陳媛媛 李光勝 劉洋 何毓琦 周美亮 方正武

（1 長(zhǎng)江大學(xué)農(nóng)學(xué)院，434025，湖北荊州；2 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物科學(xué)研究所，100081，北京；3 湖南科技大學(xué)生命科學(xué)與健康學(xué)院，411201，湖南湘潭；4 西南大學(xué)農(nóng)學(xué)與生物科技學(xué)院，400700，重慶）

作物的生長(zhǎng)發(fā)育常受到病原微生物的侵害，在協(xié)同進(jìn)化的過(guò)程中，作物逐漸形成了一系列復(fù)雜的防御機(jī)制來(lái)應(yīng)對(duì)病原微生物的入侵[1]。這種防御機(jī)制是一個(gè)復(fù)雜的免疫應(yīng)答調(diào)控過(guò)程，包含對(duì)病原微生物的識(shí)別、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和抗病基因的調(diào)控等[2]。面對(duì)病原微生物的侵害，作物體內(nèi)抗病蛋白能通過(guò)特異識(shí)別病原菌分泌的效應(yīng)蛋白、介導(dǎo)應(yīng)激反應(yīng)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、觸發(fā)免疫響應(yīng)對(duì)抗病原微生物的侵?jǐn)_[3]。

TIR（toll-like receptor）基因是TIR-NB-LRR類(lèi)型的抗病基因（resistance gene，Rgene）。TIR 蛋白的N 端含有白細(xì)胞介素受體TIR 結(jié)構(gòu)域，能夠特異識(shí)別病原菌分泌的效應(yīng)蛋白，協(xié)助蛋白質(zhì)之間的結(jié)合[4-5]。目前，已經(jīng)從煙草[6]、擬南芥[7]和亞麻[8]中鑒定到了TIR基因，并對(duì)其功能進(jìn)行了分析。在煙草中，將TIR 蛋白中與Toll 或TIR 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)的保守氨基酸位點(diǎn)突變后，突變的轉(zhuǎn)基因煙草植株對(duì)煙草花葉病毒的抗性減弱，且病毒可以在突變位點(diǎn)及周?chē)鷶U(kuò)散[9]。此外，AtTIR基因突變后，擬南芥植株在沒(méi)有病原菌誘導(dǎo)情況下的存活率顯著降低[10]。同樣，在亞麻中發(fā)現(xiàn)，TIR 結(jié)構(gòu)域突變后，植株的抗病性也顯著降低，證實(shí)TIR基因在植物抗病性中具有重要作用[11]。迄今為止，對(duì)TIR基因的研究主要集中在信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及病原菌識(shí)別方面。然而，關(guān)于苦蕎TIR基因克隆與功能等方面的研究還鮮見(jiàn)報(bào)道。

苦蕎是蓼科（ Polygonaceae ） 蕎麥屬（Fagopyrum）的一種食藥同源的雜糧作物，富含蛋白質(zhì)、維生素、礦物質(zhì)及各種藥用類(lèi)黃酮[12]。近年來(lái)，隨著我國(guó)蕎麥種植面積的不斷擴(kuò)大，由立枯絲核菌（Rhizoctoniasolani）侵害引起的蕎麥立枯病害也呈逐年加重趨勢(shì)，嚴(yán)重阻礙了我國(guó)蕎麥產(chǎn)業(yè)的高質(zhì)量發(fā)展。蕎麥立枯病主要發(fā)生在苗期，立枯絲核菌通過(guò)侵入蕎麥種子的種皮或幼苗莖基部和根部的傷口來(lái)感染蕎麥植株，被感染的蕎麥種皮表現(xiàn)為黃色或者褐色，嚴(yán)重時(shí)會(huì)導(dǎo)致種子腐爛[13]。受到感染的幼苗，前期莖基部會(huì)出現(xiàn)暗褐色的病斑或者水澤狀，接著病斑部位不斷擴(kuò)大，病斑部位組織凹陷和腐爛，植株發(fā)生倒伏現(xiàn)象，后期幼苗發(fā)生枯萎，嚴(yán)重時(shí)幼苗死亡[14]。目前，蕎麥立枯病的防治主要依賴(lài)噴施化學(xué)藥物，雖然能有效殺死致病菌或抑制病菌的生長(zhǎng)，但長(zhǎng)期使用化學(xué)藥物會(huì)導(dǎo)致土壤微生物種群減少、土壤板結(jié)和肥力下降等問(wèn)題[15]。

為了解析蕎麥立枯病菌的致病機(jī)理，挖掘抗病基因，本研究從苦蕎中克隆了FtTIR基因，對(duì)其進(jìn)行生物信息學(xué)分析和基因表達(dá)模式分析，并進(jìn)一步在擬南芥中過(guò)表達(dá)FtTIR基因進(jìn)行抗病性鑒定，為研究苦蕎TIR基因在立枯絲核菌致病機(jī)制提供重要依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料及處理方法

供試的立枯絲核菌株、野生型擬南芥（Col-0）、苦蕎品種“品苦1 號(hào)”和植物表達(dá)載體pBI121 均由中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物科學(xué)研究所蕎麥基因資源創(chuàng)新研究組提供。

選取顆粒飽滿(mǎn)、大小均一的苦蕎種子，經(jīng)蒸餾水浸泡12h 后剝?nèi)ネ獗砥?。依次?% NaClO 和75%乙醇消毒6min，然后用無(wú)菌水清洗3～5 次，將其平鋪于MS 培養(yǎng)基上，在22℃、16h/8h 光暗周期的培養(yǎng)室中培養(yǎng)。將培養(yǎng)2 周后的幼苗用活化好的立枯絲核菌菌柄侵染，菌柄直徑約3mm，用菌層接觸無(wú)菌苗。于侵染后0、6、12、24 和48h 分別對(duì)幼苗根、莖和葉取樣，用液氮速凍。

1.2 苦蕎總RNA 提取和cDNA 合成

取苦蕎幼苗80～100mg，按照RNA Easy Fast Plant Tissue Kit（北京天根生化科技有限公司）植物組織RNA 提取試劑盒提取樣品總RNA；用HiScript?III 1st Strand cDNA Synthesis Kit（+gDNA wiper）試劑盒（南京諾唯贊生物技術(shù)有限公司）反轉(zhuǎn)錄合成第1 鏈cDNA，并于-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 FtTIR 基因克隆及生物信息學(xué)分析

利用CE 軟件以FtPinG0404132400.01.T01（Pinku1：http://mbkbase.org/Pinku1/）序列為參考序列，設(shè)計(jì)FtTIR基因全長(zhǎng)擴(kuò)增引物FtTIR-F/R（表1），以cDNA 為模板進(jìn)行PCR 擴(kuò)增。PCR 產(chǎn)物經(jīng)電泳檢驗(yàn)后，回收純化?；厥债a(chǎn)物經(jīng)連接和轉(zhuǎn)化，篩選陽(yáng)性克隆后送北京擎科生物科技股份有限公司測(cè)序，得到FtTIR-T 載體質(zhì)粒。

表1 引物序列匯總Table 1 Summary of primer sequence

利用NCBI 在線(xiàn)網(wǎng)站對(duì)測(cè)序正確的序列進(jìn)行blast 比對(duì)分析，確定FtTIR的開(kāi)放閱讀框（ORF）。利用Expasy（https://web.expasy.org/protparam/）網(wǎng)站預(yù)測(cè)FtTIR編碼氨基酸數(shù)目、蛋白分子量（MW）、等電點(diǎn)（pI）等理化性質(zhì)。分別利用PRABIGERLAND（https://npsa-prabi.ibcp.fr/）和SWISSMODEL（https://swissmodel.expasy.org/interactive）網(wǎng)站預(yù)測(cè)FtTIR 蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)和三級(jí)結(jié)構(gòu)。利用Cell-PLoc 2.0（http://www.csbio.sjtu.edu.cn/bioinf/Cell-PLoc-2/）對(duì)FtTIR 蛋白進(jìn)行亞細(xì)胞定位預(yù)測(cè)分析。在NCBI 網(wǎng)站上利用FtTIR 蛋白序列進(jìn)行blast同源比對(duì)，用DNAMAN 軟件進(jìn)行TIR 蛋白的多序列比對(duì)，并用MEGA-X 軟件構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)。

1.4 立枯絲核菌侵染下苦蕎FtTIR 基因的表達(dá)模式分析

利用CE 軟件設(shè)計(jì)FtTIR基因熒光定量PCR 引物FtTIR-qPCR-F/R（表1），以苦蕎組成型表達(dá)基因FtH3為內(nèi)參基因。使用Taq Pro Universal SYBR qPCR Master Mix 熒光定量試劑盒（南京諾唯贊生物技術(shù)有限公司）和7500 Real Time PCR System 儀器進(jìn)行qRT-PCR 分析。按公式2-ΔΔCT計(jì)算基因的相對(duì)表達(dá)量。

1.5 pBI121-FtTIR 過(guò)表達(dá)載體的構(gòu)建及擬南芥的遺傳轉(zhuǎn)化

以測(cè)序比對(duì)正確的FtTIR-T 質(zhì)粒為模板，參照pBI121 圖譜設(shè)計(jì)特異性引物121-FtTIR-F/R（表1）進(jìn)行PCR 擴(kuò)增，利用同源重組方法將FtTIR基因的全長(zhǎng)編碼區(qū)連接到空載體pBI121 中，測(cè)序比對(duì)后得到過(guò)表達(dá)載體質(zhì)粒pBI121-FtTIR。

將重組質(zhì)粒pBI121-FtTIR轉(zhuǎn)化到農(nóng)桿菌GV3101 感受態(tài)中，篩選鑒定得到陽(yáng)性克隆。將陽(yáng)性菌液培養(yǎng)至OD600=0.6～0.8，通過(guò)浸花法侵染野生型擬南芥，收取T0代轉(zhuǎn)基因擬南芥種子，然后經(jīng)卡那霉素抗性篩選得到T1代過(guò)表達(dá)擬南芥。以T1代過(guò)表達(dá)擬南芥葉片的DNA 為模板，載體pBI121的通用引物121F 為正向引物、121-FtTIR-R 為反向引物進(jìn)行PCR 以鑒定陽(yáng)性轉(zhuǎn)基因擬南芥植株。篩選至純化的T3代轉(zhuǎn)基因擬南芥（FtTIR-OE）并進(jìn)行后續(xù)的生理生化分析。

1.6 pBI121-FtTIR 過(guò)表達(dá)擬南芥的抗病性鑒定

采用離體葉片接種法檢測(cè)轉(zhuǎn)基因擬南芥的抗病性，將過(guò)表達(dá)FtTIR擬南芥T3代和野生型擬南芥種子消毒滅菌后先在MS 固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，7d后轉(zhuǎn)移到蛭石:營(yíng)養(yǎng)土=1:1 的混合土中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為25℃，光周期為光照16h、黑暗8h。取3周齡大小一致的葉片用于立枯絲核菌侵染。把葉片放置在鋪有濕潤(rùn)濾紙的培養(yǎng)皿中，將活化好的立枯絲核菌平板菌打成直徑0.3mm 的菌餅，菌層接觸葉片正面。每個(gè)株系取15 個(gè)葉片，設(shè)置3 次生物學(xué)重復(fù)，對(duì)照使用無(wú)菌PDA 培養(yǎng)基。在接菌后24h統(tǒng)計(jì)發(fā)病情況。進(jìn)一步做DAB 染色試驗(yàn)，并觀察其病斑情況，然后檢測(cè)立枯絲核菌侵染和未侵染條件下擬南芥中FtTIR和病程相關(guān)基因AtPR1的相對(duì)表達(dá)量，并測(cè)定過(guò)氧化物酶（POD）和超氧化物歧化酶（SOD）活性。

2 結(jié)果與分析

2.1 苦蕎FtTIR 基因的克隆與生物信息學(xué)分析

以苦蕎幼苗cDNA 為模板，經(jīng)PCR 擴(kuò)增獲得一條長(zhǎng)度為576bp 的目的片段（圖1）。

圖1 苦蕎FtTIR 基因序列擴(kuò)增Fig.1 Sequence amplification of FtTIR gene in tartary buckwheat

基因結(jié)構(gòu)分析（圖2a）表明，F(xiàn)tTIR基因編碼蛋白與其他植物上的該基因編碼蛋白具有相同的保守結(jié)構(gòu)域TIR，屬于TIR-NB-LRR 類(lèi)型抗病基因家族，但不同植物間具有不同程度的同源性。SOPMA 在線(xiàn)網(wǎng)站分析（圖2b）顯示，F(xiàn)tTIR 蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)包含41.36%α-螺旋、34.03%不規(guī)則卷曲、15.71%β-折疊及8.90%β-轉(zhuǎn)角。三級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)（圖2c）顯示，F(xiàn)tTIR 蛋白與模板c5ku7B 的相似性達(dá)33%，與二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)結(jié)果基本一致。利用Phyre2預(yù)測(cè)FtTIR 的三級(jí)結(jié)構(gòu)，顯示FtTIR 與TIR-NB-LRR型抗性蛋白rpv1（c5ku7B）的相似性達(dá)100%，與二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)結(jié)果一致。系統(tǒng)發(fā)育分析（圖2d）顯示，F(xiàn)tTIR 蛋白與藜麥XP_021726625.1 和赤豆XP_047164412.1 親緣關(guān)系較近，屬于同一分支。

圖2 FtTIR 基因的生物信息學(xué)分析Fig.2 Bioinformatics analysis of FtTIR gene

2.2 苦蕎FtTIR 基因的表達(dá)模式分析

qRT-PCR 結(jié)果（圖3）表明，F(xiàn)tTIR基因在立枯絲核菌侵染下總體表達(dá)上調(diào)，但苦蕎根、莖和葉中FtTIR基因存在不同程度的誘導(dǎo)表達(dá)，且在根中的表達(dá)量普遍較低，在莖中的表達(dá)量較高。在莖中FtTIR基因的表達(dá)量在接菌后6h 時(shí)達(dá)到峰值，與不接菌相比表達(dá)量上調(diào)約7 倍。在根中FtTIR基因的表達(dá)量在接菌后48h 時(shí)達(dá)到峰值，且表達(dá)量?jī)H上調(diào)0.5 倍左右。在葉中FtTIR基因的表達(dá)量在接菌后24h 時(shí)達(dá)到峰值，表達(dá)量上調(diào)約9 倍。

圖3 立枯絲核菌侵染下FtTIR 基因在苦蕎不同器官中的表達(dá)模式Fig.3 Expression patterns of FtTIR genes in different organs of tartary buckwheat under infestation with R.solani

2.3 FtTIR 過(guò)表達(dá)擬南芥的抗病性鑒定

2.3.1 過(guò)表達(dá)擬南芥葉片接種立枯絲核菌表型 選取生長(zhǎng)狀態(tài)相同的3 周齡的轉(zhuǎn)基因和野生型擬南芥葉片進(jìn)行立枯絲核菌接種（圖4），在正常條件下，野生型（WT）與過(guò)表達(dá)擬南芥株系（FtTIR-OE）之間無(wú)明顯差異。而在立枯絲核菌侵染后，過(guò)表達(dá)擬南芥株系葉片的抗病性較WT 強(qiáng)。

圖4 轉(zhuǎn)基因擬南芥的抗病性表型驗(yàn)證Fig.4 Phenotypic verification of disease resistance in transgenic Arabidopsis

2.3.2 DAB 染色試驗(yàn) 選取3 周齡的FtTIR-OE 和WT 擬南芥葉片進(jìn)行立枯絲核菌侵染，對(duì)照組不作侵染。經(jīng)28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)24h 后，用DAB 染色液對(duì)離體葉片染色20min，再用葉綠體脫色液脫色至葉片透明。如圖5 所示，對(duì)照組FtTIR-OE 和WT擬南芥葉片無(wú)明顯差異，而被立枯絲核菌侵染的葉片出現(xiàn)大量的病斑，呈棕褐色。在立枯絲核菌侵染24h 時(shí)，經(jīng)DAB 染色后，F(xiàn)tTIR-OE 擬南芥株系葉片的病斑明顯少于WT。這表明FtTIR基因?qū)α⒖萁z核菌的侵害具有一定的抵抗作用。

圖5 轉(zhuǎn)基因擬南芥的抗病性DAB 染色驗(yàn)證Fig.5 DAB staining for resistance of transgenic Arabidopsis

2.4 立枯絲核菌侵染FtTIR 過(guò)表達(dá)擬南芥的表達(dá)模式

采用qRT-PCR 方法檢測(cè)FtTIR-OE 和WT 擬南芥在立枯絲核菌侵染下FtTIR基因的表達(dá)模式，以Atactin為內(nèi)參。如圖6a 所示，F(xiàn)tTIR-OE 轉(zhuǎn)基因株系中FtTIR基因的表達(dá)量較WT 顯著提高，而在立枯絲核菌侵染后FtTIR-OE 轉(zhuǎn)基因株系（OE-RS）中FtTIR基因的表達(dá)量較不侵染時(shí)（OE）的表達(dá)量顯著提高。

圖6 轉(zhuǎn)基因擬南芥中的表達(dá)模式分析Fig.6 Analysis of expression patterns in transgenic Arabidopsis

進(jìn)一步研究FtTIR在苦蕎立枯病抗病信號(hào)通路中的作用，通過(guò)qRT-PCR 檢測(cè)擬南芥葉片中病程相關(guān)基因AtPR1的表達(dá)水平，結(jié)果表明轉(zhuǎn)基因擬南芥中AtPR1基因的表達(dá)量顯著高于WT（圖6b），同時(shí)在立枯絲核菌侵染下，AtPR1基因的表達(dá)量顯著增加。

2.5 擬南芥抗病性相關(guān)生理生化指標(biāo)分析

測(cè)定擬南芥葉片中POD 活性（圖7a）發(fā)現(xiàn)，在WT 擬南芥中經(jīng)立枯絲核菌侵染24h 條件下，POD 活性沒(méi)有顯著差異；而在FtTIR-OE 株系中，POD 活性在經(jīng)立枯絲核菌侵染24h 后顯著升高。WT 擬南芥在立枯絲核菌侵染下，SOD 活性顯著低于正常條件；而在FtTIR-OE 株系中，與正常生長(zhǎng)條件相比，被立枯絲核菌侵染24h 后，SOD 活性顯著升高（圖7b）。結(jié)果表明，過(guò)表達(dá)擬南芥株系在被立枯絲核菌侵染時(shí)，植株體內(nèi)的POD 和SOD 活性均顯著提高，表明過(guò)表達(dá)株系相較于WT 具有更強(qiáng)的抗病性。

圖7 轉(zhuǎn)基因擬南芥生理生化指標(biāo)分析Fig.7 Analysis of biochemical indices in transgenic Arabidopsis

3 討論

為了適應(yīng)極端環(huán)境，植物進(jìn)化出一系列防御機(jī)制來(lái)抵抗病原菌的侵害[15]。TIR抗病基因在植物的抗病信號(hào)通路中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用[16]。蕎麥的藥用價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值日益顯著，種植面積不斷擴(kuò)大，而其生產(chǎn)受立枯病影響日益嚴(yán)重[3,17]。立枯病是由立枯絲核菌感染造成的，用立枯絲核菌感染苦蕎植株后，90%的植株出現(xiàn)壞死的褐色病變[18]。到目前為止，關(guān)于蕎麥的立枯病抗病機(jī)制尚未明確。為解析苦蕎對(duì)立枯絲核菌的抗病性，本研究從苦蕎品種“品苦1 號(hào)”中克隆出FtTIR基因，生物信息學(xué)分析顯示其具有TIR 家族特有的TIR 結(jié)構(gòu)域。在苦蕎苗期，立枯絲核菌侵染后的qRT-PCR 分析表明，F(xiàn)tTIR基因受立枯絲核菌脅迫的誘導(dǎo)；組織特異性分析表明，F(xiàn)tTIR基因在根、莖和葉中有不同的表達(dá)量，參與不同的發(fā)育階段。

TIR基因的作用機(jī)制是通過(guò)與病原菌結(jié)合，將信號(hào)轉(zhuǎn)遞給轉(zhuǎn)導(dǎo)因子[4]。轉(zhuǎn)導(dǎo)因子與免疫反應(yīng)基因的啟動(dòng)子相結(jié)合，誘導(dǎo)免疫反應(yīng)基因表達(dá)，從而對(duì)病原菌產(chǎn)生抗性[18]。在煙草中，TIR基因的突變導(dǎo)致轉(zhuǎn)基因煙草對(duì)煙草花葉病毒的抗性消失，且病毒的擴(kuò)散速度大幅提升，說(shuō)明TIR基因參與了煙草花葉病毒的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)[19]。在擬南芥中，TIR基因的突變導(dǎo)致轉(zhuǎn)基因擬南芥在沒(méi)有病原菌效應(yīng)蛋白誘導(dǎo)的情況下也可以引起細(xì)胞壞死[11,20]。同樣，在亞麻中TIR基因突變也導(dǎo)致轉(zhuǎn)基因植株對(duì)條銹病的抗性消失[21]。這些研究證實(shí)，TIR基因與病原菌的效應(yīng)分子識(shí)別有關(guān)，但TIR 蛋白是否直接與病原菌效應(yīng)蛋白結(jié)合還有待進(jìn)一步研究證實(shí)。此外，TIR基因具有調(diào)節(jié)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的功能[22]。對(duì)擬南芥中TIR基因的研究[20,23]發(fā)現(xiàn)，TIR基因具有負(fù)調(diào)節(jié)抗性信號(hào)傳導(dǎo)的功能，因?yàn)門(mén)IR基因的突變導(dǎo)致轉(zhuǎn)基因擬南芥的防御反應(yīng)一直處于激活狀態(tài)。同樣，過(guò)表達(dá)馬鈴薯TIR基因?qū)е轮仓甑牟【烙磻?yīng)降低[24]。與上述研究矛盾的是，有研究[25]發(fā)現(xiàn)，TIR基因具有正調(diào)節(jié)功能。將TIR基因的LRR 結(jié)構(gòu)域突變后，植株的抗性反應(yīng)消失，說(shuō)明LRR 結(jié)構(gòu)域具有正調(diào)控信號(hào)轉(zhuǎn)化功能。因此，TIR 是否作為植物抗病反應(yīng)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的負(fù)調(diào)控因子仍需進(jìn)一步研究證實(shí)。

本研究中，在擬南芥中異源表達(dá)FtTIR后顯著提高了擬南芥葉片對(duì)立枯絲核菌的抗病性。生理指標(biāo)檢測(cè)分析發(fā)現(xiàn)，其抗病性的提高與植物體內(nèi)SOD和POD 活性的增加有關(guān)。此外，在立枯絲核菌侵染過(guò)表達(dá)擬南芥中病程相關(guān)基因AtPR1的表達(dá)水平也顯著提高，這種病程相關(guān)蛋白激活了植株的防御機(jī)制，從而使植物最大程度減少損傷。本研究結(jié)果表明，F(xiàn)tTIR在提高苦蕎對(duì)立枯絲核菌抗病性中發(fā)揮著積極作用。本研究證實(shí)了TIR基因通過(guò)激活病程相關(guān)基因PR1的表達(dá)來(lái)提高植株的抗病性，是苦蕎立枯病抗性的正向調(diào)節(jié)因子，該結(jié)果為后續(xù)深入研究TIR基因調(diào)控苦蕎立枯病抗病分子機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。

4 結(jié)論

從苦蕎中克隆出TIR-NB-LRR 類(lèi)型的抗病基因FtTIR，在立枯絲核菌侵染24h 后，其在苦蕎根、莖和葉中表達(dá)量均有顯著增加，在莖中表達(dá)量最高，表明FtTIR基因受立枯絲核菌誘導(dǎo)表達(dá)。過(guò)表達(dá)擬南芥離體葉片侵染和DAB 染色結(jié)果說(shuō)明，F(xiàn)tTIR基因具有明顯的抗病性。在立枯絲核菌侵染條件下，F(xiàn)tTIR轉(zhuǎn)基因擬南芥植株的POD 和SOD活性較WT 顯著提高，其抗病能力顯著高于對(duì)照。