李瑩瑩，劉凱洋，畢詩(shī)杰，徐真真，王澤文，趙亞楠，王梓安，張嘉寧，鄒 妍，張燕玲*

經(jīng)典名方丁香柿蒂散的物質(zhì)基準(zhǔn)量值傳遞研究

李瑩瑩1，劉凱洋1，畢詩(shī)杰1，徐真真1，王澤文1，趙亞楠1，王梓安1，張嘉寧1，鄒 妍2，張燕玲1*

1. 北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院 國(guó)家中醫(yī)藥管理局中藥信息工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 102488 2. 神威藥業(yè)集團(tuán)有限公司，河北 廊坊 065201

建立經(jīng)典名方丁香柿蒂散（Dingxiang Shidi Powder，DSP）特征圖譜并測(cè)定指標(biāo)性成分含量及出膏率，明確關(guān)鍵質(zhì)量屬性的傳遞規(guī)律，指導(dǎo)丁香柿蒂?gòu)?fù)方制劑的開(kāi)發(fā)。制備17批DSP凍干粉作為物質(zhì)基準(zhǔn)樣品，建立HPLC指紋圖譜，并測(cè)定多指標(biāo)性成分含量及干膏率，計(jì)算上述指標(biāo)在飲片-水煎液-物質(zhì)基準(zhǔn)傳遞過(guò)程中的轉(zhuǎn)移率。17批DSP物質(zhì)基準(zhǔn)的特征圖譜相似度良好（均＞0.90），標(biāo)定了9個(gè)特征峰，對(duì)共有峰進(jìn)行歸屬，1號(hào)峰來(lái)自丁香與柿蒂，2～8號(hào)峰來(lái)自丁香，9號(hào)峰來(lái)自生姜；指標(biāo)性成分丁香酚、沒(méi)食子酸、6-姜辣素在DSP物質(zhì)基準(zhǔn)中質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2.09～3.88、0.60～1.11、0.05～0.10 mg/g；物質(zhì)基準(zhǔn)的出膏率在9.42%～17.49%。飲片到物質(zhì)基準(zhǔn)丁香酚、6-姜辣素的轉(zhuǎn)移率分別為7.65%～14.29%、6.90%～32.90%，干膏率的傳遞率為6.88%～25.13%。DSP物質(zhì)基準(zhǔn)的關(guān)鍵質(zhì)量屬性可在飲片-水煎液-物質(zhì)基準(zhǔn)中穩(wěn)定傳遞，初步建立了DSP物質(zhì)基準(zhǔn)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，為后續(xù)復(fù)方制劑的開(kāi)發(fā)提供數(shù)據(jù)支撐。

經(jīng)典名方；丁香柿蒂散；物質(zhì)基準(zhǔn)；量值傳遞；關(guān)鍵質(zhì)量屬性；HPLC；轉(zhuǎn)移率；丁香；柿蒂；生姜；丁香酚；沒(méi)食子酸；6-姜辣素

丁香柿蒂散（Dingxiang Shidi Powder，DSP）來(lái)源于《傷寒瘟疫條辨》[1]，由丁香、柿蒂、生姜和人參組成，方中丁香、柿蒂溫中散寒，降逆止呃，為治療胃寒呃逆之要藥；生姜辛溫，為嘔家圣藥，與丁香、柿蒂合用則溫胃降逆之功尤著；人參甘溫益氣，補(bǔ)虛養(yǎng)胃[2]，用于“治久病呃逆，因下寒者”，具有溫中益氣、降逆止呃的功效，主治胃氣虛寒、胃失和降、氣逆之呃逆，是治療呃逆的經(jīng)典方?，F(xiàn)代研究表明，DSP多應(yīng)用于呃逆[3-4]以及頑固性呃逆[5-7]、延遲性嘔吐[8]等疾病。DSP收錄于《古代經(jīng)典名方目錄（第一批）》[9]，原文記載為“丁香、柿蒂各二錢(qián)，人參一錢(qián)，生姜三錢(qián)。水煎溫服?！苯?jīng)典名方物質(zhì)基準(zhǔn)作為后續(xù)復(fù)方制劑的質(zhì)量參照，于經(jīng)典名方復(fù)方制劑開(kāi)發(fā)過(guò)程中具有核心地位[10]。確定物質(zhì)基準(zhǔn)的質(zhì)控指標(biāo)，對(duì)于實(shí)現(xiàn)經(jīng)典名方的現(xiàn)代開(kāi)發(fā)和廣泛應(yīng)用具有重要的意義?！栋垂糯?jīng)典名方目錄管理的中藥復(fù)方制劑藥學(xué)研究技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）》要求，經(jīng)典名方物質(zhì)基準(zhǔn)的關(guān)鍵質(zhì)量屬性（critical quality attribute，CQAs）應(yīng)包括特征圖譜、指標(biāo)成分含量及干膏率[11]。綜合利用高效液相色譜法和氣相色譜法等技術(shù)手段，明確藥材-飲片-水煎液-物質(zhì)基準(zhǔn)傳遞過(guò)程中的CQAs。

DSP研究多集中于臨床方面，尚未有關(guān)于物質(zhì)基準(zhǔn)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及量值傳遞關(guān)系等文獻(xiàn)的報(bào)道。本研究通過(guò)制備17批DSP物質(zhì)基準(zhǔn)，測(cè)定其特征圖譜、出膏率范圍、指標(biāo)性成分含量，分析飲片與物質(zhì)基準(zhǔn)間的量值傳遞及整體質(zhì)量研究，有利于DSP制劑的后續(xù)開(kāi)發(fā)和研究。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

ACCHROM S6000高效液相色譜儀，北京華譜科儀科技有限公司；KQ-500D型數(shù)控超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司；Sartorious BT25S型分析電子天平，賽多利斯科學(xué)儀器有限公司；色譜柱為Shiseido Capcell Pak C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；JYH-A30A1型小熊煎藥壺，廣東小熊電器有限公司；MDJ-A01Y1型小熊粉碎機(jī)，廣東小熊電器有限公司；FD-1A-50型冷凍干燥機(jī)，北京博醫(yī)康實(shí)驗(yàn)儀器有限公司；HW.SY21-KP6型水浴鍋，北京市長(zhǎng)風(fēng)儀器儀表公司；DHG-9140A型電熱鼓風(fēng)干燥箱、DZF-6050型真空干燥箱，上海一恒科學(xué)儀器有限公司。

1.2 試劑與試藥

1.2.1 樣品 藥材信息如表1所示，由神威藥業(yè)集團(tuán)有限公司采購(gòu)提供，以上藥材經(jīng)北京中醫(yī)藥大學(xué)張媛教授鑒定，分別為丁香為桃金娘科蒲桃屬植物丁香Thunb.的干燥花蕾，柿蒂為柿樹(shù)科柿屬植物柿Thunb.的干燥宿萼，生姜為姜科姜屬植物姜Rose.的新鮮根莖，人參為五加科人參屬植物人參C. A. Mey.的干燥根和根莖。丁香、柿蒂和人參分別按照已考證的炮制工藝進(jìn)行炮制，經(jīng)檢驗(yàn)均合格。

表1 DSP組方藥材來(lái)源信息

1.2.2 試劑 乙腈、甲醇，色譜級(jí)，F(xiàn)isher公司；純凈水，廣州屈臣氏食品飲料有限公司；磷酸，質(zhì)量分?jǐn)?shù)85%，美國(guó)Fisher公司；對(duì)照品丁香酚（批號(hào)110725-201716，質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.6%）、沒(méi)食子酸（批號(hào)110831-201605，質(zhì)量分?jǐn)?shù)90.8%）、6-姜辣素（批號(hào)111833-201806，質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.9%），中國(guó)食品藥品鑒定研究院。

2 方法與結(jié)果

2.1 17批DSP基準(zhǔn)樣品的制備

采用隨機(jī)數(shù)法對(duì)表1中各批次藥材組合成17批DSP基準(zhǔn)樣品（S1～S17），如表2所示。將丁香、柿蒂、人參分別搗碎成《中國(guó)藥典》2020年版規(guī)定下的最粗粉（全部通過(guò)一號(hào)篩，但混有能通過(guò)三號(hào)篩不超過(guò)20%），生姜切成《中國(guó)藥典》2020年版規(guī)定下的薄片（1～2 mm）。經(jīng)考證及度量衡換算，清代1錢(qián)折算為今3.73 g，丁香、柿蒂折算為7.46 g，生姜11.19 g，人參3.73 g，最終確定每份稱(chēng)取丁香7.46 g、柿蒂7.46 g、人參3.73 g、生姜11.19 g，加純凈水300 mL，浸泡30 min，武火（500 W）加熱煮沸后，文火（250 W）加蓋煎煮10 min，用玻璃棒攪拌3次，趁熱濾過(guò)100目篩，擠壓濾渣，量取煎液體積，取濾液凍干，得DSP物質(zhì)基準(zhǔn)對(duì)應(yīng)的實(shí)物，即DSP凍干粉。每組實(shí)驗(yàn)平行2次。

表2 17批藥材搭配

2.2 DSP物質(zhì)基準(zhǔn)特征圖譜的建立

2.2.1 色譜條件[12]色譜柱為Shiseido Capcell Pak C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相為乙腈- 0.02%磷酸水溶液；梯度洗脫程序：0～5 min，3%乙腈；5～15 min，3%～10%乙腈；15～30 min，10%～13%乙腈；30～50 min，13%～23%乙腈；50～70 min，23%～55%乙腈；70～75 min，55%～98%乙腈；75～95 min，98%乙腈。檢測(cè)波長(zhǎng)203 nm；柱溫25 ℃；體積流量1.0 mL/min；進(jìn)樣量10 μL。

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)定丁香酚、沒(méi)食子酸、6-姜辣素適量，加75%甲醇制成分別含丁香酚1 221.20 μg/mL、沒(méi)食子酸341.40 μg/mL、6-姜辣素41.72 μg/mL的溶液，即得混合對(duì)照品溶液。

2.2.3 供試品溶液的制備 取DSP凍干粉200 mg，精密稱(chēng)定，置于25 mL量瓶?jī)?nèi)，加入5 mL的75%甲醇，搖勻，超聲提取30 min（頻率40 kHz、功率300 W），靜置，放冷，用75%甲醇定容至刻度線(xiàn)，搖勻，過(guò)0.22 μm微孔濾膜，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

2.2.4 單味藥材/飲片供試品溶液 取藥材/飲片丁香、柿蒂、人參打成最粗粉，生姜切薄片。稱(chēng)取組方用量的丁香、柿蒂、生姜、人參飲片，分別置于圓底燒瓶中，加水200 mL回流20 min，恢復(fù)到室溫，搖勻后，精密量取2.5 mL的湯液置10 mL量瓶中，加入2.5 mL甲醇，搖勻，超聲提取30 min（功率300 W、頻率40 kHz），靜置，放冷，用甲醇定容至刻度線(xiàn)，搖勻，過(guò)0.22 μm微孔濾膜，取續(xù)濾液，即得藥材/飲片供試品溶液，進(jìn)樣量為10 μL。

2.2.5 單味飲片陰性供試品溶液的制備 按處方量稱(chēng)取缺丁香、缺柿蒂、缺生姜和缺人參陰性處方，并按“2.1”項(xiàng)下DSP基準(zhǔn)樣品制法制得相應(yīng)的陰性?xún)龈煞勰?，再按?.2.3”項(xiàng)下方法制得相應(yīng)的單味飲片陰性供試品溶液。

2.2.6 精密度試驗(yàn) 取編號(hào)為S15的凍干粉制備供試品溶液，按“2.2.1”項(xiàng)特征圖譜色譜條件進(jìn)樣檢測(cè)，連續(xù)進(jìn)樣6次進(jìn)行測(cè)定，特征圖譜相似度均大于0.90，以丁香酚為對(duì)照峰（S），9個(gè)特征峰相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的RSD分別≤1.39%和2.20%，表明儀器精密度良好。

2.2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取編號(hào)為S15的凍干粉6份，制備供試品溶液，按照“2.2.1”項(xiàng)特征圖譜色譜條件進(jìn)樣檢測(cè)，特征圖譜相似度均大于0.90，以丁香酚為S峰，9個(gè)特征峰相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的RSD分別≤0.48%和4.28%，表明方法重復(fù)性良好。

2.2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取編號(hào)為S15的凍干粉制備供試品溶液，按照“2.2.1”項(xiàng)特征圖譜色譜條件，分別于供試樣品溶液制備后0、2、4、8、12、24 h進(jìn)樣檢測(cè)，特征圖譜相似度均大于0.90，以丁香酚為S峰，9個(gè)特征峰相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積RSD分別≤0.31%和2.74%，表明供試樣品溶液于24 h穩(wěn)定性良好。

2.2.9 特征圖譜的建立及相似度評(píng)價(jià) 取17批DSP物質(zhì)基準(zhǔn)供試品溶液，按照“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，記錄色譜圖，導(dǎo)入中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)2012版，以樣品圖譜1為參照?qǐng)D譜，時(shí)間窗寬度設(shè)定為0.2 min，采用中位數(shù)法，進(jìn)行多點(diǎn)校正和全譜峰匹配，17批DSP基準(zhǔn)樣品特征圖譜見(jiàn)圖1，計(jì)算各批次特征圖譜與對(duì)照指紋圖譜（R）的相似度，17批DSP物質(zhì)基準(zhǔn)（S1～S17）相似度結(jié)果分別為0.992、0.997、0.997、0.991、0.985、0.998、0.998、0.997、0.996、0.997、0.995、0.994、0.993、0.996、0.990、0.992、0.997，均大于0.90。

特征圖譜中共指認(rèn)了9個(gè)特征峰，分離良好，通過(guò)與對(duì)照品比較，結(jié)果如圖2所示，1號(hào)峰為沒(méi)食子酸、8號(hào)峰為丁香酚、9號(hào)峰為6-姜辣素。以8號(hào)峰君藥丁香內(nèi)丁香酚作為S峰，計(jì)算17批DSP物質(zhì)基準(zhǔn)中特征峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積，結(jié)果見(jiàn)表3、4。結(jié)果各色譜峰相對(duì)保留時(shí)間的RSD均小于2.00%，說(shuō)明DSP基準(zhǔn)樣品批次間關(guān)鍵成分具有一致性，2號(hào)峰相對(duì)峰面積波動(dòng)明顯高于其他色譜峰。

圖1 1～17批DSP物質(zhì)基準(zhǔn)HPLC特征圖譜和對(duì)照指紋圖譜(R)

2.2.10 飲片-基準(zhǔn)樣品特征圖譜量值傳遞關(guān)系研究 如圖3所示，峰1歸屬于丁香與柿蒂；峰9歸屬于生姜；峰2～8歸屬于丁香。以每味藥中的一個(gè)特征峰為參照峰，丁香以丁香酚作為參照峰，生姜以6-姜辣素為參照峰，柿蒂和人參不含專(zhuān)屬特有峰，計(jì)算相對(duì)峰面積，比較基準(zhǔn)樣品和各單味飲片中特征峰峰面積的比值，結(jié)果見(jiàn)表5。發(fā)現(xiàn)飲片和物質(zhì)基準(zhǔn)對(duì)應(yīng)特征峰的比值存在差異。

2.3 DSP指標(biāo)性成分含量測(cè)定

2.3.1 色譜條件及溶液制備 同“2.2”項(xiàng)下色譜條件及供試品溶液和對(duì)照品溶液制備的方法，波長(zhǎng)203 nm（6-姜辣素）及280 nm（丁香酚、沒(méi)食子酸）。

2.3.2 線(xiàn)性關(guān)系考察 取不同質(zhì)量濃度的丁香酚、沒(méi)食子酸、6-姜辣素對(duì)照品溶液，按照“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)（），峰面積為縱坐標(biāo)（），進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制，并計(jì)算回歸方程，結(jié)果分別為丁香酚＝9 834.89＋31 810.36，＝0.999 9，線(xiàn)性范圍61.06～610.60 μg/mL；沒(méi)食子酸＝29 529.26－32 341.34，＝1.000 0，線(xiàn)性范圍17.07～170.70 μg/mL；6-姜辣素＝62 817.47－16 286.77，＝0.999 9，線(xiàn)性范圍2.09～20.86 μg/mL。

1-沒(méi)食子酸 8-丁香酚 9-6-姜辣素

表3 17批DSP基準(zhǔn)樣品共有峰相對(duì)保留時(shí)間

表4 17批DSP基準(zhǔn)樣品共有峰相對(duì)峰面積

圖3 DSP物質(zhì)基準(zhǔn)的特征峰歸屬

表5 各單味飲片對(duì)照?qǐng)D譜與基準(zhǔn)樣品對(duì)照?qǐng)D譜中特征峰峰面積對(duì)比

2.3.3 精密度考察 取編號(hào)為S15的DSP凍干粉制備供試品溶液，按照“2.3.1”項(xiàng)色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖，計(jì)算丁香酚、沒(méi)食子酸、6-姜辣素峰面積的RSD分別為0.12%、0.47%、0.73%。

2.3.4 穩(wěn)定性考察 取編號(hào)為S15的DSP凍干粉制備供試品溶液，分別在制備后0、2、4、6、8、10、12、14、24 h按照“2.3.1”項(xiàng)色譜條件，進(jìn)樣分析，計(jì)算丁香酚、沒(méi)食子酸、6-姜辣素峰面積的RSD分別為0.70%、2.50%、0.78%。

2.3.5 重復(fù)性考察 取編號(hào)為S15的DSP凍干粉制備供試品溶液，平行操作6次，制備6份供試品溶液，按照“2.3.1”項(xiàng)色譜條件，分別進(jìn)樣分析，計(jì)算丁香酚、沒(méi)食子酸、6-姜辣素質(zhì)量分?jǐn)?shù)的RSD分別為1.60%、2.60%、1.20%。

2.3.6 加樣回收率考察 取已測(cè)定指標(biāo)成分的樣品（S15）的DSP凍干粉6份，每份100 mg，分別加入丁香酚、沒(méi)食子酸、6-姜辣素對(duì)照品，制備為供試品溶液，按照“2.3.1”項(xiàng)色譜條件進(jìn)行分析測(cè)定，計(jì)算加樣回收率，結(jié)果丁香酚、沒(méi)食子酸、6-姜辣素的平均加樣回收率分別為97.05%、100.41%、97.44%，RSD分別為1.33%、0.93%、1.23%。

2.3.7 含量測(cè)定 對(duì)17批基準(zhǔn)樣品的丁香酚、沒(méi)食子酸、6-姜辣素進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表6。17批DSP凍干粉中丁香酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)均值為2.98 mg/g，其均值的70%～130%為2.09～3.88 mg/g；沒(méi)食子酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)均值為0.88 mg/g，其均值的70%～130%為0.61～1.14 mg/g，發(fā)現(xiàn)第14批DSP凍干粉沒(méi)食子酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)不在其均值的70%～130%，可能是該批次柿蒂內(nèi)沒(méi)食子酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)較高，去除離散值后，沒(méi)食子酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)均值為0.85 mg/g，其均值的70%～130%為0.60～1.11 mg/g；6-姜辣素質(zhì)量分?jǐn)?shù)均值為0.07 mg/g，其均值的70%～130%為0.05～0.10 mg/g；因此，除了第14批DSP凍干粉外，剩下16批DSP含量測(cè)定數(shù)據(jù)均在其均值的70%～130%，結(jié)果較穩(wěn)定。

表6 17批DSP基準(zhǔn)樣品含量測(cè)定

2.3.8 量值傳遞研究 統(tǒng)計(jì)17批次基準(zhǔn)樣品指標(biāo)成分的含量、標(biāo)準(zhǔn)煎液（中間體）指標(biāo)性成分含量其對(duì)應(yīng)批次飲片的成分含量，計(jì)算指標(biāo)成分從飲片→基準(zhǔn)樣品轉(zhuǎn)移率和中間體→基準(zhǔn)樣品轉(zhuǎn)移率。

轉(zhuǎn)移率＝/

、均表示所含指標(biāo)性成分質(zhì)量

從表7可知，丁香酚、沒(méi)食子酸和6-姜辣素3個(gè)成分從水煎液到物質(zhì)基準(zhǔn)所基準(zhǔn)樣品之間的轉(zhuǎn)移率均值分別為66.55%、96.60%、95.10%，在凍干的過(guò)程中沒(méi)食子酸和6-姜辣素較穩(wěn)定，幾乎全部轉(zhuǎn)移，并且批間轉(zhuǎn)移率都在其均值的70%～130%，說(shuō)明整個(gè)凍干過(guò)程工藝穩(wěn)定，可以實(shí)現(xiàn)沒(méi)食子酸和6-姜辣素的穩(wěn)定轉(zhuǎn)移；丁香酚不穩(wěn)定，在凍干的過(guò)程中損失1/3左右，然而有大于15批次的從飲片到凍干粉，水煎液到凍干粉的轉(zhuǎn)移率在其均值的70%～130%，說(shuō)明從整個(gè)制備過(guò)程工藝穩(wěn)定，可以實(shí)現(xiàn)丁香酚的穩(wěn)定傳遞。

2.4 出膏率及其傳遞關(guān)系

分別稱(chēng)取丁香粗粉7.46 g或柿蒂粗粉7.46 g或生姜薄片11.19 g或人參粗粉3.73 g于煎藥鍋中，加300 mL去離子水，按照“2.1”項(xiàng)下煎煮方法得到濾液。移取“2.1”項(xiàng)下全方濾液和單味飲片濾液各70 mL轉(zhuǎn)移至100 mL蒸發(fā)皿中濃縮至稠膏，60 ℃真空干燥72 h，按比例換算后即得DSP物質(zhì)基準(zhǔn)干膏質(zhì)量，計(jì)算全方物質(zhì)基準(zhǔn)的實(shí)際出膏率。

表7 指標(biāo)性成分轉(zhuǎn)移率

按公式（理論出膏率＝∑單味藥出膏率×單味藥生藥量/全方總生藥量）計(jì)算DSP理論出膏率，以實(shí)際出膏率與理論出膏率的比值作為飲片-物質(zhì)基準(zhǔn)的出膏傳遞率。17批物質(zhì)基準(zhǔn)的物質(zhì)基準(zhǔn)出膏率及飲片-物質(zhì)基準(zhǔn)的出膏率傳遞結(jié)果如表8所示。由表可知，17批物質(zhì)基準(zhǔn)的出膏率平均值為13.45%，±30%范圍為9.42%～17.49%，均在其均值的±30%范圍內(nèi)；實(shí)際出膏率整體低于理論出膏率，出膏率變化幅度整體范圍為6.88%～25.13%。

表8 DSP物質(zhì)基準(zhǔn)出膏率

3 討論

3.1 指標(biāo)性成分的選擇

丁香在DSP中為君藥，性味辛溫，歸脾、胃、肺、腎經(jīng)，并有溫中散寒，降逆止呃、補(bǔ)腎助陽(yáng)之功效。內(nèi)含揮發(fā)油15%～20%，油中主要成分丁香酚含量排名第一[13]，達(dá)到84%～95%[14]，煎煮過(guò)程揮發(fā)油可定量保留于水煎液內(nèi)，能夠應(yīng)用高效液相色譜法測(cè)定煎液內(nèi)丁香酚的含量[15]。丁香酚具有抗菌消炎、解熱鎮(zhèn)痛、抗氧化等藥理作用[16-18]；與丁香藥材整體藥理作用類(lèi)似[19]，并且丁香酚為《中國(guó)藥典》2020年版中丁香藥材的指標(biāo)性成分。柿蒂在DSP中同為君藥，具有降逆止呃的功效。柿蒂水提液對(duì)大鼠膈肌收縮會(huì)產(chǎn)生抑制的效應(yīng)，此藥理作用可能與其治療呃逆的功效相關(guān)[20]。HPLC測(cè)定柿蒂含量較高的活性成分為沒(méi)食子酸、齊墩果酸、烏索酸，而且基于整合網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析香草酸、沒(méi)食子酸、槲皮素等成分，與柿蒂治療頑固性呃逆密切相關(guān)[21]，《中國(guó)藥典》2020年版以水溶性成分沒(méi)食子酸為柿蒂藥材薄層鑒別的指標(biāo)成分。生姜在DSP中為臣藥，具有溫胃散寒、降逆止呃的功效。生姜所含姜辣素類(lèi)具有抗氧化、抗腫瘤、抑菌、保肝等藥理作用[22]，具有很好的藥理活性，與生姜的傳統(tǒng)功效相符，且姜辣素是姜屬植物的特有成分，其中6-姜辣素含量最高[23]，且《中國(guó)藥典》2020年版中6-姜辣素為生姜藥材和飲片的指標(biāo)性成分。故選擇以上3個(gè)成分為量值傳遞研究指標(biāo)性成分。

3.2 特征圖譜分析

本研究建立的17批樣品相似度均＞0.90，表明該制備工藝穩(wěn)定。對(duì)DSP物質(zhì)基準(zhǔn)特征圖譜共指認(rèn)9個(gè)特征峰，1號(hào)峰（沒(méi)食子酸）歸屬于丁香與柿蒂；9號(hào)峰（6-姜辣素）為藥典中生姜指標(biāo)性成分之一，歸屬于生姜；其余色譜峰歸屬于丁香。本實(shí)驗(yàn)尚存在不足之處，未于此色譜條件下獲得的特征圖譜內(nèi)歸屬到人參藥味的特征峰，可能是由于全方中人參藥味劑量較低，皂苷成分含量低，峰面積不穩(wěn)定，變化大，將對(duì)DSP物質(zhì)基準(zhǔn)內(nèi)人參皂苷類(lèi)成分進(jìn)行含量測(cè)定或薄層定性鑒別，表征全方中人參藥味。

3.3 量值傳遞結(jié)果分析

從中間體到凍干粉丁香酚整體轉(zhuǎn)移率偏低，考慮到凍干過(guò)程中揮發(fā)性成分丁香酚的損失，于復(fù)方制劑過(guò)程中采用包合技術(shù)添加揮發(fā)油以此保持質(zhì)量的一致性。由于丁香與柿蒂均含有沒(méi)食子酸，且藥典內(nèi)尚無(wú)丁香和柿蒂藥材內(nèi)的沒(méi)食子酸含量測(cè)定的方法，本研究未對(duì)藥材/飲片內(nèi)沒(méi)食子酸進(jìn)行含量測(cè)定，故無(wú)法進(jìn)行沒(méi)食子酸從飲片到物質(zhì)基準(zhǔn)量值傳遞的分析研究。丁香酚和6-姜辣素從飲片到凍干粉的轉(zhuǎn)移率偏低，分析因該2種成分為熱不穩(wěn)定成分，加熱煎煮造成損失。且生姜中成分6-姜辣素，從飲片到凍干粉之間的轉(zhuǎn)移率僅有的9批轉(zhuǎn)移率在其均值的70%～130%，其余的8批中有5批產(chǎn)地是云南，并且轉(zhuǎn)移率均低于均值的70%，考慮和其產(chǎn)地有關(guān)，云南的生姜質(zhì)地比較堅(jiān)硬，《中國(guó)藥典》中測(cè)生姜內(nèi)姜辣素含量需將生姜切成1～2 mm大小的丁，再用甲醇提取，但在DSP物質(zhì)基準(zhǔn)的制備過(guò)程中，提取對(duì)象為生姜薄片（1～2 mm）使接觸面積減小，提取溶劑為水，造成了不同產(chǎn)地轉(zhuǎn)移率不均勻的結(jié)果，但凍干粉中6-姜辣素含量均在其均值的70%～130%，說(shuō)明雖然產(chǎn)地不同，但提取量基本一致，物質(zhì)基準(zhǔn)制備過(guò)程工藝穩(wěn)定，可實(shí)現(xiàn)從中間體到物質(zhì)基準(zhǔn)6-姜辣素的穩(wěn)定轉(zhuǎn)移。

4 結(jié)論

本研究使用不同批次飲片制備17批DSP物質(zhì)基準(zhǔn)，建立了DSP的HPLC特征圖譜，共確定了9個(gè)特征峰，指認(rèn)出丁香酚、沒(méi)食子酸、6-姜辣素3個(gè)色譜峰，并采用“中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)”（2012版）進(jìn)行相似度分析，相似度均大于0.90；以丁香酚、沒(méi)食子酸、6-姜辣素為指標(biāo)性成分建立DSP中多成分HPLC含量測(cè)定方法，以不超過(guò)質(zhì)量均值的70%～130%為界限設(shè)定各含量指標(biāo)的量值范圍，結(jié)果表明，DSP物質(zhì)基準(zhǔn)中丁香酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2.09～3.88 mg/g，沒(méi)食子酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.60～1.11 mg/g；6-姜辣素質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.05～0.10 mg/g；物質(zhì)基準(zhǔn)的出膏率在9.42%～17.49%，表明了DSP的CQAs可在藥材-飲片-水煎液-物質(zhì)基準(zhǔn)內(nèi)穩(wěn)定傳遞。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

[1]楊栗山. 傷寒瘟疫條辨[M]. 北京: 人民衛(wèi)生出版社, 1986: 168.

[2]陳士林, 劉安. 經(jīng)典名方開(kāi)發(fā)指引 [M]. 北京: 科學(xué)出版社, 2020: 664.

[3]梁占虎. 加味丁香柿蒂湯治療中風(fēng)后呃逆60例 [J]. 光明中醫(yī), 2011, 26(6): 1134-1135.

[4]李俊. 丁香柿蒂湯臨床治療呃逆22例 [J]. 中國(guó)中醫(yī)藥現(xiàn)代遠(yuǎn)程教育, 2013, 11(21): 26-27.

[5]耿明. 丁香柿蒂湯治療腫瘤致頑固性呃逆的臨床效果分析 [J]. 中國(guó)醫(yī)藥指南, 2017, 15(5): 195-196.

[6]王政. 丁香柿蒂湯治療腫瘤致頑固性呃逆48例 [J]. 浙江中醫(yī)雜志, 2019, 54(4): 251.

[7]劉潔, 王寶亮, 徐曉妍. 湯藥聯(lián)合穴位按壓治療頑固性呃逆的應(yīng)用價(jià)值 [J]. 深圳中西醫(yī)結(jié)合雜志, 2020, 30(1): 41-42.

[8]沈禮平, 張卉, 沈金根, 等. 丁香柿蒂湯加味防治化療致延遲性嘔吐51例臨床觀察 [J]. 中國(guó)中醫(yī)藥科技, 2014, 21(2): 198-199.

[9]國(guó)家中醫(yī)藥管理局. 國(guó)家中醫(yī)藥管理局關(guān)于發(fā)布《古代經(jīng)典名方目錄(第一批)》的通知 [EB/OL]. [2018-04-13]. http://kjs.satcm.gov.cn/zhengcewenjian/2018-04-16/7107. html.

[10]代云桃, 靳如娜, 吳治麗, 等. 基于標(biāo)準(zhǔn)湯劑(物質(zhì)基準(zhǔn))的經(jīng)典名方制備工藝和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究 [J]. 中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志, 2020, 26(2): 164-174.

[11]劉雨涵, 關(guān)雅戈, 韓晨, 等. 經(jīng)典名方桃核承氣湯物質(zhì)基準(zhǔn)關(guān)鍵質(zhì)量屬性傳遞規(guī)律分析 [J]. 中草藥, 2022, 53(7): 2011-2021.

[12]張燕玲, 李寅慶, 侯金才, 等. 丁香柿蒂散指紋圖譜的構(gòu)建方法及其標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜和應(yīng)用: 中國(guó), CN114113392B [P]. 2023-04-14.

[13]蔡君龍, 盧金清, 黎強(qiáng), 等. 不同產(chǎn)地丁香揮發(fā)性成分分析 [J]. 植物科學(xué)學(xué)報(bào), 2015, 33(2): 251-258.

[14]胡洪波, 錢(qián)長(zhǎng)蘇. 丁香柿蒂在呃逆中的應(yīng)用 [J]. 實(shí)用中醫(yī)內(nèi)科雜志, 2007, 21(1): 84.

[15]劉永剛, 白俊杰, 翟雙慶. 丁香、郁金單煎及共煎液中有效成分含量的變化 [J]. 吉林中醫(yī)藥, 2011, 31(4): 365-367.

[16]朱瑞瑜, 吳迪, 蔡成崗, 等. 丁香花蕾精油乳液的制備及其抗菌作用的研究 [J]. 科技通報(bào), 2018, 34(4): 99-103.

[17]翟華強(qiáng), 王雙艷, 張碩峰, 等. 黃連、丁香外用藥理作用研究 [J]. 中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志, 2011, 17(11): 192-195.

[18]張慧蕓, 申云翔, 任國(guó)艷. 丁香多酚細(xì)胞抗氧化活性的研究 [J]. 食品工業(yè)科技, 2012, 33(19): 147-149.

[19]美麗, 朱懿敏, 羅晶, 等. 丁香化學(xué)成分、藥效及臨床應(yīng)用研究進(jìn)展 [J]. 中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志, 2019, 25(15): 222-227.

[20]趙慶華. 柿蒂提取物抑制大鼠離體膈肌收縮的作用機(jī)制及其有效部位的研究 [D]. 石家莊: 河北醫(yī)科大學(xué), 2005.

[21]劉方, 陳寬, 段燦燦, 等. 基于整合網(wǎng)絡(luò)分析柿蒂治療頑固性呃逆的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機(jī)制 [J]. 中藥材, 2019, 42(9): 2133-2141.

[22]劉琳琪, 劉玉環(huán), 趙晨曦, 等. 不同產(chǎn)地生姜主要活性成分的比較分析 [J]. 天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā), 2015, 27(6): 1016-1021.

[23]劉怡妙, 凌悅, 徐旭, 等. 生姜的研究進(jìn)展及其質(zhì)量標(biāo)志物的預(yù)測(cè)分析 [J]. 中草藥, 2022, 53(9): 2912-2928.

Research on quality value transfer of material benchmarks of classical prescription Dingxiang Shidi Powder

LI Ying-ying1, LIU Kai-yang1, BI Shi-jie1, XU Zhen-zhen1, WANG Ze-wen1, ZHAO Ya-nan1, WANG Zi-an1, ZHANG Jia-ning1, ZOU Yan2, ZHANG Yan-ling1

1. Key Laboratory of Traditional Chinese Medicine Information Engineering, National Administration of Traditional Chinese Medicine, School of Chinese Materia Medica, Beijing University of Chinese Medicine, Beijing 102488, China 2. Shineway Pharmaceutical Group Ltd., Langfang 065201, China

Through establishing the the characteristic spectrum, as well as determining the paste yield and content of the index components of the classical prescription Dingxiang Shidi Powder (丁香柿蒂散, DSP), the transfer rule of the key quality attributes can be clarified and further guide the development of Dingxiang Shidi compound preparation.A total of 17 batches of DSP freeze-dried powder were prepared as benchmark samples to establish characteristic spectrums; The content of index components and paste rate in the benchmark samples were determined, and the transfer rate of the above indicators in the process of pieces-decoction-material benchmark was calculated.The characteristic spectrum similarity of 17 batches of DSP was more than 0.90, and nine common peaks were calibrated. Peak 1 belonged to Dingxiang (, CF) and Shidi (); Peaks 2—8 belonged to CF; Peak 9 belonged to Shengjiang (). The mass fraction ranges of index components eugenol, gallic acid and 6-gingerol in DSP material benchmark were 2.09—3.88, 0.60—1.11, 0.05—0.10 mg/g, respectively; The paste rate range of the material benchmark was 9.42%—17.49%. The transfer rates of eugenol and 6-gingerol ranged from 7.65% to 14.29%, 6.90% to 32.90%, respectively; The transfer rate of paste rate ranged from 6.88% to 25.13%.The key quality attributes of the material benchmark of DSP can be transferred stably in pieces-decoction-material benchmark, and the quality standard of material benchmark of DSP was preliminarily established, which provides data support for the subsequent development of compound preparations.

classical prescription; Dingxiang Shidi Powder; material benchmark; quality value transfer; critical quality attributes; HPLC;transfer rate;;;; eugenol; gallic acid; 6-gingerol

R283.6

A

0253 - 2670(2023)21 - 7025 - 09

10.7501/j.issn.0253-2670.2023.21.011

2023-04-21

國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目（82073996）；經(jīng)典名方丁香柿蒂顆粒劑的合作開(kāi)發(fā)研究（2017110031015575）

李瑩瑩（1997—），女，碩士研究生，研究方向?yàn)橹兴幵O(shè)計(jì)與優(yōu)化。Tel: 18939286354 E-mail: lyy11022333@163.com

通信作者：張燕玲，研究員，博士生導(dǎo)師，研究方向?yàn)橹兴幩幬镌O(shè)計(jì)與優(yōu)化。Tel: 13810778920 E-mail: zhangyanling@bucm.edu.cn

[責(zé)任編輯 鄭禮勝]