王紫怡,李佳林,王雪純,付立波

(長春師范大學生命科學學院,吉林 長春 130032)

夾竹桃(Neriumindicum)是一種廣泛分布于熱帶和亞熱帶地區(qū)的觀賞植物,在我國各地區(qū)均有栽植[1]。夾竹桃的葉、皮、根、花中含有多種生物活性成分,具有強心、利尿、 抗癌、鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、抗菌、消炎等功效[2]。有報道研究了同屬植物歐洲夾竹桃中兩種果膠類酸性多糖的化學結(jié)構(gòu)和藥理活性,通過實驗證實了夾竹桃葉提取物對小鼠的鎮(zhèn)痛作用[3-4]。

龍須藤(Bauhiniachampionii)為豆科羊蹄甲屬植物,又稱羊蹄藤、烏郎藤、過崗圓龍、九龍?zhí)?、梅花入骨丹? 分布于華東、華中、華南、西南等地。其味苦、澀,性平,具有祛風除濕、活血止痛、健脾理氣等功效,臨床用于治療風濕痹痛、胃脘脹痛、跌打損傷、痢疾等癥[5]。目前從龍須藤中已分離鑒定出數(shù)十種化合物,主要含有黃酮類、糖類、揮發(fā)油等成分[6]。

目前治療疼痛的方法有很多,常用的是口服鎮(zhèn)痛藥物。臨床上常用的鎮(zhèn)痛藥物有如布洛芬、吲哚美辛、阿司匹林等,雖然這些藥物具有明顯療效,但常常伴隨著一些副作用。因此具有療效溫和、穩(wěn)定、安全的中藥治療方法越來越受到人們的重視[7]。為探究中草藥材夾竹桃與龍須藤合劑是否具有鎮(zhèn)痛作用,本次試驗采用灌胃和行為學測痛方法來探究夾竹桃與龍須藤合劑是否參與正常大鼠的痛覺調(diào)節(jié)作用,以便為后續(xù)中草藥材的鎮(zhèn)痛作用的研究提供參考。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 實驗動物

6只雄性Wistar大鼠,體重在180～200 g,由白求恩醫(yī)學動物實驗中心提供。每只單獨飼養(yǎng),3天換一次墊料,室溫穩(wěn)定在25 ℃,提供充足水源,一天3次喂食。

在實驗前期,對大鼠進行熱板和壓板的適應性訓練。大約每天上午9點進行測試,每只大鼠測3輪,連續(xù)測5天。以便大鼠適應實驗環(huán)境,得到更為準確的實驗數(shù)據(jù)。

1.1.2 實驗用品及儀器

夾竹桃和龍須藤干葉片原樣、氯化鈉注射液(遼寧民康制藥有限公司)、灌胃針 (深圳瑞沃德公司)、YLS-6B智能熱板儀(上海曼普生物公司)、YLS-3E電子壓痛儀(意大利UGO)、電磁爐。

1.2 實驗方法

1.2.1 不同質(zhì)量濃度的夾竹桃與龍須藤的合劑的配制

取夾竹桃,龍須藤干葉片原樣各20 g,分別加水進行煎煮,使其溶液濃縮至500 mL,得到40 mg/mL的母液。取母液配制濃度分別為5、20、40 mg/mL的合劑備用。灌胃用量每次2 mL。

1.2.2 行為學測痛

1.2.2.1 熱板測試

將電子熱板儀溫度設定為(52±0.2)℃,將大鼠雙爪分別與熱板儀接觸,踩下計時器,此時開始計時,由于大鼠會感知到足底的灼熱感,出現(xiàn)后足回縮,離開與熱板儀的接觸面,此時再次踩下計時器,計時結(jié)束。熱板儀上顯示的測量時間,即為大鼠的熱痛閾值(hindpaw withdrawal latency,HWL)。以第6天注射生理鹽水后測得大鼠的HWL作為對照,從第7天開始用不同濃度的夾竹桃和龍須藤合劑進行灌胃。在每次灌胃之前需要先測3次大鼠的HWL,作為基礎值。灌胃之后在第5、10、15、20、30、45、60 min進行熱板測痛,測大鼠的HWL。

1.2.2.2 壓板測試

將壓板示數(shù)的指針調(diào)至0,將大鼠雙足分別與壓板的圓形臺面接觸,此時開始踩壓力板,持續(xù)踩踏,示數(shù)會逐漸加大,這也意味著壓力逐漸增大。直至大鼠后足發(fā)生撤回,脫離圓形臺面,停止踩踏,此時指針的示數(shù)即視為大鼠的壓痛閾值HWL。以第6天注射生理鹽水后測得大鼠的HWL作為對照,從第7天開始用不同濃度的夾竹桃和龍須藤合劑進行灌胃。在每次灌胃之前先測3次大鼠的HWL作為基礎值。灌胃之后在第5、10、15、20、30、45、60 min進行壓板測痛,測大鼠的HWL。

1.2.3 數(shù)據(jù)處理方法

用實驗前測得的3次HWL值的平均值作為基礎值,實驗中測得的結(jié)果與其比較。應用SPSS 27.0進行數(shù)據(jù)分析,非正態(tài)分布數(shù)據(jù)應用非參數(shù)檢驗方法,正態(tài)分布數(shù)據(jù)應用t檢驗方法,P<0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 實驗結(jié)果

2.1 灌胃5 mg/mL夾竹桃與龍須藤合劑后正常大鼠的HWL的變化

由表1可知,與灌入生理鹽水組相比,灌胃5 mg/mL的合劑對正常大鼠右爪的熱刺激HWL有極顯著差異(P<0.01);左爪的機械刺激HWL有顯著差異(P<0.05);對左爪熱刺激HWL和對右爪的機械刺激HWL無顯著差異(P>0.05)。

表1 灌胃5 mg/mL夾竹桃與龍須藤合劑后對大鼠熱刺激與機械刺激HWL的影響

2.2 灌胃20 mg/mL夾竹桃與龍須藤合劑后正常大鼠的HWL的變化

由表2可知,與對照組相比,灌胃20 mg/mL的合劑對正常大鼠的左爪的熱刺激和機械刺激HWL均有顯著差異(P<0.05);右爪的熱刺激HWL和機械刺激HWL均無顯著差異(P>0.05)。

表2 灌胃20 mg/mL夾竹桃與龍須藤合劑后對大鼠熱刺激與機械刺激HWL的影響

2.3 灌胃40 mg/mL夾竹桃與龍須藤合劑后正常大鼠的HWL的變化

由表3可知,與灌入生理鹽水組相比,灌胃40 mg/mL的合劑對正常大鼠左右爪的機械刺激HWL均有顯著差異(P<0.05);對右爪的熱刺激有極顯著差異(P<0.01);對左爪熱刺激HWL無顯著差異(P>0.05)。

表3 灌胃40 mg/mL夾竹桃與龍須藤合劑后對大鼠熱刺激與機械刺激HWL的影響

3 討論

本次實驗結(jié)果表明,三個濃度(5、20、40 mg/mL)下的夾竹桃與龍須藤合劑對正常大鼠灌胃,大鼠的HWL與生理鹽水組相比有了明顯的增大,均在15 min大鼠的HWL達到最佳,表明合劑起到了明顯的鎮(zhèn)痛作用。隨著時間的增加,正常大鼠對熱刺激和機械刺激的痛覺敏感程度逐漸降低。

通過高效液相色譜法和液-質(zhì)聯(lián)用法(LC-MS)等提取夾竹桃中的化學成分,可知強心苷類化合物在夾竹桃中含量最多,是最主要的活性成分[8-9]。且強心苷具有顯著的強心、抗癌、抑菌、鎮(zhèn)痛、祛瘀等作用[10]。運用硅膠、聚酰胺等柱色譜手段進行分離純化,其成分大多是醇提取物,且這些成分的鎮(zhèn)痛抗炎作用較強[11]。有臨床報道,采用龍須藤煎煮液能緩解類風濕性關節(jié)炎患者的癥狀,降低關節(jié)疼痛,增加雙手握力,并能在較短時間內(nèi)使患者腰腿疼痛緩解[12]。中藥可通過增加5-羥色胺含量及其受體的表達、激活阿片受體、抑制環(huán)氧合酶活性、調(diào)節(jié)細胞因子分泌等來發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用[13]。對于夾竹桃與龍須藤合劑中的主要鎮(zhèn)痛成分是如何參與大鼠痛覺調(diào)節(jié)機制,目前尚不清楚,有待于進一步實驗研究。