包瑞瑩， 王閆宇， 劉曉烜， 張海文， 王學梅 ， 馮 昆

（1.海南大學動物科技學院，海南?？?570228；2.遵義醫(yī)科大學珠海校區(qū)，廣東珠海 519041）

中草藥是我國的特色藥材，例如黨參、黃芪、皇竹草等已有數(shù)千年的發(fā)展歷史（Xu 等，2017）。作為飼料添加劑， 中草藥可以通過改善動物的免疫狀態(tài)、促進動物的生長性能來提高其生產力，因此被廣泛用于畜禽生產（Gong 等，2014）。 中草藥渣是中草藥經加工提取、 煎煮制劑后產生的大量廢棄物， 受提取工藝的限制， 其中還含有30% ～50%的藥用活性物質 （Huang 等，2021；Meng 等，2017）。 目前常用的中草藥渣處理方法有填埋、焚燒、 堆放等， 造成了嚴重的環(huán)境污染和資源浪費（孟祥才等，2018）。發(fā)酵技術已應用于非常規(guī)飼料原料處理多年，以此擴大飼料資源，解決飼料短缺問題，其中常用的發(fā)酵菌種有乳酸菌、酵母菌、芽孢桿菌和藥用真菌等 （吳軍龍等，2022；Li 等，2020）。 張玉千（2020）研究發(fā)現(xiàn)，日糧中添加發(fā)酵中草藥渣可以提高斷奶仔豬的生產性能。 梁麗芬（2022）使用發(fā)酵羅漢果渣飼喂肉雞發(fā)現(xiàn)，其屠宰性能得到了顯著改善。安琦等（2021）研究表明，植物乳桿菌發(fā)酵的黃芩藥渣可以顯著提高斷奶仔豬的生長性能和免疫功能。 然而發(fā)酵中草藥渣作為飼料添加劑對家禽的相關研究報道有限。

文昌雞是海南地方雞品種，具有皮薄肉嫩、風味獨特、營養(yǎng)豐富等特點，年產值約120 億元，對海南省畜禽養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展具有重要支撐作用（宋彥亭等，2021）。本試驗以發(fā)酵中草藥渣為原料，研究其不同添加量對文昌雞生長、 屠宰性能和免疫機能的影響， 從而為發(fā)酵中草藥渣作為飼料添加劑提供可行性方向和理論支撐， 對提高文昌雞飼養(yǎng)效率等方面具有實踐意義。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 靈芝菌：由本課題組篩選鑒定。發(fā)酵中草藥渣的成分及處理方式：22%黨參藥渣，22%黃芪藥渣，44%皇竹草，11%麥麩，1%生石膏，65%蒸餾水。 經121 ℃高壓滅菌20 min 后，接種靈芝菌有氧發(fā)酵30 d 所得發(fā)酵產物烘干粉碎制成。

1.2 試驗設計與飼養(yǎng)管理 試驗在海南大學動物科技學院動物養(yǎng)殖基地進行， 試驗雞由譚牛文昌雞種雞場提供。選擇192 只43 日齡的文昌雞母雞，隨機分為4 組，每組8 個重復，每個重復6 只雞。 對照組（CK 組） 飼喂基礎日糧，T1、T2、T3組的基礎日糧中分別添加0.5%、1.0%、1.5%的發(fā)酵中草藥渣替代麥麩。 試驗共持續(xù)28 d，試驗雞采取籠養(yǎng)的方式，期間自由采食和飲水，自然通風和光照。 基礎日糧的配制符合中國禽類的飼養(yǎng)標準（NY/T 33-2004），基礎日糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

表1 基礎日糧組成及營養(yǎng)水平（風干基礎）

1.3 測定指標與方法

1.3.1 生長性能 記錄每個重復的投料量和剩余料量。 試驗第14 天和第28 天晚清空料槽內的剩余飼料，并在試驗雞空腹12 h 后進行稱重，以重復為單位記錄總重。計算平均日增重、平均日采食量、料重比，公式如下。 每日觀察各組試驗雞的健康狀態(tài)，統(tǒng)計死亡率。

平均日增重/（g/d）=（末重-初重）/試驗天數(shù)；

平均日采食量/（g/d）=飼料消耗量/試驗天數(shù)；

料重比=平均日采食量/平均日增重。

1.3.2 屠宰性能 試驗結束后， 每個重復隨機選取2 只體型相近的空腹試驗雞， 稱重后靜脈放血處死。 測定活體重、屠體重、半凈膛重、全凈膛重、腹脂重、左側腿肌重、左側翅膀重，并通過所得數(shù)據(jù)計算屠宰率、半凈膛率、全凈膛率、腹脂率、腿比率、翅膀率，具體方法參照《家禽生產性能名詞術語和度量統(tǒng)計方法》（NY/T 823-2020）。 從試驗雞尾根部切線向上沿第一切線剝離兩側皮膚， 使用游標卡尺測量脂肪帶的寬度，得到皮下脂肪厚度。

屠宰率/%=胴體重/活體重×100；

半凈膛率/%=半凈膛重/活體重×100；

全凈膛率/%=全凈膛重/活體重×100；

腹脂率/%=腹脂重/（全凈膛重+腹脂重）×100；

腿比率/%=腿肌重/全凈膛重×100；

翅膀率/%=翅膀重/全凈膛重×100。

1.3.3 免疫器官指數(shù) 文昌雞屠宰后， 取胸腺和脾臟（剔除脂肪和系膜）分別稱重，計算免疫器官指數(shù)。

脾臟指數(shù)=脾臟重/活體重；

胸腺指數(shù)=胸腺重/活體重。

1.3.4 免疫組織形態(tài) 試驗結束后每個處理隨機選取1 只文昌雞取胸腺和脾臟組織， 利用多聚甲醛固定，制作石蠟組織切片，經H.E.染色法處理后，顯微鏡下觀察其淋巴細胞數(shù)量變化。

1.3.5 血清免疫指標 分離血清后， 使用試劑盒（南京建成生物工程研究所）檢測血清免疫球蛋白A （IgA）、 免疫球蛋白G （IgG）、 免疫球蛋白M（IgM）含量。

1.4 數(shù)據(jù)處理和分析 使用Excel 2007 對數(shù)據(jù)進行初步整理， 再通過SPSS 17.0 軟件進行單因素方差分析，P ＜0.05 為差異顯著，P ＜0.01 為差異極顯著。 結果以“平均值±標準誤”表示。

2 結果與分析

2.1 發(fā)酵中草藥渣對文昌雞生長性能的影響如表2 所示，飼料中添加發(fā)酵中草藥渣后，試驗第1 ～14 天，T1、T2、T3 組平均日增重較CK 組分別提高了9.73%、5.64%、2.25%，其中T1、T2 組差異顯著（P ＜0.05）。 各處理組間的平均日采食量、料重比無顯著差異（P ＞0.05）；試驗第15 ～28 天，各生長性能指標均無顯著差異（P ＞0.05）。整個試驗期間無試驗動物死亡。

表2 發(fā)酵中草藥渣對文昌雞生長性能的影響

2.2 發(fā)酵中草藥渣對文昌雞屠宰性能的影響由表3 可知， 用一定比例的發(fā)酵中草藥渣替代部分基礎日糧后， 與CK 組相比，T1、T2、T3 組腿比率分別提高了5.04%、6.74%、7.67%（P ＜0.05），試驗組的屠宰率呈遞增趨勢，T1、T2 組翅膀率有所增加，但是差異均不顯著（P ＞0.05）。 各處理組間的全凈膛率、腹脂率、皮下脂肪厚度均無顯著差異（P ＞0.05）。

表3 發(fā)酵中草藥渣對文昌雞屠宰性能的影響

2.3 發(fā)酵中草藥渣對文昌雞免疫機能的影響

2.3.1 發(fā)酵中草藥渣對文昌雞免疫器官發(fā)育的影響 由表4 可見，T1、T2、T3 組脾臟質量較CK 組分別提高了8.53%、21.33%、5.69%，其中T2 組差異顯著（P ＜0.05）。 各試驗組的脾臟指數(shù)、胸腺質量和胸腺指數(shù)均有增長的趨勢， 且T2 組增加最高，但是無顯著差異（P ＞0.05）。觀察圖1 可知，試驗組中文昌雞脾臟和胸腺組織中的淋巴細胞數(shù)量明顯多于CK 組。

圖1 發(fā)酵中草藥渣對文昌雞脾臟、胸腺組織中淋巴細胞數(shù)量的影響

表4 發(fā)酵中草藥渣對文昌雞免疫器官質量和指數(shù)的影響

2.3.2 發(fā)酵中草藥渣對文昌雞血清免疫蛋白的影響 如表5 所示， 添加一定含量的發(fā)酵中草藥渣后，T1、T2、T3 組文昌雞血清中的IgA、IgG 含量均高于CK 組，分別提高了26.75%、35.31%、26.54%和41.60%、55.33%、33.42%， 其中T1、T3 組增加顯著（P ＜0.05），T2 組增加極顯著（P ＜0.01）。 各處理組間血清中的IgM 含量無顯著差異 （P ＞0.05）。

表5 發(fā)酵中草藥渣對文昌雞血清免疫蛋白的影響 μg/mL

3 討論

3.1 發(fā)酵中草藥渣對文昌雞生長性能的影響中草藥渣中含有大量纖維素、脂肪和蛋白質、多糖等生物活性成分 （馬遜風等，2004； 吳純潔等，1998）。 在發(fā)酵過程中，微生物可以將中草藥渣中的大分子物質分解為小分子物質， 釋放其藥用活性成分， 降解中草藥渣中的有毒物質以減少其副作用，從而更利于被動物直接吸收，微生物產生的大量代謝產物還可以促進動物的生長發(fā)育（劉曉烜等，2021；Chen 等，2012；Himmel 等，2007）。 閆先超（2016）研究發(fā)現(xiàn)，在青腳麻雞的飼糧中添加黃芪藥渣發(fā)酵物后， 其平均日增重得到了顯著提高，生長性能得到了改善。盧浪（2022）將野生艾草和不同濃度黑曲霉發(fā)酵的艾草飼喂肉仔雞發(fā)現(xiàn)，發(fā)酵艾草提高了其生長性能且效果優(yōu)于野生艾草。 譚雁婷（2022）發(fā)現(xiàn)，3%的香菇發(fā)酵料可以有效促進黃羽肉雞的生產性能。本研究結果中，試驗第1 ～14 天，飼喂發(fā)酵中草藥渣提高了文昌雞的平均日增重， 其中0.5%、1.0%的添加量組差異顯著，而各組的平均日采食量和料重比無顯著差異。試驗第15 ～28 天，各指標均無顯著差異，整個試驗階段無死亡。 說明發(fā)酵中草藥渣對文昌雞無明顯副作用， 且對其生長發(fā)育起到了一定的促進作用。 可能是發(fā)酵中草藥渣的活性物質和微生物代謝產物改善了文昌雞的腸道功能， 促進其消化吸收營養(yǎng)物質的能力， 而試驗后期文昌雞的生長逐漸達到平緩階段，基礎日糧已滿足自身需求（徐輝等，2021）。

3.2 發(fā)酵中草藥渣對文昌雞屠宰性能的影響屠宰性能是反映禽類胴體品質的重要指標， 其中屠宰率和全凈膛率是衡量禽類產肉性能的主要指標。 一般認為屠宰率高于80%、 全凈膛率高于60%的禽類肉用性能良好（張紅等，2004）。腿比率和翅膀率越高說明禽類的腿和翅膀所占比率越大，產肉性能越好。腹脂率和皮下脂肪厚度反映了家禽的脂肪在腹部和皮下的沉積能力， 而脂肪沉積過多會導致雞的屠宰率和飼料轉化率降低，腹脂率和皮下脂肪厚度值越高， 則說明產肉率越?。◤埛f等，2022；韓文朋等，2019）。張強等（2022）研究發(fā)現(xiàn)， 基礎飼糧中添加3%的發(fā)酵穿心蓮粉可以顯著提高番鴨的屠宰率和胸肌率， 產肉性能得到了改善。高鳳磊（2022）研究表明，在黃花雞的基礎日糧中添加5%發(fā)酵劍麻渣可以顯著提高屠宰率。 本試驗結果表明， 所有處理組的屠宰率大于87%，全凈膛率大于65%，說明試驗所用文昌雞肉用性能良好。 在飼料中添加發(fā)酵中草藥渣對半凈膛率、腹脂率、皮下脂肪厚度均無顯著影響，但是提高了屠宰率，顯著增加了腿比率，0.5%、1.0%的發(fā)酵中草藥渣提高了文昌雞的翅膀率， 說明發(fā)酵中草藥渣有利于文昌雞的器官發(fā)育， 可以提高其屠宰性能，改善產肉能力。

3.3 發(fā)酵中草藥渣對文昌雞免疫機能的影響在家禽的生長發(fā)育過程中， 胸腺和脾臟是免疫系統(tǒng)中主要的免疫器官， 在抵抗外來病原微生物入侵的作用上起著不可取代的作用。 胸腺是中樞免疫器官，是免疫細胞發(fā)生、發(fā)育、分化與成熟的場所， 同時對外周免疫器官的發(fā)育起到主導作用。脾臟是外周免疫器官， 是參與免疫反應的重要部位，主要免疫功能是產生抗體（欒維民，2008）。 免疫器官質量增加是免疫力加強的表現(xiàn)， 免疫器官指數(shù)是免疫器官質量占活體重的比例， 值越高則代表免疫器官的相對發(fā)育情況越好， 相應免疫功能也越完善（江彥等，2018；余祖華等，2016）。陳柯源等（2020）使用枯草芽孢桿菌發(fā)酵當歸、黃芪藥粉發(fā)現(xiàn)，其可以顯著增加肉雞的免疫器官指數(shù)。張曉靜等（2018）研究發(fā)現(xiàn)，發(fā)酵黃芪-甘草水提物增強817 肉雞免疫功能的效果優(yōu)于未發(fā)酵產物。家禽血液中淋巴細胞的主要來源是胸腺， 淋巴細胞對抗原刺激進行免疫應答主要在脾臟中進行，且血清中免疫球蛋白的主要來源是淋巴細胞，因此淋巴細胞的數(shù)量可在一定程度上評估家禽的免疫能力（杜平，2022；董淑珍等，2011）。 姜云瑤等（2016）使用扁靈芝發(fā)酵浸膏發(fā)現(xiàn)，可以促進肉雞淋巴細胞的增殖。鄭全等（2013）研究發(fā)現(xiàn)，蟲草真菌固態(tài)發(fā)酵添加劑可以促進加肉仔雞免疫組織淋巴細胞的成熟，增加其數(shù)量。 本研究結果顯示，飼喂發(fā)酵中草藥渣后文昌雞的免疫器官質量均有提高， 其中1.0%的添加水平顯著增加了脾臟質量，各試驗組的免疫器官指數(shù)均高于對照組，且1.0%發(fā)酵中草藥渣組值最高， 并且發(fā)酵中草藥渣能夠明顯增加文昌雞淋巴細胞的數(shù)量。 說明在飼料中添加發(fā)酵中草藥渣對免疫器官的發(fā)育、 免疫活性細胞的增殖具有明顯促進作用， 增強了機體的抗病力，提高機體免疫功能，其中添加量為1.0%時效果最佳。

IgA、IgG、IgM 是家禽血清中重要的抗體，當細菌或病毒入侵機體時， 可以與相應的抗原進行特異性結合，激活體液免疫，達到清除細菌、病毒、致病物質的作用，對機體有保護和防御功能，因此IgA、IgG、IgM 的含量越高代表家禽免疫功能越強（解軍亮等，2022）。 IgA 參與黏膜免疫，在局部損傷中發(fā)揮作用；IgG 是血清中含量最高、最重要的免疫球蛋白，在體液免疫中起主導作用；IgM 是機體受到抗原刺激時產生的第一種抗體， 在早期防御中起著重要作用 （Song 等，2020； 馬玉芳等，2008）。 范作良等（2016）研究發(fā)現(xiàn)，日糧中發(fā)酵后的中草藥制劑可以極顯著提高蛋雞血清中的I-gA、IgG、IgM 含量。許棟等（2021）在產蛋后期的蛋雞飼料中添加發(fā)酵中草藥發(fā)現(xiàn)， 其球蛋白含量有極顯著的提高。 謝全喜等（2016）使用鼠李糖乳桿菌發(fā)酵紫莖澤蘭脫毒草粉和麩皮， 聯(lián)合枯草芽孢桿菌飼喂黃羽肉雞發(fā)現(xiàn)，其盲腸內容物sIgA 和血清IgG 含量得到顯著增加。本研究結果顯示，各處理組IgM 含量差異不顯著，推測可能是試驗末期文昌雞已渡過早期免疫階段， 因此發(fā)酵中草藥渣對抗原刺激誘導的免疫應答產生的IgM 水平影響不大，其機理還有待進一步研究。而飼料中添加0.5%、1.5%的發(fā)酵中草藥渣顯著提高了文昌雞血清中的IgA、IgG 含量，1.0%的發(fā)酵中草藥渣有極顯著的提高， 說明添加發(fā)酵中草藥渣能夠提高文昌雞的免疫抗體水平， 從而進一步加強其免疫功能，且1.0%的添加量效果最佳，可能是發(fā)酵所使用的靈芝真菌與各中草藥渣成分發(fā)生協(xié)同作用，具有增強免疫力的功效， 且中草藥渣經發(fā)酵后多糖等活性成分的增加也會引起免疫指標水平的升高（解軍亮等，2022；陳柯源等，2020）。

4 結論

本研究結果表明， 在飼料中添加發(fā)酵中草藥渣可以顯著改善文昌雞的生長性能、 屠宰性能和免疫機能， 以添加1.0%的發(fā)酵中草藥渣效果最優(yōu)。