王沁園，王明瑞，丁向萍

（甘肅省第二人民醫(yī)院消化科，甘肅 蘭州 730030）

結(jié)直腸癌是常見的惡性腫瘤，該病在早期并無突出表現(xiàn)，只有部分患者出現(xiàn)腹瀉、身體消瘦等癥狀，部分患者確診時可能已錯過最佳手術(shù)機(jī)會[1]。腺瘤性息肉作為典型的癌前病變，其癌變速度較為緩慢，發(fā)展至腺癌的時間通常要持續(xù)幾年甚至十幾年，通過結(jié)腸鏡檢查能夠及早發(fā)現(xiàn)并確診結(jié)直腸息肉，但結(jié)直腸息肉切除術(shù)后仍有部分患者存在較高的癌變風(fēng)險，因此尋找一項(xiàng)結(jié)直腸息肉的觀察指標(biāo)用于評估其癌變風(fēng)險具有重要意義[2-3]。血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）具有促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移、血管新生的作用，既往報道指出，VEGF 在多種癌癥的侵襲和轉(zhuǎn)移過程中均有參與，在腫瘤發(fā)生、發(fā)展和治療中均有一定的指導(dǎo)意義[4-5]。本研究通過檢測結(jié)直腸息肉組織中VEGF的表達(dá)情況，分析其與患者臨床特征的相關(guān)性，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2022 年1 月至12 月甘肅省第二人民醫(yī)院收治的75 例結(jié)直腸息肉患者為結(jié)直腸息肉組，選取同期甘肅省第二人民醫(yī)院收治的20 例結(jié)直腸癌患者為結(jié)直腸癌組，另選取同期在甘肅省第二人民醫(yī)院行腸鏡下活檢且病理結(jié)果為正常的50 名體檢者作為對照組進(jìn)行回顧性分析。結(jié)直腸息肉組患者中男性42 例，女性33 例；年齡42～74 歲，平均年齡（57.62±12.84）歲；BMI 20～27 kg/m2，平均BMI（23.26±2.71）kg/m2。結(jié)直腸癌組患者中男性12 例，女性8 例；年齡45～75 歲，平均年齡（56.88±11.25）歲；BMI 20～27 kg/m2，平均BMI（23.75±2.10）kg/m2。對照組研究對象中男性28 名，女性22 名；年齡40～76 歲，平均年齡（56.27±11.94）歲；BMI 20～28 kg/m2，平均BMI（23.55±3.06）kg/m2。3 組研究對象一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），組間具有可比性。本研究經(jīng)甘肅省第二人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn)：①研究對象年齡為40～80 歲；②結(jié)直腸息肉、結(jié)直腸癌患者分別符合結(jié)直腸息肉[6]、結(jié)直腸癌[7]的診斷標(biāo)準(zhǔn)，并均經(jīng)病理檢查確診；③無嚴(yán)重感染者；④胃腸道穿孔者；⑤無其他惡性腫瘤者。排除標(biāo)準(zhǔn)：①妊娠、哺乳期女性；②入組前已接受放療、化療及其他治療者。

1.2 研究方法結(jié)直腸癌組患者取腫瘤組織、結(jié)直腸息肉組患者取息肉組織、對照組研究對象取正常腸黏膜組織并制作石蠟標(biāo)本，石蠟標(biāo)本均連續(xù)切片為4 μm 厚度，之后進(jìn)行免疫組化染色，具體步驟如下：使用二甲苯Ⅰ、Ⅱ（廣州化學(xué)試劑廠）5 mL 分別浸泡切片10 min，之后分別在無水乙醇、95%乙醇、75%乙醇中浸泡5 min，最后放入磷酸緩沖液（PBS）（武漢普諾賽生命科技有限公司）5 mL 中10 min。使用3%過氧化氫溶液浸泡切片10 min，之后使用PBS 沖洗5 min，共3 次。將切片置于枸櫞酸鹽緩沖液（上海尚寶生物科技有限公司）5 mL（pH=6.0）中，然后使用1 kW 微波爐加熱，持續(xù)10 min，加熱結(jié)束后待其降至室溫，再使用PBS 沖洗3 min，共3次。加入VEGF 抗體[羅丹明標(biāo)記VEGF 抗體免疫球蛋白G（IgG），上海滬震實(shí)業(yè)有限公司]后在4 ℃冰箱中孵育，持續(xù)24 h，孵育后放入37 ℃保溫箱（北京福意電器有限公司，型號：FYL-YS-150L）中待其恢復(fù)室溫，之后使用PBS 沖洗3 min，共3 次。加入二抗后在37 ℃保溫箱孵育15 min，繼續(xù)PBS 沖洗3 min，共3 次。加入10 mg 二氨基聯(lián)苯胺（DAB）（上海翊圣生物科技有限公司）、1 mL 蘇木素（上海科匯生物技術(shù)有限公司）復(fù)染、脫水、透明、封片，生物顯微鏡（南京貝登醫(yī)療股份有限公司，型號：EX01）下觀察攝片。染色結(jié)果判定：經(jīng)400×生物顯微鏡觀察，在切片隨機(jī)選擇5 個視野，VEGF 染色結(jié)果陽性的判定以細(xì)胞質(zhì)存在棕黃顆粒為標(biāo)準(zhǔn)。染色結(jié)果根據(jù)細(xì)胞中染色強(qiáng)度和比例進(jìn)行評估，染色強(qiáng)度依據(jù)無著色、淡黃色、棕黃色、棕褐色分別記為0、1、2、3 分，細(xì)胞陽性比例據(jù)0%～5%、6%～25%、26%～50%、51%～75%、＞75%分別記為0、1、2、3、4 分，最終評分為染色強(qiáng)度、細(xì)胞陽性比例評分的乘積，總分0～12 分，0～6 分為陰性表達(dá)，7～12 分為陽性表達(dá)[8]。采用實(shí)時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（qRT-PCR）檢測結(jié)直腸息肉組織、結(jié)直腸癌組織及正常結(jié)直腸黏膜組織的VEGF mRNA 相對表達(dá)水平。結(jié)果判定：設(shè)定正常結(jié)直腸黏膜表達(dá)水平為1，采用2-ΔΔCt法計(jì)算個樣品的VEGF mRNA 相對表達(dá)水平，分析各組的VEGF mRNA相對表達(dá)量[9]。

1.3 觀察指標(biāo)①比較3 組研究對象VEGF mRNA 相對表達(dá)量。②比較結(jié)直腸息肉組VEGF 陽性表達(dá)與陰性表達(dá)患者的臨床特征。③分析結(jié)直腸息肉組織VEGF 陽性表達(dá)與臨床特征的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS 22.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)量資料以（）表示，多組間比較采用方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以[例(%)]表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，等級資料比較采用秩和檢驗(yàn)；采用Spearman 相關(guān)系數(shù)進(jìn)行相關(guān)性分析。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3 組研究對象VEGF mRNA 相對表達(dá)量比較結(jié)直腸癌組、結(jié)直腸息肉組研究對象的VEGF mRNA 相對表達(dá)量高于對照組，結(jié)直腸癌組高于結(jié)直腸息肉組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 3 組研究對象VEGF mRNA 相對表達(dá)量比較（）

表1 3 組研究對象VEGF mRNA 相對表達(dá)量比較（）

注：與對照組比較，*P＜0.05；與結(jié)直腸癌組比較，#P＜0.05。VEGF：血管內(nèi)皮生長因子。

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2.2 結(jié)直腸息肉組VEGF 陽性表達(dá)與陰性表達(dá)患者的臨床特征比較75 例結(jié)直腸息肉患者中，26 例為VEGF 陽性表達(dá)，49 例為VEGF 陰性表達(dá)，兩組患者性別、年齡、病理類型比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；VEGF 陽性表達(dá)患者多發(fā)性息肉、息肉直徑＞2 cm、息肉表面為分葉狀及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移占比高于VEGF 陰性表達(dá)患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

2.3 結(jié)直腸息肉組織VEGF 陽性表達(dá)與臨床特征的相關(guān)性分析相關(guān)性分析顯示，VEGF 陽性表達(dá)與息肉數(shù)量、息肉直徑、息肉表面為分葉狀及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)（P＜0.05），與性別、年齡、病理類型無明顯相關(guān)性（P＞0.05），見表3。

3 討論

結(jié)直腸息肉屬于消化系統(tǒng)常見病，依據(jù)病理分型可分為非腫瘤性和腫瘤性息肉兩大類型，前者主要為增生性息肉，后者則包含絨毛狀、管狀腺瘤性息肉等[10]。作為結(jié)直腸癌的癌前病變，結(jié)直腸腺瘤性息肉經(jīng)過數(shù)年時間可能發(fā)展為腺癌，因此及早發(fā)現(xiàn)并抑制腺瘤息肉的癌變對于降低結(jié)直腸癌發(fā)病率具有重要意義，目前已發(fā)現(xiàn)“結(jié)直腸腺瘤-癌”這一病理過程中有多種關(guān)鍵參與基因，但結(jié)直腸息肉癌前病變的發(fā)生發(fā)展機(jī)制仍未完全闡明[11]。本研究通過觀察結(jié)直腸息肉組織中VEGF 的表達(dá)，并分析其與臨床特征的相關(guān)性，探究VEGF 與病理進(jìn)程的關(guān)系。

本研究顯示，結(jié)直腸癌組、結(jié)直腸息肉組研究對象的VEGF mRNA 相對表達(dá)量高于對照組，結(jié)直腸癌組高于結(jié)直腸息肉組，提示VEGF 在結(jié)直腸息肉的形成和進(jìn)展中具有重要作用，也可在一定程度上反映其癌變的進(jìn)程。VEGF的生理作用在于能夠促進(jìn)腫瘤血管生成，在腫瘤細(xì)胞的生長、遷移等生理病理過程中均有促進(jìn)作用，VEGF 在缺氧環(huán)境中呈現(xiàn)高表達(dá)，而其高表達(dá)又會進(jìn)一步促進(jìn)腫瘤組織血管新生[12]。從正常結(jié)直腸黏膜到結(jié)直腸息肉，再到結(jié)直腸癌，VEGF mRNA 相對表達(dá)量逐漸升高，提示細(xì)胞增生的活性逐步提高，腫瘤癌變的風(fēng)險提高，促進(jìn)結(jié)直腸癌的發(fā)生[13]。蔣潤梅等[14]研究VEGF 在結(jié)直腸癌中的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)VEGF 在結(jié)直腸癌組織中呈現(xiàn)高表達(dá)，且高于其在結(jié)直腸腺瘤組織中的表達(dá)，該結(jié)論與本研究結(jié)果互為印證。

本研究結(jié)果顯示，VEGF 陽性表達(dá)患者多發(fā)性息肉、息肉直徑＞2 cm、息肉表面為分葉狀及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移占比高于VEGF 陰性表達(dá)患者，提示VEGF 陽性表達(dá)與息肉數(shù)量、息肉直徑、息肉表面為分葉狀及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床特征有關(guān)，符合以上特征的結(jié)直腸息肉患者VEGF 陽性表達(dá)率較高，具有較高的癌變風(fēng)險。結(jié)直腸息肉生長緩慢，臨床及早發(fā)現(xiàn)、確診并摘除息肉有利于改善患者的臨床癥狀，降低結(jié)直腸癌的發(fā)病風(fēng)險。另外，本研究發(fā)現(xiàn)VEGF 陽性表達(dá)與息肉數(shù)量、息肉直徑、息肉表面為分葉狀及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，提示VEGF 的表達(dá)在結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展、侵襲和轉(zhuǎn)移等病理過程中均具有重要作用，臨床可通過檢測VEGF 陽性表達(dá)為該病的治療和腫瘤轉(zhuǎn)移的預(yù)測提供指導(dǎo)，也可作為預(yù)測結(jié)直腸息肉、結(jié)直腸癌患者預(yù)后的參考指標(biāo)。

綜上所述，具有多發(fā)性息肉、息肉直徑＞2 cm、息肉表面為分葉狀及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床特征的結(jié)直腸息肉患者VEGF 陽性表達(dá)較高，并且以上臨床特征與VEGF 陽性表達(dá)呈正相關(guān)，通過檢測結(jié)直腸息肉組織VEGF 的表達(dá)，或可用于指導(dǎo)患者病情和預(yù)后的評估。