劉培紅, 安黎云, 邵茹彬, 陳 芳

(聯(lián)勤保障部隊第九八〇醫(yī)院檢驗科, 河北 石家莊 050082)

甲狀腺癌(Thyroid carcinoma,TC)在我國發(fā)病率約為19%～67%,且經(jīng)過規(guī)范治療后仍有5%～10%患者表現(xiàn)為極強侵襲性[1,2]。抗鼠科肉瘤病毒癌基因同源物B1(v-raf murine sarcoma viral oncogene homologue B1,BRAF)基因突變可驅(qū)動TC發(fā)生發(fā)展,調(diào)查顯示TC患者中BRAF基因V600E突變檢出率約為83%[3]。細(xì)針穿刺細(xì)胞學(xué)活檢是臨床診斷BRAF基因突變型TC的金標(biāo)準(zhǔn),但該檢查會損傷身體,在TC發(fā)病前血清學(xué)指標(biāo)已發(fā)生明顯變化,并可能作為診斷TC的潛在標(biāo)志物,因而血清學(xué)指標(biāo)是否可作為BRAF基因突變型TC的診斷標(biāo)志物成為研究重點。促甲狀腺激素(Thyroid-stimulating hormone,TSH)是由垂體前葉分泌的生長因子,可調(diào)控自身下游或其他信號通路、基因突變等影響TC發(fā)生發(fā)展[4]。甲狀腺球蛋白抗體(Anti-thyroglobulin antibodies,TgAb)是甲狀腺組織或細(xì)胞分泌甲狀腺球蛋白(Tg)時產(chǎn)生的,其水平升高可促進(jìn)TC發(fā)生[5]。中期因子(Midkine,MK)屬于分泌型細(xì)胞因子,可通過促血管生成、促分裂等形式參與TC發(fā)生發(fā)展過程[6]。目前TSH、TgAb、MK在BRAF基因突變型TC中應(yīng)用研究尚未見報道,基于此,本研究主要探討B(tài)RAF基因突變型TC患者血清TSH、TgAb、MK水平,分析其與BRAF基因突變相關(guān)性,并分析其對突變型TC的診斷價值。

1 資料與方法

1.1一般資料:選取2021年1月至2022年1月本院收治的BRAF基因突變型TC患者83例作為突變組,遵循1∶1分配原則選取同期BRAF基因野生型TC患者83例作為野生組。兩組一般資料比較見表1。本研究符合《赫爾透辛基宣言》。納入標(biāo)準(zhǔn):符合甲狀腺癌診斷標(biāo)準(zhǔn)[7],且經(jīng)病理學(xué)活檢證實;首次確診者;未合并其他惡性腫瘤;未接受放化療、免疫治療者;近6個月內(nèi)無手術(shù)治療史;意識清楚且無溝通障礙;研究對象知情同意且簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn):長期使用糖皮質(zhì)激素類藥物者;合并其他內(nèi)分泌腺疾病;伴有甲狀腺功能亢進(jìn)、甲狀腺彌漫性病變等其他甲狀腺疾病者;既往有酗酒、吸毒史者。

表1 兩組人口學(xué)資料臨床病理特征血清TSH TgAb MK水平及相關(guān)性

1.2方 法

1.2.1收集臨床資料:通過病歷收集兩組研究對象臨床資料,包括性別、年齡、體質(zhì)量指數(shù)(BMI)、吸煙史、慢性疾病史、腫瘤直徑、腫瘤分期、腫瘤分化程度、腫瘤類型、腫瘤數(shù)目、被膜侵犯、頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、中央?yún)^(qū)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。

1.2.2PCR法檢測BRAF基因突變:研究對象均行超聲引導(dǎo)下甲狀腺穿刺活檢,獲取甲狀腺癌組織,采用石蠟包埋組織,參照DNA提取試劑盒(北京百奧萊博科技有限公司)提取組織DNA,依據(jù)熒光PCR試劑盒(廈門艾德生物公司)配置反應(yīng)體系,PCR法擴增組織中BRAF基因第15外顯子,應(yīng)用3730/3730xl型自動化基因分析儀(美國ABI公司)進(jìn)行測序,按照Chromas軟件對比測序結(jié)果,標(biāo)記出野生型、突變型基因序列,BRAF基因V600E(AGC)發(fā)生突變,即A→C,本研究中將V600E發(fā)生錯義突變者納入突變組,否則為野生組。

1.2.3檢測血清TSH、TgAb、MK水平:抽取兩組(入組時)靜脈血5mL,應(yīng)用XZ21K-T離心機(長少湘智公司)離心12min(5000r/min)后取血清,采用ELISA法檢測血清MK水平,美國R&D公司提供檢測試劑盒。采用全自動電化學(xué)發(fā)光免疫分析法檢測血清TSH水平(上海羅氏制藥有限公司),應(yīng)用Unicel Dxi800 Access免疫分析儀(美國貝克曼庫爾特公司)檢測血清TgAb水平。

1.3觀察指標(biāo):①對比兩組(入組時)血清TSH、TgAb、MK水平,分析其與BRAF基因突變型相關(guān)性。②分析BRAF基因突變型TC影響因素。③評價(入組時)血清TSH、TgAb、MK對BRAF基因突變型TC的診斷價值,分析其對BRAF基因突變型TC危險度的影響。

2 結(jié) 果

兩組腫瘤分期、被膜侵犯、腫瘤數(shù)目、頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、中央?yún)^(qū)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及血清TSH、TgAb、MK水平比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),Spearman分析顯示,血清TSH、TgAb、MK水平與BRAF基因突變呈顯著正相關(guān)(r=0.639、0.715、0.593,P均<0.05),詳見表1、表2;以TC患者BRAF基因是否突變?yōu)橐蜃兞?表1中具有統(tǒng)計學(xué)意義指標(biāo)為自變量納入Logistic回歸方程,未調(diào)整模型和調(diào)整后模型1顯示,隨著血清TSH、TgAb、MK水平升高,TC患者BRAF基因突變風(fēng)險也將增加,血清TSH、TgAb、MK水平是BRAF基因突變型TC高危因素(P<0.05),詳見表3;以BRAF基因突變型TC為陽性標(biāo)本,BRAF基因野生型TC為陰性標(biāo)本繪制ROC曲線,結(jié)果顯示,三者聯(lián)合診斷BRAF基因突變型TC的AUC為0.947(95%CI:0.901～0.976),敏感度、特異度分別為86.75%、90.36%,明顯優(yōu)于血清TSH[AUC為0.739(95%CI:0.665～0.804)]、TgAb[AUC為0.798(95%CI:0.729～0.857)]、MK[AUC為0.737(95%CI:0.663～0.802)]單一診斷效能,詳見表4、圖1;以ROC曲線中血清TSH、TgAb、MK表達(dá)截斷值為界限分為高表達(dá)和低表達(dá)。經(jīng)RR檢驗可知,TSH、TgAb、MK高表達(dá)者BRAF基因突變型TC危險度是低表達(dá)者的1.500、1.625、2.617倍,詳見表5。

圖1 血清TSH、TgAb、MK單一及聯(lián)合診斷BRAF基因突變型TC價值

表2 賦值情況

表3 BRAF基因突變型TC多因素分析

表4 ROC曲線對比

表5 血清TSH TgAb MK表達(dá)對BRAF基因突變型TC危險度的影響

3 討 論

TC發(fā)病機制與碘缺乏、自身免疫缺陷、電離輻射、遺傳因素、毛細(xì)血管形成、腫瘤細(xì)胞穿透性增高有關(guān),BRAF基因突變主要為V600E氨基酸突變,可持續(xù)激活BRAF激酶,影響甲狀腺生長[8,9]。BRAF基因突變型TC初期無典型癥狀,臨床僅能在疾病出現(xiàn)明顯癥狀后確診,導(dǎo)致其錯失最佳治療時期,因而早期鑒別對BRAF基因突變型TC,對臨床診治、預(yù)后評估具有重要意義。

本研究結(jié)果顯示,突變組血清TSH水平高于野生組,突變組TgAb水平高于野生組,且血清TgAb水平與BRAF基因突變呈正相關(guān),提示TgAb水平升高與BRAF基因突變型TC發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。已知TSH水平升高與TC惡性程度有關(guān),可增加TC淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移風(fēng)險[10,11]。提示TSH水平升高可能參與BRAF基因突變型TC發(fā)生過程。分析認(rèn)為TSH可增強過氧化物酶活性,促進(jìn)甲狀腺上皮細(xì)胞蛋白質(zhì)合成,刺激癌變細(xì)胞生長,加快TSH進(jìn)展。TgAb與Tg結(jié)合后可激活自然殺傷細(xì)胞,損傷甲狀腺上皮細(xì)胞,參與TC發(fā)生發(fā)展過程[12]。由此推測TgAb水平升高可能通過損傷甲狀腺細(xì)胞,參與BRAF基因突變型TC發(fā)生過程。

本研究結(jié)果顯示,突變組MK水平高于野生組,且MK水平與BRAF基因突變呈正相關(guān),提示MK高表達(dá)可能增加BRAF基因突變發(fā)生風(fēng)險。MK在惡性腫瘤組織中呈高表達(dá),可參與多個組織細(xì)胞分化、增殖、新生血管形成,且與腫瘤進(jìn)展有關(guān)[13]。既往研究表明BRAF基因突變可能引起TSH、TgAb、MK表達(dá)異常[14]。本研究發(fā)現(xiàn)血清TSH、TgAb、MK水平升高是BRAF基因突變TC高危因素,分析其原因可能為BRAF基因突變可能導(dǎo)致甲狀腺分泌不足,引起TSH水平升高、Tg分泌異常,刺激機體產(chǎn)生免疫應(yīng)答釋放TgAb,增加甲狀腺細(xì)胞癌變風(fēng)險;BRAF基因突變可能減弱MK與硫酸肝素的親和力,促進(jìn)嗜中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等多種細(xì)胞移動,致使TC生長及轉(zhuǎn)移。但TSH、TgAb、MK對BRAF基因突變型TC的診斷價值尚未可知,本研究結(jié)果顯示,TSH、TgAb、MK聯(lián)合診斷BRAF基因突變型TC的AUC明顯優(yōu)于單一診斷效能,提示聯(lián)合檢測TSH、TgAb、MK水平可提高BRAF基因突變型TC的診斷效能。

綜上所述,BRAF基因突變型TC患者血清TSH、TgAb、MK水平升高,且與BRAF基因突變呈正相關(guān),其水平升高可增加TC患者BRAF基因突變發(fā)生風(fēng)險,聯(lián)合檢測其水平可用于鑒別診斷BRAF基因突變型TC,可為早期治療干預(yù)提供參考依據(jù)。