盧玉慧，譚蕓秀，李永才，王小晶，畢 陽

（甘肅農(nóng)業(yè)大學食品科學與工程學院，甘肅 蘭州 730070）

早酥梨（Pyrus bretchneidericv.Zaosu）是我國西北地區(qū)主要栽培的一種早熟梨品種，因其果皮翠綠，果肉雪白、酥脆、多汁，從而深受消費者青睞[1]。但是由于早酥梨的采收季節(jié)正值夏季，環(huán)境溫度的升高使得早酥梨果實極易受到病原菌的侵染，尤其是互隔交鏈孢菌（Alternaria alternata）引起的黑斑病作為早酥梨主要的采后病害，造成了嚴重的經(jīng)濟損失[2]。因此研發(fā)綠色安全采后病害控制方法已勢在必行。誘導抗性是一種能夠有效減輕果蔬采后病害的新方法，其通過生物或非生物方法激活果蔬自身的免疫能力，從而增強果蔬對病原物的抗性[3]。與傳統(tǒng)殺菌劑相比，誘導抗性具有抗菌譜廣、持續(xù)時間長、不會導致抗藥菌株出現(xiàn)等特點。此外，誘導抗性會導致植物組織中酚類化合物的含量增加，提高果蔬的抗氧化性能[4]。

鼠李糖脂（rhamnolipids，RLS）作為生物源表面活性劑，研究認為其參與植物非特異性免疫，能誘導植物對多種病原真菌產(chǎn)生抗性[5]。RLS有雙重作用模式：它們既有抗菌作用，又能刺激植物防御反應。Varnier等[6]研究發(fā)現(xiàn)RLS能誘導葡萄產(chǎn)生防御反應，質量濃度0.01 mg/mL RLS處理能使葡萄細胞幾丁質酶基因表達量增加30 倍，RLS在質量濃度0.025 mg/mL下可強烈誘導幾丁質酶基因的表達，相當于對照組（無PLS）的320 倍。源于銅綠假單胞菌的Rha-C10-C10和Rha-Rha-C10-C10以及來自植物芽孢桿菌的Rha-Rha-C14-C14在葡萄體內(nèi)引發(fā)了強烈的防御反應，包括一些早期細胞信號傳導，如鈣離子內(nèi)流、活性氧（reactive oxygen species，ROS）的產(chǎn)生和絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）的激活，能激發(fā)鈣離子內(nèi)流、ROS的產(chǎn)生和MAPK的細胞信號傳導[6]。同時RLS還誘導了致病相關的蛋白質基因和參與氧化磷脂和植物抗毒素生物合成途徑的多種防御基因。RLS還能夠刺激煙草、小麥和擬南芥的防御基因以抵御病原物的侵染[7]。

果蔬在采后貯藏過程中發(fā)生成熟和衰老，自由基不斷積累，細胞膜受損，生理代謝紊亂，果蔬營養(yǎng)品質下降[8]。誘抗處理可以調(diào)節(jié)果蔬ROS代謝，減少有害自由基的積累，防止膜脂過氧化。誘導抗性涉及的典型機制主要包括氧化爆發(fā)、苯丙烷代謝激活。研究表明，屬于水解酶類的病程相關蛋白幾丁質酶、β-1,3-葡聚糖酶也屬于防御產(chǎn)物，與植物系統(tǒng)的誘導性抗性密切相關[9-11]。苯丙烷途徑是植物重要的次生代謝之一。由于苯丙烷途徑可合成如酚類、木質素和黃酮大量的抗菌物質[12]。所以，苯丙烷代謝途徑的激活被認為是果蔬產(chǎn)生抗性反應的標志之一。ROS的產(chǎn)生和它們被抗氧化防御系統(tǒng)清除之間的平衡決定了成熟和衰老的速度，從而決定了水果的保質期[13]。在果實成熟和衰老過程中，ROS的過量積累會導致氧化應激[14]。植物體內(nèi)存在不同的酶系統(tǒng)來抵抗這種氧化應激[15]。在清除ROS的酶促系統(tǒng)中，過氧化氫酶（catalase，CAT）、過氧化物酶（peroxidase，POD）和超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）起關鍵作用。目前有關RLS對梨果采后病害的控制作用及其機理尚鮮見報道。因此本實驗研究了RLS處理對黑斑病的控制作用及對早酥梨組織苯丙烷代謝、ROS代謝以及對病程相關蛋白的影響，以期為早酥梨采后病害的綠色防控提供技術支撐。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

供試早酥梨采摘自甘肅省白銀市景泰縣條山農(nóng)場，挑選無任何病蟲害、機械損傷，且大小形狀均勻的健康果實，去除田間熱后，于4 ℃冷庫中貯藏待用。

RLS（相對純度≥95%）西安瑞捷生物科技有限公司；丙酮、硫代巴比妥酸、三氯乙酸 上海源葉生物科技有限公司；煙酰胺腺嘌呤二核苷磷酸（nicotinamide adenine dinucleotide phosphate，NADP＋）試劑盒、還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（nicotinamide adenine dinucleotide phosphate，NADPH）試劑盒、H2O2試劑盒、試劑盒、還原型谷胱甘肽（reduced glutathione,GSH）試劑盒、氧化型谷胱甘肽（oxidized glutathione,GSSG）試劑盒、幾丁質酶試劑盒、β-1,3-葡聚糖酶試劑盒蘇州科銘生物技術有限公司。

1.2 儀器與設備

HH-2電熱恒溫水浴鍋 江蘇省金壇市榮華儀器公司；TGL-20M低溫高速離心機 長沙平凡儀表有限公司；1510 型酶標儀 美國賽默飛世爾公司；UV-2450型紫外-可見光分光光度計 日本島津公司；SPX-30085H-II型生化培養(yǎng)箱 上海新苗醫(yī)療器械制造有限公司；A11 B S025研樣機 德國IKA公司。

1.3 方法

1.3.1 RLS誘抗處理對早酥梨黑斑病的控制效果

早酥梨清洗后用體積分數(shù)1%次氯酸鈉消毒2 min，再經(jīng)蒸餾水沖洗，晾干，然后在質量濃度為10、20、30、40、50 mg/mL RLS溶液中浸泡20 min，室溫下晾干。24 h后用無菌鐵釘（直徑3 mm）在果實赤道部位均勻地打3 個孔（深3 mm），待其晾干后接種1×106個/mL的A.alternata孢子懸浮液，待孢子懸浮液晾干。以無菌水處理作為對照。通過十字交叉法，每3 d測量一次果實的病斑直徑，并記錄數(shù)據(jù)，測量至第15天。每個處理用9 個梨果實，重復3 次。

1.3.2 生化指標測定取樣

誘抗處理后，在誘抗后的0、7、14、21、28、35 d用滅菌手術刀取皮下2 mm左右的果肉組織，液氮迅速冷凍后用研樣機研磨成粉末，于50 mL離心管保存待用，最后放置于-80 ℃冰箱保存。

1.3.3 苯丙烷代謝相關酶活力及其代謝產(chǎn)物的測定

苯丙氨酸解氨酶（phenylalanine ammonia-lyase，PAL）活力的測定參照Shang Qingmao等[16]的方法，單位以U/g表示。C4H活力的測定參照Zhou Fuhui等[17]的方法，單位以U/（min·g）表示。4CL活力的測定參照Knobloch等[18]的方法，單位以U/（min·g）表示。CAD活力的測定參照Li Hua等[19]的方法，單位以U/（min·g）表示?？偡雍康臏y定參照Scalbert等[20]的方法，結果以沒食子酸當量表示，單位為mg/100 g。類黃酮含量的測定參照Cvek等[21]的方法，以兒茶素為標準物制作標準曲線來計算類黃酮含量，單位以mg/100 g表示。

1.3.4 ROS代謝相關指標的測定

細胞膜透率的測定參照Zhu Liqin等[22]的方法，用直徑為10 mm打孔器取皮下2～5 mm處的果肉組織圓片3.0 g，去離子水沖洗3 遍后瀝干水分，再放入含有40 mL去離子水的小燒杯中，放置3 h（25 ℃），記錄起始電導率E0/（μS/cm）和終止電導率E1/（μS/cm）。最后將杯沸水浴加熱（95 ℃、0.5 h），冷卻到室溫后測定其最終的電導率EZ/（μS/cm）。細胞膜透率計算如公式（1）所示。

丙二醛（malondialdehyde，MDA）濃度的測定參照Sun Jiang等[23]的方法，在5 mL質量濃度100 g/L三氯乙酸（trichloroacetic acid，TCA）溶液中加入2 g組織粉末研磨，振蕩混勻，冰浴浸提10 min后，4 ℃、8 000×g離心5 min后，取上清液2 mL，加入質量分數(shù)為0.67%硫代巴比妥酸（thiobarbituric acid，TBA）溶液2 mL，對照組以TCA溶液代替，混勻后再次沸水浴20 min，冷卻至室溫后，4 ℃、8 000×g離心5 min后，在450、532、600 nm波長處測定反應液的吸光度。MDA濃度計算如公式（2）所示。

H2O2含量及含量采用試劑盒進行測定。H2O2含量以μmol/g表示，含量以nmol/g表示。

NADPH氧化酶（NADPH oxidase，NOX）活力的測定參照Fluhr等[24]的方法；SOD、CAT活力的測定分別參照Bewley[25]和Gao Huijuan[26]等的方法；POD活力的測定參照Venisse等[27]的方法；APX活力的測定參照Bao Gaihong等[28]的方法；以上結果均以U/g表示。

采用試劑盒測定NADP＋、NADPH含量，結果以nmol/g表示。谷胱甘肽還原酶（glutathione reductase，GR）活力的測定參照Cao Shifeng等[29]的方法，結果以nmol/（min·g）表示。單脫氫抗壞血酸還原酶（monodehydroascorbate reductase，MDHAR）活力的測定參照Wei Meilin等[30]的方法，結果以nmol/（min·g）表示。脫氫抗壞血酸還原酶（dehydroascorbate reductase，DHAR）活力的測定參照Yu Xiaozhang等[31]的方法，結果以nmol/（min·g）表示。采用試劑盒進行GSH、GSSG含量的測定，結果分別以μmol/g、nmol/g表示。

1.3.5 病程相關蛋白酶活力的測定

幾丁質酶、β-1,3-葡聚糖酶活力的測定采用試劑盒進行測定，結果以mg/（g·h）表示。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

數(shù)據(jù)采用Microsoft Excel 2013軟件計算，并用Origin 2017軟件作圖，用SPSS 26.0軟件對得到的數(shù)據(jù)進行方差分析，采用Duncan’s多重差異顯著分析。以上實驗均重復3 次，且結果均以鮮質量計。

2 結果與分析

2.1 RLS誘抗處理對早酥梨黑斑病的控制效果

RLS誘抗處理顯著抑制了早酥梨黑斑病的擴展，處理組與對照組之間差異明顯，但各處理之間差異不明顯（圖1A）。在12 d后，質量濃度20 mg/mL的RLS處理組病斑直徑顯著低于質量濃度10 mg/mL處理組（P＜0.05），其病斑直徑僅為對照組的64.29%，但與質量濃度30、40、50 mg/mL的處理組之間無顯著差異（P＞0.05）（圖1B），因此以質量濃度20 mg/mL的RLS處理研究其誘抗機理。同時由圖1A可知，RLS處理的早酥梨果實的黃化程度明顯低于對照組。

圖1 RLS誘抗處理對早酥梨黑斑病擴展（A）及病斑直徑（B）的影響Fig.1 Effect of RLS treatment on the development of black spot disease (A) and lesion diameter (B) in ‘Zaosu’ pears

2.2 RLS處理對梨果苯丙烷代謝的影響

2.2.1 RLS處理對梨果PAL、C4H、4CL和CAD活力的影響

PAL、C4H、4CL和CAD是果實組織苯丙烷代謝的關鍵酶。貯藏期間處理組和對照組梨果體內(nèi)PAL活力呈先升高后降低的趨勢，RLS處理后PAL活力較對照組顯著提高（P＜0.05），第28天達到峰值后降低，RLS處理組早酥梨的PAL活力在第28天時比對照組提高了24.56%（P＜0.05）（圖2A）。早酥梨果實的C4H活力呈單峰型變化，在第21天時RLS處理組C4H活力顯著高于對照組（P＜0.05），其活力高出對照組10.66%（圖2B）。梨果組織4CL活力整體呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢，在第28天達到峰值，且整個貯藏過程中處理組顯著高于對照組（P＜0.05）（圖2C）。CAD活力隨貯藏時間的延長先增加后降低，在第28天達到峰值，此時RLS處理的早酥梨的CAD活力高出對照組20.73%（P＜0.05）（圖2D）。

圖2 RLS處理對貯藏期間早酥梨PAL（A）、C4H（B）、4CL（C）和CAD（D）活力的影響Fig.2 Effect of RLS treatment on the activities of PAL (A),C4H (B),4CL (C) and CAD (D) of ‘Zaosu’ pears during storage

總酚和類黃酮是苯丙烷代謝產(chǎn)物的主要產(chǎn)物。在貯藏期間果實的總酚含量總體呈上升的趨勢，且RLS處理的梨果總酚含量均顯著高于對照組（P＜0.05），在第28天，RLS處理的早酥梨的總酚含量高出對照組11.63%（P＜0.05）（圖3A）。梨果類黃酮含量隨貯藏時間的延長呈先上升后下降的趨勢，在第28天達到峰值，此時RLS處理組早酥梨的類黃酮含量高出對照組7.98%（P＜0.05）（圖3B）。

圖3 RLS處理對貯藏期間早酥梨總酚（A）和類黃酮（B）含量的影響Fig.3 Effect of RLS treatment on the contents of total phenols (A) and total flavonoids (B) in ‘Zaosu’ pears during storage

2.3 RLS處理對梨果ROS代謝的影響

2.3.1 RLS處理對梨果NOX和SOD活力的影響

早酥梨的NOX、SOD活力在貯藏期間呈先上升后趨于平穩(wěn)的趨勢，RLS處理組的NOX活力在貯藏期間均顯著高于對照組（P＜0.01、P＜0.05），在第14天達到峰值，此時處理組高出對照組15.52%（P＜0.01）（圖4A）。除第28天外，處理組的SOD活力均顯著高于對照組（P＜0.01、P＜0.05），在第7天差異極顯著（P＜0.01），此時處理組高出對照組23.06%（圖4B）。

圖4 RLS處理對貯藏期間早酥梨NOX（A）、SOD（B）活力的影響Fig.4 Effect of RLS treatment on the activities of NOX (A) and SOD (B) in ‘Zaosu’ pears during storage

2.3.2 RLS處理對梨果H2O2和含量的影響

早酥梨果實的H2O2含量在貯藏期間呈單峰變化，RLS處理顯著提高了梨果組織H2O2含量，在貯藏第21天時，RLS處理的早酥梨的H2O2含量極顯著高出對照組54.79%（P＜0.01）（圖5A）。早酥梨組織的含量呈先上升后下降的趨勢，RLS處理提高了前期含量，后期處理組含量低于對照組（圖5B）。

城中，槍聲還在繼續(xù)。木排上的戰(zhàn)士們望著城中槍響的方向，心里說不出的悲傷。這時，一名戰(zhàn)士發(fā)現(xiàn)躺在身邊的夏國忠哼了一聲，他轉頭看去，夏國忠嘴里涌出一股血，隨即停止了呼吸。

圖5 RLS處理對貯藏期間早酥梨H2O2含量（A）和含量（B）的影響Fig.5 Effect of RLS treatment on H2O2 content (A) and superoxide anion radical content (B) of ‘Zaosu’ pears during storage

2.3.3 RLS處理對梨果CAT和POD活力的影響

貯藏前期，RLS處理組和對照組果實的CAT活力隨貯藏時間延長逐漸升高，貯藏第14天時，RLS處理組早酥梨的CAT活力高出對照20.83%（P＜0.05）（圖6A）。POD活力呈單峰型變化，在第7天達到最大值，此時RLS處理組高出對照組39.63%（P＜0.01）（圖6B）。

2.3.4 RLS處理對梨果APX、MDHAR、DHAR、GR活力的影響

APX 活力在誘抗處理期間先上升后降低，在第14天達到峰值，此時RLS處理梨果APX活力高出對照組27.59%（P＜0.01）（圖7A）。MDHAR活力在貯藏前期迅速上升，后面趨于平穩(wěn)，在第28天RLS處理組的MDHAR活力顯著高出對照組9.50%（P＜0.05）（圖7B）。DHAR的活力先上升后下降，在第21天達到峰值，此時RLS處理組高出對照組77.78%（P＜0.01）（圖7C）。RLS處理和對照果實的GR活力隨貯藏時間延長先升高后降低，與對照組相比，RLS處理提高了GR活力，在第21天達到峰值，其值高出對照組43.59%（P＜0.01）（圖7D）。

圖7 RLS處理對貯藏期間早酥梨APX（A）、MDHAR（B）、DHAR（C）和GR（D）活力的影響Fig.7 Effect of RLS treatment on the activities of APX (A),MDHAR (B),DHAR (C) and GR (D) in ‘Zaosu’ pears during storage

2.3.5 RLS處理對梨果GSH和GSSG含量的影響

RLS處理組和對照組果實的GSH含量隨貯藏時間延長均呈上升趨勢，RLS處理組GSH的含量顯著高于對照組（P＜0.05、P＜0.01），在第35天，處理組的GSH含量高出對照組25.97%（P＜0.05）（圖8A）。梨果組織的GSSG含量隨貯藏時間的延長呈先上升后降低再趨于平穩(wěn)的趨勢，除第7、14天外，RLS處理組梨果GSSG含量低于對照組，在第21天達到峰值，此時RLS處理組GSSG含量低于對照組5.40%（P＜0.05）（圖8B）。

圖8 RLS處理對貯藏期間早酥梨GSH（A）、GSSG（B）含量的影響Fig.8 Effect of RLS treatment on GSH (A) and GSSG (B) contents in‘Zaosu’ pears during storage

2.3.6 RLS處理對梨果NADP＋和NADPH含量的影響

NADPH是NADP的還原態(tài)形式，在電子傳遞中也作為電子供體給出電子。貯藏期間，梨果NADP＋的含量呈先上升后下降的趨勢，在第28天達到峰值，此時RLS處理的早酥梨的NADP＋含量高出對照組13.51%（P＜0.05）（圖9A）。梨果組織NADPH的含量在貯藏前期上升明顯，在第14天時達到峰值，后期趨于平穩(wěn)。在第14天時，RLS處理組早酥梨NADPH含量高出對照組8%（P＜0.05）；在整個貯藏期間，RLS處理組果實的NADPH含量顯著高于對照組果實（P＜0.05）（圖9B）。

圖9 RLS處理對貯藏期間早酥梨NADP＋（A）和NADPH（B）含量的影響Fig.9 Effect of the RLS treatment on NADP+ (A) and NADPH (B)contents in ‘Zaosu’ pears during storage

2.3.7 RLS處理對梨果MDA濃度和細胞膜透率的影響

細胞膜透率是評估膜滲透性的有效參數(shù)，它和MDA濃度可反映細胞膜完整性和脂質過氧化水平[32]。早酥梨貯藏期間組織的MDA濃度逐漸上升，RLS處理的早酥梨MDA濃度在貯藏第28天時低于對照組46.39%（P＜0.05）（圖10A）。早酥梨細胞膜透率呈上升趨勢，與對照組相比，RLS處理顯著降低了細胞膜透率（圖10B）。

圖10 RLS處理對貯藏期間早酥梨MDA濃度（A）和細胞膜透率（B）的影響Fig.10 Effect of RLS treatment on MDA content (A) and cell membrane permeability (B) in ‘Zaosu’ pears during storage

2.4 RLS處理對梨果組織幾丁質酶和β-1,3-葡聚糖酶活力的影響

RLS處理的早酥梨果實中幾丁質酶活性被顯著誘導，在第7、21、28天RLS處理的早酥梨的幾丁質酶活力分別高出對照組5.87%、3.51%和4.93%（P＜0.05）（圖11A）。梨果組織β-1,3-葡聚糖酶活力隨貯藏時間的延長先逐漸上升后下降，且RLS處理組顯著高于對照組（P＜0.05），在第28天，RLS處理的早酥梨β-1,3-葡聚糖酶活力高出對照組14.87%（P＜0.05）（圖11B）。

圖11 RLS處理對貯藏期間早酥梨幾丁質酶（A）和β-1,3-葡聚糖酶（B）活力的影響Fig.11 Effect of RLS treatment on chitinase (A) and β-1,3-glucanase (B)activity of ‘Zaosu’ pears during storage

3 討論

苯丙烷的代謝是植物最重要的次生代謝途徑之一，其在植物防御生物和非生物脅迫方面具有重要作用[33]。PAL、C4H、4CL和CAD是苯丙烷途徑中的關鍵酶。苯丙烷途徑由L-苯丙氨酸脫氨基生成肉桂酸啟動，PAL是這一過程的關鍵調(diào)節(jié)酶[34]。PAL活力的增加與植物防御途徑中活性代謝物的生物合成有關，例如木質素、酚類物質和類黃酮[35]。POD是木質素合成最后階段的關鍵酶，催化單體木質素聚合成木質素，木質素交聯(lián)細胞壁蛋白有助于鞏固細胞結構。酚類化合物和黃酮類化合物是苯丙烷途徑合成的主要產(chǎn)物。本研究表明，RLS處理誘導了PAL、C4H、4CL和CAD相關酶活力的提高（圖2），同時促進了總酚、類黃酮的合成（圖3），表明RLS可通過激活梨果組織的苯丙烷代謝而增強其抗病性。

幾丁質酶與β-1,3-葡聚糖酶作為受不同脅迫刺激誘導的一組病程相關蛋白，在植物抵御病原限制和對環(huán)境的普遍適應中發(fā)揮著重要作用，病程相關蛋白可以提高整個植物對病原菌攻擊的抵抗力，與植物的發(fā)育、抗病、逆境適應等特定機制密切相關[36]。病程相關蛋白是分子質量相對較低的多肽，其可在受感染的植物組織中積累，并顯示出對蛋白質降解的高抗性，病程相關蛋白的積累是植物對病原菌最具特征的防御反應之一[37]。植物β-1,3-葡聚糖酶是一個高度復雜的大基因家族，參與病原菌防御和廣泛的正常發(fā)育過程。底物幾丁質和β-1,3-葡聚糖是各種真菌細胞壁的主要成分。已經(jīng)證明幾丁質酶和β-1,3-葡聚糖酶可以降解真菌細胞壁和細菌細胞壁[38-39]。本研究結果發(fā)現(xiàn)RLS誘導的早酥梨果實體內(nèi)幾丁質酶和β-1,3-葡聚糖酶活力的增強和積累有助于提高對早酥梨黑斑病的抗性（圖11），該結果與RLS防治西瓜枯萎病的研究結果相似，該研究發(fā)現(xiàn)將RLS（質量濃度1.0 g/L）噴施在西瓜葉片可使幾丁質酶與β-1,3-葡聚糖酶活力分別提高49.95%和63.04%，從而預防西瓜枯萎病[40]。

果蔬組織中過多的H2O2積累會引起細胞膜脂質過氧化，從而加速細胞衰老和分解[41]。在本研究中，早酥梨在貯藏的前期和中期H2O2含量略有上升，在貯藏21 d，質量濃度20 mg/mL RLS處理的早酥梨的H2O2含量高出對照組54.79%（圖5）。Nukuntornprakit等[42]研究發(fā)現(xiàn)過量的H2O2會對水果細胞造成損害。水果中的SOD、CAT、POD、GR和GSH是細胞清除這些ROS的主要保護酶和抗氧化劑[43]。這些保護酶增加了細胞膜通透性并減少了MDA的積累以實現(xiàn)自我抗氧化保護[44]。可見RLS處理可調(diào)節(jié)梨果組織的活性的產(chǎn)生和清除水平，有效維持組織的ROS水平，防止細胞免受傷害。

NADPH是一種重要的還原等價物，在細胞抵御氧化損傷方面必不可少。NADPH為ROS的分解提供還原能力，使其成為ROS防御過程中不可或缺的一部分，可促進植物體的生物合成。此外，還原型的NADPH在抗壞血酸-谷胱甘肽循環(huán)（ascorbate-glutathione cycle，ASA-GSH）循環(huán)中作為電子供體起重要作用[45]。NADP＋和NADPH參與生物體內(nèi)的氧化還原反應是通過傳遞電子實現(xiàn)的，從而能夠調(diào)節(jié)生物體內(nèi)的各種代謝活動[46]。NADPH可參與清除各種脅迫下產(chǎn)生的自由基。因此RLS處理通過改變NADPH的含量從而影響細胞中ROS的產(chǎn)生和清除能力來保持細胞膜完整性以延緩果實衰老（圖9）。

RLS對梨果抗病性具有顯著的誘導作用，其中質量濃度20 mg/mL RLS處理顯著抑制了早酥梨黑斑病的擴展，同時顯著提高了梨果組織的PAL、C4H、4CL和CAD活力，以及總酚和類黃酮的含量，整體上顯著誘導了幾丁質酶和β-1,3-葡聚糖酶活力，顯著提高了NOX、SOD、CAT、POD活力及貯藏前期和中期H2O2和的含量，同時ROS清除系統(tǒng)AsA-GSH循環(huán)被激活，維持了梨果組織ROS動態(tài)平衡狀態(tài)，進而降低了梨果細胞膜透率和MDA的含量?？梢?，采后RLS處理可通過調(diào)節(jié)梨果組織苯丙烷代謝、ROS代謝及病程相關蛋白進而增強其抗病性，其在果蔬采后病害控制中具有潛在的應用前景。