劉芙芙，黃浩原，袁渙媛，陳金鳳，吳文斌，黃紅泓

(廣西中醫(yī)藥大學(xué)賽恩斯新醫(yī)藥學(xué)院藥學(xué)系，廣西 南寧 530001)

毛果算盤子(GlochidioneriocarpumChamp.)是大戟科植物，別名毛七公、漆大伯、兩面毛、漆大姑。味苦、澀；性平，全年可采收。具有驅(qū)風(fēng)利濕，散瘀，止血，消腫的功效，用于治急性胃腸炎，痢疾，風(fēng)濕關(guān)節(jié)痛，跌打損傷，創(chuàng)傷出血，濕疹，漆瘡，皮炎[1]。其含有酚類、鞣質(zhì)類等成分和三萜類化合物以及微量元素[1-3]。近年來(lái)劉布鳴等[4-5]從廣西毛果算盤子中分離出沒(méi)食子酸類化合物并進(jìn)行薄層色譜鑒定。覃日宏等[6-7]研究發(fā)現(xiàn)毛果算盤子具有抗炎鎮(zhèn)痛的作用。黃紅泓等[8]對(duì)廣西產(chǎn)毛果算盤子的沒(méi)食子酸含量進(jìn)行了測(cè)定。目前尚未發(fā)現(xiàn)有文獻(xiàn)報(bào)道有關(guān)毛果算盤子根、莖、葉3個(gè)部位的化學(xué)成分對(duì)比以及藥理作用比較研究。本課題研究毛果算盤子藥材根、莖、葉3個(gè)部位的指紋圖譜，對(duì)比3個(gè)部位的化學(xué)成分信息，為今后研究毛果算盤子的譜效關(guān)系提供科學(xué)的參考依據(jù)。

1 實(shí) 驗(yàn)

1.1 儀器與試藥

安捷倫Agilent1200高效液相色譜儀；LG16-W高速微量離心機(jī)，北京醫(yī)用離心機(jī)廠；SB3200T超聲波清洗儀，上海能信超聲有限公司；Millipore Simplicity-185超純水儀，美國(guó)密里博公司；BP211D電子分析天平，德國(guó)賽多利斯。

香草酸(批號(hào)：7447，HPLC純度≥99.80%)，上海詩(shī)丹德標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)服務(wù)有限公司；甲醇、乙腈為色譜純；其余試劑為分析純。毛果算盤子藥材于2020年春季采自廣西5個(gè)地區(qū)，曬干，經(jīng)廣西中醫(yī)藥大學(xué)賽恩斯新醫(yī)藥學(xué)院生藥教研室苑敏副教授鑒定均為大戟科植物毛果算盤子(GlochidioneriocarpumChamp.)的全株(表1)。

1.2 方法與結(jié)果

1.2.1 色譜條件

用X-Peonyx C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流動(dòng)相為甲醇(B)-0.1%磷酸(A)，梯度洗脫0～7 min，8%B；7～15 min，8%B→20%B；15～20 min，20%B→28%B；20～30 min，28%B→35%B；30～45 min，35%B→45%B。檢測(cè)波長(zhǎng)270 nm，柱溫20 ℃，流速1.0 mL·min-1，進(jìn)樣量10 μL；記錄時(shí)間60 min[9-10]。

1.2.2 對(duì)照品溶液的制備

取香草酸對(duì)照品1 mg，精密稱量，置25 mL量瓶，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密吸取10 μL注入高效液相色譜儀。

1.2.3 供試品溶液的制備

取毛果算盤子根莖葉3個(gè)部位各1 g，精密稱定，精密加入20 mL甲醇，稱重，靜置30 min，超聲提取40 min，放冷，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液于離心管，12000 r/min離心10 min，取上清液10 μL，注入液相色譜儀測(cè)定，即得[7]。

1.2.4 精密度試驗(yàn)

取S1莖部位供試品溶液，按“1.2.1”項(xiàng)條件連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖，分別對(duì)共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積進(jìn)行考察。結(jié)果表明，各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間RSD為0.44%～0.73%，相對(duì)峰面積RSD為0.89%～1.56%。符合指紋圖譜分析要求。

1.2.5 重復(fù)性試驗(yàn)

取S1莖部位供試品溶液，分別制備6份供試品溶液，按“1.2.1”項(xiàng)條件進(jìn)樣，記錄色譜圖，分別對(duì)共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積進(jìn)行考察。結(jié)果表明，各共有峰相對(duì)保留時(shí)間RSD為0.67%～0.97%，相對(duì)峰面積RSD為1.34%～1.73%，符合指紋圖譜分析要求。

1.2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取S1莖部位供試品溶液，按“1.2.1”項(xiàng)色譜條件分別于0，2，4，6，12，24 h時(shí)進(jìn)樣，記錄色譜圖，考察其共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積。結(jié)果表明，各共有峰相對(duì)保留時(shí)間RSD為0.34%～1.25%，相對(duì)峰面積RSD為1.17%～1.92%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

1.2.7 指紋圖譜與共有峰的確定

采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)》(2012版)計(jì)算機(jī)軟件，以S1色譜圖作為對(duì)照色譜，時(shí)間窗寬度為0.1，經(jīng)多點(diǎn)校正后進(jìn)行自動(dòng)匹配，以平均數(shù)方法生成毛果算盤子根莖葉3個(gè)部位的對(duì)照?qǐng)D譜和疊加圖譜(圖1～圖6)。經(jīng)與對(duì)照品對(duì)照，考察對(duì)照品保留時(shí)間，指認(rèn)了根部位的5號(hào)峰、莖部位的7號(hào)峰、葉部位的4號(hào)峰為香草酸。以香草酸成分的峰為參照計(jì)算其他共有峰的相對(duì)保留時(shí)間及相對(duì)峰面積，結(jié)果見表2～表7。5批毛果算盤子根、莖、葉3個(gè)部位的相似度均大于0.9，表明相似度良好。

圖1 毛果算盤子藥材根部位的對(duì)照?qǐng)D譜(5.香草酸)Fig.1 Comparison map of root position [Vanillic acid(5)]

圖2 毛果算盤子藥材莖部位的對(duì)照?qǐng)D譜(7.香草酸)Fig.2 Comparison map of stem parts [Vanillic acid(7)]

圖3 毛果算盤子藥材葉部位的對(duì)照?qǐng)D譜(4.香草酸)Fig.3 Comparison map of leaf parts (Vanillic acid(4))

圖4 毛果算盤子藥材根部位的指紋圖譜疊加圖Fig.4 Fingerprint overlay of root position

圖5 毛果算盤子藥材莖部位的指紋圖譜疊加圖Fig.5 Fingerprint overlay of stem

圖6 毛果算盤子藥材葉部位的指紋圖譜疊加圖Fig.6 Fingerprint overlay of leaf parts

表2 毛果算盤子藥材根部位指紋圖譜共有峰的相對(duì)保留時(shí)間Table 2 The relative retention time of a total peak of root site in samples

表3 毛果算盤子藥材莖部位指紋圖譜共有峰的相對(duì)保留時(shí)間Table 3 The relative retention time of a total peak of stem part in samples

表4 毛果算盤子藥材葉部位指紋圖譜共有峰的相對(duì)保留時(shí)間Table 4 The relative retention time of a total peak of leaf position in samples

表5 毛果算盤子藥材根部位指紋圖譜共有峰的相對(duì)峰面積Table 5 The relative peak area of a total peak of root site in samples

表6 毛果算盤子藥材莖部位指紋圖譜共有峰的相對(duì)峰面積Table 6 The relative peak area of a total peak of stem part in samples

表7 毛果算盤子藥材葉部位指紋圖譜共有峰的相對(duì)峰面積Table 7 The relative peak area of a total peak of leaf position in samples

2 結(jié) 論

通過(guò)對(duì)比毛果算盤子根、莖、葉3個(gè)部位的指紋圖譜得知，3個(gè)部位的化學(xué)成分信息基本相似，但成分含量多少存在差異，其中莖部位的化學(xué)成分最多且含量較高，其次是葉部位，最低的是根部位。5批毛果算盤子3個(gè)部位的HPLC指紋圖譜相似度大于0.9，表明廣西各產(chǎn)地的毛果算盤子基本相似，而根莖葉3個(gè)部位化學(xué)成分的峰面積RSD為0.73%～70.76%，表明其化學(xué)成分含量存在較大差異。研究毛果算盤子各部位的指紋圖譜信息，可為毛果算盤子藥材的質(zhì)量控制和研究其譜效關(guān)系提供可靠的科學(xué)依據(jù)。