陳韓,楊江怡,陳華,韓鋒

宮頸癌是女性生殖系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤之一。GLOBOCAN2020全球癌癥統(tǒng)計數(shù)據(jù)報告顯示,2020年全球約60.4萬宮頸癌新發(fā)病例和34.2萬死亡病例[1-2]。2020年我國宮頸癌新發(fā)病例約11萬例,死亡病例約6萬例[3]。目前宮頸癌較為理想的治療模式是手術(shù)切除配合術(shù)后同步放療、化療,但是宮頸癌早期癥狀不明顯,確診時通常已處于中晚期,貽誤了最佳的手術(shù)治療時機,且患者預(yù)后往往較差[4-5]。溶血磷脂酰膽堿?；D(zhuǎn)移酶1(lysophosphatidylcholine acyltransferase 1,LPCAT1)是一種重要的磷脂酰基代謝酶,主要功能為介導(dǎo)磷脂代謝過程Land’s循環(huán)中溶血磷脂酰膽堿的再乙?；?生成飽和磷脂酰膽堿(PC)[6]。膽堿代謝產(chǎn)物的變化是細胞癌變的一個重要特征,而PC是腫瘤細胞較正常細胞改變最為明顯的磷脂?？梢?磷脂酰膽堿的代謝異常與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[7-8]。LPCAT1作為合成磷脂酰膽堿的關(guān)鍵酶在多種惡性腫瘤中表達顯著上升,如肺癌、子宮內(nèi)膜癌、前列腺癌、乳腺癌、肝癌等[9-13]。然而,關(guān)于LPCAT1蛋白在宮頸癌中的表達情況及其與患者預(yù)后的關(guān)系相關(guān)報道較少。因此,現(xiàn)分析不同LPCAT1蛋白表達的宮頸癌患者臨床病理特征和預(yù)后的差異,以期為宮頸癌的早期診斷和臨床治療提供新思路,報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2012年1月1日—2022年12月31日海南醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院婦科手術(shù)治療宮頸癌患者163例作為觀察組,年齡(50.37 ± 12.88)歲;腫瘤直徑≤4 cm者71例,>4 cm者92例;參考國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO)分期標準[14]:Ⅰ～Ⅱ期110例,Ⅲ～Ⅳ期53例;主要的組織病理類型為鱗癌133例(81.6%);子宮肌層浸潤深度>1/2肌層72例(44.2%);發(fā)生盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移77例(47.2%);組織分化程度為低分化88例,中高分化75例;HPV感染陽性率為74.8%(122/163)。另選取同期因患子宮平滑肌瘤施行全子宮切除術(shù)患者77例作為對照組,年齡(52.93±13.56)歲。2組患者年齡比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(t=1.413,P=0.159)。本研究已經(jīng)獲得醫(yī)院倫理委員會批準(HYFY20230258),患者及家屬知情同意并簽署知情同意書。

1.2 病例選擇標準 (1)納入標準:①無生育需求,主要術(shù)式為廣泛子宮切除加盆腔淋巴結(jié)清掃術(shù);②手術(shù)切除標本經(jīng)病理組織活檢證實為宮頸癌[15];③術(shù)前未接受放療、化療和靶向治療等抗腫瘤治療。(2)排除標準:①合并其他惡性腫瘤;②合并心、肺、肝、腎等嚴重影響患者生存的疾病;③臨床資料不完整、隨訪不依從。

1.3 觀測指標與方法

1.3.1 免疫組化法檢測LPCAT1蛋白表達:收集觀察組患者手術(shù)切除宮頸癌組織以及對照組患者手術(shù)切除正常宮頸組織,經(jīng)10%福爾馬林溶液固定、常規(guī)石蠟包埋,4 μm厚連續(xù)切片。二甲苯脫蠟、乙醇梯度水化后采用免疫組化SP法對切片進行染色。3%過氧化氫溶液浸泡后在檸檬酸溶液中修復(fù)抗原,PBS緩沖液漂洗后加入10%山羊血清室溫下封閉20 min。將1∶200稀釋的LPCAT4一抗(購自英國Abcam公司)滴加至切片上,4℃孵育過夜。次日PBS沖洗后將二抗(購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)滴加至切片上室溫孵育30 min。PBS清洗后DAB顯色、蘇木精復(fù)染。常規(guī)乙醇梯度脫水后二甲苯固定、中性樹脂封片,顯微鏡(型號CX23BGUV,購自日本Olympus公司)下觀察并攝片。

1.3.2 隨訪:依據(jù)《宮頸癌診療規(guī)范》[15]推薦的隨訪方法,采用門診復(fù)查或電話隨訪,第1年和第2年每3個月隨訪1次,以后每6個月隨訪1次,隨訪截至2023年5月31日?？偵嫫?overall survival,OS)是指患者接受手術(shù)治療當日至任何原因死亡或失訪的時間[16]。

1.4 結(jié)果判定 參照二級計分法對免疫組化結(jié)果進行判定,即總評分=陽性細胞百分比×細胞染色強度。以細胞膜和/或細胞質(zhì)呈現(xiàn)棕黃色或棕褐色判定為LPCAT1蛋白表達陽性。陽性細胞百分比≤5%計0分,6%～25%計1分,26%～50%計2分,51%～75%計3分,>75%計4分;細胞染色強度呈無色、淺黃色、棕黃色、棕褐色分別計0、1、2、3分。上述兩者乘積0分為陰性,1～4分為弱陽性,5～8分為陽性,9～12分為強陽性,其中陰性和弱陽性認定為LPCAT1蛋白低表達,陽性和強陽性認定為高表達[17]。

2 結(jié) 果

2.1 宮頸癌組織和正常宮頸組織中LPCAT1蛋白表達比較 宮頸癌組織和正常宮頸組織中LPCAT1蛋白表達見圖1;宮頸癌組織中LPCAT1蛋白高表達率為50.9%(83/163),高于正常宮頸組織中的21.3%(16/75)(χ2=18.509,P<0.001)。

注:A.正常宮頸組織中LPCAT1蛋白陽性表達;B.宮頸癌組織中LPCAT1蛋白弱陽性表達;C.宮頸癌組織中LPCAT1蛋白陽性表達;D.宮頸癌組織中LPCAT1蛋白強陽性表達。

2.2 LPCAT1表達水平在宮頸癌患者不同臨床病理特征中差異比較 FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期、浸潤深度>1/2肌層、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、中高分化宮頸癌患者LPCAT1蛋白高表達率高于FIGO分期Ⅰ～Ⅱ期、≤1/2肌層、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、低分化者(P<0.05),而在不同年齡、腫瘤直徑、組織病理類型和HPV感染中比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),見表1。

表1 LPCAT1表達水平在宮頸癌患者不同臨床病理特征中差異比較 [例(%)]

2.3 LPCAT1蛋白表達與宮頸癌患者術(shù)后預(yù)后的關(guān)系 163例宮頸癌患者中位生存時間為67.73個月,1、3和5年總生存率分別為87.4%、60.5%和49.1%。

83例LPCAT1蛋白高表達者中位生存時間為36.10個月,低于80例低表達者中位生存時間95.30個月(χ2=4.791,P=0.029),見圖2。

圖2 LPCAT1蛋白表達與宮頸癌患者術(shù)后預(yù)后的關(guān)系

2.4 宮頸癌患者術(shù)后預(yù)后影響因素Cox回歸分析 以宮頸癌患者術(shù)后生存為因變量,以上述結(jié)果中P<0.05項目為自變量進行多因素Cox回歸分析,結(jié)果顯示FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期、腫瘤浸潤深度>1/2肌層、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、中高分化和LPCAT1蛋白高表達均為宮頸癌患者術(shù)后預(yù)后不良的獨立危險因素(P<0.05),見表2。

表2 宮頸癌患者術(shù)后預(yù)后影響因素Cox回歸分析

3 討 論

LPCAT1屬于1-?；视?3-磷酸酰基轉(zhuǎn)移酶(1-acylglycerol-3-phosphate acyltransferases,AGPATs)家族,是一種具有4個保守結(jié)構(gòu)域的Ⅱ型跨膜蛋白,定位于細胞的脂滴、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體內(nèi)[18]。LPCAT1通過將脂肪酰基鏈結(jié)合到磷脂酰膽堿中來催化溶血磷脂酰膽堿轉(zhuǎn)化為磷脂酰膽堿,這種磷脂代謝反應(yīng)一方面可為腫瘤細胞增殖提供更多的生物來源,另一方面可調(diào)節(jié)細胞內(nèi)磷脂組分和脂滴含量,影響細胞膜性結(jié)構(gòu)及信號通路傳導(dǎo)[6,19]。多項研究表明LPCAT1催化的溶血磷脂酰膽堿向磷脂酰膽堿的轉(zhuǎn)化是腫瘤進展的原因[10,20]。

LPCAT1表達上調(diào)可促進腫瘤細胞增殖、侵襲和遷移,而其表達下調(diào)可誘導(dǎo)細胞周期阻滯于G0/G1期從而抑制腫瘤細胞生長[9]。本研究發(fā)現(xiàn)宮頸癌組織中LPCAT1蛋白高表達率顯著高于正常宮頸組織。前期細胞實驗證實敲低LPCAT1可顯著抑制宮頸癌細胞的增殖、遷移和侵襲,同時顯著誘導(dǎo)細胞凋亡。LPCAT1沉默可顯著降低宮頸癌細胞中白介素-6(IL-6)、p-Janus激酶2(JAK2)和磷酸化信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3(p-STAT3)的表達水平[21]。類似地,在具有LPCAT1缺失的宮頸癌細胞中,IL-6/STAT3靶基因的表達水平也被顯著下調(diào)[19]。添加重組IL-6后可消除由敲低LPCAT1引起的功能變化,抑制宮頸癌細胞的增殖和上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化過程[21]。此外,動物實驗結(jié)果證實LPCAT1缺失可有效降低異種移植小鼠模型的腫瘤生長速率和體內(nèi)肺轉(zhuǎn)移[22]。Tao等[23]發(fā)現(xiàn)LPCAT1通過介導(dǎo)SREBP-1/EGFR/PI3K信號通路調(diào)節(jié)細胞內(nèi)的膽固醇代謝,進而促進食管癌細胞的遷移和侵襲。

本研究發(fā)現(xiàn),LPCAT1蛋白高表達的宮頸癌患者總生存率顯著低于低表達者,與前期研究發(fā)現(xiàn)類似,例如劉小小等[24]發(fā)現(xiàn)LPCAT1 mRNA低表達的非小細胞肺癌患者總生存率明顯高于高表達者;He等[13]檢測了3 715例肝癌組織和3 105例非肝癌組織發(fā)現(xiàn),肝癌組織標本中LPCAT1蛋白表達水平顯著增加,且LPCAT1高表達與總生存狀況惡化相關(guān),是肝癌預(yù)后不良的危險因素(HR=2.21)。

綜上所述,LPCAT1蛋白在宮頸癌組織中呈現(xiàn)高表達水平,其表達水平上升與FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期、腫瘤浸潤深度>1/2肌層、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、中高分化程度呈正相關(guān),同時亦是宮頸癌患者術(shù)后預(yù)后不良的獨立危險因素,提示LPCAT1蛋白可能是宮頸癌早期診斷的潛在生物標志物和治療靶標。

利益沖突：所有作者聲明無利益沖突

作者貢獻聲明

陳韓:設(shè)計研究方案,實施研究過程,論文撰寫;楊江怡:實施研究過程,資料搜集整理,論文修改;陳華:提出研究思路,分析試驗數(shù)據(jù),論文審核;韓鋒:論文審核,論文修改,論文終審