陳茂深，劉華濤，曹永

1.江南大學(xué)未來(lái)食品科學(xué)中心（無(wú)錫 214122）；2.山東帥克寵物用品有限公司（臨沂 276300）

犬是最具有代表性的寵物，和人類相處的時(shí)間最早可追溯至公元前14 000年[1]。哈士奇是世界上最古老的犬種之一，最早人們以其作為交通工具拉雪橇，由于其獨(dú)特的外形和性格，近年來(lái)成為廣受歡迎的寵物犬。幼犬階段是犬一生中營(yíng)養(yǎng)需求最重要的階段，選擇的犬糧成分應(yīng)適合該階段犬的營(yíng)養(yǎng)需求。幼犬糧一般易于消化吸收，營(yíng)養(yǎng)水平較高，如幼犬吃成犬糧容易造成營(yíng)養(yǎng)不良等問(wèn)題。研究表明當(dāng)日糧中的鈣和磷分別占到0.8%和0.67%時(shí)，就可以保證犬骨骼的健康成長(zhǎng)[2]。犬糧中的纖維素對(duì)于維持犬腸道健康具有非常重要的作用，適量的纖維素水平使犬糞便成型較好。

益生元由GR.Gibson等提出，是指一種不可被消化的碳水化合物，通過(guò)選擇性的刺激一種或少數(shù)菌落中細(xì)菌的生長(zhǎng)而對(duì)寄主產(chǎn)生有益的影響，進(jìn)而改善宿主健康[3]。許多研究證實(shí)益生元對(duì)腸道菌群有調(diào)控作用，通常有益于雙歧桿菌和乳酸桿菌的增殖，抑制大腸桿菌的生長(zhǎng)[4]。國(guó)內(nèi)關(guān)于益生元對(duì)犬腸道作用的研究比較少，而國(guó)外研究的方面主要是益生元對(duì)腸道菌群、氨及其他蛋白代謝產(chǎn)物、短鏈脂肪酸、糞便質(zhì)量、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化率和免疫等的影響。但這些研究基本上都是針對(duì)于成犬，而關(guān)于益生元對(duì)幼犬的研究并不十分清楚。

依據(jù)AAFCO對(duì)生長(zhǎng)犬營(yíng)養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)的指導(dǎo)確定幼犬犬糧的基礎(chǔ)配方。在此基礎(chǔ)上將低聚果糖、菊粉和甘露寡糖3種益生元添加到基礎(chǔ)犬糧中，考察益生元的添加量對(duì)保留率的影響。采用體外模擬發(fā)酵試驗(yàn)比較3種益生元對(duì)哈士奇幼犬腸道菌群、短鏈脂肪酸和發(fā)酵液pH的影響，比較其作用效果，選定合適的益生元添加到犬糧中，以期為國(guó)內(nèi)生產(chǎn)含益生元的幼犬犬糧提供理論指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 試劑與材料

雞胸肉（雨潤(rùn)食品有限公司）；雞肉粉、豆粕、魚粉、玉米粉、米粉、微量元素、礦物質(zhì)、山梨酸鉀、食鹽、磷酸氫鈣（無(wú)錫糧油市場(chǎng)）；大豆油（中糧集團(tuán)）；低聚果糖、菊粉、甘露寡糖[量子高科（中國(guó)）生物股份有限公司]；石油醚、濃硫酸、濃硝酸、高氯酸、鹽酸、氫氧化鈉、高錳酸鉀（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；蔗果三糖標(biāo)準(zhǔn)品、蔗果四糖標(biāo)準(zhǔn)品、蔗果五糖標(biāo)準(zhǔn)品、甘露糖標(biāo)準(zhǔn)品（sigma公司）；BBL瓊脂培養(yǎng)基（青島日水生物技術(shù)有限公司）；EMB瓊脂培養(yǎng)基（中國(guó)國(guó)藥集團(tuán)上海化學(xué)試劑公司）；乳酸、乙酸、丙酸、丁酸標(biāo)準(zhǔn)品[盈芯生物科技（上海）有限公司]。

1.2 儀器與設(shè)備

FMHE72-20/40雙螺桿擠壓膨化機(jī)（湖南富馬科食品工程技術(shù)有限公司）；DFY-200搖擺式高速萬(wàn)能粉碎機(jī)（溫嶺市林大機(jī)械有限公司）；XMTA馬弗爐（上海實(shí)驗(yàn)儀器總廠）；K1160凱氏定氮儀（蘇省宜興市科教儀器研究所）；UV-2800紫外可見分光光度計(jì)（上海尤尼柯儀器有限公司）；E2695高效液相色譜儀[沃特世科技（上海）有限公司]；YJ-1340超凈工作臺(tái)（蘇州凈化設(shè)備廠）；DG250厭氧培養(yǎng)箱（英國(guó)惠特利科學(xué)有限公司）；DGG-9123A隔水式恒溫培養(yǎng)箱（上海森信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司）；MG48-PCR儀（上海谷寧儀器有限公司）；LDZH-100LS立式壓力蒸汽滅菌器（上海申安醫(yī)療器械廠）。

1.3 犬糧的制作

1.3.1 犬糧配方設(shè)計(jì)方法

參照美國(guó)動(dòng)物飼糧管理協(xié)會(huì)AAFCO設(shè)定的關(guān)于生長(zhǎng)犬營(yíng)養(yǎng)成分的標(biāo)準(zhǔn)值及市售犬糧的營(yíng)養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)確定粗蛋白和粗脂肪等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)，各原料主要成分通過(guò)查閱中國(guó)食品成分表得到，原料價(jià)格由市場(chǎng)調(diào)查獲得，運(yùn)用規(guī)劃求解的方法得出犬糧的配方。

1.3.2 顆粒犬糧加工方法

將原料粉碎過(guò)篩后混合均勻，用擠壓機(jī)進(jìn)行擠壓膨化。擠壓膨化參數(shù)：五段機(jī)筒溫度分別為70，90，110，130和140 ℃，進(jìn)水量20%。將膨化后的犬糧通過(guò)100 ℃的鼓風(fēng)干燥機(jī)，干燥后趁熱涂油，冷卻后將犬糧密封包裝。

1.3.3 犬糧主要營(yíng)養(yǎng)成分的測(cè)定方法

采用GB/T 6432—2018《飼料中粗蛋白的測(cè)定》、GB/T 6433—2006《飼料中粗脂肪的測(cè)定》、GB/T 6434—2006《飼料中粗纖維的含量測(cè)定》、GB/T 6435—2014《飼料中水分的測(cè)定》、GB/T 6436—2018《飼料中鈣的測(cè)定》、GB/T 6437—2018《飼料中總磷的測(cè)定》和GB/T 6438—2007《飼料中粗灰分的測(cè)定》測(cè)定犬糧中各營(yíng)養(yǎng)成分。

1.4 犬糧中益生元保留率的測(cè)定

低聚果糖、菊粉和甘露寡糖3種益生元添加量均分別為0，0.25%，0.50%，0.75%和1.00%，按1.3.2的方法進(jìn)行犬糧加工。將擠壓后的犬糧粉碎，根據(jù)傅博強(qiáng)等[5]和李仁勇等[6]的方法并稍加改動(dòng)。首先對(duì)1.2～1.5 g樣品進(jìn)行脫脂處理，用乙腈定容至25 mL，取1.5 mL并用0.45 μm有機(jī)濾膜過(guò)濾，所得濾液通過(guò)HPLC測(cè)定犬糧中益生元的含量。根據(jù)結(jié)果，按照式（1）計(jì)算不同添加量的益生元經(jīng)擠壓后的保留率。

1.5 哈士奇幼犬糞便中雙歧桿菌、乳酸桿菌和大腸桿菌的篩選及鑒定

1.5.1 試驗(yàn)動(dòng)物和飼喂條件

3只哈士奇幼犬，犬齡均為4個(gè)月，體重6 kg左右/只，犬飼喂在江南大學(xué)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，溫度維持在22 ℃，光照時(shí)間7：00～23：00。每只犬單獨(dú)喂養(yǎng)，自由飲水，飼喂時(shí)間為每天的早8點(diǎn)和晚8點(diǎn)，飼喂周期14 d。試驗(yàn)期間統(tǒng)一飼喂不含益生元的基礎(chǔ)犬糧，在第14天取幼犬糞便進(jìn)行試驗(yàn)。

1.5.2 糞便稀釋液的制備

取2.5 g新鮮幼犬糞便于滅菌后的裝有玻璃珠的錐形瓶中，加入50 mL無(wú)菌生理鹽水搖勻，按5 000 r/min離心10 min取上清液。

1.5.3 接種培養(yǎng)

取1 mL糞便稀釋液加入9 mL生理鹽水中充分稀釋，依次連續(xù)稀釋至10-6。選擇2個(gè)合適的稀釋度，其中大腸桿菌選擇的是10-3和10-4，雙歧桿菌和乳酸桿菌選擇的10-5和10-6。每個(gè)稀釋度取100 μL進(jìn)行平板涂布。

雙歧桿菌：BBL選擇培養(yǎng)基，在37 ℃下厭氧培養(yǎng)48 h。乳酸桿菌：LBS選擇培養(yǎng)基，在37 ℃下厭氧培養(yǎng)48 h。大腸桿菌：EMB選擇性培養(yǎng)基，在37 ℃下需氧培養(yǎng)24 h[7]。

1.5.4 菌種鑒定

挑取BBL、LBS和EMB培養(yǎng)基中純化3次的典型菌落進(jìn)行液體培養(yǎng)12 h，液體培養(yǎng)基采用MRS肉湯+0.05%半胱氨酸鹽酸鹽。取菌液2 mL至EP管，按1 000 r/min離心2 min，棄上清得菌體。加入200 μL SDS裂解液，于80 ℃水浴30 min，加入酚-氯仿200 μL于裂解液中，顛倒混勻后按1 200 r/min離心10 min，取200 μL上清液。加入400 μL冰乙醇重懸沉淀，按1 200 r/min離心3 min，棄上清，常溫倒置30 min至2 h以上。7.50 mL ddH2O重溶沉淀以備PCR，PCR反應(yīng)體系如表1所示。

表1 細(xì)菌16S rDNA 50 μL PCR反應(yīng)體系

16S rDNA的PCR擴(kuò)增：以提取的基因組DNA為模板，正向引物為27F：AGA GTT TGA TCC TGG CCT CA 20，反向引物為1492R：GGT TAC CTT GTT ACG ACT T 19，擴(kuò)增片段長(zhǎng)度為1 500 bp。PCR反應(yīng)條件：預(yù)變性94 ℃，4 min；變性94 ℃，45 s，退火55 ℃，45 s，延伸72 ℃，1 min，共30個(gè)循環(huán)。由生工生物工程（上海）有限公司完成DNA的測(cè)序工作。登陸美國(guó)國(guó)家生物信息技術(shù)中心（NCBI）網(wǎng)站，將已知序列與所測(cè)序列對(duì)比得出結(jié)果[8]。

1.6 3種益生元體外發(fā)酵過(guò)程中腸道菌群的測(cè)定

體外模擬腸道發(fā)酵參照Olano-Martin等[9]的方法，對(duì)照組不加益生元，試驗(yàn)組分別添加1%的低聚果糖、菊粉和甘露寡糖，每組設(shè)2個(gè)平行。將溶解后的培養(yǎng)基分裝于試管中，于115 ℃滅菌20 min，每個(gè)試管分裝9 mL，取1 mL糞便稀釋液接種于培養(yǎng)基中，于37 ℃厭氧發(fā)酵。

在發(fā)酵的第0，第6和第24小時(shí)取1 mL發(fā)酵液，加入9 mL生理鹽水充分稀釋，依次進(jìn)行連續(xù)稀釋至10-7。取1 mL的10-5，10-6和10-73個(gè)稀釋度的稀釋液于3種培養(yǎng)基中培養(yǎng)計(jì)數(shù)。其中，6 h檢測(cè)益生元短時(shí)間的作用效果，24 h檢測(cè)益生元長(zhǎng)時(shí)間的作用效果。

1.7 3種益生元體外發(fā)酵過(guò)程中短鏈脂肪酸的測(cè)定

將每個(gè)時(shí)間段的發(fā)酵液于常溫按12 000 r/min離心7 min，去除菌體。取上清液，過(guò)0.45 μm膜，用反相高效液相色譜法測(cè)定發(fā)酵液中的乳酸、乙酸、丙酸、丁酸的濃度。

HPLC條件[10]：色譜柱為反相C18柱，流動(dòng)相為0.02 mol/L KH2PO4-甲醇（98︰2，V/V），檢測(cè)波長(zhǎng)215 nm，流速1.0 mL/min，進(jìn)樣體積20 μL。

1.8 3種益生元體外發(fā)酵過(guò)程中pH的測(cè)定

于第0，第6，第12，第18和第24小時(shí)取發(fā)酵液用pH計(jì)測(cè)pH。

1.9 統(tǒng)計(jì)分析

使用Origin Pro 8和Microsoft Excel 2019對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理、繪制和數(shù)學(xué)擬合。使用SPSS 23.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行顯著性分析，P＜0.05 時(shí)，在統(tǒng)計(jì)學(xué)上差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 犬糧配方的建立

2.1.1 營(yíng)養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)及原料的確定

犬糧配方的制作主要參照AAFCO對(duì)生長(zhǎng)犬制定的飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)，如表2所示。原料的選擇方面參照市場(chǎng)上常用的配方原料。市售犬糧的主要原料選擇普遍采用肉類+骨粉+谷物的模式。這是因?yàn)殡m然肉類是一種非常優(yōu)質(zhì)的蛋白原料，但實(shí)際成本偏高，而骨粉在成本上要低于鮮肉，并且蛋白含量高，二者結(jié)合既可以保證犬的營(yíng)養(yǎng)需求，同時(shí)也考慮了經(jīng)濟(jì)效益。在肉類方面大多選擇雞肉，但也有一些高端犬糧選擇采用更高品質(zhì)的羊肉和牛肉。骨粉的選擇包括雞肉粉、鴨肉粉等；谷物方面主要是小麥粉、玉米粉和米粉等。最終選擇將雞肉、雞肉粉、豆粕和魚粉作為原料中的蛋白質(zhì)來(lái)源。因?yàn)殡u肉是一種優(yōu)質(zhì)的肉類原料，其蛋白含量高，約20%，并且氨基酸種類豐富，易于消化吸收。雞肉粉是將分割出胸肉之后雞的剩余部分加工而成的蛋白質(zhì)飼料原料，粗蛋白含量在65%～73%，粗脂肪含量9%～10%，總體營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)與魚粉不相上下[11]。豆粕是大豆經(jīng)提取豆油后的副產(chǎn)品，其蛋白含量豐富，達(dá)43%，各種氨基酸含量豐富且比較平衡，特別是一些必需氨基酸的含量較高，價(jià)格較其他蛋白飼料便宜，是一種常用的飼料來(lái)源[12]。雖然豆粕中含有一些抗?fàn)I養(yǎng)因子，但經(jīng)擠壓機(jī)的高溫高壓擠壓之后可以消除這些不利因素，但添加量不宜太多，否則會(huì)影響適口性。魚粉與其他蛋白飼料相比，是一種優(yōu)質(zhì)的動(dòng)物蛋白飼料，粗蛋白含量≥65%，具有營(yíng)養(yǎng)成分齊全和含量均衡的優(yōu)點(diǎn)，另外魚粉的礦物質(zhì)和維生素含量也特別豐富，其中鈣和磷的含量最高，并且比例適宜，一般可達(dá)1.4︰1～2︰1[13]。谷物作為犬碳水化合物的來(lái)源，提供一定的能量和纖維素，一定量的淀粉可使犬糧更好糊化。犬糧中常用的谷物通常包括小麥、玉米和大米，由于小麥含有過(guò)敏原，可能會(huì)導(dǎo)致幼犬過(guò)敏，所以選擇玉米和大米作為谷物來(lái)源。纖維不能被消化，也不能提供能量，但可以加快犬消化和排便的速度，纖維過(guò)少會(huì)導(dǎo)致便秘，但太多也會(huì)影響腸道健康，纖維主要靠玉米皮來(lái)提供。鈣磷的補(bǔ)充除了靠魚粉之外，主要由磷酸氫鈣提供。礦物質(zhì)和維生素用市售的預(yù)混料補(bǔ)充，其具體含量見表3。

表2 AAFCO營(yíng)養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)（犬）

表3 預(yù)混料成分含量表（礦物質(zhì)與維生素）

2.1.2 犬糧配方的制作及營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的測(cè)定

設(shè)計(jì)的基礎(chǔ)配方結(jié)果如表4所示。犬糧蛋白原料來(lái)源為雞肉、雞肉粉、魚粉和豆粕，谷物原料來(lái)源為玉米粉和米粉，纖維原料來(lái)源為玉米皮。

表4 犬糧配方及其營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)含量 單位：%

通過(guò)查閱《中國(guó)飼料成分及營(yíng)養(yǎng)價(jià)值表》確定各添加物的營(yíng)養(yǎng)成分含量，并確定它們的市場(chǎng)價(jià)格，利用Excel規(guī)劃求解，限定各營(yíng)養(yǎng)成分的最低標(biāo)準(zhǔn)和最高標(biāo)準(zhǔn)，以成本的最小值作為目標(biāo)單元格，完成犬糧配方的最低成本優(yōu)化。同時(shí)為保證犬糧的質(zhì)量，將雞肉的添加量限制在不低于10%。

配方制定好后，按照配方混合原料進(jìn)行擠壓，將擠壓之后的犬糧進(jìn)行主要營(yíng)養(yǎng)成分的檢測(cè)（表4）。由表4的結(jié)果可知，最終制定的犬糧主要營(yíng)養(yǎng)成分均高于AAFCO推薦的標(biāo)準(zhǔn)。

2.2 犬糧擠壓工藝對(duì)益生元保留率的影響

在確定犬糧基礎(chǔ)配方后，為制造一種可以改善犬腸道健康的功能性犬糧，還需加入益生元這一功能成分。由于益生元的價(jià)格較高，考慮到成本問(wèn)題，將益生元的最高添加量設(shè)定為1.00%，具體添加量分別為0.25%，0.50%，0.75%和1.00%。由于犬糧的制備過(guò)程包括物料的粉碎、擠壓膨化和干燥等過(guò)程，可能會(huì)對(duì)益生元造成損失，因此試驗(yàn)探討3種益生元的添加量對(duì)保留率的影響。

在原料混合過(guò)程中，分別添加低聚果糖、菊粉和甘露寡糖粉末，添加量設(shè)計(jì)為0.25%，0.50%，0.75%和1.00%，考察3種益生元的添加量對(duì)其保留率的影響。

如圖1所示，3種益生元的保留率并不隨添加量的變化而顯著變化，說(shuō)明在一定范圍內(nèi)益生元的添加量對(duì)其保留率沒有顯著的影響。其中，低聚果糖的保留率都維持在較高水平，都在90%左右。菊粉和甘露寡糖的保留率比低聚果糖低，約75%。說(shuō)明犬糧制粒過(guò)程中雖然這些低聚糖很穩(wěn)定，但也會(huì)有些損失，其中低聚果糖的保留率最高。

圖1 益生元添加量對(duì)其保留率的影響

2.3 哈士奇幼犬糞便中雙歧桿菌、乳酸桿菌和大腸桿菌的篩選及鑒定

試驗(yàn)選擇傳統(tǒng)的平板計(jì)數(shù)法，使用BBL、LBS和EMB這3種選擇性培養(yǎng)基對(duì)糞便中3種主要腸道菌群（雙歧桿菌1、乳酸桿菌和大腸桿菌）進(jìn)行篩選計(jì)數(shù)，為了對(duì)3種篩選的菌群進(jìn)行進(jìn)一步確定，采用分子生物學(xué)的方法鑒定其菌屬。DNA所測(cè)序列與已知序列的比對(duì)結(jié)果如表5所示。

表5 菌種鑒定結(jié)果 單位：%

結(jié)果表明，3種培養(yǎng)基可將雙歧桿菌、乳酸桿菌和大腸桿菌篩選出來(lái)，為后續(xù)試驗(yàn)中利用這3種培養(yǎng)基進(jìn)行平板計(jì)數(shù)提供條件。

2.4 3種益生元體外發(fā)酵對(duì)哈士奇幼犬腸道菌群數(shù)量的影響

在體外發(fā)酵的第0，第6和第24小時(shí)取發(fā)酵液測(cè)定其雙歧桿菌、乳酸桿菌和大腸桿菌的菌落數(shù)。糞便發(fā)酵液的測(cè)定結(jié)果如表6所示。

表6 不同樣品體外發(fā)酵對(duì)哈士奇幼犬腸道菌群數(shù)量的影響 單位：lg CFU/mL±SD

表6反映3種益生元對(duì)哈士奇幼犬腸道菌群的不同作用效果，在發(fā)酵6 h后，試驗(yàn)組與對(duì)照組相比雙歧桿菌菌群數(shù)量沒有顯著增加，試驗(yàn)組間雙歧桿菌數(shù)量也無(wú)明顯差異；發(fā)酵24 h后，所有試驗(yàn)組雙歧桿菌數(shù)量都顯著高于對(duì)照組。其中，低聚果糖組由4.86 lg CFU/mL上升到8.24 lg CFU/mL，菊粉組上升到8.51 lg CFU/mL，甘露寡糖組上升到8.47 lg CFU/mL。對(duì)于乳酸桿菌，發(fā)酵6 h后，試驗(yàn)組與對(duì)照組相比菌群數(shù)量都顯著增加，各試驗(yàn)組間菌群數(shù)量無(wú)顯著性差異；發(fā)酵24 h后低聚果糖和菊粉組乳酸桿菌數(shù)量顯著高于對(duì)照組，而甘露寡糖組與對(duì)照組相比菌群數(shù)量無(wú)顯著差異。其中，低聚果糖組由4.21 lg CFU/mL上升到8.05 lg CFU/mL，菊粉組上升到8.23 lg CFU/mL。大腸桿菌組在發(fā)酵6 h后，對(duì)照組與試驗(yàn)組相比菌群數(shù)量無(wú)顯著性差異；發(fā)酵24 h后，有且僅有低聚果糖組的大腸桿菌在顯著低于對(duì)照組，為7.71 lg CFU/mL。

2.5 3種益生元體外發(fā)酵對(duì)哈士奇幼犬腸道菌群產(chǎn)生短鏈脂肪酸濃度的影響

在體外發(fā)酵的第0，第6和第24小時(shí)取發(fā)酵液用高效液相色譜法測(cè)定發(fā)酵液中乳酸、乙酸和丙酸濃度。3種益生元對(duì)哈士奇體外發(fā)酵過(guò)程中產(chǎn)酸的變化分別如表7所示。

表7 不同樣品體外發(fā)酵過(guò)程中短鏈脂肪酸濃度的變化 單位：mmol/L

發(fā)酵6 h后，相較于對(duì)照組，僅有低聚果糖組的乳酸顯著降低，為18.65 mmol/L。發(fā)酵24 h后，試驗(yàn)組與對(duì)照組相比，乳酸濃度顯著增加，其中低聚果糖組的乳酸濃度增加最多。乙酸組發(fā)酵6 h后，試驗(yàn)組與對(duì)照組無(wú)顯著性差異；發(fā)酵24 h后試驗(yàn)組與對(duì)照組相比乙酸濃度均顯著增加，其中甘露寡糖組增加最多，由11.69 mmol/L上升到15.88 mmol/L。對(duì)于丙酸組，發(fā)酵的24 h內(nèi)試驗(yàn)組與對(duì)照組間均無(wú)明顯規(guī)律。哈士奇幼犬糞便發(fā)酵液中低聚果糖組在發(fā)酵24 h內(nèi)中乳酸濃度先減少后增加的原因可能是，乳酸在產(chǎn)生過(guò)程中可被其他共生的細(xì)菌轉(zhuǎn)化為乙酸或丙酸等短鏈脂肪酸[14]，但這些共生的細(xì)菌對(duì)低pH比較敏感，隨著pH的下降，這些細(xì)菌的活性被抑制，導(dǎo)致乳酸的含量又逐漸增加[15]。

3種益生元對(duì)哈士奇幼犬體外發(fā)酵過(guò)程中總短鏈脂肪酸的濃度變化結(jié)果如表8所示?？偠替溨舅?乳酸+乙酸+丙酸。發(fā)酵24 h后，與其他組相比，低聚果糖組產(chǎn)生的總短鏈脂肪酸最多，由31.81 mmol/L增加到59.92 mmol/L。

表8 不同樣品體外發(fā)酵過(guò)程中總短鏈脂肪酸濃度變化 單位：mmol/L

2.6 3種益生元體外發(fā)酵對(duì)發(fā)酵液pH的影響

在一定程度上，發(fā)酵液pH的高低反映腸道菌群的致酸效果，3種益生元體外發(fā)酵過(guò)程中哈士奇幼犬糞便發(fā)酵液pH隨時(shí)間變化的結(jié)果如圖2所示。

圖2 發(fā)酵過(guò)程中pH的變化情況

隨著發(fā)酵時(shí)間的增加，各組發(fā)酵液的pH均在下降。在0～6 h內(nèi)發(fā)酵液的pH下降速度較快，且對(duì)照組下降速度小于所有試驗(yàn)組，低聚果糖組下降速度最快，由pH 7.42降至pH 6.33。在6～12 h內(nèi)發(fā)酵液pH值下降的速度減緩，其中對(duì)照組的pH幾乎沒有變化，而低聚果糖組和菊粉組的pH仍保持一個(gè)較快的速度下降；24 h后低聚果糖組的pH降至最低，pH從7.42降至4.31，菊粉組次之，從pH 7.46降至pH 4.88。與腸道菌群的產(chǎn)酸結(jié)果進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)發(fā)酵液pH與短鏈脂肪酸并沒有明顯相關(guān)性。原因是pH除了與短鏈脂肪酸濃度有關(guān)外，還與酸產(chǎn)生、吸收和利用的相對(duì)速率及在發(fā)酵過(guò)程中產(chǎn)生的其他物質(zhì)有關(guān)[16]。

3 結(jié)語(yǔ)

在改進(jìn)犬糧配方的基礎(chǔ)上，考察添加不同量益生元時(shí)，犬糧經(jīng)擠壓制粒后益生元保留率的變化，并通過(guò)體外發(fā)酵試驗(yàn)比較3種益生元對(duì)哈士奇幼犬腸道的益生作用，結(jié)果表明：隨添加量的變化，3種益生元的保留率基本不變，其中低聚果糖保留率達(dá)到最高，約為90%；3種益生元均能不同程度促進(jìn)哈士奇幼犬的腸道健康，其中只有低聚果糖可以顯著地抑制大腸桿菌的增長(zhǎng)，參考其保留率和價(jià)格，選擇添加低聚果糖添加到幼犬犬糧更具有工業(yè)指導(dǎo)意義。