徐正康 戴曉港 陳贏男

（林木遺傳育種國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 現(xiàn)代南方林業(yè)協(xié)同創(chuàng)新中心 林木遺傳與生物技術(shù)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 江蘇省林木遺傳和高效培育重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 南京林業(yè)大學(xué) 南京 210037）

玉蘭屬（Yulania）樹(shù)種，即原木蘭科（Magnoliaceae）木蘭屬（Magnolia）玉蘭亞屬（subgen. Yulania）植物（傅大立，2001），是中國(guó)最具傳統(tǒng)特色的觀賞花木之一，其花形多姿、花色多變、芳香典雅，被廣泛應(yīng)用于園林景觀和園林綠化。此外，玉蘭屬樹(shù)種也是重要的藥用及香料植物，其干燥花蕾既可入藥（統(tǒng)稱(chēng)“辛夷”）又可作為名貴香料原料，具有較高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。近年來(lái)玉蘭產(chǎn)業(yè)不斷發(fā)展，種植規(guī)模、經(jīng)濟(jì)產(chǎn)值和從業(yè)人員逐年提高，以“中國(guó)玉蘭之鄉(xiāng)”河南省南召縣為例，2014 年南召縣玉蘭種植面積達(dá)1.79 萬(wàn)hm2；產(chǎn)值達(dá)到18.7 億元（周虎等，2015）。在玉蘭產(chǎn)業(yè)蓬勃的同時(shí)，也出現(xiàn)了品種繁多名稱(chēng)混亂、缺乏科學(xué)管理等問(wèn)題。確?；緝?yōu)良品種種苗的真實(shí)性，是玉蘭產(chǎn)業(yè)健康穩(wěn)定發(fā)展的基礎(chǔ)，建立一套便捷、快速、可靠的玉蘭良種鑒定技術(shù)，對(duì)于監(jiān)督種苗生產(chǎn)、新品種認(rèn)定，以及保護(hù)育種工作者知識(shí)產(chǎn)權(quán)具有重要意義。

傳統(tǒng)的特異性、一致性和穩(wěn)定性（distinctness,uniformity and stability，DUS）測(cè)試是建立在觀察和測(cè)量部分植物表型基礎(chǔ)上，雖然受環(huán)境影響小、測(cè)試條件簡(jiǎn)單可靠、適宜描述質(zhì)量性狀，但周期長(zhǎng)、效率低、質(zhì)量難控制等問(wèn)題。分子標(biāo)記技術(shù)及構(gòu)建DNA 指紋圖譜為DUS 測(cè)試提供強(qiáng)有力的輔助工具，并已成為一套完整的植物新品種保護(hù)測(cè)試技術(shù)體系不可或缺的一部分（李曉輝等，2003）。微衛(wèi)星（simple sequence repeat, SSR）標(biāo)記技術(shù)，因其具有操作簡(jiǎn)單、穩(wěn)定、靈敏、檢測(cè)多態(tài)性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，成為品種一致性和特異性檢驗(yàn)以及植物新品種測(cè)試中應(yīng)用最廣泛的標(biāo)記技術(shù)（鐘海豐等，2017）。目前，我國(guó)對(duì)玉蘭屬植物的研究主要集中在傳統(tǒng)分類(lèi)學(xué)、化學(xué)成分分析（傅大立等，2005）以及繁育等方面（王藝等，2019），仍缺少豐富的分子標(biāo)記資源和準(zhǔn)確的DNA 指紋圖譜信息。

望春玉蘭（Magnolia biondii）是玉蘭屬中優(yōu)良的早春觀花樹(shù)種，也是辛夷植物中栽培面積最大和藥用質(zhì)量最好的樹(shù)種（傅大立等，2003），具有觀賞、藥用、香料和用材等用途，是珍貴的多功能經(jīng)濟(jì)樹(shù)種。中國(guó)科學(xué)院仙湖植物園研究團(tuán)隊(duì)首次發(fā)布了高質(zhì)量的望春玉蘭基因組信息（Donget al., 2021），為挖掘和開(kāi)發(fā)SSR 標(biāo)記提供了寶貴的序列信息?；谝压嫉耐河裉m全基因組序列，本研究對(duì)其微衛(wèi)星位點(diǎn)進(jìn)行搜索，分析了微衛(wèi)星的序列特征、分布和組成等信息，在此基礎(chǔ)上設(shè)計(jì)和開(kāi)發(fā)SSR 特異性引物，并構(gòu)建了26分玉蘭商業(yè)品種的DNA 指紋圖譜，為玉蘭屬植物的分子遺傳學(xué)研究提供標(biāo)記資源，也為玉蘭優(yōu)良品種的真實(shí)性鑒定提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

在河南省南召縣內(nèi)6 個(gè)不同地點(diǎn)選取6 株望春玉蘭自然單株（編號(hào)NZ1—NZ6）；此外，在南召縣林業(yè)局收集的玉蘭種質(zhì)資源庫(kù)中選取26 個(gè)不同商業(yè)品種的玉蘭植株（編號(hào)1—26，表1）。2022 年9 月，分別采集上述玉蘭植株的幼嫩葉片經(jīng)低溫保鮮運(yùn)送，貯存于-80 ℃冰箱，待用。6 份自然單株和26 份商業(yè)品種分別用于篩選SSR 引物及構(gòu)建SSR 指紋圖譜。

表1 26 份玉蘭商業(yè)品種信息Tab. 1 Information of 26 commercial Magnolia cultivars

1.2 基因組DNA 提取

稱(chēng)取100 mg 葉片樣品，采用TIANGEN 公司的DNA 提取試劑盒（DNAsecure Plant Kit，DP320）提取基因組DNA。利用1%瓊脂糖凝膠電泳和NanoDrop-2000 分光光度儀分別對(duì)DNA 的質(zhì)量及濃度進(jìn)行檢測(cè)，并將每份DNA 樣品稀釋至30 ng·μL-1，置于-20 ℃冰箱保存，待用。

1.3 望春玉蘭基因組SSR 特征分析

利用已公布的望春玉蘭基因組序列信息（https://datadryad.org/stash/dataset/doi:10.5061/dryad.s4mw6m947），采用MISA 軟件（http://www.pgrc.ipkgaters leben.de/misa）進(jìn)行全基因組微衛(wèi)星序列查找。微衛(wèi)星查找參數(shù)設(shè)置為：?jiǎn)魏塑账嶂貜?fù)≥12 bp；二核苷酸和三核苷酸重復(fù)次數(shù)最少分別為6 次和4 次；四核苷酸和五核苷酸重復(fù)次數(shù)最少為3 次；六核苷酸重復(fù)最少為2 次；如果SSR 位點(diǎn)之間的距離≤100 bp，則定義為復(fù)合型SSR。

1.4 SSR 引物設(shè)計(jì)、篩選與指紋圖譜構(gòu)建

根據(jù)望春玉蘭基因組SSR 位點(diǎn)分析結(jié)果，除去復(fù)合型SSR 和單核苷酸重復(fù) SSR，利用Primer Premier 5.0 軟件批量設(shè)計(jì)SSR 引物。引物設(shè)計(jì)參數(shù)設(shè)置為：引物長(zhǎng)度18～28 bp，GC 含量在40%～60%之間，擴(kuò)增產(chǎn)物大小為100～300 bp，退火溫度（Tm 值）在50～60 ℃之間。針對(duì)二～六核苷酸重復(fù)的SSR 位點(diǎn)，選取203對(duì)引物交由生工生物工程（上海）股份有限公司合成。

利用合成的203 對(duì)引物對(duì)樣品NZ1—NZ6 的基因組DNA 進(jìn)行PCR 擴(kuò)增，用12%的聚丙烯酰胺凝膠電泳對(duì)SSR 引物進(jìn)行篩選，選擇電泳條帶清晰、容易判讀、多態(tài)性信息含量高的引物組合。PCR 反應(yīng)體系為10 μL，包括基因組DNA 1 μL、上下游引物各1 μL、10×PCR Buffer（Mg2+plus）1 μL、dNTP Mixture 0.4 μL、TaKaRa TaqTM聚合酶0.1 μL 和ddH2O 5.5 μL。PCR 反應(yīng)程序?yàn)椋?4 ℃預(yù)變性5 min，95 ℃變性30 s，55 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，循環(huán)30 次，最后72 ℃延伸7 min。聚丙烯酰胺凝膠電泳條件為電壓180 V，電流200 mA 電泳90 min，電泳緩沖液為0.5×TBE。電泳結(jié)束后采用銀染法染色，去離子水漂洗2 次后，置燈箱上拍照。

進(jìn)一步根據(jù)引物的多態(tài)信息量（polymorphism information content, PIC）指數(shù)篩選出多態(tài)性較高的SSR 引物用于指紋圖譜構(gòu)建。在擴(kuò)增26 份玉蘭商業(yè)品種基因組DNA時(shí)，每個(gè)PCR 反應(yīng)體系中加入1 μL稀釋100 倍的熒光dUTP（Thermol），將擴(kuò)增產(chǎn)物在ABI-3730XL 測(cè)序儀進(jìn)行毛細(xì)管電泳，利用Gene Mapper 基因型分析軟件對(duì)獲得的電泳譜帶進(jìn)行分析。

1.5 數(shù)據(jù)分析

引物PIC 指數(shù)用下列公式進(jìn)行計(jì)算：PIC=1-式中：n為某一對(duì)SSR 引物擴(kuò)增的等位基因數(shù)，Pi為該位點(diǎn)第i個(gè)等位基因的頻率（Keimet al., 1992）。引物的鑒別力（discrimination power, DP）即一對(duì)引物所能區(qū)別的最大品種數(shù)（Brownet al., 1996；許鯤等，2008）。使用GenAIEx 軟件計(jì)算等位基因數(shù)、基因型數(shù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 望春玉蘭長(zhǎng)基因組SSR 位點(diǎn)特征

利用 MISA 軟件對(duì)已公布的望春玉蘭基因組序列（～2.22 Gb）進(jìn)行搜索，在19 條染色體中發(fā)現(xiàn)符合條件的SSR 位點(diǎn)總計(jì)2 820 303 個(gè)。望春玉蘭基因組SSR 的長(zhǎng)度分布在12～701 bp 之間，其中長(zhǎng)度在12～16 bp 之間的有2 293 738 個(gè)，占總數(shù)的81.33%；長(zhǎng)度在 17～21 bp 之間的有270 830 個(gè)，占總數(shù)的9.6%；長(zhǎng)度在21 bp 以上的有255 735 個(gè)，占總數(shù)的9.07%（圖1）。

圖1 望春玉蘭SSR 長(zhǎng)度與分布頻率Fig. 1 The length distribution and frequency of SSRs in M. biondii

在搜索到的望春玉蘭基因組SSR 位點(diǎn)中，單核苷酸、二核苷酸、四核苷酸和六核苷酸重復(fù)類(lèi)型出現(xiàn)的頻率占優(yōu)勢(shì)，所占比例分別為9.98%、12.02%、7.63%和62.13%；三核苷酸和五核苷酸重復(fù)類(lèi)型出現(xiàn)頻率不高，分別占比5.43%和2.80%（表2）。SSR 重復(fù)單元的重復(fù)次數(shù)分布在 2～701 次之間，其中2～11 次重復(fù)的SSR 位點(diǎn)有2 385 718 個(gè)，占比84.59%；12～25 次重復(fù)的SSR 位點(diǎn)有353 970 個(gè)，占比12.55%；25 次重復(fù)以上的SSR 位點(diǎn)有80 615 個(gè)，占比2.86%（表2）。從SSR 的重復(fù)次數(shù)來(lái)看，單核苷酸主要分布在12～25 次，占單核苷酸總數(shù)的90.40%；二核苷酸主要分布在6～11 次，占二核苷酸總數(shù)的55.73%；三核苷酸主要分布在4～9 次，占三核苷酸總數(shù)的96%；四核苷酸、五核苷酸主要分布在3～6 次，分別占其總數(shù)99.41%和99.51%；六核苷酸主要分布在2～5 次，占六核苷酸總數(shù)的99.92%（表2）。

表2 望春玉蘭基因組SSR 的種類(lèi)、數(shù)量及比例Tab. 2 Type, number and ratio of SSRs in the genome of M. biondii

從核苷酸重復(fù)基序的類(lèi)型來(lái)看，望春玉蘭基因組2 820 303 個(gè)SSR 位點(diǎn)共包含501 種重復(fù)基序，二核苷酸至六核苷酸重復(fù)基序分別有4、10、33、102 和352 種。二核苷酸重復(fù)基序中AG/CT（166 489 個(gè)）、AT/AT（130 648 個(gè)）和AC/GT（41 152 個(gè)）的出現(xiàn)頻率較高，分別占二核苷酸重復(fù)總數(shù)的49.1%、38.53%和12.14%。三核苷酸中出現(xiàn)最多的重復(fù)基序是AAT/ATT（50 530 個(gè)）和AAG/CTT（47 939 個(gè)），分別占三核苷酸總數(shù)的33.02%和31.33%，其次是ATC/ATG（22 407 個(gè)），占三核苷酸總數(shù)的14.64%；最少的是CCG/CGG（255 個(gè)），只占三核苷酸總數(shù)的0.17%。四核苷酸中出現(xiàn)最多的重復(fù)基序是AAAT/ATTT（70 162 個(gè)）占四核苷酸總數(shù)的32.58%，其次是AAAG/CTTT（28 531 個(gè)）占四核苷酸總數(shù)的13.25%。五核苷酸中以AAAAT/ATTTT（21 301 個(gè)）和AAAAG/CTTTT（11 687個(gè)）出現(xiàn)頻率最高，分別占五核苷酸總數(shù)的26.96%和14.79%。六核苷酸中出現(xiàn)頻率最高的是 AAACCT/AGGTTT（464 338 個(gè)），占六核苷酸總數(shù)的26.50%，其次是AAAAAT/ATTTTT（86 617 個(gè)）、AACCTT/AAGGTT（464 338 個(gè)）和AAAAAG/CTTTTT（56 652 個(gè)），分別占六核苷酸總數(shù)的4.94%、4.24%和3.23%（附表1）。

2.2 望春玉蘭基因組SSR 引物的篩選與多態(tài)性分析

利用隨機(jī)選取的203 對(duì)SSR 引物對(duì)望春玉蘭樣品NZ1—NZ6 的基因組DNA 進(jìn)行PCR 擴(kuò)增，有94 對(duì)引物能夠得到預(yù)期產(chǎn)物，引物擴(kuò)增有效率為46.31%；有25 對(duì)引物在不同樣品間呈現(xiàn)多態(tài)性，占有效引物的26.6%。這25 對(duì)多態(tài)性引物擴(kuò)增望春玉蘭基因組產(chǎn)生的條帶數(shù)在2～5 之間（附表2），不同樣品間條帶呈現(xiàn)多態(tài)性（圖2）。

圖2 多態(tài)性引物擴(kuò)增6 份望春玉蘭樣品的部分代表性結(jié)果Fig. 2 Representative results of the six M. biondii samples amplified with polymorphic primers

2.3 玉蘭商業(yè)品種的SSR 標(biāo)記多態(tài)性及指紋圖譜構(gòu)建

在上述25 對(duì)多態(tài)性引物中，選擇PIC 值最高的前10 對(duì)引物，對(duì)26 份玉蘭商業(yè)品種進(jìn)行擴(kuò)增。由于聚丙烯酰胺凝膠電泳只能根據(jù)DNA Marker 判斷譜帶的相對(duì)大小，不夠精確，因此在分析玉蘭商業(yè)品種擴(kuò)增結(jié)果時(shí)，采用了毛細(xì)管電泳對(duì)擴(kuò)增譜帶進(jìn)行判讀。每一對(duì)引物都可以對(duì)供試樣品產(chǎn)生清晰譜帶，表明篩選出的SSR 引物在不同玉蘭品種間表現(xiàn)出良好的通用性。10 對(duì)引物共擴(kuò)增出85 個(gè)等位位點(diǎn)，最多的為18 個(gè)（Chr19-6），最少的為3 個(gè)（Chr08-5），平均每對(duì)引物檢測(cè)到8.5 個(gè)；基因型數(shù)最多的為19 個(gè)（Chr06-10），最少的為4 個(gè)（Chr08-5），平均每對(duì)引物檢測(cè)到8.4 個(gè)；PIC 指數(shù)在0.420～0.882 之間，平均為0.759（表3）。以引物Chr02-1 為例，該對(duì)引物擴(kuò)增產(chǎn)生6 種不同基因型譜帶（圖3）。

圖3 引物Chr02-1 在26 份玉蘭商業(yè)品種中擴(kuò)增出的6 種基因型Fig. 3 Six genotypes generated by the primer Chr02-1 amplified among 26 commercial cultivars

表3 10 對(duì)SSR 引物多態(tài)性及鑒別力分析Tab. 3 Polymorphic and discrimination power analysis of the 10 pairs of primers

某些玉蘭品種僅需一對(duì)引物即可與其他品種相互區(qū)分，例如引物Chr02-1 和Chr10-7 分別是‘日出’和‘玉玲瓏’的特異引物。但多數(shù)品種需要利用不同的引物組合才能實(shí)現(xiàn)與其他品種的區(qū)分。一對(duì)引物所能區(qū)分的最大品種數(shù)可以用于評(píng)價(jià)引物鑒別力。按照引物鑒別力大小排列，只需利用3 對(duì)引物（Chr06-10、Chr09-2、Chr19-6）作為首選引物組合即可將本研究中涉及26 份玉蘭商業(yè)品種一一區(qū)分，但是為了能夠更準(zhǔn)確地反映某一品種的遺傳真實(shí)性，避免品種識(shí)別誤差，擴(kuò)大指紋圖譜的適用范圍，本研究整合匯總了10對(duì)SSR 引物對(duì)每一個(gè)品種的擴(kuò)增結(jié)果，每一對(duì)引物的擴(kuò)增帶型按照大小進(jìn)行編碼處理，得到每一個(gè)玉蘭品種對(duì)應(yīng)A-F 引物的10 個(gè)編號(hào)，按固定的順序?qū)?0 個(gè)編號(hào)串聯(lián)形成字符串，由此得到以字符串表示的26份玉蘭商業(yè)品種的DNA 指紋代碼，并進(jìn)一步利用二維碼生成器將指紋圖譜代碼信息轉(zhuǎn)換為便于市場(chǎng)流通和栽培管理的二維碼（表4）。

表4 26 個(gè)玉蘭品種的指紋代碼Tab. 4 Fingerprints of 26 Magnolia cultivars

3 討論

木蘭類(lèi)（Magnoliids）植物在被子植物演化系統(tǒng)中占有特殊地位，是探究被子植物起源與進(jìn)化的代表性植物（Chenet al., 2019）。目前，完成全基因組測(cè)序的木蘭類(lèi)植物僅有6 個(gè)物種，包括：鵝掌楸（Liriodendron chinense）（Chenet al., 2019）、牛油果（Persea americana）（Rendón-Anayaet al., 2019）、黑胡椒（Piper nigrum）（Huet al., 2019）、刺果番荔枝（Annona muricata）（Strijket al., 2021）、牛樟（Cinnamomum kanehirae）（Chawetal., 2019）和望春玉蘭（Donget al., 2021），其中望春玉蘭基因組（～2.2 GB）是迄今報(bào)道的木蘭類(lèi)植物中最大的。這些基因組序列的公布不僅為研究木蘭類(lèi)植物在被子植物演化歷史中的系統(tǒng)位置提供了關(guān)鍵信息，也為充分開(kāi)發(fā)分子標(biāo)記資源提供了豐富的序列。本研究根據(jù)望春玉蘭全基因組的SSR 位點(diǎn)序列信息，篩選出10 對(duì)擴(kuò)增譜帶清晰的SSR 引物，在擴(kuò)增不同玉蘭品種基因組DNA 時(shí)表現(xiàn)出良好的穩(wěn)定性和重復(fù)性，這些引物擴(kuò)增的等位基因數(shù)≥3，PIC 值均大于0.65（除Chr08-5 外），顯示出較高的多態(tài)信息。此外，最終篩選出的10 對(duì)SSR 引物分散在10 條不同染色體上，能夠充分反映不同玉蘭品種之間的遺傳差異，提高鑒定結(jié)果的可靠性，可以作為玉蘭品種鑒定的核心引物。利用這些引物首次構(gòu)建了26 個(gè)玉蘭商業(yè)品種的DNA 指紋圖譜，其中包括12 個(gè)國(guó)家林業(yè)草原局授權(quán)植物新品種。由于玉蘭屬植物極佳的觀賞性和較高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值性，栽培范圍廣泛，自然雜交現(xiàn)象較多，部分品種間性狀變異幅度小、交叉多，僅憑葉形、花型、果實(shí)等形態(tài)特征難以對(duì)相似品種的遺傳真實(shí)性進(jìn)行準(zhǔn)確判斷。通過(guò)比對(duì)玉蘭DNA 指紋圖，結(jié)果顯示本研究所涉及的26 個(gè)玉蘭商業(yè)不存在同種異名或異種同名現(xiàn)象。

中國(guó)是玉蘭屬植物起源中心，也是玉蘭屬植物資源最為豐富的國(guó)家（田國(guó)行等，2006），僅望春玉蘭就包括6 個(gè)品種群和24 個(gè)品種（孫軍等，2008）。近年來(lái)，國(guó)外新優(yōu)品種不斷被引入，國(guó)內(nèi)自主培育的新品種也不斷涌現(xiàn)，為望春玉蘭良種選育和推廣應(yīng)用提供了豐富種質(zhì)資源，但由于栽培歷史悠久、來(lái)源復(fù)雜、品種繁多，為優(yōu)良品種的純度和真實(shí)性鑒定，充分保障育種知識(shí)產(chǎn)權(quán)提出了更高的要求。本研究開(kāi)發(fā)的SSR引物具有多態(tài)性高、穩(wěn)定好等特點(diǎn)，在少量玉蘭商業(yè)品種中的應(yīng)用和初探，證明了SSR 標(biāo)記用于玉蘭種質(zhì)資源DNA 指紋圖譜構(gòu)建和品種鑒別的可行性。在后續(xù)研究工作中，廣泛收集和系統(tǒng)整理玉蘭品種資源，構(gòu)建包含更多玉蘭品種的SSR 指紋圖譜數(shù)據(jù)庫(kù)具有重要意義。建立和完善玉蘭品種指紋圖譜數(shù)據(jù)庫(kù)，進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)指紋圖的查詢(xún)和比對(duì)功能，不僅可以為玉蘭品種快速和準(zhǔn)確鑒別提供遺傳信息，也為玉蘭新品種的審定和登記提供一個(gè)基礎(chǔ)平臺(tái)。此外，玉蘭屬植物系統(tǒng)分類(lèi)和親緣關(guān)系研究存在較大爭(zhēng)議（傅大立，2001）。以形態(tài)學(xué)特征為基礎(chǔ)，以分子標(biāo)記等多種遺傳標(biāo)記技術(shù)為輔助，綜合形態(tài)特征和基因型數(shù)據(jù)，將有利于系統(tǒng)梳理玉蘭屬植物復(fù)雜的分類(lèi)關(guān)系。本研究開(kāi)發(fā)的SSR 引物也為玉蘭屬植物的系統(tǒng)分類(lèi)和遺傳背景分析提供了分子標(biāo)記資源。

4 結(jié)論

本研究通過(guò)對(duì)望春玉蘭全基因組微衛(wèi)星序列進(jìn)行查找和分析，共獲得重復(fù)單元長(zhǎng)度為1～6 堿基的微衛(wèi)星位點(diǎn)2 820 303 個(gè)，其中六核苷酸重復(fù)基序AAACCT/AGGTTT 數(shù)量最多（464 338 個(gè)），占六核苷酸重復(fù)總數(shù)的26.50%。在此基礎(chǔ)上，設(shè)計(jì)開(kāi)發(fā)和篩選出譜帶清晰、易于判讀、多態(tài)性高的SSR 引物25 對(duì)，平均每對(duì)引物產(chǎn)生1.28 個(gè)多態(tài)性條帶，PIC 值在0.24～0.72。進(jìn)一步利用PIC 值最高的前10 對(duì)引物構(gòu)建了玉蘭商業(yè)品種的DNA 指紋圖譜，結(jié)果表明這10對(duì)引物在不同品種中具有良好通用性，可以準(zhǔn)確鑒別26 個(gè)商業(yè)品種。本研究不僅為玉蘭屬植物群體遺傳結(jié)構(gòu)和遺傳多樣性研究提供了豐富的分子標(biāo)記資源，也為玉蘭優(yōu)良品種的遺傳真實(shí)性鑒別和品種保護(hù)工作提供了技術(shù)支撐和科學(xué)依據(jù)。

附表 1 望春玉蘭基因組SSR 各重復(fù)基序類(lèi)型及數(shù)量Appendix Tab. 1 The type and number of SSR repeat motifs in the M. biondii genome

附表 2 望春玉蘭25 對(duì)多態(tài)性SSR 引物信息Appendix Tab. 2 Information of 25 polymorphic primers developed from M. biondii