劉智民 ，任鵬飛 ，韓心語(yǔ) ，喬夢(mèng)麗 ，牛 勝 ，王 穎 ，任建樂(lè) ，趙宇軍 ，張 鼎 ，范瑞文 ，畢玉海 ，2，田文霞

（1.山西農(nóng)業(yè)大學(xué) 動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院，山西 太谷 030801；2.中國(guó)科學(xué)院微生物研究所病原微生物與免疫學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/中國(guó)科學(xué)院 流感監(jiān)測(cè)與預(yù)警中心，北京 100101）

H9N2 亞型禽流感病毒（Avian influenza virus，AIV）可引起雞的免疫抑制性疾病，給家禽業(yè)帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)損失。AIV 是20 世紀(jì)90 年代初首次在我國(guó)雞群中發(fā)現(xiàn)和分離的一種病毒，在發(fā)現(xiàn)后的幾十年中逐漸發(fā)展成大部分地區(qū)家禽養(yǎng)殖的地方病[1]。H9N2 AIV 屬于低致病性禽流感病毒，但因其變異能力強(qiáng)、流行范圍廣而成為最難防控的禽流感亞型之一。目前，雖然疫苗防控研究已取得一定進(jìn)展，但沒(méi)有從根本上阻斷其流行和傳播。

紅細(xì)胞不僅能夠運(yùn)輸氧氣，還參與機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)反應(yīng)。1981 年，“紅細(xì)胞免疫系統(tǒng)”的概念首次由SIEGEL 等[2]提出，他們的研究鑒定了紅細(xì)胞的多種免疫功能，并發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞是通過(guò)免疫黏附作用發(fā)揮其免疫功能。人紅細(xì)胞是紅細(xì)胞免疫領(lǐng)域研究的重點(diǎn)，動(dòng)物中有關(guān)核紅細(xì)胞免疫功能方面的研究側(cè)重于魚類和爬行類，但關(guān)于雞紅細(xì)胞參與機(jī)體免疫反應(yīng)的研究較少。模式識(shí)別受體的識(shí)別是機(jī)體抵抗病原感染的第一步，也是機(jī)體誘導(dǎo)天然免疫反應(yīng)的關(guān)鍵一步。Toll 樣受體（TLRs）是發(fā)揮模式識(shí)別功能最重要的受體之一，當(dāng)外界病原入侵機(jī)體，TLRs 能立刻識(shí)別病原相關(guān)配體，激活下游相應(yīng)細(xì)胞因子，啟動(dòng)天然免疫應(yīng)答反應(yīng)[3]。白細(xì)胞介素（Interleukin，IL）是一種細(xì)胞因子，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)39 種[4]，它們?cè)诿庖呒?xì)胞的成熟、活化、調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用，可參與炎癥反應(yīng)和免疫反應(yīng)。最新研究發(fā)現(xiàn)，這些ILs 的mRNA 表達(dá)量隨著病毒入侵機(jī)體而發(fā)生變化。JAHEJO 等[5]研究發(fā)現(xiàn)，IL-7在感染馬立克氏病毒（Marek’s disease virus，MDV）的雞紅細(xì)胞中的表達(dá)量與對(duì)照組相比顯著上升，而IL-12和IL-13的表達(dá)量顯著降低。董建國(guó)等[6]研究發(fā)現(xiàn)，PK15（豬腎細(xì)胞）感染A型塞內(nèi)卡病毒（SVA）后，IL-6表達(dá)水平顯著上升。BOULASSEL 等[7]和胡寬修等[8]研究均發(fā)現(xiàn)，感染HIV-1 的患者體內(nèi)IL-15和IL-16的表達(dá)量明顯上升。雞感染禽白血病病毒（ALV-J）后，單核細(xì)胞中IL-18mRNA 的表達(dá)水平升高[9]。感染流感A 病毒（Influenza a virus，IAV）后期，患者血清和外周血單核細(xì)胞（PBMC）中IL-34表達(dá)量升高[10]。因此，鑒定H9N2 感染雞后紅細(xì)胞中ILs 表達(dá)水平的變化有助于更深入研究H9N2 的致病和免疫機(jī)理。

目前，關(guān)于H9N2 感染雞紅細(xì)胞后ILs 的表達(dá)水平變化仍未見報(bào)道。本研究通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR 鑒定H9N2 感染雞紅細(xì)胞后不同白細(xì)胞介素（IL-6、IL-7、IL-12、IL-13、IL-15、IL-16、IL-18、IL-34）的表達(dá)水平，旨在為研究雞紅細(xì)胞在感染H9N2 后ILs 相關(guān)基因參與免疫調(diào)節(jié)功能以及防治H9N2 提供理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 毒株 禽流感病毒H9N2 亞型山西毒株A/chicken/Shanxi/1.23 TGRL003-O/2019 由山西農(nóng)業(yè)大學(xué)生物制品實(shí)驗(yàn)室保存；SPF 雞胚購(gòu)自山東濟(jì)南賽福實(shí)驗(yàn)動(dòng)物養(yǎng)殖有限公司；SPF 雞和H9N2 免疫雞血清購(gòu)自山西太谷隆科爾公司。

1.1.2 試劑 RNAiso plus 2000、熒光定量PCR 試劑盒(AK6003）、反轉(zhuǎn)錄試劑盒（AK3020）、淋巴細(xì)胞分離液均購(gòu)自大連Takara 寶生物工程公司。DMEM 培養(yǎng)基購(gòu)自美國(guó)HyClone 公司。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 H9N2 體外感染雞紅細(xì)胞 翅靜脈采集SPF 雞新鮮血液，參考NIU 等[11]的方法分離紅細(xì)胞（大約5.0×109個(gè)）用于后續(xù)試驗(yàn)。試驗(yàn)組根據(jù)紅細(xì)胞與H9N2 共孵育的時(shí)間分為4 組：0 h 組、2 h組、6 h 組和10 h 組，每組4 個(gè)重復(fù)。每個(gè)離心管中先加入50 μL 紅細(xì)胞，然后加入100 μL 的H9N2 AIV 尿囊液（病毒滴度7×㏒2）和900 μL 的細(xì)胞維持液DMEM。在對(duì)照組的4 個(gè)離心管中直接加入50 μL 紅細(xì)胞和1 000 μL 的細(xì)胞維持液DMEM。將4 組紅細(xì)胞與H9N2 混合后在37 ℃培養(yǎng)箱分別孵育0、2、6、10 h 后，2 000 r/min 離心20 min，重新分離紅細(xì)胞，然后用PBS 洗滌3 次，用于后續(xù)試驗(yàn)。1.2.2 H9N2感染雛雞 選擇1日齡SPF雛雞48羽，隨機(jī)分為攻毒組和對(duì)照組（每組各24 羽）。預(yù)飼期7 d，預(yù)飼期結(jié)束后，試驗(yàn)組滴鼻接種H9N2 亞型禽流感尿囊液（病毒滴度7×㏒2）0.2 mL/只，對(duì)照組滴鼻接種相同體積的PBS 緩沖液。攻毒后第3、7、14 天從2 組中各隨機(jī)選取5 只進(jìn)行心臟采血（2 mL/只），抗凝處理后用于后續(xù)試驗(yàn)。

1.2.3 紅細(xì)胞的分離 心臟采集4 mL 新鮮血液保存于抗凝管中，采用淋巴細(xì)胞分離液分離紅細(xì)胞。按淋巴細(xì)胞分離液∶血液∶無(wú)菌PBS 比例為2∶1∶1使用，首先將抗凝血與等體積無(wú)菌PBS 混勻，隨后緩慢傾斜加入到等體積的淋巴細(xì)胞分離液中，避免發(fā)生混合，2 000 r/min 離心20 min，棄去最上層的血清和中間層的淋巴細(xì)胞，分離得到紅細(xì)胞，再用無(wú)菌PBS 洗滌紅細(xì)胞，2 000 r/min 離心12 min，重復(fù)3 次。

1.2.4 RNA 提取與cDNA 合成 按照1.2.3 方法從血液樣品中分離得到紅細(xì)胞，收集25 μL 紅細(xì)胞，采用Trizol 法提取總RNA?？俁NA 的濃度和純度通過(guò)1.5%瓊脂凝膠電泳和核酸測(cè)定儀檢測(cè)。評(píng)估核糖核酸質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn)是凝膠中可以看到28 S和18 S 條帶且RNA 的A260/A280值為1.9～2.1。根據(jù)反轉(zhuǎn)錄試劑盒（南京諾唯贊生物科技有限公司）的操作步驟，將總RNA 反轉(zhuǎn)錄為cDNA，保存至-20 ℃，用于后續(xù)的熒光定量PCR 檢測(cè)cDNA。

1.2.5 熒光定量PCR 根據(jù)NCBI 數(shù)據(jù)庫(kù)中8 種白細(xì)胞介素的CDS 序列信息，使用Primer 5.0 軟件設(shè)計(jì)引物，引物序列如表1 所示。熒光定量PCR 采用10.0 μL 反應(yīng)體系，其中SYBR?Premix Ex Taq?II（2×）5.0 μL，ROX Reference Dye II（50×）0.1 μL，上下游引物各0.25 μL（100 μmol/L），cDNA 模板1.0 μL，ddH2O 3.4 μL。反應(yīng)條件為：95 ℃ 3 min；95 ℃ 30 s，55 ℃ 30 s，共42 個(gè)循環(huán)，每個(gè)樣品設(shè)置4 個(gè)重復(fù)。

表1 定量PCR 引物信息Tab.1 Primers of real-time qPCR

1.3 數(shù)據(jù)分析

以18S rRNA 作為標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)參基因，使用2-ΔΔct方法計(jì)算目的基因在不同時(shí)間段試驗(yàn)組的表達(dá)差異。使用GraphPad Prism 5.0 進(jìn)行上述基因表達(dá)量數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示，P＜0.05代表具有顯著性差異。

2 結(jié)果與分析

2.1 體外感染H9N2 AIV 后雞紅細(xì)胞中ILs 相關(guān)基因的mRNA 表達(dá)變化

熒光定量PCR 結(jié)果如圖1 所示，H9N2 體外感染雞紅細(xì)胞后，與對(duì)照組相比，IL-6的表達(dá)水平在感染后期（6、10 h）顯著上升（P＜0.05）；IL-7在0、6 h 顯著上升（P＜0.05），在2 h 顯著下降（P＜0.05）；IL-12的表達(dá)量在0、6 h 都顯著升高（P＜0.05），0 h 的表達(dá)量高于6 h；IL-13的表達(dá)水平在感染病毒后0、6 h 顯著下降（P＜0.05）；IL-15在感染早期（0 h）顯著上調(diào)（P＜0.05），而在感染的中間點(diǎn)（2、6 h）顯著下調(diào)（P＜0.05）；IL-16僅在感染后2 h 顯著下調(diào)（P＜0.05），在其余感染時(shí)間點(diǎn)無(wú)顯著變化；IL-18在感染第2、6 h 顯著上調(diào)（P＜0.05），并且在6 h 上調(diào)程度更高；IL-34在感染后的0、2、6、10 h 表達(dá)水平有輕微的波動(dòng)，變化規(guī)律不明顯。

圖1 體外H9N2 AIV 感染雞紅細(xì)胞后各IL 相關(guān)基因mRNA 表達(dá)變化Fig.1 mRNA expression change of the IL-related genes in chicken erythrocytes infected by H9N2 AIV in vitro

2.2 體內(nèi)攻毒后雞紅細(xì)胞中IL 相關(guān)基因的mRNA表達(dá)變化

熒光定量PCR 結(jié)果如圖2 所示，體內(nèi)感染H9N2 AIV 后，與對(duì)照組相比，IL-6的表達(dá)水平在攻毒3 d 顯著下降（P＜0.05），在體內(nèi)攻毒7 d 顯著上升（P＜0.05）；IL-7在攻毒后的3、7、14 d 都顯著上升（P＜0.05），并在14 d 時(shí)達(dá)最高；IL-12、IL-13、IL-15、IL-16的表達(dá)量在攻毒后的7、14 d 顯著升高（P＜0.05），并且在攻毒14 d 的表達(dá)量高于7 d 表達(dá)量；IL-18的表達(dá)水平在體內(nèi)攻毒3 d 沒(méi)有顯著變化，7 d 時(shí)顯著上升（P＜0.05），而在14 d 時(shí)顯著下降（P＜0.05）；IL-34在體內(nèi)攻毒3 d 時(shí)顯著下降（P＜0.05），7、14 d 顯著上升（P＜0.05）。

圖2 體內(nèi)攻毒后雞紅細(xì)胞中各IL 相關(guān)基因mRNA 表達(dá)變化Fig.2 The mRNA expression change of the IL-related genes in chicken erythrocytes infected by H9N2 AIV in vivo

3 結(jié)論與討論

近年來(lái)，雞紅細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)功能受到越來(lái)越多的關(guān)注。TLR 已被確定為脊椎動(dòng)物先天免疫識(shí)別的關(guān)鍵受體之一[12-13]，近期研究發(fā)現(xiàn)，雞紅細(xì)胞可表達(dá)多種TLRs[14]。IL 可以通過(guò)TLR 與其配體的相互作用來(lái)誘導(dǎo)ILs 的表達(dá)，如IL-1β、IL-6和IL-8[15]。本研究結(jié)果顯示，雞紅細(xì)胞中8 個(gè)免疫相關(guān)基因IL-6、IL-7、IL-12、IL-13、IL-15、IL-16、IL-18和IL-34均表達(dá)，這些基因可能通過(guò)表達(dá)水平的變化參與紅細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)作用。

IL-6是一種多種功能細(xì)胞因子，既是一種促炎細(xì)胞因子，又是一種抗炎的肌氨酸，在雞的免疫反應(yīng)中起著重要的調(diào)節(jié)作用[16]。IL-6被證明具有很強(qiáng)的生物佐劑活性，可增強(qiáng)機(jī)體免疫功能[17]。本研究結(jié)果顯示，IL-6的mRNA 表達(dá)水平在體內(nèi)攻毒后3 d 顯著下降，可能是由于病毒增殖速度快，在體內(nèi)拷貝數(shù)較高，抑制了IL-6的表達(dá)，導(dǎo)致其在3 d表達(dá)量降低。IL-6的mRNA 表達(dá)水平在感染后期（體外孵育后6、10 h 和攻毒后的7 d）表達(dá)量顯著上調(diào)。有報(bào)道稱，IL-6能夠有效改善感染流感病毒引起的肺損傷[18]，據(jù)此推測(cè)IL-6的mRNA 表達(dá)水平在感染后期升高，一方面改善了病毒感染對(duì)機(jī)體的損傷；另一方面增強(qiáng)了機(jī)體的免疫功能，對(duì)機(jī)體免疫穩(wěn)態(tài)維持起調(diào)節(jié)作用。

IL-7主要由淋巴組織、胸腺和骨髓的基質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生，不僅在T 細(xì)胞分化中起作用，也在B 細(xì)胞的分化、增殖、成熟和維持過(guò)程中發(fā)揮重要作用[19-20]。IL-7是一種促炎細(xì)胞因子，其在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)和活化可刺激炎性細(xì)胞產(chǎn)生大量致炎因子，致炎因子可調(diào)控炎癥過(guò)程各組分之間的相互作用，維持機(jī)體免疫平衡。有研究表明，IL-7重組蛋白具有較強(qiáng)的免疫增強(qiáng)活性[21]。本研究結(jié)果顯示，IL-7的表達(dá)水平在體外感染H9N2 AIV 后0、6 h 以及體內(nèi)攻毒后的3、7 d 顯著上升，這與HIV 感染者體內(nèi)IL-7水平升高結(jié)果一致[22]，推測(cè)紅細(xì)胞在該時(shí)間段可能通過(guò)上調(diào)IL-7的表達(dá)量來(lái)提高B 細(xì)胞和T 細(xì)胞免疫功能，控制由病毒感染引起的炎癥過(guò)程，但其具體的免疫機(jī)制還有待進(jìn)一步證實(shí)。

IL-12是由Th1 細(xì)胞及樹突細(xì)胞分泌的一種促炎性細(xì)胞因子，可以調(diào)節(jié)輔助T 細(xì)胞的分化，誘導(dǎo)NK 細(xì)胞和Th1 細(xì)胞分泌γ-干擾素（Interferon-γ，IFN-γ）。IFN-γ 屬于II 型干擾素，在免疫調(diào)節(jié)和抗病毒方面發(fā)揮重要作用。雞IL-12的結(jié)構(gòu)和功能與哺乳動(dòng)物IL-12相似[23]，并且重組IL-12可作為生物佐劑在雞脾細(xì)胞中誘導(dǎo)高水平的IFN-γ表達(dá)。本研究結(jié)果顯示，隨著感染的時(shí)間增加，病毒的載量和活性逐漸降低，IL-12的表達(dá)量也隨之降低，這與李潔萍等[24]的試驗(yàn)結(jié)果一致，其結(jié)果顯示，慢性乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus，HBV）感染患者血清蛋白IL-12水平和HBV DNA 載量呈現(xiàn)正相關(guān)。但值得注意的是，體內(nèi)IL-12的mRNA 表達(dá)量的變化趨勢(shì)與體外表達(dá)量變化趨勢(shì)相反，說(shuō)明體內(nèi)外免疫機(jī)制不同，具體機(jī)制還有待進(jìn)一步證實(shí)。

IL-13是一種抗炎細(xì)胞因子，屬于B 細(xì)胞因子家族，主要在機(jī)體體液免疫反應(yīng)中發(fā)揮作用，可通過(guò)參與機(jī)體免疫反應(yīng)、造血和刺激急性期反應(yīng)促進(jìn)宿主防御機(jī)制[25]，并可顯著降低細(xì)胞毒性單核細(xì)胞功能和抑制單核細(xì)胞分泌促炎性遞質(zhì)進(jìn)而控制炎癥反應(yīng)。李杰等[26]研究健脾益氣方對(duì)人類免疫缺陷患者（Human immunodeficiency virus，HIV）體內(nèi)病毒載量與IL-13相關(guān)性時(shí)，發(fā)現(xiàn)IL-13水平在治療前后存在明顯差異，治療后體內(nèi)病毒載量降低且IL-13水平顯著升高。有文獻(xiàn)報(bào)道，IL-13表達(dá)量的升高影響了病毒DNA 合成，顯著降低HIV 病毒的感染性，對(duì)病毒活性有抑制作用[27]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，隨著攻毒時(shí)間的推移，IL-13的表達(dá)水平在檢測(cè)的3 個(gè)時(shí)間點(diǎn)（3、7、14 d）逐漸上升，與前2 個(gè)研究結(jié)果完全一致。

IL-15在NK 細(xì)胞發(fā)育、成熟、增殖、活化以及向炎癥部位的遷移具有調(diào)節(jié)能力，對(duì)NK 細(xì)胞免疫應(yīng)答有重要作用，因此，能夠響應(yīng)感染并抑制病毒復(fù)制。哺乳動(dòng)物體內(nèi)的IL-15 在B 細(xì)胞的增殖和分化、CD4+T 細(xì)胞的發(fā)育、自然殺傷細(xì)胞的增殖中都具有重要作用，在炎癥反應(yīng)中IL-15通過(guò)多種途徑發(fā)揮促炎癥作用。LIM 等[28]研究表明，雞IL-15在增強(qiáng)體液免疫應(yīng)答過(guò)程中發(fā)揮作用。BOULASSEL等[7]研究發(fā)現(xiàn)，感染HIV-1 患者血液中的IL-15的水平高于健康者，但在抗病毒治療后IL-15的水平又恢復(fù)了正常。此外，一些研究者還發(fā)現(xiàn)，感染人類免疫缺陷病毒1 亞型（Human immunodeficiency virus type 1，HIV-1）的患者患血液病毒癥的概率與IL-15的水平密切相關(guān)，尤其是IL-15表達(dá)水平升高或者不穩(wěn)定的患者[29]。IL-15的mRNA 表達(dá)量在感染后0 h 顯著升高，之后表達(dá)量下降，這與前面2 個(gè)的研究結(jié)果一致，說(shuō)明IL-15在抵抗禽流感H9N2 早期感染中發(fā)揮重要作用，IL-15也可以作為體外早期感染禽流感H9N2 AIV 的一個(gè)特征因子。體內(nèi)IL-15的表達(dá)量在攻毒后的7、14 d 顯著升高，沈桂堂等[30]研究發(fā)現(xiàn)，重型肝炎患者的IL-15水平在一定程度上反映了肝臟炎癥嚴(yán)重程度，據(jù)此推測(cè)感染禽流感H9N2 AIV 后引發(fā)了機(jī)體的炎癥反應(yīng)，但仍需進(jìn)一步證實(shí)。

IL-16作為一種免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞因子，主要發(fā)揮促炎癥的作用。有研究表明，IL-16在CD4+Th1 細(xì)胞的募集和激活中起重要作用，它通過(guò)刺激炎性細(xì)胞因子的分泌和促進(jìn)T 淋巴細(xì)胞的活化參與炎癥性疾病[31]。IL-16能夠促進(jìn)CD4+淋巴細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞及嗜酸性粒細(xì)胞的應(yīng)答反應(yīng)。IL-16促進(jìn)這些免疫細(xì)胞產(chǎn)生應(yīng)答的主要原因是它們都能表達(dá)CD4。CD4 是IL-16的主要受體，二者結(jié)合后，可以產(chǎn)生一系列免疫反應(yīng)，比如通過(guò)抑制HIV-1 的啟動(dòng)子抑制病毒復(fù)制。一些研究結(jié)果顯示，白細(xì)胞介素IL-16的表達(dá)量在攻毒后逐漸上升，這與丙型肝炎病毒（Hepatitis virus C，HCV）患者經(jīng)抗病毒治療后IL-16表達(dá)上調(diào)相似。說(shuō)明在感染初始階段，IL-16的表達(dá)量較低，免疫功能被抑制，但是隨著攻毒時(shí)間的延長(zhǎng)，機(jī)體自身的免疫力提高，病毒載量也相應(yīng)降低，以致IL-16的表達(dá)量升高。胡寬修[8]研究也發(fā)現(xiàn)，在感染HIV-1 的患者中，治療組的患者IL-16的表達(dá)水平高于對(duì)照組患者，且差異具有顯著性。

IL-18在CD4+和CD8+T 細(xì)胞反應(yīng)的發(fā)展和自然殺傷細(xì)胞的誘導(dǎo)中發(fā)揮重要功能，同樣具有促炎癥作用。IL-18在機(jī)體的先天免疫和獲得性免疫方面都起到重要作用[32]。袁朋等[33]在昆蟲細(xì)胞中利用桿狀病毒表達(dá)載體表達(dá)了雞白介素18（cIL-18），研究發(fā)現(xiàn)，cIL-18蛋白可在MDCK 細(xì)胞中抑制H9N2 AIV 的復(fù)制。本研究結(jié)果顯示，IL-18的表達(dá)量在感染后2、6 h 和攻毒后7 d 都顯著上調(diào)，說(shuō)明IL-18可能起到了免疫作用，抑制了H9N2 AIV的復(fù)制，維持了機(jī)體的免疫平衡。在研究IL-18與乙肝病毒形肝炎（Hepatitis B virus，HBV）感染的相關(guān)性時(shí)，有研究發(fā)現(xiàn)，HBV 與IL-18表達(dá)密切相關(guān)[34]，其可作為HBV 診斷和療效檢測(cè)的新指標(biāo)，提示IL-18也可以作為感染H9N2 AIV 的一個(gè)指標(biāo)。

IL-34的功能尚不完全清楚。在哺乳動(dòng)物中，IL-34的功能包括促進(jìn)趨化因子以及炎癥細(xì)胞等的生成和釋放、刺激巨噬細(xì)胞和單核細(xì)胞的增殖與分化，從而發(fā)揮促炎作用。IL-34與巨噬細(xì)胞集落刺激因子（M-CSF 或CSF-1）共用一個(gè)受體CSF-1R，當(dāng)配體與受體結(jié)合后可調(diào)節(jié)單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的生物學(xué)功能，所以，研究集中于IL-34在一些炎癥性疾病中的作用。慢性丙型肝炎病毒（HCV）感染患者肝臟纖維化階段血清中IL-34的表達(dá)量明顯升高，此外，HCV 感染和炎癥因子可促進(jìn)體外培養(yǎng)的肝臟細(xì)胞表達(dá)IL-34。本研究結(jié)果顯示，IL-34的表達(dá)量在體外感染H9N2 AIV 的0、2、6、10 h沒(méi)有發(fā)生差異變化，一定程度上說(shuō)明IL-34在體外發(fā)揮的作用較小。攻毒后IL-34的表達(dá)量在7 d 和14 d 顯著上升，推測(cè)機(jī)體感染H9N2 亞型禽流感病毒后引發(fā)了強(qiáng)烈的炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致機(jī)體產(chǎn)生了大量的炎性因子。YU 等[35]也報(bào)道了同樣的結(jié)果，發(fā)現(xiàn)在感染流感A 病毒（IAV）后期，患者血清和外周血單核細(xì)胞中（PBMC）中IL-34表達(dá)量升高。IL-34的表達(dá)量在攻毒的7 d 較14 d 相對(duì)表達(dá)量更高，可能是由于隨著感染時(shí)間的增加，機(jī)體自身的免疫力增強(qiáng)，而鳥類本身可能在感染后期獲得一些針對(duì)特定病原體或感染的免疫力，導(dǎo)致14 d 的攻毒水平和炎癥因子水平較7 d 低。

本研究結(jié)果顯示，無(wú)論是雞紅細(xì)胞在培養(yǎng)條件下感染H9N2 AIV，還是易感雛雞體內(nèi)攻毒H9N2 AIV，雞紅細(xì)胞中IL-6、IL-7、IL-12、IL13、IL-15、IL-16、IL-18和IL-34共8 種白細(xì)胞介素呈現(xiàn)了轉(zhuǎn)錄水平上的變化。表明雞感染H9N2 亞型禽流感病毒后紅細(xì)胞可能發(fā)生了相應(yīng)的免疫應(yīng)答反應(yīng)，起到抵抗病毒感染、調(diào)節(jié)機(jī)體免疫穩(wěn)定的作用。