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        基于UPLC 指紋圖譜和含量測定的積雪草標(biāo)準(zhǔn)湯劑質(zhì)量評價研究

        2023-10-21 07:39:00呂渭升楊潔侯栩軒梁月儀李振雨孫冬梅陳向東賈小舟
        廣東藥科大學(xué)學(xué)報 2023年5期
        關(guān)鍵詞:積雪草醛酸湯劑

        呂渭升,楊潔,侯栩軒,梁月儀,李振雨,孫冬梅,陳向東,賈小舟,2

        (1.廣東一方制藥有限公司/廣東省中藥配方顆粒企業(yè)重點實驗室,廣東 佛山 528244;2.廣州中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院,廣東 廣州 510400)

        積雪草為傘形科植物積雪草Centella asiatica(L.)Urb.的干燥全草,夏、秋二季采收,除去泥沙,曬干[1]。積雪草廣泛生長于我國的大部分省份,主產(chǎn)于廣西、貴州、云南等地,又名銅錢草、馬蹄草、錢齒草等,最早收載于《神農(nóng)本草經(jīng)》:“味苦,寒;主大熱,惡瘡,癰疽,浸淫赤嫖,皮膚赤,身熱”[2],具有清熱利濕,解毒消腫等功效[3-4],臨床上主要用于跌打損傷、傳染性肝炎、流行性腦脊髓膜炎等[5-6]。積雪草所含化學(xué)成分中主要包括三萜類、黃酮類、酚酸類、多炔烯烴類,以及揮發(fā)油類成分[7]?!吨袊幍洹?020 年版中以積雪草苷和羥基積雪草苷為指標(biāo)性成分對積雪草的質(zhì)量進行控制。羥基積雪草苷具有抗炎、鎮(zhèn)靜、促進肌膚再生、改善肌膚紋理的作用[8],而積雪草苷能改善皮膚水油平衡,有助于膠原蛋白的合成[9-10]。因此,積雪草不僅具有良好的藥用價值,還具有良好的護膚價值。

        中藥飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑理論被提出之后,便成為了中藥現(xiàn)代工藝轉(zhuǎn)化的標(biāo)尺,標(biāo)準(zhǔn)湯劑連接了傳統(tǒng)中藥飲片和現(xiàn)代中藥制劑,為控制中藥配方顆粒、經(jīng)典名方和部分使用水作為提取溶劑的中成藥的質(zhì)量提供了參照和研究基礎(chǔ)。由于不同的化學(xué)成分在水中的溶解度不同,其轉(zhuǎn)移率也會有差異,導(dǎo)致標(biāo)準(zhǔn)湯劑在化學(xué)組成上可能與藥材飲片不一致[11],因此對中藥湯劑成分的研究更具有臨床指導(dǎo)性意義[12-13]。鑒于積雪草水煎劑和其他現(xiàn)代中藥制劑在臨床上的廣泛應(yīng)用,為保證用藥的有效性和安全性,本研究共收集了19批不同產(chǎn)地來源的積雪草藥材,炮制成飲片后制備標(biāo)準(zhǔn)湯劑凍干粉,用于建立積雪草標(biāo)準(zhǔn)湯劑的超高效液相色譜(UPLC)指紋圖譜,首次同時測定其中的三萜類成分積雪草苷、羥基積雪草苷和黃酮類成分槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷3 種活性成分的含量,并使用SPSS 軟件和SIMCA-P 軟件對積雪草標(biāo)準(zhǔn)湯劑指紋圖譜進行主成分分析(PCA),對不同產(chǎn)地積雪草制成的標(biāo)準(zhǔn)湯劑質(zhì)量進行評價,為積雪草標(biāo)準(zhǔn)湯劑質(zhì)量的整體評價提供思路。

        1 儀器與試藥

        1.1 儀器

        YRE-501 小型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠);全自動煎藥壺(3 L,深圳一枚王有限公司);JJ600 百分之一天平(常熟市雙杰測試儀器廠);ME204E萬分之一天平(梅特勒-托利多公司);XP26百萬分之一天平(梅特勒-托利多公司);HZ-D(Ш)臺式循環(huán)水真空泵(上海力辰儀器科技有限公司);DLSB-5/20 低溫冷卻液循環(huán)泵(鄭州長城科工貿(mào)有限公司);TRL-0.5 真空冷凍干燥機(大連雙瑞科技有限公司);LC-40Dxs島津超高效液相色譜儀(島津公司);HWS28電熱數(shù)顯恒溫水浴箱(上海一恒科技有限公司);KQ-500DE 超聲波清洗機(昆山市超聲儀器有限公司)。

        1.2 試劑試藥

        積雪草苷對照品(批號:110892-201505,質(zhì)量分數(shù):91.2%,中國食品藥品檢定研究院);羥基積雪草苷對照品(批號:110893-201804,質(zhì)量分數(shù):94.5%,中國食品藥品檢定研究院);積雪草苷B 對照品(批號:ST78590120MG,質(zhì)量分數(shù):98.0%,上海詩丹德生物技術(shù)有限公司);異綠原酸C 對照品(批號:wkq18050905,質(zhì)量分數(shù):98.0%,四川省維克奇生物科技有限公司);槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷對照品(批號:CFN92172,質(zhì)量分數(shù):98.0%,Chem Faces);乙醇、甲醇(西隴科學(xué)股份有限公司),倍他環(huán)糊精(上海麥克林生化科技有限公司)為分析純;磷酸(天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司)、乙腈(默克股份有限公司)、甲醇(默克股份有限公司)為HPLC色譜級;水為實驗室自制超純水。

        1.3 樣品及制備方法

        19批不同產(chǎn)地收集得到的積雪草藥材信息詳見表1,經(jīng)廣東一方制藥有限公司孫冬梅主任中藥師鑒定為傘形科植物積雪草Centella asiatica(L.)Urb.的干燥全草,積雪草苷和羥基積雪草苷的總量均符合《中國藥典》2020年版“不得少于0.80%”的規(guī)定。

        表1 19批積雪草藥材信息表Table 1 Source information of 19 batches of Centellae Herbs

        《中國藥典》2020年版一部“積雪草”項下規(guī)定積雪草飲片的炮制方法為:除去雜質(zhì),洗凈,切段,干燥。本研究對積雪草飲片的具體炮制方法為:取積雪草原藥材,揀去雜質(zhì)、變質(zhì)品,洗凈(清水噴淋,并不斷翻動藥材),用鍘刀切制成5~15 mm 的段,干燥,用20 目篩除去碎屑物,即得積雪草飲片。根據(jù)《中藥配方顆粒質(zhì)量控制與標(biāo)準(zhǔn)制定技術(shù)要求》相關(guān)規(guī)定,建立積雪草標(biāo)準(zhǔn)湯劑凍干粉的制備方法步驟為:分別取積雪草飲片約100 g,煎煮次數(shù)為2 次,第1次煎煮加水量為12倍,飲片浸泡時間為30 min,煎煮時間為30 min,煎煮后用200 目篩網(wǎng)趁熱過濾,濾液迅速用冷水冷卻,備用。第2 次煎煮加水量為10倍,煎煮時間為25 min,煎煮后用200 目篩網(wǎng)趁熱過濾,濾液迅速冷水冷卻,合并兩次濾液,65 ℃減壓濃縮,冷凍干燥,即得。按此法制得19 批積雪草標(biāo)準(zhǔn)湯劑凍干粉。

        2 方法與結(jié)果

        2.1 色譜條件

        采用色譜柱Waters CORTECS T3(2.1 mm×150 mm,1.6 μm);乙腈為流動相A,含0.15%磷酸的2 mmol/L 倍他環(huán)糊精溶液為流動相B,進行梯度洗脫(0~5 min,13%~16%A;5~10 min,16%A;10~25 min,16%~19%A;25~30 min,19%~22%A;30~40 min,22%~24%A;40~45 min,24%~36%A);流速為0.30 mL/min;柱溫為35 ℃;紫外檢測波長為205 nm;進樣量為1 μL。

        2.2 參照物溶液的制備

        取積雪草苷對照品、羥基積雪草苷對照品、槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷對照品、異綠原酸C 對照品、積雪草苷B 對照品適量,精密稱定,加甲醇制成5 種成分質(zhì)量濃度分別為218.454、209.425、20.145、25.574、13.505 μg/mL 的混合對照品溶液,作為對照品參照物溶液。

        2.3 供試品溶液的制備

        取積雪草標(biāo)準(zhǔn)湯劑凍干粉適量,研細,取約0.2 g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入80%甲醇溶液25 mL,稱定質(zhì)量,超聲處理(功率250 W,頻率40 kHz)30 min,放冷,再稱定質(zhì)量,用80%甲醇溶液補足減失的質(zhì)量,搖勻,濾過,取續(xù)濾液,即得。

        2.4 指紋圖譜的建立

        2.4.1 精密度試驗 取積雪草標(biāo)準(zhǔn)湯劑凍干粉(批號:S4)按照“2.3”項下方法制備供試品溶液,按照“2.1”項下色譜條件連續(xù)進樣測定6次。以9號羥基積雪草苷色譜峰為參照峰(S),計算得到各共有峰的相對保留時間RSD值在0.06%~0.14%范圍內(nèi),相對峰面積RSD 值在0.68%~1.31%范圍內(nèi),均小于3%,表明儀器精密度良好。

        2.4.2 重復(fù)性試驗 取同一批積雪草標(biāo)準(zhǔn)湯劑凍干粉(批號:S4)6 份,按“2.3”項下方法平行制備6份供試品溶液。按照“2.1”項下色譜條件測定,以9 號羥基積雪草苷色譜峰為參照峰(S),計算得到各色譜峰相對保留時間RSD值在0.01%~0.15%范圍內(nèi),相對峰面積RSD值在0.30%~2.84%范圍內(nèi),均小于3%,說明該方法重復(fù)性良好。

        2.4.3 穩(wěn)定性試驗 取積雪草標(biāo)準(zhǔn)湯劑凍干粉(批號:S4)按照“2.3”項下方法制備供試品溶液,按照“2.1”項下色譜條件,分別在制樣后0、5、12、16、20、23 h 進樣測定,以9 號羥基積雪草苷色譜峰為參照峰(S),計算得到23 h 內(nèi)各色譜峰相對保留時間RSD值在0.08%~0.23%范圍內(nèi),相對峰面積RSD值在0.87%~1.37%范圍內(nèi),說明該供試品溶液在23 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

        2.4.4 指紋圖譜的建立及相似度評價 取19批積雪草標(biāo)準(zhǔn)湯劑凍干粉,按照“2.3”項下方法制備供試品溶液,按“2.1”項下色譜條件進樣測定,篩選共有峰,并進行積分。將指紋圖譜數(shù)據(jù)導(dǎo)入“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)(2012 版)”,以S1 號樣品色譜圖為參照圖譜,采用平均數(shù)法,經(jīng)過多點校正,生成疊加圖譜和對照圖譜(R),共標(biāo)定11個共有峰,見圖1。通過與對照品保留時間及紫外全波長3D 掃描曲線圖比較,指認了其中的5 個成分,分別是峰1 槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷、峰5 異綠原酸C、峰7 積雪草苷B、峰9 羥基積雪草苷、峰11 積雪草苷,見圖2。以9號羥基積雪草苷色譜峰為參照峰(S),計算得到19 批樣品中11 個共有峰的相對保留時間的RSD 范圍為0.07%~0.50%,相對峰面積的RSD 范圍為4.53%~51.89%,說明11 個共有峰峰面積差異較大。相似度評價結(jié)果見表2,19 批樣品指紋圖譜與積雪草標(biāo)準(zhǔn)湯劑對照圖譜(R)的相似度均>0.900,說明19 批積雪草標(biāo)準(zhǔn)湯劑的化學(xué)成分種類一致性較好,主要差異表現(xiàn)在各特征峰所代表的化學(xué)成分的含量上。

        圖1 19批積雪草標(biāo)準(zhǔn)湯劑UPLC疊加圖譜與對照圖譜(R)Figure 1 UPLC superposition fingerprints and control fingerprint(R)for 19 batches of Centellae Herbs standard decoction

        圖2 混合對照品、供試品與陰性樣品的色譜圖Figure 2 UPLC chromatograms of mixed reference substances,test sample and negative sample

        表2 19批積雪草標(biāo)準(zhǔn)湯劑相似度評價結(jié)果Table 2 Similarity results of 19 batches of Centellae Herbs standard decoction

        2.4.5 主成分分析 將19批積雪草標(biāo)準(zhǔn)湯劑指紋圖譜中11個共有峰峰面積導(dǎo)入IBM SPSS Statistics 25軟件,以峰面積為變量,特征值大于1.0 為主成分因子的篩選標(biāo)準(zhǔn)進行PCA 分析,計算得到主成分特征值和方差貢獻率,結(jié)果見表3。結(jié)果顯示,PCA 共提取2 個特征值大于1 的主成分,累積方差貢獻率達80.428%,大于80%表明提取的前2個主成分可以代表積雪草標(biāo)準(zhǔn)湯劑指紋圖譜共有峰中大部分的信息[14-15]。旋轉(zhuǎn)后的成分載荷矩陣反映了各變量對主成分的貢獻大小,結(jié)果見表4。結(jié)果顯示,第1 主成分主要反映了峰2、4、5、6、10對其的貢獻;而峰8、11對第2主成分的貢獻率較大。將共有峰峰面積導(dǎo)入SMICA-P 軟件中,進行無監(jiān)督模式識別PCA,得到主成分散點圖,結(jié)果見圖3。從結(jié)果可看出,所有樣品均在95%可信區(qū)間內(nèi),以產(chǎn)地進行分析,同一產(chǎn)地的樣品斑點分布較為分散,差異較大。而不同產(chǎn)地之間的樣品斑點均存在相互重疊的區(qū)域,無明顯性差異,這提示了產(chǎn)地可能不是造成積雪草標(biāo)準(zhǔn)湯劑質(zhì)量差異的主要因素。

        圖3 19批積雪草標(biāo)準(zhǔn)湯劑PCA得分圖Figure 3 PCA score chart of 19 batches of Centellae Herbs standard decoction samples

        表3 主成分全部方差分析Table 3 Variance analysis of all the main components

        表4 積雪草標(biāo)準(zhǔn)湯劑主成分因子載荷矩陣Table 4 Principal component load matrix of Centellae Herbs standard decoction

        2.5 含量測定

        2.5.1 供試品溶液的制備及色譜條件 分別同“2.3”、“2.1”項下方法。

        2.5.2 對照品溶液制備 取積雪草苷、羥基積雪草苷、槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷對照品適量,精密稱定,加80%甲醇制成每1 mL分別含150、200和20μg的混合對照品溶液,即得。

        2.5.3 專屬性試驗 分別精密吸取“2.2”項下的混合對照品溶液、“2.3”項下供試品溶液及陰性樣品(空白溶劑)溶液1 μL,按“2.1”項下色譜條件依法進樣測定,結(jié)果見圖2。結(jié)果顯示,待測成分積雪草苷、羥基積雪草苷、槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷與相鄰成分達到基線分離,陰性樣品無干擾。

        2.5.4 線性關(guān)系考察 精密稱取積雪草苷對照品18.654 mg、羥基積雪草苷對照品27.113 mg、槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷對照品5.325 mg,置25 mL 量瓶中,加80% 甲醇制成每1 mL 含積雪草苷680.498 μg、羥基積雪草苷1024.871 μg、槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷208.740 μg的混合對照品儲備液。

        精密量取混合對照品儲備液0.5、1、1.5、2、5、10 mL,分別置于25 mL 量瓶中,加80%甲醇至刻度,搖勻,制得不同濃度的混合對照品溶液,分別含積雪草苷13.610、27.220、40.830、54.440、136.100、272.199 μg/mL,羥基積雪草苷20.497、40.995、61.492、81.990、204.974、409.949 μg/mL;槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷4.175、8.350、12.524、16.699、41.478、83.496 μg/mL 的系列對照品溶液。按照“2.3”項下色譜條件進樣測定,記錄各個濃度的色譜峰面積。以色譜峰峰面積為縱坐標(biāo)(y),對照品配制濃度為橫坐標(biāo)(x),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,結(jié)果表明各對照品在進樣量范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。結(jié)果見表5。

        表5 各成分線性關(guān)系Table 5 Linear relationships of various constituents

        2.5.5 精密度考察 精密吸取積雪草標(biāo)準(zhǔn)湯劑供試品溶液(批號:S4),按照“2.1”項下色譜條件重復(fù)進樣6 次,結(jié)果顯示積雪草苷峰面積RSD 為0.45%,羥基積雪草苷峰面積RSD 為0.84%,槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷峰面積RSD 為1.22%,均小于2%,表明儀器精密度良好。

        2.5.6 穩(wěn)定性考察 精密吸取積雪草標(biāo)準(zhǔn)湯劑供試品溶液(批號:S4),按照“2.1”項下色譜條件,分別在制樣后0、5、12、16、20、23 h 進樣測定,結(jié)果顯示,積雪草苷峰面積RSD 為0.42%,羥基積雪草苷峰面積RSD 為0.77%,槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷峰面積RSD 為1.13%,均小于2%,表明積雪草標(biāo)準(zhǔn)湯劑供試品溶液在23 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

        2.5.7 重復(fù)性考察 按照“2.3”項下供試品溶液制備方法,取積雪草標(biāo)準(zhǔn)湯劑凍干粉(批號:S4)制備供試品溶液6 份,按照“2.1”項下色譜條件進樣測定。結(jié)果顯示,積雪草苷平均含量為12.127 mg/g,RSD為1.34%;羥基積雪草苷平均含量為20.243 mg/g,RSD 為1.78%,槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷平均含量為5.334 mg/g,RSD 為1.64%,均小于2%,表明該方法重復(fù)性良好。

        2.5.8 加樣回收率測定 精密稱取積雪草苷對照品10.624 mg、羥基積雪草苷對照品16.545 mg、槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷對照品4.265 mg,置200 mL量瓶中,加80% 甲醇制成每1 mL 含積雪草苷48.445 μg、羥基積雪草苷78.175 μg、槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷20.899 μg的混合對照品溶液,備用。

        取積雪草標(biāo)準(zhǔn)湯劑凍干粉(序號:S4)適量,研細,取約0.1 g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,平行6份,每份分別精密加入25 mL上述混合對照品溶液,然后按“2.3”項下方法制備6份供試品溶液,按“2.1”項下色譜條件進樣測定,結(jié)果顯示,積雪草苷、羥基積雪草苷和槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷的平均加樣回收率分別為100.31%、99.65%、98.70%,結(jié)果見表6。根據(jù)《中國藥典》2020 年版“藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗證指導(dǎo)原則”規(guī)定樣品中待測成分含量在0.1%~1%時回收率限度為90%~108%,含量在1%~10%時回收率限度為92%~105%,所有數(shù)據(jù)均在此范圍內(nèi),回收率良好。

        表6 積雪草標(biāo)準(zhǔn)湯劑各成分加樣回收率試驗結(jié)果Table 6 Results of recovery tests for various constituents of Centellae Herbs standard decoction(n=6)

        2.5.9 樣品含量測定 取19批積雪草標(biāo)準(zhǔn)湯劑凍干粉,分別按“2.3”項下方法制備19 份積雪草標(biāo)準(zhǔn)湯劑供試品溶液,各平行兩份,按照“2.1”項下色譜條件進樣測定,記錄峰面積,計算各批次的積雪草苷、羥基積雪草苷和槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷的含量,結(jié)果見表7、圖4。

        表7 19批積雪草標(biāo)準(zhǔn)湯劑的含量測定結(jié)果Table 7 Results of the determination of 19 batches of Centellae Herbs standard decoction(n=2)w/%

        從表7 可見,19 批積雪草標(biāo)準(zhǔn)湯劑中積雪草苷含量范圍為0.39%~2.54%,羥基積雪草苷含量范圍為1.47%~3.72%,槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷含量范圍為0.12%~0.60%,RSD 值分別為50.73%、31.51%和49.58%,說明各批次積雪草標(biāo)準(zhǔn)湯劑各有效成分含量有所差異。在三萜皂苷類成分積雪草苷和羥基積雪草苷含量方面,廣西產(chǎn)地相對較高,其他產(chǎn)地差異不大;在黃酮苷類成分槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷含量方面,除來源于貴州的5 個樣品含量較為穩(wěn)定外,其他各個產(chǎn)地的樣品差異較大,暫無明顯地域性特征。

        3 討論

        在供試品溶液制備方法的考察中,先后考察了提取溶劑(甲醇、80%甲醇、60%甲醇、40%甲醇、乙醇、80%乙醇、60%乙醇、40%乙醇)、提取方式(超聲處理和加熱回流)、提取時間(15、30、60 min)和溶劑用量(15、25、50 mL)對指紋圖譜各個共有峰的影響,優(yōu)選最佳提取參數(shù)。結(jié)果顯示,采用80%甲醇25 mL,超聲處理30 min提取效率最高。

        在色譜條件的考察中,對比了乙腈-2 mmol/L倍他環(huán)糊精溶液、乙腈-含0.15%磷酸的2 mmol/L倍他環(huán)糊精溶液、乙腈-含0.2%磷酸的2 mmol/L 倍他環(huán)糊精溶液、乙腈-0.2%磷酸溶液4種流動相的洗脫效果,結(jié)果顯示選取2 mmol/L 倍他環(huán)糊精溶液作為水相時,色譜峰的分離度較差;乙腈-0.2%磷酸溶液作為水相時積雪草苷B與羥基積雪草苷兩個成分難以分離;選擇另外兩種流動相洗脫時色譜峰較多,分離效果較好,整體響應(yīng)度適中且無明顯差異,結(jié)合方法的耐用性及保護色譜柱的角度考慮,選取含0.15%磷酸的2 mmol/L 倍他環(huán)糊精溶液作為水相。之所以在流動相中加入倍他環(huán)糊精是因為積雪草苷B與羥基積雪草苷是一對烏蘇烷型和齊墩果烷型結(jié)構(gòu)的同分異構(gòu)體,采用普通流動相時往往難以分離,而倍他環(huán)糊精則可與不同異構(gòu)體形成不同空間位阻的包含物,致使它們在色譜柱中的保留時間產(chǎn)生差異,從而達到有效分離[16-17]。

        積雪草的三萜皂苷類成分具有抗氧化應(yīng)激作用、促進組織愈合和改善微循環(huán)作用、抗炎、抗焦慮等作用[18-19]。此外,槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷屬于積雪草中的黃酮醇成分,具有抗感染、抗氧化、抗腫瘤、抗動脈粥樣硬化等多種生物活性作用[20-21]。因此,本研究首次建立了UPLC 法同時測定積雪草標(biāo)準(zhǔn)湯劑中積雪草苷、羥基積雪草苷和槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷含量的方法。結(jié)果顯示3種成分均能在標(biāo)準(zhǔn)湯劑中穩(wěn)定存在,能有效從飲片提取傳遞至標(biāo)準(zhǔn)湯劑之中。同一產(chǎn)地不同批次的樣品有效成分含量存在著不同程度的差異,例如廣西產(chǎn)地的積雪草苷含量為0.82%~2.54%,羥基積雪草苷含量為1.47%~3.72%,槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷含量為0.12%~0.41%,最大相差約3.5 倍,其他產(chǎn)地也存著同樣的差異,不同產(chǎn)地之間無明顯的地域性差異。

        中藥指紋圖譜具有專屬性高、穩(wěn)定性好、整體性強的特點,能更全面地反映中藥材整體的化學(xué)成分信息。因此,本研究建立積雪草標(biāo)準(zhǔn)湯劑指紋圖譜,共確定了11個共有峰,并指認了其中5個成分,對控制積雪草標(biāo)準(zhǔn)湯劑的質(zhì)量具有指導(dǎo)意義。相似度結(jié)果顯示19 批積雪草標(biāo)準(zhǔn)湯劑與對照指紋圖譜的相似度較高,具有較好的一致性。PCA 結(jié)果則顯示不同產(chǎn)地及來源的積雪草標(biāo)準(zhǔn)湯劑樣品無明顯地域性差異。積雪草性喜溫暖潮濕,對栽培土要求不嚴,適應(yīng)性強,繁殖迅速,水陸兩棲皆可,因此能廣泛分布于國內(nèi)的大部分地區(qū)。有文獻研究得出影響積雪草質(zhì)量的因素除了產(chǎn)地土壤外,還可能與光照條件、種植密度、肥料等有關(guān)[22-23]。另外,藥材的采收季節(jié)、產(chǎn)地加工方式、儲存環(huán)境等因素也會對積雪草的質(zhì)量產(chǎn)生一定的影響,下一步可對其他的影響因素進行研究,為積雪草質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究提供參考。

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