周純潔，程輝躍

（重慶市食品藥品檢驗檢測研究院·國家藥品監(jiān)督管理局麻醉精神藥品質量監(jiān)測重點實驗室，重慶 401121）

局部麻醉藥（簡稱局麻藥）可作用于外周神經，抑制神經沖動傳導，使局部組織失去痛覺［1-2］。按結構可將常用的局麻藥分為酰胺類和酯類，其中酰胺類主要包括利多卡因、布比卡因、羅哌卡因等，酯類主要包括普魯卡因、丁卡因等。隨著局麻藥在臨床的廣泛應用，其毒副作用也日益凸顯，主要表現(xiàn)為過敏反應、神經毒性反應、心血管毒性反應等［3］。近年來，一些不良商家為牟取更多利潤，將卡因類局麻藥用于化妝品及畜類、水產養(yǎng)殖中，長期使用這類產品易危害人體健康。本研究中對中國知網（CNKI）、萬方（WanFang）、維普（VIP）、ScienceDirect等數(shù)據(jù)庫中2018年1月11日至2023年7月2日的化妝品、畜產品、水產品中的卡因類局麻藥檢測技術進行了綜述，旨在為卡因類局麻藥非法添加的日常監(jiān)管提供理論依據(jù)和技術支撐。現(xiàn)報道如下。

1 卡因類局麻藥非法添加現(xiàn)狀

1.1 化妝品

化妝品通過皮膚吸收，長期與人體直接接觸，起到修復、美白、祛痘、祛斑等功效，若存在有害物質，也易通過皮膚吸收危害而人體健康［4］。隨著社會經濟的不斷進步，化妝品逐漸成為必不可少的日用品，其質量安全問題也備受關注［5］。臨床常用的卡因類局麻藥添加到化妝品中，可使皮膚和肌肉暫時麻痹和僵硬，以減輕皮膚疼痛或不適感，并讓皮膚看似光滑，從而起到抗皺、抗衰老的作用。一些不法商家為提高化妝品修復、抗衰老的功效以牟取暴利，將該類藥物添加到化妝品中，宣稱具有修護、舒緩、抗皺、抗衰老功效。該類藥物通過皮膚吸收進入人體血液循環(huán)，可引起神經或心血管毒性反應。故《化妝品安全技術規(guī)范（2015 年版）》（2015 年第268 號，以下簡稱《規(guī)范》）中已明確將普魯卡因、丁卡因、利多卡因、辛可卡因等局麻藥列為化妝品禁用組分。

1.2 水產品

在水產品的運輸及暫養(yǎng)過程中，多采用高密度運輸以降低成本，這種環(huán)境極易造成水產動物的應激反應。為提高水產品的鮮活度，降低受傷率和死亡率，一些商家會通過添加麻醉劑來降低水產動物的新陳代謝，使其進入類休眠狀態(tài)，以抑制其應激反應，減少因缺氧或皮膚損傷等造成的傷亡現(xiàn)象，從而獲得更高的經濟效益［6］?？ㄒ蝾惥致樗幝樽頃r間短、持續(xù)時間長、復蘇時間短，可有效提高水產品長途運輸過程中的存活率，常被商家用作漁用麻醉劑，但其安全性也一直存在爭議［7］。三卡因（MS-222）是目前最常用的卡因類漁用麻醉劑，也是美國、挪威、英國、加拿大唯一允許使用的水產品麻醉劑，但世界各國對其在水產品中的應用均較謹慎，分別規(guī)定使用過三卡因的水產品需經過21，21，10，5 d的休藥期才可上市［8-10］，但我國尚未制訂卡因類局麻藥作為漁用麻醉劑的使用限量和休藥期。

1.3 畜產品

近年來，一些不法商家為獲取高額利潤，在畜類屠宰前對其注射局麻藥，使其毛細血管擴張，肌肉松弛，再注入大量水，通過聯(lián)用注射的局麻藥與腎上腺素、阿托品等保水利尿類藥，提高畜類動物的注水保水承受能力，增加畜肉質量［11-12］?！白⑺⑺幦狻笔录念l發(fā)不僅大大降低了消費者對我國畜肉品質的信心，引發(fā)的質量安全問題也值得關注［13-14］。注水注藥會使畜肉產生有毒有害物質，且殘留的藥物會進入人體血液循環(huán)，長期食用此類畜肉會危害人體健康?！渡i屠宰管理條例》（中華人民共和國國務院令第742 號）明確規(guī)定，嚴禁生豬定點屠宰廠（場）屠宰注水或注入其他物質的生豬，嚴禁為對生豬、生豬產品注水或注入其他物質的單位和個人提供場所。

2 檢測技術

2.1 高效液相色譜（HPLC）法

HPLC 法是藥物分析中最經典且應用最廣泛的分析技術，以液體為流動相，通過高壓輸液系統(tǒng)將流動相泵入色譜柱，在柱內通過固定相實現(xiàn)各成分的色譜分離后，依次進入檢測器檢測，能在短時間內完成復雜樣品的分離與分析［15］。HPLC 法主要用于分析熱不穩(wěn)定、沸點高、分子量較大的化合物，因其靈敏度高、選擇性強、穩(wěn)定性好，在醫(yī)藥、環(huán)境、食品、農業(yè)等領域應用廣泛。目前，HPLC 法中最常用的檢測器為紫外- 可見光檢測器（UVD）及二極管陣列檢測器（DAD），均為光吸收型檢測器?！兑?guī)范》規(guī)定的7種卡因類禁用組方普魯卡因胺、普魯卡因、氯普魯卡因、苯佐卡因、利多卡因、丁卡因、辛可卡因的檢測方法均采用HPLC - DAD 法，根據(jù)保留時間和紫外光譜圖進行定性，根據(jù)峰面積進行定量。但隨著醫(yī)藥行業(yè)的迅速發(fā)展，臨床常用的局麻藥已遠不止上述7 種。HPLC 法檢測化妝品和水產品中卡因類非法添加物的典型案例見表1。

表1 高效液相色譜法檢測卡因類非法添加物典型案例Tab.1 Typical cases of HPLC method for detecting caine-type illegal additives

沈心等［16］建立了同時測定醫(yī)療美容產品中臨床常用的9種卡因類局麻藥的HPLC-UVD法，檢測限（LOD）為31～40 mg/kg，定量限（LOQ）為62～80 mg/kg，對10批醫(yī)療美容產品進行檢測分析發(fā)現(xiàn)，1 批樣品檢出利多卡因、普魯卡因胺和丙胺卡因，含量分別為24.81，3.91，6.65 mg/g。高平等［17］建立了同時測定水產品中6 種卡因類局麻藥的HPLC-DAD 法，通過增強型脂質去除凈化劑（EMR-Lipid）結合親水親油平衡（HLB）固相萃取柱的凈化方式，提高了方法的靈敏度和穩(wěn)定性，LOD 為0.06 mg/kg。石芳等［18］采用自制的苯乙烯-甲基丙烯酸縮水甘油酯聚合物微球（PS-GMA）、N-丙基乙二胺（PSA）和C18柱混合吸附劑作為分散固相萃取凈化劑，建立了同時測定3 種卡因類局麻藥和4 種丁香酚類麻醉劑的HPLC-UVD 法，該方法耗時短、靈敏度高、有機溶劑消耗少，且PS-GMA 有進行功能化修飾以進一步提高吸附選擇性的可能。離子色譜（IC）法是特殊的HPLC 法，其原理為利用離子型化合物與色譜柱固定相表面的離子型功能基團的電荷相互作用程度不同而實現(xiàn)成分的分離［21］。郭項雨等［19］建立了測定丁卡因的IC法和HPLC 法，并對2 種方法進行了對比，結果顯示，IC法的成本略低，但HPLC 法的靈敏度更高。超高效液相色譜（UPLC）法是基于HPLC 法分離原理發(fā)展的色譜分析技術，其固定相填充物采用粒徑小于2μm的微粒，可承受100 MPa以上的壓力，具有更高的分離度和分析效率［22］。禤開智等［20］建立了同時測定魚肉中丁香酚、布他卡因等6種卡因類局麻藥的UPLC-UVD雙波長檢測法，該方法前處理簡單、凈化效果好、靈敏度高，能滿足篩查和定量需求。

可見，采用HPLC 法同時檢測的卡因類局麻藥可達9種，檢測波長范圍為200～313 nm。樣品前處理時若采用甲醇溶解定容后直接進樣，LOD 高于2 mg/kg；采用固相萃取凈化并濃縮可提高方法靈敏度，LOD 不超過0.043 mg/kg。

2.2 高效液相色譜串聯(lián)質譜（HPLC-MS/MS）法

HPLC-MS/MS 儀主要由色譜儀、接口裝置（離子源）、質量分析器及檢測器構成，是以質譜（MS）作為檢測器的HPLC 法。HPLC - MS/MS 法既具備HPLC 法的高分離能力，又具備MS 法的高選擇性、高靈敏度和準確性，在復雜樣品基質的分析中應用廣泛［23-24］。常規(guī)串聯(lián)質譜（MS/MS）指三重四極桿串聯(lián)質譜（QqQ），由2 個四極桿質量分析器串聯(lián)而成，具有優(yōu)異的離子過濾和選擇能力。與傳統(tǒng)的HPLC 法相比，HPLC - MS/ MS法有更高的靈敏度和抗干擾能力，且分析通量更高，可有效檢測非法添加物［25］?！兑?guī)范》已將HPLC - MS/ MS法作為普魯卡因胺等7 種卡因類局麻藥的陽性結果確證方法。此外，針對畜肉屠宰及水產品運輸過程中的卡因類局麻藥非法添加問題，原國家食品藥品監(jiān)督管理總局于2017 年發(fā)布的《畜肉中阿托品、山莨菪堿、東莨菪堿、普魯卡因和利多卡因的測定（BJS 201711）》、國家市場監(jiān)督管理總局于2021 年發(fā)布的《水產品及相關用水中12 種卡因類麻醉劑及其代謝物的測定（BJS 202110）》，均采用HPLC-MS/MS法進行定性確證和定量測定。HPLC - MS/ MS 法檢測化妝品、畜產品、水產品中卡因類非法添加物的典型案例見表2。

表2 高效液相色譜串聯(lián)質譜法檢測卡因類非法添加物典型案例Tab.2 Typical cases of HPLC-MS/MS method for detecting caine-type illegal additives

鄭向華等［26］建立了測定水產品中三卡因、苯佐卡因2種卡因類局麻藥和喹哪啶殘留量的HPLC-MS/MS法，LOD 為0.10～0.25 μg/ kg，方法專屬性強、定性準確。郭旭茜等［27］建立了檢測豬肉中14 種卡因類局麻藥殘留量的UPLC - MS/ MS 法，LOD 為0.05～0.1 μg/ kg，在200 份市售豬肉樣品中有1 份樣品檢出普魯卡因，含量為0.9μg/kg。吳少明等分別建立了檢測水產品［28］及畜肉［29］中18種卡因類局麻藥殘留量的UPLC-MS/MS法，采用混合型陽離子固相萃取柱MCX 柱凈化后，有效降低了基質效應，對實際樣品進行檢測發(fā)現(xiàn)，3 份羅非魚和2份明蝦檢出三卡因，含量為18.8～126.8μg/kg。高平等［30］建立了檢測南美白對蝦、石斑魚和鱖魚中6種卡因類局麻藥殘留量的HPLC - MS/ MS 法，采用PRIME HLB 柱凈化，提高了前處理效率，獲得了較好的凈化效果。線性離子阱是與四極桿結構非常相似的質量分析器，與四極桿串聯(lián)后在保持定量測定能力的同時又增強了其定性確證的能力［34］。蘆麗等［31］建立了測定化妝品中16種卡因類局麻藥的高效液相色譜-四極桿串聯(lián)線性離子阱質譜（HPLC-Qtrap）法，通過離子阱特有的增強子離子掃描（EPI）模式可獲得化合物的碎片離子信息，提高了定性確證能力。應用于實際樣品檢測發(fā)現(xiàn)，15 批次舒緩眼部化妝品中均檢出丙胺卡因、利多卡因、丁卡因，含量為16.4～150.2 mg/g。楊建英等［32］采用HPLC-Qtrap結合QuEChERS樣品前處理技術，建立了快速測定護膚品中21 種卡因類局麻藥的方法，采用Acclaim Mixed-Mode WCX-1混合模式色譜柱可在15 min 內完成檢測，對市售45 批次樣品進行分析發(fā)現(xiàn)，2 批次宣稱具有舒緩功效的眼部護膚品分別檢出107 mg/ kg 利多卡因和83.8 mg/ kg 丙胺卡因。穆樹荷等［33］建立了檢測水產品中氟喹諾酮類抗菌藥物和丁卡因、布比卡因、地西泮的HPLC - Qtrap 法，采用自制的推桿式濾過型（CAFS clean - up）凈化柱凈化，提高了檢測效率，并在1 批次水產品中檢出布比卡因，含量為1.41 μg /kg。

可見，HPLC-MS/MS 法的LOD 均低于10μg/kg，部分甚至低于1 μg/kg，靈敏度和準確度均較高，可同時分析21 種卡因類局麻藥。HPLC - MS/ MS 法在卡因類非法添加物篩查及確證方面，尤其是在殘留量普遍較低的動物性食品中發(fā)揮了重要作用。

2.3 氣相色譜-質譜（GC-MS）法

GC 法是利用化合物固有沸點、極性和吸附性的差異來實現(xiàn)成分分離的色譜技術，與MS 法聯(lián)用可實現(xiàn)弱極性、小分子化合物的定性定量測定，常用于分析低分子量、低沸點及熱穩(wěn)定性好的物質［35］。趙丹妮等［36］以布比卡因分子印跡聚合物（MIPs）為選擇性吸附劑，采用分子印跡吸頭整體柱固相萃取（PT-SPE）凈化方式，建立了測定化妝品中5種卡因類局麻藥的GC-MS法，顯著降低了基質干擾，LOD 為0.02～0.03 mg/ L。翟紋靜等［37］建立了檢測水產品中三卡因和6 種丁香酚類麻醉劑的氣相色譜串聯(lián)質譜（GC-MS/MS）法，采用多反應監(jiān)測模式可有效降低基質干擾，提高靈敏度和準確性，LOD 為2.0 μg/ kg，回收率為73.93%～119.97%。趙瑩等［38］建立了測定淡水魚中7 種卡因類和7 種丁香酚類麻醉劑的GC-MS/MS 法，采用通過式固相萃取凈化，降低了雜質干擾，提高了檢測效率，14 種麻醉劑的LOD均為1μg/kg，回收率為75.3%～120.0%。

2.4 快速檢測方法

儀器分析方法雖有較高的靈敏度和準確性，但樣品前處理復雜、耗時較長，且操作煩瑣，無法滿足現(xiàn)場快速篩查的需求。因此，各類快速檢測技術多應用于卡因類非法添加物的現(xiàn)場檢測。戴曉娜等［39］基于磁性納米探針開發(fā)了三卡因快速檢測試紙條，在水體和魚肉基質中LOD 分別為0.141 μg/ mL 和0.150 μg/ mL，可在5～10 min 實現(xiàn)水體和魚肉中三卡因的定性檢測。再通過減少樣品和提取試劑的用量優(yōu)化了6 種漁用麻醉劑同時檢測的快速前處理方法，將前處理時間控制在20 min 內，并降低了對前處理設備的需求，可同時適用于試紙條檢測和HPLC 檢測［40］。方方等［41］采用表面增強拉曼光譜技術（SERS）建立了潤膚水、凝膠狀精華、固體乳膏等化妝品中利多卡因和辛可卡因的便攜式快速篩查方法，該方法操作簡便、檢測時間短、普適性較好，利多卡因和辛可卡因的LOD均為5 mg/kg。

3 結語

目前，易濫用卡因類局麻藥的行業(yè)主要集中在化妝品、畜產品和水產品。由于卡因類局麻藥非法添加問題具有多樣性和隱蔽性的特點，監(jiān)管難度較大。我國對卡因類局麻藥非法添加問題仍存在限量規(guī)定相對落后、可支撐監(jiān)管的方法及標準相對較少等問題，導致非法添加問題屢禁不止，社會危害嚴重。隨著檢測技術的不斷發(fā)展，對化妝品、畜產品、水產品中的卡因類局麻藥檢測方法的效率、靈敏度和準確度均在不斷提高，尤其是近年來應用廣泛的HPLC-MS/MS 法促進了卡因類非法添加物的檢測方法不斷向簡便、快速、高靈敏度、高準確性和高通量方向發(fā)展。儀器分析技術的不斷升級提高了檢測的靈敏度、準確性，縮短了檢測周期，而各類快速檢測技術的不斷發(fā)展，也極大地提高了現(xiàn)場執(zhí)法的效率。儀器分析技術及各類快速檢測技術的不斷發(fā)展可有效提高監(jiān)管部門對卡因類非法添加問題的追蹤效率和打擊力度，為日常監(jiān)管提供了更加有效的技術支撐。