胡靜美,梁 靜,魯水洪,謝朝陽(yáng),簡(jiǎn)曉毅△

1.南方醫(yī)科大學(xué)附屬中山市博愛(ài)醫(yī)院輸血科,廣東中山 528400;2.廣東醫(yī)學(xué)院,廣東東莞 523808

ABO新生兒溶血病(ABO-HDN)是指因母嬰血型不符所致胎兒或新生兒發(fā)生的免疫性溶血性疾病,多見(jiàn)于母親血型為O型RhD陽(yáng)性,胎兒血型為A型或B型。臍帶是連接母親和胎兒血液的交通樞紐,胎兒紅細(xì)胞表面抗原通過(guò)臍帶進(jìn)入母親體內(nèi)刺激母體產(chǎn)生與胎兒血型抗原不合的免疫球蛋白G(IgG)抗體,這種抗體再通過(guò)胎盤(pán)進(jìn)入胎兒體內(nèi)引起免疫性溶血反應(yīng)。輕者出現(xiàn)新生兒貧血、黃疸、肝脾腫大等,嚴(yán)重情況下可誘發(fā)新生兒高膽紅素腦病及核黃疸,甚至死亡,臨床表現(xiàn)多以輕癥為主,偶有IgG高效價(jià)抗-A或抗-B引起嚴(yán)重ABO-HDN[1]。尋找準(zhǔn)確、快速診斷ABO-HDN的檢測(cè)方法是及時(shí)發(fā)現(xiàn)、干預(yù)和治療該疾病的關(guān)鍵,有學(xué)者研究結(jié)果表明,ABO-HDN中臍帶血溶血試驗(yàn)優(yōu)于外周血溶血試驗(yàn)[2-3],而臍帶血球形紅細(xì)胞計(jì)數(shù)研究甚少。因此,本研究主要探討新生兒臍帶血球形紅細(xì)胞計(jì)數(shù)與溶血3項(xiàng)試驗(yàn)(直接抗人球蛋白試驗(yàn)、血清游離抗體試驗(yàn)、紅細(xì)胞抗體釋放試驗(yàn))在ABO-HDN早期診斷中的價(jià)值,旨在新生兒出生早期即可快速診斷罹患ABO-HDN患兒,同時(shí)密切監(jiān)測(cè)患兒黃疸的進(jìn)展,以便及時(shí)發(fā)現(xiàn)需要治療的患兒。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2021年6月至2022年4月在南方醫(yī)科大學(xué)附屬中山市博愛(ài)醫(yī)院(下稱本院)住院的O型RhD陽(yáng)性產(chǎn)婦分娩的血型為A型或B型確診為ABO-HDN的189例新生兒作為觀察組。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)產(chǎn)婦孕周為37～42周;(2)弓形蟲(chóng)抗體、抗風(fēng)疹病毒抗體、抗巨細(xì)胞病毒抗體、抗單純皰疹病毒抗體檢測(cè)陰性;(3)產(chǎn)婦無(wú)合并感染、糖尿病、高血壓,無(wú)膽道閉鎖、顱腦出血、窒息、胎兒宮內(nèi)窘迫及其他妊娠并發(fā)癥[2]。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)生理性黃疸;(2)遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥;(3)自身免疫性溶血性貧血;(4)葡萄糖-6-磷酸脫氫酶缺乏癥;(5)珠蛋白生成障礙性貧血;(6)其他新生兒遺傳代謝性疾病。另選取同期本院200例非ABO-HDN患兒作為對(duì)照組。所有研究對(duì)象家屬均知情同意并簽署知情同意書(shū)。本研究經(jīng)本院倫理委員會(huì)審核通過(guò)。

1.2試劑與儀器 ABO標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞試劑購(gòu)自上海血液生物醫(yī)藥有限公司;ABO血型和Rh血型抗原試劑卡購(gòu)自中山市生科試劑儀器有限公司;溶血3項(xiàng)試驗(yàn)試劑由博德生物科技公司提供。臍帶血和外周血涂片染液由珠海貝索生物技術(shù)有限公司提供;CAL800全自動(dòng)流水線分析儀自動(dòng)制備血涂片。專用卡式孵育機(jī)及離心機(jī)均由戴安娜公司提供;血型儀器為中山生科SK全自動(dòng)血型儀和伯樂(lè)IH1000全自動(dòng)血型儀;常規(guī)生化檢查采用貝克曼庫(kù)爾特AU5800全自動(dòng)生化分析儀;血常規(guī)檢測(cè)采用CAL800全自動(dòng)血液分析流水線。

1.3方法 檢測(cè)孕婦分娩前及新生兒出生后的ABO和Rh(D)血型,篩選孕婦為O型Rh(D)陽(yáng)性分娩的A型或B型Rh(D)陽(yáng)性新生兒,在新生兒出生時(shí)收集臍帶血3 mL,以及出生后短時(shí)間內(nèi)抽取外周靜脈血3 mL,按照文獻(xiàn)[3]進(jìn)行血涂片制備和溶血3項(xiàng)試驗(yàn)。比較臍帶血和外周血球形紅細(xì)胞計(jì)數(shù)陽(yáng)性率、直接抗人球蛋白試驗(yàn)陽(yáng)性率、血清游離抗體試驗(yàn)陽(yáng)性率、紅細(xì)胞抗體釋放試驗(yàn)陽(yáng)性率。外周血球形紅細(xì)胞計(jì)數(shù)≥5%設(shè)為陽(yáng)性值參照標(biāo)準(zhǔn)[4-5]。

1.4ABO-HDN診斷標(biāo)準(zhǔn) ABO-HDN診斷標(biāo)準(zhǔn)參考《實(shí)用新生兒學(xué)(第4版)》[6]:(1)新生兒早期具有病理性黃疸和(或)貧血臨床表現(xiàn);(2)母嬰血型不合;(3)出現(xiàn)持續(xù)溶血;(4)溶血3項(xiàng)試驗(yàn)中直接抗人球蛋白試驗(yàn)呈陽(yáng)性和(或)紅細(xì)胞抗體釋放試驗(yàn)呈陽(yáng)性[6-7]。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析處理。計(jì)數(shù)資料以例數(shù)或百分率表示,組間比較采用χ2檢驗(yàn)。以P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1兩組不同球形紅細(xì)胞計(jì)數(shù)對(duì)診斷ABO-HDN的陽(yáng)性率比較 為了更好地研究臍帶血球形紅細(xì)胞計(jì)數(shù)與診斷ABO-HDN的關(guān)系,本研究預(yù)設(shè)了3個(gè)陽(yáng)性界點(diǎn)(5%、8%、10%)進(jìn)行比較,當(dāng)設(shè)置臍帶血球形紅細(xì)胞計(jì)數(shù)≥5%為陽(yáng)性時(shí),檢出陽(yáng)性例數(shù)159例,其陽(yáng)性率為84.13%;當(dāng)設(shè)置臍帶血球形紅細(xì)胞計(jì)數(shù)≥8%為陽(yáng)性時(shí),檢出陽(yáng)性139例,其陽(yáng)性率73.54%;當(dāng)設(shè)置臍帶血球形紅細(xì)胞計(jì)數(shù)≥10%為陽(yáng)性時(shí),檢出陽(yáng)性9例,其陽(yáng)性率4.76%。選取臍帶血球形紅細(xì)胞計(jì)數(shù)≥5%為陽(yáng)性界點(diǎn)時(shí),診斷陽(yáng)性率均高于其他2個(gè)陽(yáng)性界點(diǎn)。見(jiàn)表1。

表1 兩組不同球形紅細(xì)胞計(jì)數(shù)對(duì)診斷ABO-HDN的陽(yáng)性率比較[n(%)]

2.2ABO-HDN臍帶血和外周血球形紅細(xì)胞陽(yáng)性結(jié)果比較 189例ABO-HDN患兒中,以球形紅細(xì)胞計(jì)數(shù)≥5%為陽(yáng)性界點(diǎn)時(shí),159例臍帶血球形紅細(xì)胞計(jì)數(shù)陽(yáng)性,陽(yáng)性率為84.13%;113例外周血球形紅細(xì)胞計(jì)數(shù)陽(yáng)性,陽(yáng)性率為59.79%,臍帶血球形紅細(xì)胞計(jì)數(shù)陽(yáng)性率明顯高于外周血,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=38.94,P<0.05)。

2.3ABO-HDN患兒臍帶血和外周血溶血3項(xiàng)試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果比較 臍帶血ABO-HDN陽(yáng)性186例(98.41%),外周血ABO-HDN陽(yáng)性169例(89.42%),臍帶血和外周血ABO-HDN陽(yáng)性率比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=13.47,P<0.05)。臍帶血血清游離抗體試驗(yàn)陽(yáng)性172例(91.01%),紅細(xì)胞抗體釋放試驗(yàn)陽(yáng)性182例(96.30%),外周血血清游離抗體試驗(yàn)陽(yáng)性145例(76.72%),紅細(xì)胞抗體釋放試驗(yàn)陽(yáng)性152例(80.42%),二者陽(yáng)性率比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。臍帶血直接抗人球蛋白試驗(yàn)陽(yáng)性率雖稍高于外周血,但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表2。

表2 新生兒臍帶血和外周血溶血3項(xiàng)試驗(yàn)結(jié)果比較[n(%)]

2.4臍帶血與外周血球形紅細(xì)胞計(jì)數(shù)聯(lián)合溶血3項(xiàng)試驗(yàn)檢測(cè)診斷ABO-HDN陽(yáng)性率比較 聯(lián)合檢測(cè)以其中任何一項(xiàng)高于或等于臨界值為陽(yáng)性,臍帶血球形紅細(xì)胞計(jì)數(shù)聯(lián)合溶血3項(xiàng)試驗(yàn)檢測(cè)診斷ABO-HDN陽(yáng)性187例(98.94%),外周血球形紅細(xì)胞計(jì)數(shù)聯(lián)合溶血3項(xiàng)試驗(yàn)檢測(cè)診斷ABO-HDN陽(yáng)性117例(61.90%),臍帶血球形紅細(xì)胞計(jì)數(shù)聯(lián)合溶血3項(xiàng)試驗(yàn)檢測(cè)診斷ABO-HDN陽(yáng)性率明顯高于外周血,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=68.05,P<0.05)。

3 討 論

ABO-HDN是指母嬰血型不合所致的胎兒或新生兒免疫性溶血性疾病,第1胎即可發(fā)病,且新生兒發(fā)病率隨孕婦分娩次數(shù)增加而升高,病情逐漸加重,極易誘發(fā)高膽紅素血癥,導(dǎo)致神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥[8],甚至死亡。尋找快速有效的診斷方法是ABO-HDN早期診斷、有效干預(yù)及治療的關(guān)鍵。目前ABO-HDN臨床檢測(cè)方法較多,例如血清抗體效價(jià)檢測(cè)、血清溶血3項(xiàng)試驗(yàn)、早期膽紅素測(cè)定等檢測(cè)均被廣泛應(yīng)用于臨床[9-10],這些項(xiàng)目需抽取外周靜脈血進(jìn)行檢測(cè),但新生兒毛細(xì)血管細(xì)、血液濃縮、采血難度大、穿刺困難、頻繁采血易誘發(fā)醫(yī)源性失血及新生兒皮膚感染或損傷,以及患兒家屬不容易接受等原因,導(dǎo)致無(wú)法及時(shí)采血而錯(cuò)過(guò)了最佳治療時(shí)機(jī),因此,在臨床上應(yīng)用比較困難[11]。有研究表明,臍帶作為胎兒與母體間營(yíng)養(yǎng)代謝產(chǎn)物轉(zhuǎn)運(yùn)的關(guān)鍵樞紐,臍帶血能夠在新生兒出生時(shí)即可采集,血量充足,在短時(shí)間內(nèi)便可得到檢測(cè)結(jié)果,同時(shí)避免因侵入性檢查給新生兒造成傷害[12],故臍帶血比外周血更具優(yōu)勢(shì)。

ABO-HDN在O型母親所生的A型或B型嬰兒中有較高的發(fā)生率,第1胎即可發(fā)病,在HDN中最為常見(jiàn)[13]。妊娠或分娩過(guò)程中胎兒紅細(xì)胞經(jīng)過(guò)胎盤(pán)屏障進(jìn)入母體,使母體產(chǎn)生IgG抗體,此抗體透過(guò)胎盤(pán)進(jìn)入胎兒,使胎兒紅細(xì)胞致敏[14-16]。部分致敏紅細(xì)胞被單核-巨噬細(xì)胞吞噬,或者與補(bǔ)體結(jié)合,發(fā)生溶血;另一部分致敏紅細(xì)胞導(dǎo)致其膜發(fā)生缺損,紅細(xì)胞形態(tài)改變趨于球形,變形能力下降,壽命縮短[4-5]。因此,在患兒外周血和臍帶血中均可發(fā)現(xiàn)球形紅細(xì)胞。本研究在確診為ABO-HDN的189例患兒中發(fā)現(xiàn),臍帶血球形紅細(xì)胞計(jì)數(shù)陽(yáng)性率明顯高于外周血,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),說(shuō)明臍帶血球形紅細(xì)胞計(jì)數(shù)相比外周血球形紅細(xì)胞計(jì)數(shù)更有助于早期診斷ABO-HDN,ABO-HDN患兒外周血中球形紅細(xì)胞計(jì)數(shù)陽(yáng)性率低于臍帶血,可能原因與新生兒體內(nèi)母體IgG抗體逐漸消耗或被新生兒紅細(xì)胞外其他組織中的可溶性A或B抗原中和,以及致敏紅細(xì)胞被破壞等有關(guān)[4]。目前臨床常采用溶血3項(xiàng)試驗(yàn)作為診斷ABO-HDN的主要檢測(cè)方法。本研究表明,臍帶血ABO-HDN陽(yáng)性率與外周血比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);臍帶血血清游離抗體試驗(yàn)和紅細(xì)胞抗體釋放試驗(yàn)陽(yáng)性率與外周血比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);臍帶血直接抗人球蛋白試驗(yàn)陽(yáng)性率稍高于外周血,但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。以上結(jié)果與胡姬婷等[2]、唐建軍等[7]的研究結(jié)論相符。臍帶血和外周血直接抗人球蛋白試驗(yàn)陽(yáng)性率無(wú)差異,考慮原因?yàn)樾律鷥撼錾撾x母體后體內(nèi)紅細(xì)胞不再受IgG類抗體致敏,體內(nèi)殘留的致敏紅細(xì)胞逐漸被代謝,而臍帶血直接抗人球蛋白試驗(yàn)相對(duì)于外周血陽(yáng)性率稍高的原因可能與胎兒紅細(xì)胞ABO血型系統(tǒng)抗原發(fā)育成熟程度[17]及進(jìn)入母胎循環(huán)的抗原數(shù)量有關(guān)。

綜上所述,本研究新生兒臍帶血球形紅細(xì)胞計(jì)數(shù)對(duì)ABO-HDN具有較高的陽(yáng)性率,與溶血3項(xiàng)試驗(yàn)聯(lián)合檢測(cè)可進(jìn)一步增加其陽(yáng)性率,對(duì)于早期診斷、干預(yù)和治療ABO-HDN有至關(guān)重要的臨床意義,并且臍帶血更能反映新生兒血清游離抗體和紅細(xì)胞結(jié)合抗體的狀態(tài)。因此,臍帶血球形紅細(xì)胞計(jì)數(shù)聯(lián)合溶血3項(xiàng)試驗(yàn)檢測(cè)用于ABO-HDN的診斷更準(zhǔn)確、直觀[18-19]。