李 昭，鄭金鳳，石笑弋，劉 軼，李昌亮，劉雁鳴，李曉燕

1.湖南省藥品檢驗檢測研究院，湖南 長沙 410001；2.國家藥品監(jiān)督管理局藥用輔料工程技術研究重點實驗室，湖南 長沙 410001；3.湖南省藥品審核查驗中心，湖南 長沙 410001

復方賴氨酸顆粒收載于《國家藥品標準》（化學藥品地方標準上升國家標準，第16 冊）[1]，是由鹽酸賴氨酸、葡萄糖酸鈣、維生素B1、維生素B6等組成的復方制劑，主要用于改善賴氨酸缺乏引起的小兒食欲不振和營養(yǎng)不良，亦用于補充賴氨酸、維生素和鈣質(zhì)。原質(zhì)量標準使用一階導數(shù)紫外法測定鹽酸賴氨酸含量，原子吸收法測定葡萄糖酸鈣的含量。但該檢測方法操作繁瑣、費時、效率較低，且重復性差，增大了生產(chǎn)及質(zhì)量控制的難度。本文將參考有關文獻[2-5]，建立一種能快速、準確且同時測定復方賴氨酸顆粒中鹽酸賴氨酸和葡萄糖酸鈣含量的方法，以期為產(chǎn)品的質(zhì)量控制提供更好的分析方法。

1 材料與方法

1.1 儀器與設備

Agilent1260 II 高效液相色譜儀（美國安捷倫公司，UV 紫外檢測器）；XP205 型電子天平（瑞士梅特勒公司，精密度：1/100000）。

1.2 材料與試劑

樣品：復方賴氨酸顆粒（四川某制藥公司，批號：190201，190202，190203）；鹽酸賴氨酸對照品（來源：中檢院；批號：140673-201207；含量：99.8%）；葡萄糖酸鈣對照品（來源：中檢院；批號：100082-201803；含量：100%）；水為超純水；乙腈（色譜純，霍尼韋爾貿(mào)易（上海）有限公司，批號：TIDA1H）；磷酸二氫鉀（分析純，國藥集團化學試劑有限公司，批號：20190328）。

1.3 試驗方法

1.3.1 色譜條件

色譜柱：Welch Ultimate XB-NH2（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈-0.05 mol/L 磷酸二氫鉀溶液（60∶40）；檢測器：UV 檢測器；檢測波長：200 nm；柱溫：30 ℃；流速：1.0 mL/min；進樣量：10 μL。

1.3.2 制備溶液

對照品溶液：精密稱取鹽酸賴氨酸和葡萄糖酸鈣對照品適量，加溶劑溶解并稀釋制成約含鹽酸賴氨酸5.4 mg/mL 和葡萄糖酸鈣0.3mg/mL 的溶液。

供試品溶液：取出10 袋本品的內(nèi)容物，精密稱定，研磨，再精密稱取細粉適量，加溶劑溶解并稀釋制成約含鹽酸賴氨酸5.4 mg/mL 和葡萄糖酸鈣0.3 mg/mL 的溶液。

陰性樣品溶液：精密稱取除鹽酸賴氨酸和葡萄糖酸鈣以外的其余原輔料，按處方比例配制。

精密稱取鹽酸賴氨酸和葡萄糖酸鈣對照品適量，加溶劑溶解并稀釋制成含鹽酸賴氨酸1.346 0、2.692 0、4.038 0、5.384 1、6.057 1、6.730 1 和7.403 1 mg/mL，葡萄糖酸鈣0.075 9、0.151 8、0.227 7、0.303 6、0.341 5、0.379 5 和0.417 5 mg/mL 的系列溶液。以峰面積（A）為縱坐標，濃度（C）為橫坐標，進行線性回歸。

1.3.3 進行試驗

重復性試驗：取同一批號的供試品（批號190201）6 份，按1.3.2 項的操作制備供試品溶液。

精密度試驗：取重復性項下的樣品溶液，連續(xù)進樣6 次。

回收率試驗：精密稱取9 份不含鹽酸賴氨酸和葡萄糖酸鈣的其余原輔料，分別置于100 mL 量瓶中，分別按低、中、高三種濃度加入3 份鹽酸賴氨酸和葡萄糖酸鈣，按1.3.2 項的操作制備供試品溶液。

穩(wěn)定性試驗：取重復性項下的供試品溶液，分別于配制0、2、4、8、12、24 h 后進樣。

2 結果與分析

2.1 各項試驗結果

專屬性試驗：結果表明，陰性樣品溶液主峰位置無干擾，該方法專屬性良好。詳見圖1。

圖1 HPLC 色譜圖（1：葡萄糖酸鈣；2：鹽酸賴氨酸）

線性試驗：鹽酸賴氨酸線性方程為A=441.08C+11.83，r=0.999 9；葡萄糖酸鈣線性方程為A =751.41C-3.93，r=0.999 8。試驗結果表明：鹽酸賴氨酸質(zhì)量濃度在1.346 0～7.403 1 mg/mL 范圍內(nèi)，葡萄糖酸鈣質(zhì)量濃度在0.075 9～0.417 5 mg/mL 范圍內(nèi)，與峰面積呈良好的線性關系。

重復性試驗：6 次測定鹽酸賴氨酸的平均含量為97.74%，SRSD為0.23%（n=6）；葡萄糖酸鈣的平均含量為98.46%，SRSD為0.38%（n=6）。試驗結果表明，重復性良好。

精密度試驗：鹽酸賴氨酸峰面積的SRSD為0.03%（n=6）；葡萄糖酸鈣峰面積的SRSD為0.73%（n=6）。試驗結果表明，精密度良好。

回收率試驗：鹽酸賴氨酸平均回收率為99.32%，SRSD為0.27%（n=9）；葡萄糖酸鈣平均回收率為100.51%，SRSD為0.71%（n=9）。試驗結果表明，回收率良好。

穩(wěn)定性試驗：鹽酸賴氨酸峰面積的SRSD為0.23%（n=6）；葡萄糖酸鈣峰面積的SRSD為1.13%（n=6）。試驗結果表明：溶液24 h 內(nèi)保持在穩(wěn)定狀態(tài)。

2.2 與現(xiàn)行國家標準WS1-XG-047-2000 測定結果比較

將按照上述方法測得的結果與現(xiàn)行國家標準收載的復方賴氨酸顆粒含量測定方法測得的結果相比較，比較結果見表1。由表可知，該方法與國家標準方法測定的結果基本一致。

表1 不同方法測定鹽酸賴氨酸和葡萄糖酸鈣含量的比較（單位：%）

3 討論與結論

復方賴氨酸顆?，F(xiàn)行國家標準為化學藥品地方標準上升國家標準第十六冊WS1-XG-047-2000，其中鹽酸賴氨酸含量測定采用一階導數(shù)紫外分光光度法，葡萄糖酸鈣含量測定采用原子吸收法，但使用該方法操作較為繁瑣。對此，本文采用了較為簡便的高效液相色譜法，直接測定鹽酸賴氨酸和葡萄糖酸鈣兩種組分含量，有助于提升檢測效率。

鹽酸賴氨酸屬于末端吸收，文獻報道的HPLC法測定賴氨酸大多采用的是衍生法，操作繁瑣，增加了分析步驟和成本。而本研究提出的方法不經(jīng)衍生，操作簡便、專屬性強、分離效果好、準確度高，穩(wěn)定性及重現(xiàn)性都比較理想，符合分析工作的要求，值得進一步推廣和應用。