任培君 江月萍 周積曉 荊雪 董嫻寧 周建蕊

1青島大學附屬醫(yī)院消化內(nèi)科,青島 266000;2青島大學附屬醫(yī)院病理科,青島 266000

【提要】 回顧性分析82例行手術(shù)切除且病理證實為胰腺癌患者的臨床資料,探討層黏連蛋白α3亞基(LAMA3)在胰腺癌組織中的表達及其與肝轉(zhuǎn)移的關(guān)系。結(jié)果顯示,胰腺癌肝轉(zhuǎn)移組LAMA3高表達率顯著高于非肝轉(zhuǎn)移組,腫瘤分化程度、病理分期及LAMA3表達水平與胰腺癌肝轉(zhuǎn)移相關(guān)且是其獨立危險因素。LAMA3高表達可能促進胰腺癌發(fā)生肝轉(zhuǎn)移,LAMA3可作為一種潛在治療靶點和預(yù)后標志物。

胰腺癌是一種高度致命的惡性腫瘤,確診后的5年生存率僅為10%[1]。轉(zhuǎn)移是胰腺癌患者死亡的主要原因,其中肝臟為最常見的轉(zhuǎn)移部位,其次是腹膜、肺和胸膜等[2-4]。層黏連蛋白是由α、β和γ亞基組成的異三聚體分子,層黏連蛋白α3亞基(laminin subunit alpha 3,LAMA3)基因參與編碼層黏連蛋白的α亞單位,從而調(diào)節(jié)細胞轉(zhuǎn)移和機械信號傳導,抑制腫瘤細胞的侵襲和轉(zhuǎn)移[5-6]。LAMA3參與胃癌、并影響卵巢癌、皮膚癌、肺癌和膀胱癌等腫瘤的發(fā)生、發(fā)展,影響患者預(yù)后[7-11]。已有文獻證實LAMA3在胰腺癌組織中表達升高[12-14],但LAMA3的表達與胰腺癌術(shù)后肝轉(zhuǎn)移的關(guān)系尚不明確。本研究旨在探討LAMA3在胰腺癌組織中的表達及其與肝轉(zhuǎn)移的關(guān)系,為臨床判斷預(yù)后提供有效證據(jù)。

一、資料與方法

1．研究對象:收集2018年1月至2020年12月間青島大學附屬醫(yī)院病理科存檔的82例行手術(shù)治療且術(shù)后病理證實為胰腺導管腺癌患者的石蠟標本。所有患者術(shù)前未行放、化療。記錄患者的性別、年齡、血清CEA和CA19-9水平、腫瘤大小、腫瘤分化程度、病理分期、是否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、有無脈管侵犯及神經(jīng)侵犯等。本研究經(jīng)青島大學附屬醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會批準通過(QYFYWZLL27485),患者或其家屬均簽署知情同意書。

2．胰腺癌組織LAMA3蛋白表達檢測:標本常規(guī)切片,采用免疫組織化學法檢測胰腺癌組織LAMA3蛋白表達,嚴格按試劑盒說明書操作。鼠抗人LAMA3單克隆抗體購自美國Abcam公司,工作濃度1∶100。以磷酸鹽緩沖液代替一抗作為陰性對照,以胞質(zhì)中出現(xiàn)黃色或棕褐色的顆粒樣著色為LAMA3蛋白陽性表達。根據(jù)陽性細胞的染色強度和陽性細胞百分比進行評分:無染色為0分,染色呈淡黃色為1分,染色呈棕黃色為2分,染色呈棕褐色為3分;陽性細胞占比≤20%為0分,21%～50%為1分,51%～75%為2分,>75%為3分。兩者相乘≥4分為LAMA3高表達,<4分為LAMA3低表達。

3．隨訪和分組:采用門診就診的方式進行隨訪。術(shù)后隨訪1年,隨訪至2021年12月31日。根據(jù)隨訪期內(nèi)影像學檢查結(jié)果有無肝轉(zhuǎn)移瘤將患者分為肝轉(zhuǎn)移組和非肝轉(zhuǎn)移組。

二、結(jié)果

1．臨床資料:82例患者中,男性50例,女性32例,年齡29～86(62.30±0.99)歲。血清CEA水平3.55(0.75～80.20)ng/ml,CA19-9水平104.95(0.63～2194.00)U/ml;腫瘤大小3.00(1.00～8.00)cm;腫瘤分化程度示高分化1例,中分化48例,中-低分化12例,低分化21例;病理分期示Ⅰ期35例,Ⅱ期38例,Ⅲ期6例,Ⅳ期3例;伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移38例,脈管侵犯27例,神經(jīng)侵犯65例。

2．胰腺癌肝轉(zhuǎn)移與LAMA3蛋白表達及患者臨床病理特征的關(guān)系:免疫組織化學染色結(jié)果顯示,LAMA3在肝轉(zhuǎn)移組胰腺癌組織中呈高表達(圖1)。38例肝轉(zhuǎn)移組患者中11例(28.9%)LAMA3呈高表達,44例非肝轉(zhuǎn)移組患者中僅1例(2.3%)LAMA3呈高表達,肝轉(zhuǎn)移組LAMA3高表達率顯著高于非肝轉(zhuǎn)移組,差異有統(tǒng)計學意義(χ2=11.614,P<0.05,表1)。臨床病理特征分析發(fā)現(xiàn),腫瘤大小、腫瘤分化程度及病理分期與胰腺癌肝轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)(P值均<0.05),而性別、年齡、血清CEA水平、血清CA19-9水平、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、脈管侵犯及神經(jīng)侵犯與胰腺癌肝轉(zhuǎn)移無關(guān)(表1)。

表1 胰腺癌肝轉(zhuǎn)移與患者臨床病理特征及層黏連蛋白α3亞基蛋白表達的關(guān)系

圖1 肝轉(zhuǎn)移組胰腺癌組織(1A)和非肝轉(zhuǎn)移組胰腺癌組織(1B)中的層黏連蛋白α3亞基表達(免疫組織化學 ×400)

3．影響胰腺癌肝轉(zhuǎn)移的多因素分析:多因素logistic回歸分析結(jié)果顯示,腫瘤分化程度、病理分期及LAMA3高表達是影響胰腺癌肝轉(zhuǎn)移的獨立危險因素(表2)。

表2 影響38例胰腺癌肝轉(zhuǎn)移的多因素分析

4．LAMA3高表達與胰腺癌肝轉(zhuǎn)移患者病理特征的關(guān)系:LAMA3高表達與胰腺癌肝轉(zhuǎn)移組患者的腫瘤大小、腫瘤分化程度、病理分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均無明顯相關(guān)性(表3)。

表3 層黏連蛋白α3亞基高表達與胰腺癌肝轉(zhuǎn)移組患者病理特征的關(guān)系[例(%)]

討論LAMA3位于人的18號染色體上,包含76個外顯子,2 665 624個堿基對,主要包括LAMA3A和LAMA3B兩個轉(zhuǎn)錄本[15]。LAMA3編碼層黏連蛋白并廣泛存在于人體的各個器官中,參與調(diào)節(jié)細胞黏附和遷移,并通過高親和力受體與細胞結(jié)合,從而間接促進和抑制腫瘤細胞的生長[16]。腫瘤組織中LAMA3的表達水平及其對患者預(yù)后的影響因癌癥類型而異。研究發(fā)現(xiàn),長鏈非編碼RNA LINC00628通過招募甲基化酶促進LAMA3啟動子甲基化,從而降低LAMA3在肺腺癌中的表達[9]。Tang等[10]研究發(fā)現(xiàn),LAMA3在卵巢癌組織中表達水平低于正常組織,且LAMA3低表達卵巢癌患者預(yù)后比高表達患者差。已有研究證明LAMA3在胰腺癌組織中表達上調(diào),且其過表達可促進癌細胞增殖、分化,從而影響胰腺癌患者的生存預(yù)后[12,15]。本課題組前期采用生物信息學方法也證實了LAMA3在胰腺癌組織中高表達,這表明LAMA3可能參與胰腺癌的進展過程。

腫瘤細胞從原始病灶脫落,穿過基底膜,侵入至血管或淋巴管,通過血流或淋巴擴散至遠端器官最終形成繼發(fā)性腫瘤[17]。層黏連蛋白332是基底膜屏障的關(guān)鍵成分,一旦LAMA3表達異常,層黏連蛋白332便無法合成,基底膜結(jié)構(gòu)缺失不完整,為腫瘤發(fā)生血行轉(zhuǎn)移提供有利的條件[18]。Huang等[14]探討了LAMA3、LAMB3和LAMC2在胰腺導管腺癌惡性生物學行為中的作用,結(jié)果表明LAMA3不僅在腫瘤組織中高表達,且LAMA3對腫瘤細胞增殖、遷移和侵襲的影響更強。本研究分析了患者臨床病理特征及LAMA3表達與胰腺癌肝轉(zhuǎn)移的相關(guān)性,結(jié)果發(fā)現(xiàn)腫瘤分化程度、病理分期及LAMA3表達是影響胰腺癌肝轉(zhuǎn)移的獨立危險因素。LAMA3高表達的患者肝轉(zhuǎn)移率高達91.7%(11/12),提示LAMA3高表達可能促進胰腺癌患者發(fā)生肝轉(zhuǎn)移。除此之外,腫瘤分化程度越低,病理分期越晚的胰腺癌患者肝轉(zhuǎn)移率越高。

Pan等[19]研究證實,隨著胰腺癌病理分期的進展,LAMA3的表達呈漸進性增加。Chen等[12]研究也發(fā)現(xiàn)LAMA3的陽性表達與胰腺癌的分化、浸潤深度和分期顯著相關(guān),這表明LAMA3可能通過相關(guān)機制在胰腺癌的進展過程中發(fā)揮重要作用。本研究進一步分析LAMA3高表達與胰腺癌術(shù)后肝轉(zhuǎn)移患者病理特征的相關(guān)性,結(jié)果發(fā)現(xiàn)LAMA3高表達與患者的腫瘤大小、腫瘤分化程度、病理分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均無明顯相關(guān),這可能與本研究所納入的肝轉(zhuǎn)移組患者樣本量少有關(guān)。未來仍需要多中心、大樣本數(shù)據(jù)加以證實。

綜上所述,LAMA3在胰腺癌組織中表達增高,其表達水平是影響胰腺癌患者發(fā)生肝轉(zhuǎn)移的獨立因素,LAMA3高表達可能促進胰腺癌患者發(fā)生肝轉(zhuǎn)移。未來可通過檢測胰腺癌組織中LAMA3的表達水平來預(yù)測胰腺癌患者的肝轉(zhuǎn)移情況,對判斷患者預(yù)后具有指導意義。

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