龍威海，劉杏，劉元秋

（蒙陰縣畜牧發(fā)展促進中心 山東臨沂 276200）

口蹄疫（Foot and Mouth，F(xiàn)MD）是由口蹄疫病毒引起的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病，我國主要流行O 型、A 型和亞洲Ⅰ型3種血清型[1]，一年任何季節(jié)均可發(fā)生[2]。該病多次在世界范圍內(nèi)暴發(fā)流行，在我國也偶有發(fā)生，嚴重影響畜牧業(yè)健康發(fā)展，被世界動物衛(wèi)生組織（WOAH）列為法定報告動物傳染病，我國列為一類動物疫病。

山東省對家畜口蹄疫開展強制免疫，保障動物強制免疫的有力措施是合適的免疫計劃和有效的抗體監(jiān)測方案。開展免疫效果監(jiān)測，及時了解全縣免疫水平，對動物疫病綜合防控具有重要意義[3]。根據(jù)《蒙陰縣動物疫病監(jiān)測凈化與流行病學(xué)調(diào)查計劃（2022—2025 年）》要求，為進一步檢測蒙陰縣重大動物疫病防控成效，確保轄區(qū)內(nèi)重大動物疫病質(zhì)量，通過隨機抽取10 個鄉(xiāng)鎮(zhèn)街區(qū)的規(guī)模養(yǎng)殖場和散養(yǎng)戶豬、牛、羊血清進行抗體檢測，綜合評估全縣口蹄疫免疫效果及感染風(fēng)險，為全縣口蹄疫的防控工作提供技術(shù)支撐。

1 材料與方法

1.1 樣本來源

2022 年春季集中免疫后采集樣本，覆蓋全縣10 個鄉(xiāng)鎮(zhèn)街區(qū)。隨機抽取8 個豬場、2 個羊場、2 個牛場和47 個自然村，每個規(guī)模場采集樣品30 份、自然村抽查5 個散養(yǎng)戶，總計采集樣本595 份。

表1 樣本采集情況（份）

1.2 儀器耗材

自動洗板機（北京普朗新技術(shù)有限公司）、酶標儀（Tecan）、超純水儀（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）、移液器（Eppendorf）、恒溫培養(yǎng)箱（上海博迅醫(yī)療生物儀器股份有限公司）、96 孔板等。

1.3 免疫抗體監(jiān)測

1）檢測方法及試劑。按照改進型口蹄疫病毒O 型液相阻斷ELISA抗體檢測試劑盒（內(nèi)蒙古金邁詩生物科技有限公司，批號2022E23-001）說明書檢測。

2）試驗成立條件。病毒抗原對照OD450nm值≥0.8；陽性對照抗體效價在1∶1024±1 滴度以內(nèi)；陰性對照抗體效價＜1∶8。

3）臨界值。在6 孔病毒抗原對照中，選取4 孔相對穩(wěn)定的值，棄去最高和最低的OD450nm值，計算剩余2 孔的平均OD450nm值，再除以2，即為臨界值。

4）結(jié)果判定標準。牛羊抗體效價≥1∶128，99%以上保護；抗體效價≤1∶16，不保護；抗體效價在1∶22～1∶90 之間，50%保護。豬抗體效價≥1∶64，99%以上保護；抗體效價＜1∶8，不保護；抗體效價在1∶8～1∶45之間，50%保護。

1.4 感染抗體監(jiān)測

按照口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白（NSP）3ABC 間接ELISA 抗體檢測試劑盒（洛陽萊普生信息科技有限公司，批號TE211203）說明書進行檢測。在免疫狀態(tài)下，對NSP 抗體檢測陽性的，需進一步確認。豬可在非結(jié)構(gòu)蛋白抗體首次監(jiān)測2～4 周后（期間不能進行免疫）進行二次采樣檢測（兩次采樣檢測的豬要保持一致）。若豬群NSP 抗體陽性率等于或低于首次檢測結(jié)果的，可排除感染；也可活體采集扁桃體進行病原學(xué)檢測。牛、羊采集0-P 液進行RT-PCR 或熒光RT-PCR 檢測，病原學(xué)檢測結(jié)果為陰性的，判定為陰性畜；病原學(xué)檢測結(jié)果為陽性的，判定為陽性畜[4]。

2 結(jié)果與分析

2022 年春季動物疫病強制免疫監(jiān)測O 型口蹄疫抗體595 份，合格532 份，合格率89.4%。全縣豬、羊、牛O 型口蹄疫個體免疫合格率均在85%以上，高于農(nóng)業(yè)農(nóng)村部相關(guān)規(guī)定，結(jié)果基本反映了全縣口蹄疫免疫現(xiàn)狀。

2.1 不同家畜抗體數(shù)據(jù)

從表2 可以看出，豬、羊、牛型口蹄疫抗體合格率分別為85%、96%、100%，牛合格率最高，其次是羊，豬最低。牛羊O 型口蹄疫抗體水平高于豬，蒙陰縣豬多數(shù)以育肥為主，飼養(yǎng)周期較短，而牛羊飼養(yǎng)周期長，免疫次數(shù)較多，從而導(dǎo)致牛羊免疫抗體水平較高。

表2 不同家畜O型口蹄疫抗體數(shù)據(jù)

2.2 不同場點抗體數(shù)據(jù)

散養(yǎng)戶O 型口蹄疫抗體水平略低于規(guī)模場，差距不大（表3）。原因分析：蒙陰縣口蹄疫屬于強制免疫，每年春秋各免疫一次，散養(yǎng)戶免疫過程中可能存在免疫劑量不足和操作不當?shù)葐栴}，從而影響免疫效果。

表3 不同場點O型口蹄疫抗體數(shù)據(jù)

2.3 群體抗體數(shù)據(jù)

規(guī)模羊場和規(guī)模牛場群體合格率均為100%，規(guī)模豬場群體合格率87.5%，散養(yǎng)戶群體合格率93.6%（表4）。

表4 群體O型口蹄疫抗體數(shù)據(jù)

2.4 感染抗體數(shù)據(jù)

規(guī)模豬場和規(guī)模羊場口蹄疫感染抗體結(jié)果均為陰性，規(guī)模牛場口蹄疫感染抗體陽性率為5%（表5）。

表5 不同家畜感染抗體數(shù)據(jù)

3 討論與建議

3.1 全縣口蹄疫整體免疫效果

從檢測結(jié)果看，被檢測規(guī)模養(yǎng)殖場（戶）的免疫抗體合格率均在85%以上，達到了山東省口蹄疫免疫抗體合格率全年保持在80%以上的要求，蒙陰縣春季口蹄疫集中免疫達到預(yù)期目標。蒙陰縣自2019 年啟動免疫無口蹄疫區(qū)建設(shè)以來，不斷提升實驗室檢測能力，進一步改革和完善了村級動物防疫員管理制度，規(guī)模養(yǎng)殖場積極推進強制免疫“先打后補”政策，動物疫病強制免疫工作重視程度進一步提升，因而才能取得理想的成果。

3.2 口蹄疫免疫效果

豬、羊、牛O 型口蹄疫強制免疫抗體檢測合格率均符合國家、省要求，但也存在1 家豬場、3 家豬散養(yǎng)戶免疫抗體合格率分別為6%和0%沒達標的場點，可能是由于操作不規(guī)范、村級動物防疫員免疫密度低等原因造成。對于不達標的場（戶）根據(jù)免疫效果通報情況進行及時補免重新采樣監(jiān)測，確保免疫抗體合格率達到80%以上。

不同畜種間O 型口蹄疫抗體合格率存在一定差距，羊、牛場（戶）的免疫效果明顯優(yōu)于豬場（戶），規(guī)模豬場和豬散養(yǎng)戶都存在免疫抗體較低的現(xiàn)象。羊、牛養(yǎng)殖周期較長，每年春季兩季各進行一次強制免疫，對家畜進行多次免疫，可以使免疫抗體水平維持在較高水平[5]。生豬上半年價格波動較大，調(diào)動頻繁，存在對補欄豬漏免的情況，同時也存在采血時還未達到口蹄疫抗體免疫應(yīng)答的最佳時間，從而導(dǎo)致豬免疫抗體水平低于羊、牛。

3.3 感染抗體陽性處置

本次共檢測豬、牛、羊血清390 份，結(jié)果顯示：全縣口蹄疫非結(jié)構(gòu)蛋白抗體陽性率為0.77%，其中牛羊陽性率為2%，遠低于報告的我國牛羊口蹄疫3ABC 抗體陽性率低于39.44%這一水平[6]，目前來看，蒙陰縣口蹄疫3ABC 抗體陽性率處于較低水平。

本次檢測牛的3ABC 抗體陽性率為5%，豬、羊的3ABC 抗體陽性率均為0%。對檢測陽性場點，按照3ABC 陽性復(fù)核工作流程要求，對牛場牛只限制流通，并進一步采樣檢測。對陽性血清樣品對應(yīng)的牛只采集0-P 液封存，送上一級業(yè)務(wù)部門采用熒光PCR 方法進一步檢測，檢測結(jié)果為陰性。3 周后再次對該養(yǎng)牛場進行采樣、送樣，仍采用口熒光PCR 方法進行檢測，檢測結(jié)果仍為陰性。

3.4 提高蒙陰縣免疫質(zhì)量的建議

山東省免疫無口蹄疫和免疫無禽流感區(qū)建設(shè)已通過國家評估，建設(shè)過程中蒙陰縣進一步健全了動物防疫隊伍專業(yè)能力、全面提升了獸醫(yī)實驗室建設(shè)、持續(xù)增強了檢測能力。但要做到高標準維持無疫，做好無疫區(qū)的維持運行，現(xiàn)對蒙陰縣的口蹄疫防控工作提出3 點建議：①全縣口蹄疫免疫抗體合格率均在80%以上，但各鄉(xiāng)鎮(zhèn)免疫水平不均衡。2020 年對村級防疫員改革以來，每名防疫員負責(zé)6～7 個村，防疫人員素質(zhì)參差不齊，導(dǎo)致免疫質(zhì)量存在一定差距。下一步應(yīng)加大防疫員的培訓(xùn)力度，全面提升動物防疫水平。同時加大督導(dǎo)檢查力度，確保免疫水平較低的鄉(xiāng)鎮(zhèn)及時補免，保證抗體水平合格率；②全面推進強制免疫“先打后補”工作。應(yīng)按規(guī)模全面推行養(yǎng)殖場戶強制免疫“先打后補”，切實落實畜禽生產(chǎn)經(jīng)營者動物防疫主體責(zé)任。同時應(yīng)加大自購自免養(yǎng)殖場戶免疫效果抽檢力度，及時公布監(jiān)測評價結(jié)果；③進一步強化檢測能力。蒙陰縣動物疫病檢測工作起步較晚，人員隊伍相對薄弱、對檢測技術(shù)關(guān)鍵點的掌握還不夠成熟。需加強系統(tǒng)培訓(xùn)，通過走出去、請進來、自己學(xué)等多種方式全面提升蒙陰縣獸醫(yī)實驗室檢測技術(shù)水平?！?/p>