王沁園,王明瑞,丁向萍
(甘肅省第二人民醫(yī)院消化科,甘肅 蘭州 730030)
結(jié)直腸癌是常見(jiàn)的惡性腫瘤,該病在早期并無(wú)突出表現(xiàn),只有部分患者出現(xiàn)腹瀉、身體消瘦等癥狀,部分患者確診時(shí)可能已錯(cuò)過(guò)最佳手術(shù)機(jī)會(huì)[1]。腺瘤性息肉作為典型的癌前病變,其癌變速度較為緩慢,發(fā)展至腺癌的時(shí)間通常要持續(xù)幾年甚至十幾年,通過(guò)結(jié)腸鏡檢查能夠及早發(fā)現(xiàn)并確診結(jié)直腸息肉,但結(jié)直腸息肉切除術(shù)后仍有部分患者存在較高的癌變風(fēng)險(xiǎn),因此尋找一項(xiàng)結(jié)直腸息肉的觀察指標(biāo)用于評(píng)估其癌變風(fēng)險(xiǎn)具有重要意義[2-3]。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)具有促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移、血管新生的作用,既往報(bào)道指出,VEGF 在多種癌癥的侵襲和轉(zhuǎn)移過(guò)程中均有參與,在腫瘤發(fā)生、發(fā)展和治療中均有一定的指導(dǎo)意義[4-5]。本研究通過(guò)檢測(cè)結(jié)直腸息肉組織中VEGF的表達(dá)情況,分析其與患者臨床特征的相關(guān)性,現(xiàn)報(bào)道如下。
1.1 一般資料選取2022 年1 月至12 月甘肅省第二人民醫(yī)院收治的75 例結(jié)直腸息肉患者為結(jié)直腸息肉組,選取同期甘肅省第二人民醫(yī)院收治的20 例結(jié)直腸癌患者為結(jié)直腸癌組,另選取同期在甘肅省第二人民醫(yī)院行腸鏡下活檢且病理結(jié)果為正常的50 名體檢者作為對(duì)照組進(jìn)行回顧性分析。結(jié)直腸息肉組患者中男性42 例,女性33 例;年齡42~74 歲,平均年齡(57.62±12.84)歲;BMI 20~27 kg/m2,平均BMI(23.26±2.71)kg/m2。結(jié)直腸癌組患者中男性12 例,女性8 例;年齡45~75 歲,平均年齡(56.88±11.25)歲;BMI 20~27 kg/m2,平均BMI(23.75±2.10)kg/m2。對(duì)照組研究對(duì)象中男性28 名,女性22 名;年齡40~76 歲,平均年齡(56.27±11.94)歲;BMI 20~28 kg/m2,平均BMI(23.55±3.06)kg/m2。3 組研究對(duì)象一般資料比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),組間具有可比性。本研究經(jīng)甘肅省第二人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn):①研究對(duì)象年齡為40~80 歲;②結(jié)直腸息肉、結(jié)直腸癌患者分別符合結(jié)直腸息肉[6]、結(jié)直腸癌[7]的診斷標(biāo)準(zhǔn),并均經(jīng)病理檢查確診;③無(wú)嚴(yán)重感染者;④胃腸道穿孔者;⑤無(wú)其他惡性腫瘤者。排除標(biāo)準(zhǔn):①妊娠、哺乳期女性;②入組前已接受放療、化療及其他治療者。
1.2 研究方法結(jié)直腸癌組患者取腫瘤組織、結(jié)直腸息肉組患者取息肉組織、對(duì)照組研究對(duì)象取正常腸黏膜組織并制作石蠟標(biāo)本,石蠟標(biāo)本均連續(xù)切片為4 μm 厚度,之后進(jìn)行免疫組化染色,具體步驟如下:使用二甲苯Ⅰ、Ⅱ(廣州化學(xué)試劑廠)5 mL 分別浸泡切片10 min,之后分別在無(wú)水乙醇、95%乙醇、75%乙醇中浸泡5 min,最后放入磷酸緩沖液(PBS)(武漢普諾賽生命科技有限公司)5 mL 中10 min。使用3%過(guò)氧化氫溶液浸泡切片10 min,之后使用PBS 沖洗5 min,共3 次。將切片置于枸櫞酸鹽緩沖液(上海尚寶生物科技有限公司)5 mL(pH=6.0)中,然后使用1 kW 微波爐加熱,持續(xù)10 min,加熱結(jié)束后待其降至室溫,再使用PBS 沖洗3 min,共3次。加入VEGF 抗體[羅丹明標(biāo)記VEGF 抗體免疫球蛋白G(IgG),上海滬震實(shí)業(yè)有限公司]后在4 ℃冰箱中孵育,持續(xù)24 h,孵育后放入37 ℃保溫箱(北京福意電器有限公司,型號(hào):FYL-YS-150L)中待其恢復(fù)室溫,之后使用PBS 沖洗3 min,共3 次。加入二抗后在37 ℃保溫箱孵育15 min,繼續(xù)PBS 沖洗3 min,共3 次。加入10 mg 二氨基聯(lián)苯胺(DAB)(上海翊圣生物科技有限公司)、1 mL 蘇木素(上海科匯生物技術(shù)有限公司)復(fù)染、脫水、透明、封片,生物顯微鏡(南京貝登醫(yī)療股份有限公司,型號(hào):EX01)下觀察攝片。染色結(jié)果判定:經(jīng)400×生物顯微鏡觀察,在切片隨機(jī)選擇5 個(gè)視野,VEGF 染色結(jié)果陽(yáng)性的判定以細(xì)胞質(zhì)存在棕黃顆粒為標(biāo)準(zhǔn)。染色結(jié)果根據(jù)細(xì)胞中染色強(qiáng)度和比例進(jìn)行評(píng)估,染色強(qiáng)度依據(jù)無(wú)著色、淡黃色、棕黃色、棕褐色分別記為0、1、2、3 分,細(xì)胞陽(yáng)性比例據(jù)0%~5%、6%~25%、26%~50%、51%~75%、>75%分別記為0、1、2、3、4 分,最終評(píng)分為染色強(qiáng)度、細(xì)胞陽(yáng)性比例評(píng)分的乘積,總分0~12 分,0~6 分為陰性表達(dá),7~12 分為陽(yáng)性表達(dá)[8]。采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(qRT-PCR)檢測(cè)結(jié)直腸息肉組織、結(jié)直腸癌組織及正常結(jié)直腸黏膜組織的VEGF mRNA 相對(duì)表達(dá)水平。結(jié)果判定:設(shè)定正常結(jié)直腸黏膜表達(dá)水平為1,采用2-ΔΔCt法計(jì)算個(gè)樣品的VEGF mRNA 相對(duì)表達(dá)水平,分析各組的VEGF mRNA相對(duì)表達(dá)量[9]。
1.3 觀察指標(biāo)①比較3 組研究對(duì)象VEGF mRNA 相對(duì)表達(dá)量。②比較結(jié)直腸息肉組VEGF 陽(yáng)性表達(dá)與陰性表達(dá)患者的臨床特征。③分析結(jié)直腸息肉組織VEGF 陽(yáng)性表達(dá)與臨床特征的相關(guān)性。
1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS 22.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)量資料以()表示,多組間比較采用方差分析,兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn),兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料以[例(%)]表示,組間比較采用χ2檢驗(yàn),等級(jí)資料比較采用秩和檢驗(yàn);采用Spearman 相關(guān)系數(shù)進(jìn)行相關(guān)性分析。以P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2.1 3 組研究對(duì)象VEGF mRNA 相對(duì)表達(dá)量比較結(jié)直腸癌組、結(jié)直腸息肉組研究對(duì)象的VEGF mRNA 相對(duì)表達(dá)量高于對(duì)照組,結(jié)直腸癌組高于結(jié)直腸息肉組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見(jiàn)表1。
表1 3 組研究對(duì)象VEGF mRNA 相對(duì)表達(dá)量比較()
表1 3 組研究對(duì)象VEGF mRNA 相對(duì)表達(dá)量比較()
注:與對(duì)照組比較,*P<0.05;與結(jié)直腸癌組比較,#P<0.05。VEGF:血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子。
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2.2 結(jié)直腸息肉組VEGF 陽(yáng)性表達(dá)與陰性表達(dá)患者的臨床特征比較75 例結(jié)直腸息肉患者中,26 例為VEGF 陽(yáng)性表達(dá),49 例為VEGF 陰性表達(dá),兩組患者性別、年齡、病理類型比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);VEGF 陽(yáng)性表達(dá)患者多發(fā)性息肉、息肉直徑>2 cm、息肉表面為分葉狀及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移占比高于VEGF 陰性表達(dá)患者,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見(jiàn)表2。
2.3 結(jié)直腸息肉組織VEGF 陽(yáng)性表達(dá)與臨床特征的相關(guān)性分析相關(guān)性分析顯示,VEGF 陽(yáng)性表達(dá)與息肉數(shù)量、息肉直徑、息肉表面為分葉狀及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)(P<0.05),與性別、年齡、病理類型無(wú)明顯相關(guān)性(P>0.05),見(jiàn)表3。
結(jié)直腸息肉屬于消化系統(tǒng)常見(jiàn)病,依據(jù)病理分型可分為非腫瘤性和腫瘤性息肉兩大類型,前者主要為增生性息肉,后者則包含絨毛狀、管狀腺瘤性息肉等[10]。作為結(jié)直腸癌的癌前病變,結(jié)直腸腺瘤性息肉經(jīng)過(guò)數(shù)年時(shí)間可能發(fā)展為腺癌,因此及早發(fā)現(xiàn)并抑制腺瘤息肉的癌變對(duì)于降低結(jié)直腸癌發(fā)病率具有重要意義,目前已發(fā)現(xiàn)“結(jié)直腸腺瘤-癌”這一病理過(guò)程中有多種關(guān)鍵參與基因,但結(jié)直腸息肉癌前病變的發(fā)生發(fā)展機(jī)制仍未完全闡明[11]。本研究通過(guò)觀察結(jié)直腸息肉組織中VEGF 的表達(dá),并分析其與臨床特征的相關(guān)性,探究VEGF 與病理進(jìn)程的關(guān)系。
本研究顯示,結(jié)直腸癌組、結(jié)直腸息肉組研究對(duì)象的VEGF mRNA 相對(duì)表達(dá)量高于對(duì)照組,結(jié)直腸癌組高于結(jié)直腸息肉組,提示VEGF 在結(jié)直腸息肉的形成和進(jìn)展中具有重要作用,也可在一定程度上反映其癌變的進(jìn)程。VEGF的生理作用在于能夠促進(jìn)腫瘤血管生成,在腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、遷移等生理病理過(guò)程中均有促進(jìn)作用,VEGF 在缺氧環(huán)境中呈現(xiàn)高表達(dá),而其高表達(dá)又會(huì)進(jìn)一步促進(jìn)腫瘤組織血管新生[12]。從正常結(jié)直腸黏膜到結(jié)直腸息肉,再到結(jié)直腸癌,VEGF mRNA 相對(duì)表達(dá)量逐漸升高,提示細(xì)胞增生的活性逐步提高,腫瘤癌變的風(fēng)險(xiǎn)提高,促進(jìn)結(jié)直腸癌的發(fā)生[13]。蔣潤(rùn)梅等[14]研究VEGF 在結(jié)直腸癌中的表達(dá),發(fā)現(xiàn)VEGF 在結(jié)直腸癌組織中呈現(xiàn)高表達(dá),且高于其在結(jié)直腸腺瘤組織中的表達(dá),該結(jié)論與本研究結(jié)果互為印證。
本研究結(jié)果顯示,VEGF 陽(yáng)性表達(dá)患者多發(fā)性息肉、息肉直徑>2 cm、息肉表面為分葉狀及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移占比高于VEGF 陰性表達(dá)患者,提示VEGF 陽(yáng)性表達(dá)與息肉數(shù)量、息肉直徑、息肉表面為分葉狀及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床特征有關(guān),符合以上特征的結(jié)直腸息肉患者VEGF 陽(yáng)性表達(dá)率較高,具有較高的癌變風(fēng)險(xiǎn)。結(jié)直腸息肉生長(zhǎng)緩慢,臨床及早發(fā)現(xiàn)、確診并摘除息肉有利于改善患者的臨床癥狀,降低結(jié)直腸癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。另外,本研究發(fā)現(xiàn)VEGF 陽(yáng)性表達(dá)與息肉數(shù)量、息肉直徑、息肉表面為分葉狀及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān),提示VEGF 的表達(dá)在結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展、侵襲和轉(zhuǎn)移等病理過(guò)程中均具有重要作用,臨床可通過(guò)檢測(cè)VEGF 陽(yáng)性表達(dá)為該病的治療和腫瘤轉(zhuǎn)移的預(yù)測(cè)提供指導(dǎo),也可作為預(yù)測(cè)結(jié)直腸息肉、結(jié)直腸癌患者預(yù)后的參考指標(biāo)。
綜上所述,具有多發(fā)性息肉、息肉直徑>2 cm、息肉表面為分葉狀及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床特征的結(jié)直腸息肉患者VEGF 陽(yáng)性表達(dá)較高,并且以上臨床特征與VEGF 陽(yáng)性表達(dá)呈正相關(guān),通過(guò)檢測(cè)結(jié)直腸息肉組織VEGF 的表達(dá),或可用于指導(dǎo)患者病情和預(yù)后的評(píng)估。