焦興蘋，達洛嘉，楊鳳梅

［青海省藥品檢驗檢測院，國家藥品監(jiān)督管理局中藥（藏藥） 質量控制重點實驗室，青海省中藏藥現代化研究重點實驗室，青海 西寧 810016］

蘚生馬先蒿是傳統(tǒng)藏藥，在《四部醫(yī)典》 《度母本草》 《宇妥本草》 《藍琉璃》 中均有記載［1］，原標準收載于1995 年版《衛(wèi)生部藥品標準（藏藥第一冊） 》 中，來源為玄參科植物蘚生馬先蒿PedicularismuscicolaMaxim.的干燥花。夏季采收，陰干。藏文名“露如木保” “漏日莫?！?，具有斂毒、生肌、清胃熱的作用，藏醫(yī)常用于食肉中毒。主治“培根木布” 病、熱性腹瀉、胃潰瘍、胃出血、肺病等［2-3］，在藏成藥“解毒膠囊” “四味石榴散” 中均有應用［1］。其根為民間中藥材，異名土人參，具補元氣、生津安神，強心之功［4］。目前收載標準中僅有基原、性狀、顯微鑒別等檢驗項目，缺少TLC 鑒別、檢查、含量測定等關鍵項目，無法有效控制該藥材質量。

課題組對青海省部分藏醫(yī)院和藏藥制藥廠進行實地考察，發(fā)現蘚生馬先蒿實際用藥部位為“干燥的全草”。調研結果顯示蘚生馬先蒿花難采集，且采集晾干后質量嚴重損失，大規(guī)模生產中較難收集到大批量“干燥的花”，同時在《青海高原本草概要》［5］等部分文獻中記載其可以全草入藥［6-7］，因此實際應用中均以“干燥的全草” 入藥。課題組在收集樣品的過程中，發(fā)現調研結果與實際情況相符，以花收集樣品較為困難。因此本實驗以10批蘚生馬先蒿“干燥的全草” 為對象來研究。

1 材料

1.1 儀器 BX53 生物顯微鏡（日本Olympus 公司）； SQP 電子天平（德國Sartorius 公司）； LC-20高效液相色譜儀（日本島津公司）； SX-4-10 箱式高溫電阻爐 （天津市泰斯特儀器有限公司）；101A-2E 電熱鼓風干燥箱（上海實驗儀器廠有限公司）； LINOMAT 5 半自動點樣儀（瑞士卡瑪公司）；DT1028 CH 超聲波提取器（德國Bandelin 公司）。

1.2 藥材 10 批蘚生馬先蒿于2017 年至2020 年在青海、西藏、甘肅等地采集或收集，經青海省藥品檢驗檢測院焦興蘋主管藥師鑒定為玄參科植物蘚生馬先蒿PedicularismuscicolaMaxim.干燥全草，具體見表1。

表1 樣品信息Tab.1 Information of samples

1.3 試劑與藥物 桃葉珊瑚苷 （批號111761-200601）、毛蕊花糖苷 （批號111530-201713，純度92.5%）、京尼平苷酸 （批號111828-201805，純度98.1%） 對照品 （中國食品藥品檢定研究院）。硅膠G 薄層板（10 cm×20 cm，青島海洋化工廠、德國默克公司）。甲醇為色譜純（德國默克公司）； 乙酸乙酯等其他試劑均為分析純； 水為超純水。

2 方法與結果

2.1 基原鑒別 本品為多年生草本，干時多少變黑，多毛。根莖粗，有分枝，端有宿存鱗片。莖叢生，在中間者直立，在外圍者多彎曲上升或傾臥，常成密叢。葉有柄； 葉片橢圓形至披針形，羽狀全裂?；ń砸干曰考撮_始著生； 萼圓筒形，長達11 mm，基部三角形而連于萼管，向上漸細，均全緣，至近端處膨大卵形，具有少數鋸齒； 花冠玫瑰色，外面有毛，盔直立部分很短，幾在基部即向左方扭折使其頂部向下，前方漸細為卷曲或S 形的長喙，喙因盔扭折之故而反向上方卷曲。

2.2 性狀鑒別 本品為干燥帶花的全草。莖多斷裂，細長且彎曲，偶見互生的葉，葉片細小多破碎。花多皺縮，棕褐色或淺紫色?；ü＜氶L，萼齒5 枚?；ü诮颗まD，前方漸細成卷曲或S 形的長喙。氣微香，味淡，微苦。見圖1。

圖1 蘚生馬先蒿性狀鑒別圖Fig.1 Trait identification image for P.muscicola

2.3 顯微鑒別 本品為粉末黃綠色?；ǚ哿o色或淡黃色，球形直徑18 ～25 μm，外壁薄，表面近光滑； 草酸鈣晶體眾多，散在或包含于細胞中； 網紋狀細胞類圓形，成群存在于細胞中； 導管以螺紋為主。見圖2。

圖2 蘚生馬先蒿顯微鑒別圖Fig.2 Microscopic identification image for of P.muscicola

2.4 TLC 鑒別 取本品粉末0.5 g，加10 mL 甲醇超聲處理30 min，濾過，濾液濃縮至1 mL，作為供試品溶液。取桃葉珊瑚苷對照品適量，加甲醇制成每1 mL 含0.2 mg 該成分的溶液，作為對照品溶液。按照2020 年版《中國藥典》 四部TLC 法（通則0502），吸取供試品、對照品溶液各10 μL，點于同一硅膠G 薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水（8 ∶0.5 ∶1 ∶1） 為展開劑，展開，取出，晾干，3%三氯化鋁乙醇溶液顯色，在105 ℃下加熱，室溫放涼，在紫外光燈（365 nm） 下檢視，結果見圖3。由此可知，供試品在對照品相應位置處顯相同的棕紅色熒光斑點。

圖3 蘚生馬先蒿TLC 色譜圖Fig.3 TLC chromatogram of P.muscicola

2.5 水分 參照2020 年版《中國藥典》 四部通則水分測定法第二法（烘干法） 測定，重復2 次，取平均值，結果見表2。

表2 水分、灰分、浸出物含量測定結果（%，n＝2）Tab.2 Results of water，ash and extract content determination （%，n＝2）

2.6 灰分 參照2020 年版《中國藥典》 四部通則灰分測定法測定，重復2 次，取平均值，結果見表2。

2.7 浸出物 參照2020 年版《中國藥典》 四部通則浸出物測定法中水浸出物測定法測定，重復2次，取平均值，結果見表2。

2.8 京尼平苷酸、毛蕊花糖苷含量測定 參考文獻［8-10］ 報道。

2.8.1 色譜條件 Waters XBridge ?C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）； 流動相甲醇（A） -0.5%醋酸（B），梯度洗脫（0 ～10 min，10% A；10 ～55 min，10% ～57% A； 55 ～60 min，57% ～10%A）； 體積流量1.0 mL/min； 柱溫25 ℃； 檢測波長254 nm； 進樣量10 μL。

2.8.2 對照品溶液制備 精密稱取京尼平苷酸對照品13.08 mg、毛蕊花糖苷對照品12.73 mg，置于50 mL 棕色量瓶中，60% 甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，得到兩者質量濃度分別為256.62、235.50 μg/mL 的母液，分別精密吸取5 mL，置于25 mL 棕色量瓶中，60% 甲醇稀釋至刻度，即得（兩者質量濃度分別為51.32、47.10 μg/mL）。

2.8.3 供試品溶液制備 取蘚生馬先蒿粉末（過3 號篩） 約0.1 g，精密稱定，置于具塞棕色三角瓶中，加入25 mL 60%甲醇，密塞，稱定質量，超聲處理30 min，放冷，60%甲醇補足減失的質量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.8.4 系統(tǒng)適用性考察 取對照品、供試品溶液適量，在“2.8.1” 項色譜條件下進樣測定，結果見圖4。以京尼平苷酸峰計，各成分色譜峰理論塔板數應大于3 000，分離度應大于1.5。

圖4 各成分HPLC 色譜圖Fig.4 HPLC chromatograms of various constituents

2.8.5 線性關系考察 分別精密吸取“2.8.2”項下母液0.5、1.0、2.0、3.5、5.0 mL，置于10 mL 棕色量瓶中，60%甲醇稀釋至刻度，搖勻，得系列質量濃度，在“2.8.1” 項色譜條件下進樣測定。以對照品質量濃度為橫坐標（X），峰面積為縱坐標（Y） 進行回歸，得京尼平苷酸、毛蕊花糖苷方程分別為Y＝7 326.1X＋1 474 （r＝0.999 7）、Y＝6 788X＋13 360 （r＝0.999 9），分別在12.83 ～128.31、11.77 ～117.75 μg/mL 范圍內線性關系良好。

2.8.6 精密度試驗 精密吸取“2.8.2” 項下對照品溶液適量，在“2.8.1” 項色譜條件下進樣測定6 次，測得京尼平苷酸、毛蕊花糖苷峰面積RSD分別為0.75%、0.43%，表明儀器精密度良好。

2.8.7 重復性試驗 精密稱取同一份蘚生馬先蒿（S10） 粉末6 份，按“2.8.3” 項下方法制備供試品溶液，在“2.8.1” 項色譜條件下進樣測定，測得京尼平苷酸、毛蕊花糖苷含量RSD 分別為1.86%、0.61%，表明該方法重復性良好。

2.8.8 穩(wěn)定性試驗 取同一份供試品溶液（S10），于0、2、4、8、12、24 h 在“2.8.1” 項色譜條件下進樣測定，測得京尼平苷酸、毛蕊花糖苷峰面積RSD 分別為0.28%、1.14%，表明溶液在24 h 內穩(wěn)定性良好。

2.8.9 加樣回收率試驗 取各成分含量已知的蘚生馬先蒿（S10） 粉末6 份，每份約0.05 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加入25 mL 對照品溶液，密塞，稱定質量，超聲處理30 min，放冷，60%甲醇補足減失的質量，搖勻，濾過，0.45 μm微孔濾膜過濾，在“2.8.1” 項色譜條件下進樣測定，計算回收率。結果，京尼平苷酸平均加樣回收率為101%，RSD 為1.16%； 毛蕊花糖苷平均加樣回收率為101%，RSD 為1.08%。

2.8.10 樣品含量測定 取10 批蘚生馬先蒿粉末（過3 號篩） 各2 份，每份約0.1 g，精密稱定，按“2.8.3” 項下方法制備供試品溶液，在“2.8.1”項色譜條件下進樣測定，計算含量 （以干燥品計），結果見表3。

表3 各成分含量測定結果（%，n＝2）Tab.3 Results of content determination of various constituents （%，n＝2）

3 討論

本實驗以乙醇、稀乙醇、70% 乙醇、水為溶劑，分別采用冷浸法、熱浸法對樣品進行浸出物測定［11］，結果各方法所得含量依次為水浸出物-冷浸法（34.5%） ＞水浸出物-熱浸法（34.3%） ＞稀乙醇浸出物-冷浸法（30.9%） ＞稀乙醇浸出物-熱浸法（30.7%） ＞70% 乙醇浸出物-熱浸法（26.2%）＞70%乙醇浸出物-冷浸法（25.3%） ＞乙醇浸出物-熱浸法＞乙醇浸出物-冷浸法，考慮到操作方便、能源節(jié)約，最終采用水浸出物-冷浸法。另外，浸出物平均值為36.7%，下浮10% 約為33.0%，擬定蘚生馬先蒿中浸出物不得少于33.0%。

粉末鑒別中，顯微鏡下可觀察到較多花粉粒、草酸高晶體、網紋狀細胞、螺紋導管。檢查項中，總灰分偏高，平均值為15.8%，故對其進行酸不溶性灰分測定，結果均較低，平均值為2.0%，說明蘚生馬先蒿總灰分偏高是其生理性灰分較高所致，擬定總灰分不得超過20.0%，酸不溶性灰分不得超過4.0%。

蘚生馬先蒿中含有環(huán)烯醚萜類、酚酸類、多種糖苷類成分［12］。所含桃葉珊瑚苷具有肝臟保護、抗氧化等作用［13-14］； 京尼平苷酸具有消炎利膽等作用，在臨床上降壓作用明顯［15-16］； 毛蕊花糖苷有抗炎、抗氧化等作用［17-18］，均與蘚生馬先蒿主治功能相符，因此將桃葉珊瑚苷、京尼平苷酸、毛蕊花糖苷作為定性定量指標。采用不同生產廠家的硅膠G 板（青島海洋化工廠、德國默克公司），在不同溫度（15、25 ℃）、相對濕度（20%、35%）下桃葉珊瑚苷斑點均顯色清晰，分離度均良好。另外，京尼平苷酸含量平均值為0.31%，毛蕊花糖苷含量平均值為1.78%，根據測定結果并結合采收季節(jié)、采收年限不同，暫定本品按干燥品計算，含京尼平苷酸（C16H22O10） 不得少于0.25%，毛蕊花糖苷（C29H36O15） 不得少于1.70%。