鄧錦秀

摘 要：目的：驗(yàn)證廣西融安縣疾病預(yù)防控制中心食品中金黃色葡萄球菌（定量）和副溶血性弧菌（定性）的檢測(cè)能力。方法：按照能力驗(yàn)證參試指導(dǎo)書、《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)》（GB 4789.10—2016）第二法 金黃色葡萄球菌平板計(jì)數(shù)法、《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 副溶血性弧菌檢驗(yàn)》（GB 4789.7—2013）對(duì)樣品進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果：22-K795、22-Y967樣品的Z值分別為-1.5、0.4，能力驗(yàn)證結(jié)果判定|Z|≤2.0為“滿意”結(jié)果，本實(shí)驗(yàn)室2份金黃色葡萄球菌（定量）檢測(cè)樣品能力驗(yàn)證結(jié)果均為滿意。22-L696、22-E161樣品均檢出副溶血性弧菌，能力驗(yàn)證結(jié)果判定實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果與指定值一致時(shí)評(píng)價(jià)為“滿意”，本實(shí)驗(yàn)室2份副溶血性弧菌（定性）檢測(cè)樣品能力驗(yàn)證結(jié)果均為滿意。結(jié)論：通過開展本次實(shí)驗(yàn)室能力驗(yàn)證，極大地提高了本實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)能力水平，證實(shí)本實(shí)驗(yàn)室具有食品中金黃色葡萄球菌、副溶血性弧菌的檢測(cè)能力。

關(guān)鍵詞：食品；金黃色葡萄球菌；副溶血性弧菌；檢測(cè)能力驗(yàn)證

Analysis of Detection Ability Verification Results of Staphylococcus aureus and Vibrio parahaemolyticus in Food

in 2022

DENG Jinxiu

（Rongan County Center for Disease Control and Prevention， Liuzhou 545400， China）

Abstract： Objective： To verify the detection ability of Staphylococcus aureus （quantitative） and Vibrio parahaemolyticus （qualitative） in food from the Rongan County Center for Disease Control and Prevention， Guangxi. Method： Samples were tested according to the proficiency test guide book， the second method of Staphylococcus aureus plate counting method in GB 4789.10—2016， and GB 4789.7—2013. Result： The Z values of samples 22-K795 and 22-Y967 were -1.5 and 0.4， respectively. The ability validation result determined that |Z|≤2.0 was a satisfactory result. The ability validation results of the two （quantitative） detection samples of Staphylococcus aureus in the laboratory were all satisfactory. 22-L696 and 22-E161 samples all detected Vibrio parahaemolyticus， and the ability validation results were evaluated as satisfactory when the laboratory test results were consistent with the specified values. The ability validation results of the two Vibrio parahaemolyticus （qualitative） test samples in our laboratory were all satisfactory. Conclusion： By conducting this laboratory capability verification， the level of detection capability in our laboratory has been greatly improved， confirming that our laboratory has the ability to detect Staphylococcus aureus and Vibrio parahaemolyticus in food.

Keywords： food; Staphylococcus aureus; Vibrio parahaemolyticus; detection capability verification

金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）為革蘭氏陽性球菌，呈葡萄球狀排列，無芽孢、無莢膜，廣泛分布于自然界，能引起各種感染和疾病，如皮膚感染、呼吸道感染、食物中毒、敗血癥等[1-2]。金黃色葡萄球菌具有廣泛的多重耐藥性和毒力因子，已成為公共衛(wèi)生領(lǐng)域備受關(guān)注的問題之一，可通過細(xì)菌培養(yǎng)和鑒定、分子生物學(xué)技術(shù)、免疫學(xué)檢測(cè)等對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)和診斷。在臨床和食品安全等領(lǐng)域，對(duì)金黃色葡萄球菌的快速檢測(cè)和準(zhǔn)確診斷具有重要意義，可幫助預(yù)防和控制其感染和傳播[3]。

副溶血性弧菌（Vibrio parahaemolyticus）為革蘭氏陰性菌，呈弧狀、棒狀等多形態(tài)，無芽孢，有鞭毛，常存在于海水和海產(chǎn)品中，可引起腸胃感染，癥狀包括腹瀉、腹部絞痛、嘔吐、惡心等[4]。人們主要通過進(jìn)食受污染的海產(chǎn)品感染副溶血性弧菌，潛伏期一般為4～96 h，嚴(yán)重感染者可能導(dǎo)致腸穿孔和敗血癥，甚至危及生命[5]。副溶血性弧菌是我國東南沿海地區(qū)引起食物中毒的重要病原體之一，目前食物中毒已成為主要的突發(fā)公共事件之一[6-7]。

能力驗(yàn)證是指通過對(duì)已知樣品的測(cè)試評(píng)估實(shí)驗(yàn)室在特定領(lǐng)域檢測(cè)能力的精確度、準(zhǔn)確度和可靠性。能力驗(yàn)證不僅可以評(píng)估實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)水平和能力，還能幫助實(shí)驗(yàn)室制定和改進(jìn)質(zhì)量管理體系、提高檢驗(yàn)人員的素質(zhì)和意識(shí)、推動(dòng)技術(shù)創(chuàng)新和學(xué)術(shù)交流，促進(jìn)實(shí)驗(yàn)室良性循環(huán)和發(fā)展。因此，能力驗(yàn)證在現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)室管理中具有廣泛的應(yīng)用價(jià)值和社會(huì)意義。

本文通過分析本實(shí)驗(yàn)室2022年參加由中國檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院測(cè)試評(píng)價(jià)中心組織和實(shí)施的食品中金黃色葡萄球菌（定量）[ACAS-PT1328（2022）]、副溶血性弧菌（定性）[ACAS-PT1329（2022）]的檢測(cè)能力驗(yàn)證的檢測(cè)結(jié)果，提升本實(shí)驗(yàn)室對(duì)食品中金黃色葡萄球菌、副溶血性弧菌的檢測(cè)能力。

1 材料與方法

1.1 樣品來源

樣品來源于中國檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院測(cè)試評(píng)價(jià)中心，共檢測(cè)2個(gè)項(xiàng)目，每個(gè)項(xiàng)目2個(gè)樣品，樣品為白色凍干塊狀，為人工污染的食品樣品，西林瓶真空包裝。

1.2 試劑與儀器

Baird-Parker瓊脂（北京陸橋）；凍干血漿（北京陸橋）；腦心浸出液肉湯（北京陸橋）；血瓊脂平板（北京陸橋）；TCBS培養(yǎng)基（北京陸橋）；3%氯化鈉胰蛋白胨大豆瓊脂（北京陸橋）；副溶血性弧菌干制生化鑒定試劑盒（北京陸橋）；科瑪嘉弧菌顯色培養(yǎng)基（科瑪嘉）；隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱；XDD-84立式電熱壓力蒸汽消毒器；HR40-ⅡA2生物安全柜等。

1.3 檢驗(yàn)依據(jù)

依據(jù)能力驗(yàn)證參試指導(dǎo)書、《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)》

（GB 4789.10—2016）[8]第二法 金黃色葡萄球菌平板計(jì)數(shù)法、《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 副溶血性弧菌檢驗(yàn)》（GB 4789.7—2013）[9]對(duì)樣品進(jìn)行檢測(cè)。

1.4 檢驗(yàn)方法

1.4.1 樣品制備

（1）金黃色葡萄球菌樣品（22-K795、22-Y967）用60 mL稀釋液再水化。樣品開啟后，立即加入

5 mL稀釋液再水化，待溶解后，吸出放入無菌瓶中，再反復(fù)用余下的稀釋液清洗西林瓶內(nèi)壁2～3次，回收清洗液放入上述無菌瓶中，此溶液為待測(cè)樣品原液。

（2）副溶血性弧菌樣品（22-L696、22-E161）用60 mL 3%氯化鈉堿性蛋白胨水再水化。樣品開啟后，立即加入5 mL 3%氯化鈉堿性蛋白胨水再水化，待溶解后，吸出放入無菌瓶中，再反復(fù)用余下的3%氯化鈉堿性蛋白胨水清洗西林瓶內(nèi)壁2～3次，回收清洗液置于上述無菌瓶中，此溶液為待測(cè)樣品原液。

1.4.2 接種、增菌及分離培養(yǎng)

（1）金黃色葡萄球菌樣品。以無菌吸管吸取

25 mL金黃色葡萄球菌待測(cè)樣品原液置于盛有

225 mL稀釋液的無菌瓶中，充分混勻，制成1∶10的樣品勻液；用微量移液器吸取1∶10樣品勻液

1 mL注于盛有9 mL生理鹽水的無菌試管中，充分混勻，制成1∶100的樣品勻液。選擇3個(gè)稀釋度（100、10-1、10-2）的樣品勻液，每個(gè)稀釋度分別吸取1 mL樣品勻液以0.3 mL、0.3 mL、0.4 mL的接種量分別加入3個(gè)Baird-Parker平板，用無菌涂布棒涂布整個(gè)平板，注意不要觸及平板邊緣。平板涂布后靜置10 min，倒置后于36 ℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)48 h。同時(shí)以標(biāo)準(zhǔn)菌株金黃色葡萄球菌作陽性對(duì)照。典型的金黃色葡萄球菌在Baird-Parker平板上呈圓形，表面光滑、凸起、濕潤，顏色呈灰黑色或黑色，有光澤，周圍繞以不透明圈，其外常有一清晰帶。

（2）副溶血性弧菌樣品。以無菌操作取25 mL副溶血性弧菌待測(cè)樣品原液置于盛有225 mL 3%氯化鈉堿性蛋白胨水的無菌瓶中，充分混勻，制成1∶10樣品勻液。將樣品勻液于36 ℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)18 h。22-L696、22-E161增菌液均渾濁生長，取增菌液各一環(huán)分別劃線接種于科瑪嘉弧菌顯色培養(yǎng)基和TCBS培養(yǎng)基，36 ℃培養(yǎng)24 h。同時(shí)以標(biāo)準(zhǔn)菌株副溶血性弧菌作陽性對(duì)照。

1.4.3 鑒定試驗(yàn)

（1）金黃色葡萄球菌鑒定試驗(yàn)。選擇有典型金黃色葡萄球菌菌落且同一稀釋度3個(gè)平板菌落數(shù)合計(jì)在20～200 CFU的平板，計(jì)數(shù)典型菌落數(shù)。從典型菌落中挑取5個(gè)可疑菌落進(jìn)行鑒定試驗(yàn)，分別做染色鏡檢、血漿凝固酶試驗(yàn)（36 ℃培養(yǎng)6 h），同時(shí)劃線接種到血平板36 ℃培養(yǎng)24 h。

（2）副溶血性弧菌鑒定試驗(yàn)。挑取3個(gè)可疑菌落接種于3%氯化鈉胰蛋白胨大豆瓊脂平板進(jìn)行純培養(yǎng)，于36 ℃培養(yǎng)24 h后進(jìn)行染色鏡檢、生化鑒定。

2 結(jié)果與分析

2.1 鑒定試驗(yàn)結(jié)果

2.1.1 金黃色葡萄球菌鑒定試驗(yàn)結(jié)果

金黃色葡萄球菌樣品22-K795、22-Y967在血平板上的菌落形態(tài)均為圓形、光滑凸起、濕潤、金黃色，菌落周圍可見完全透明溶血圈，鑒定試驗(yàn)結(jié)果見表1。

2.1.2 副溶血性弧菌鑒定試驗(yàn)結(jié)果

副溶血性弧菌樣品22-L696、22-E161在科瑪嘉弧菌顯色平板上均為淡紫色菌落，在TCBS平板上均為圓形、半透明、表面光滑、綠色菌落，其鑒定試驗(yàn)結(jié)果見表2。樣品22-L696、22-E161均檢出副溶血性弧菌。

2.2 能力驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.2.1 金黃色葡萄球菌（定量）能力驗(yàn)證結(jié)果

能力驗(yàn)證結(jié)果判定|Z|≤2.0為滿意結(jié)果；2.0＜|Z|＜3.0為可疑結(jié)果；|Z|≥3.0為不滿意（離群）結(jié)果[10]。22-K795、22-Y967樣品的Z值分別為-1.5、0.4，|Z|≤2.0，說明本實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)均獲得滿意結(jié)果。

2.2.2 副溶血性弧菌（定性）能力驗(yàn)證結(jié)果

能力驗(yàn)證結(jié)果判定實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果與指定值一致時(shí)，評(píng)價(jià)為滿意，否則為不滿意（假陰性或假陽性）[11]。22-L696、22-E161樣品均檢出副溶血性弧菌，均與指定值一致，說明本實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)均獲得滿意結(jié)果。

3 結(jié)論與討論

能力驗(yàn)證是檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室、認(rèn)可機(jī)構(gòu)和實(shí)驗(yàn)室管理部門判定實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力的重要技術(shù)手段之一，也是實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部質(zhì)量控制的有效補(bǔ)充。能力驗(yàn)證活動(dòng)是判定實(shí)驗(yàn)室能力的國際通行做法，其結(jié)果得到廣泛承認(rèn)，對(duì)實(shí)驗(yàn)室了解、提高和證實(shí)自身能力都具有積極作用。疾控機(jī)構(gòu)的微生物檢驗(yàn)室是為衛(wèi)生行政部門制定疾病預(yù)防與控制策略及采取措施、為衛(wèi)生監(jiān)督提供實(shí)驗(yàn)室技術(shù)支持、為社會(huì)日益增長的衛(wèi)生需要提供衛(wèi)生技術(shù)服務(wù)的檢測(cè)機(jī)構(gòu)，為保證所提供數(shù)據(jù)的公正、準(zhǔn)確和科學(xué)，檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室需保證測(cè)定結(jié)果達(dá)到確定的檢驗(yàn)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

本實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果（實(shí)驗(yàn)室代碼ACAS-PT1328-

056、ACAS-PT1329-056）均與ACAS-PT1328食品中金黃色葡萄球菌（定量）、ACAS-PT1329副溶血性弧菌（定性）的檢測(cè)能力驗(yàn)證計(jì)劃指定值一致，能力評(píng)價(jià)均為“滿意”結(jié)果，說明本實(shí)驗(yàn)室具有食品中金黃色葡萄球菌、副溶血性弧菌的檢測(cè)能力。通過本次能力驗(yàn)證，極大提高了本實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)能力水平，同時(shí)在檢測(cè)過程中發(fā)現(xiàn)一些需要注意的事項(xiàng)。①樣品處理時(shí)要完全溶解、混勻，無菌操作。②Baird-Parker平板在使用前要確認(rèn)無水珠，如果有水珠可放置于25～30 ℃培養(yǎng)箱中干燥，直到平板表面水珠消失，否則會(huì)出現(xiàn)菌落成片生長而無法計(jì)數(shù)的情況。③在Baird-Parker平板培養(yǎng)至24 h后可進(jìn)行一次預(yù)計(jì)數(shù)，對(duì)發(fā)現(xiàn)的特征菌落用記號(hào)筆進(jìn)行描點(diǎn)標(biāo)記，避免在48 h后出現(xiàn)雜菌干擾結(jié)果判定[12]。④要嚴(yán)格控制培養(yǎng)基的溫度、濕度和通風(fēng)等條件，以確保菌落的正常生長，并防止外界細(xì)菌污染。⑤在選擇培養(yǎng)基和試劑盒等試劑時(shí)，應(yīng)注意其質(zhì)量和有效期，避免使用過期或受污染的試劑，影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性[13]。⑥在實(shí)驗(yàn)過程中要按照規(guī)范的操作程序和實(shí)驗(yàn)室管理要求進(jìn)行，做好記錄和報(bào)告工作，及時(shí)處理發(fā)現(xiàn)的問題和異常情況，并根據(jù)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行相應(yīng)的數(shù)據(jù)分析和結(jié)論推斷，提高實(shí)驗(yàn)室的整體技術(shù)水平和科學(xué)研究能力[14]。

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