 份,每份測(cè)定2 次,分別計(jì)算AV 及相對(duì)偏倚(Bias)。 計(jì)算公式:Bias(%)=(測(cè)定值A(chǔ)V-靶值)/靶值×100%。
1.2.2.3 線性 取4 種不同濃度線性參考品各1 份,每份檢測(cè)2 次,計(jì)算AV 及其與理論值進(jìn)行相關(guān)系數(shù)(R2)及回歸方程分析。
1.2.2.4 攜帶污染率 取1 份高濃度標(biāo)本連續(xù)測(cè)定3次(H1、H2、H3),再取1 份低濃度標(biāo)本連續(xù)測(cè)定3 次(L1、L2、L3)。 計(jì)算公式:攜帶污染率(%)=(L1-L3)/(H3-L3)×100%。
1.2.2.5 靈敏度 分別取PCT、SAA 及IL-6 試劑盒中的空白液連續(xù)測(cè)定10 次, 計(jì)算AV 和SD, 并以2SD 作為相應(yīng)檢測(cè)項(xiàng)目的靈敏度。
1.2.2.6 相關(guān)性 分別采用GP 1200 和DXI 800 對(duì)80 份臨床標(biāo)本進(jìn)行PCT、SAA 及IL-6 項(xiàng)目對(duì)比檢測(cè),計(jì)算兩者結(jié)果的一致性。
1.2.3 判斷標(biāo)準(zhǔn)
精密度判斷標(biāo)準(zhǔn):CV ≤10%為驗(yàn)證通過; 正確度判斷標(biāo)準(zhǔn):Bias <±20%為可接受;線性判斷標(biāo)準(zhǔn):R2≥0.975 為驗(yàn)證通過。
采用SPSS 21.0 統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。 計(jì)數(shù)資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示;相關(guān)性采用Pearman 分析。P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
GP 1200 檢測(cè)PCT、SAA 及IL-6 水平分別為(2.62±0.14)ng/mL、(54.56 ±4.13)ng/mL、(882.93 ±44.06)pg/mL,其CV 分別為5.29%、7.57%、5.00%。
GP 1200 檢測(cè)PCT、SAA 及IL-6 項(xiàng)目Bias (低值、 高值) 分別為-0.71%、-4.25%,4.43%、6.29%,10.39%及1.84%。 見表1。
表1 GP 1200 檢測(cè)PCT、SAA 及IL-6 項(xiàng)目正確度評(píng)價(jià)結(jié)果Tab. 1 Comparison of accuracy evaluation results of PCT, SAA and IL-6 detected by GP 1200
GP 1200 檢測(cè)PCT、SAA 及IL-6 項(xiàng)目R2分別為0.999、0.996 及0.999。 見表2、圖1。
圖1 PCT、SAA 及IL-6 線性評(píng)價(jià)檢測(cè)平均值與理論值相關(guān)性Fig.1 Correlation between mean value and theoretical value of linear evaluation and detection of PCT,SAA and IL-6
表2 GP 1200 檢測(cè)PCT、SAA 及IL-6 項(xiàng)目線性評(píng)價(jià)結(jié)果Tab.2 Comparison of linear evaluation results of PCT,SAA and IL-6 detected by GP 1200
GP 1200 檢測(cè)PCT、SAA 及IL-6 項(xiàng)目攜帶污染率分別為0.089 4%、0.165 8%及0.018 4%。 表明儀器檢測(cè)PCT、SAA 及IL-6 的污染率很低。 見表3。
表3 GP 1200 檢測(cè)PCT、SAA 及IL-6 項(xiàng)目攜帶污染率Tab.3 Comparison of contamination rate of PCT,SAA and IL-6 detected by GP 1200
GP 1200 檢測(cè)PCT、SAA 及IL-6 項(xiàng)目靈敏度分別為0.102 ng/mL、0.146 mg/L 及0.315 pg/mL。 說明儀器檢測(cè)PCT、SAA 及IL-6 的靈敏度高。
GP 1200 檢測(cè)PCT、SAA 及IL-6 的結(jié)果與DXI 800 分析儀檢測(cè)的結(jié)果具有良好的相關(guān)性,相關(guān)系數(shù)(r)分別為0.941 8、0.908 6 及0.889 1,儀器間檢測(cè)結(jié)果相關(guān)性很好。
PCT、SAA 及IL-6 檢測(cè)是嚴(yán)重細(xì)菌感染/膿毒癥早期鑒別診斷最優(yōu)的觀察指標(biāo),也可輔助用于臨床細(xì)菌和病毒感染快速鑒別診斷及細(xì)菌感染嚴(yán)重程度的判斷,同時(shí)對(duì)臨床抗生素的使用具有指導(dǎo)意義[5~7]。 因此,PCT、SAA 及IL-6 水平快速檢測(cè)對(duì)臨床急診危重患者的診斷、鑒別診斷、病情評(píng)估及治療具有重要的意義。
GP 1200 是一種全自動(dòng)POCT 分析設(shè)備,其采用熒光免疫法,樣品中抗原與附著熒光顆粒的相應(yīng)抗體結(jié)合形成熒光標(biāo)記的抗原抗體免疫復(fù)合體,儀器可根據(jù)樣品區(qū)和質(zhì)控區(qū)帶上免疫復(fù)合體發(fā)射熒光強(qiáng)度的不同來檢測(cè)待測(cè)物的相應(yīng)濃度[8~10]。因其操作簡(jiǎn)便、快速、靈敏度高及穩(wěn)定性好,且檢測(cè)項(xiàng)目多,目前常用于急診危重疾病的診療工作。但不同實(shí)驗(yàn)室工作人員操作習(xí)慣、水質(zhì)、室內(nèi)溫度及濕度等因素可能存在很大差異,從而影響儀器的各項(xiàng)性能。因此,實(shí)驗(yàn)室必須對(duì)新購置的儀器和檢測(cè)系統(tǒng)性能進(jìn)行驗(yàn)證,這不僅是檢驗(yàn)質(zhì)量的保證,也是ISO 15189《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則》的基本要求。
有研究表明,精密度、正確度、線性、攜帶污染、靈敏度及相關(guān)性是定量分析儀和系統(tǒng)檢測(cè)性能評(píng)價(jià)常用的幾個(gè)指標(biāo)[11~14],其中精密度是反映同一樣品反復(fù)檢測(cè)結(jié)果之間的吻合程度, 是評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)隨機(jī)誤差大小,是所有性能評(píng)價(jià)中的基礎(chǔ)。 正確度是反映同一樣品多次檢測(cè)結(jié)果的均值與理論值之間的差異性,是評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)誤差大小。線性是指分析儀能直接測(cè)出待測(cè)物(待測(cè)物檢測(cè)前不進(jìn)行濃縮或稀釋預(yù)處理)濃度范圍,是評(píng)價(jià)方法學(xué)性能的重要指標(biāo)之一。 攜帶污染是評(píng)價(jià)待測(cè)物受檢測(cè)前后標(biāo)本對(duì)其檢測(cè)結(jié)果影響嚴(yán)重程度的指標(biāo)。靈敏度是評(píng)價(jià)儀器檢測(cè)待測(cè)物最低濃度的能力。相關(guān)性是評(píng)價(jià)新儀器和系統(tǒng)檢測(cè)結(jié)果與參照儀器結(jié)果的一致性, 確保不同儀器和系統(tǒng)檢測(cè)結(jié)果的可比性和準(zhǔn)確。 筆者評(píng)價(jià)結(jié)果顯示,GP 1200 檢測(cè)PCT、SAA 及IL-6 的CV 在5.00 % ~7.57 %,低值、 高值正確度參考品PCT、SAA 及IL-6 的Bias 值在-4.25%~10.39%,PCT、SAA 及IL-6 的AV 與理論值線性R2值在0.996 ~0.999,斜率(a)在0.960 5 ~1.100 3,攜帶污染率極低,在0.018 4%~0.165 8%,檢測(cè)靈敏度高,且對(duì)比相關(guān)性好,這表明GP 1200 在急診檢驗(yàn)室的環(huán)境下其以上各項(xiàng)評(píng)價(jià)指標(biāo)均符合臨床質(zhì)量要求。
綜上所述,PG 1200 干式熒光免疫定量分析儀檢測(cè)PCT、SAA 及IL-6 的性能經(jīng)初步評(píng)價(jià), 其精密度、正確度均在廠家允許范圍內(nèi),線性好、攜帶污染率低、靈敏度高及相關(guān)性好,且檢測(cè)速度快,操作簡(jiǎn)單,體積小,能滿足急診危重患者常規(guī)檢測(cè)及科研需求。