丁潔 劉思奇 王藝穎 王霖 施承宏 王芳 常國(guó)楫 華麗娟 陳華憶 李生浩 王晴晴

昆明市第三人民醫(yī)院/云南省傳染性疾病臨床醫(yī)學(xué)中心 1肝病綜合科，2科教學(xué)術(shù)部，3病理科，4醫(yī)務(wù)部（昆明 650041）

非酒精性脂肪性肝?。╪on-alcoholic fatty liver disease，NAFLD）是一種與代謝應(yīng)激有關(guān)的肝損傷，主要病因有胰島素抵抗和遺傳易感性，包括非酒精性肝脂肪變、非酒精性脂肪性肝炎（nonalcoholic steatohepatitis，NASH）、肝硬化和肝細(xì)胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC），其發(fā)病率在我國(guó)慢性肝病中排首位［1］，其中NASH 是肝硬化和HCC 發(fā)生的極高危因素。雖然維生素E 在NASH的治療中已取得一定的進(jìn)展［2］，但迄今為止依然沒(méi)有十分有效的治療方法，迫切需要繼續(xù)探索新的有效的藥物治療。

目前研究顯示，NASH 的發(fā)生及進(jìn)展為HCC與細(xì)胞自噬活性降低密切相關(guān)［3］，而且脂肪肝的噬脂過(guò)程調(diào)節(jié)不當(dāng)是HCC 發(fā)展的重要因素，增加自噬活性可以改善肝脂肪變、炎癥及纖維化程度［4］。既往研究［5-6］表明龍膽苦甙（gentiopicroside，GPS）可通過(guò)調(diào)節(jié)自噬相關(guān)磷脂酰肌醇3激酶（phosphatidylinositide 3-kinase，PI3K）/蛋白激酶B（protein kinase B，PKB/Akt）信號(hào)改善糖脂代謝。GPS 也能上調(diào)自噬相關(guān)Atg8 基因的表達(dá)調(diào)節(jié)自噬從而起到抗衰老作用［7］，同時(shí)GPS 還有明確的抗炎［8］、抗氧化應(yīng)激和調(diào)節(jié)血脂［5］等作用。但GPS 是否能同樣改善NASH，以及LC3Ⅱ和自噬現(xiàn)象在其中的作用和具體機(jī)制目前尚未明確。本研究擬建立大鼠的NASH 模型，設(shè)置相應(yīng)對(duì)照，給予GPS 治療，評(píng)價(jià)GPS 對(duì)NASH 治療效果，并初步探索LC3Ⅱ和自噬現(xiàn)象在其中的作用和具體的調(diào)控機(jī)制，旨在為NASH 的治療尋找新思路。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、試劑和儀器設(shè)備

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物清潔級(jí)雄性斯?jié)娎鄹?多雷（Sprague-Dawley，SD）大鼠44 只（6 周齡，體質(zhì)量180～220 g）購(gòu)于昆明醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，適應(yīng)性喂養(yǎng)2 周后用于實(shí)驗(yàn)。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑和儀器設(shè)備LC3Ⅰ/Ⅱ Antibody（美國(guó)CST）、Actin β Antibody（美國(guó)Santa）、RNA 提取試劑盒（北京天根）、RNA 保存液（北京天根）、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（上?？泼簦nti-GAPDH Antibody（杭州開(kāi)泰）、IL-1β ELISA 檢測(cè)試劑盒（賽默飛世爾科技）、TNF-α ELISA 檢測(cè)試劑盒（賽默飛世爾科技）、基礎(chǔ)電泳儀（美國(guó)Bio-rad）、半干轉(zhuǎn)膜儀（美國(guó)Bio-rad）、Applied Biosystems PCR 熱循環(huán)儀（美國(guó)賽默飛）、酶標(biāo)儀（美國(guó)賽默飛）、分光光度計(jì)（上海尤尼柯）。高脂飼料（50%脂肪供能）購(gòu)自北京博泰宏達(dá)生物技術(shù)有限公司，具體成份（質(zhì)量百分比，gm%）為：蛋白質(zhì)24.2%、碳水化合物40.1%、脂肪27.4%、以及相應(yīng)維生素和微量元素等，總熱量比為4.7 kcal/gm。本研究經(jīng)昆明市第三人民醫(yī)院倫理委員會(huì)審查批準(zhǔn)（倫理批號(hào)：KSLL20230320005），相關(guān)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)使用云南貝斯泰生物科技有限公司的實(shí)驗(yàn)平臺(tái)進(jìn)行（倫理批號(hào)：BST-RAT-20221230-1）。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組與干預(yù)正常對(duì)照組：8 只。僅普通飲食喂養(yǎng)，不予其他任何處理。另外36 只大鼠給予高脂飼料喂養(yǎng)8 周后，隨機(jī)挑選4 只用戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉處死，取肝組織用蘇木精-伊紅（hematoxylin-eosin，HE）染色觀(guān)察肝細(xì)胞脂肪變及炎癥損傷情況，從而確定NASH 模型制備是否成功，與國(guó)內(nèi)外專(zhuān)家建模及評(píng)估方式一致［9-10］。最終獲得NASH 的大鼠模型32 只，隨機(jī)分為4 組，每組8 只。具體如下：（1）模型對(duì)照組：予等體積生理鹽水腹腔注射作同樣的刺激對(duì)照4 周。（2）二甲雙胍陽(yáng)性對(duì)照組：予二甲雙胍250 mg/（kg·d）［11］腹腔注射給藥4 周。（3）龍膽苦甙組：予龍膽苦甙100 mg/（kg·d）腹腔注射給藥4 周。（4）龍膽苦甙+自噬抑制劑3-甲基腺嘌呤（3-methyladenine，3-MA）組：予GPS100 mg/（kg·d）+ 3-MA 15mg/（kg·d）腹腔注射給藥4 周。

1.3 實(shí)驗(yàn)樣品獲取完成以上處理后，戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉處死大鼠，自腹正中線(xiàn)切口剪開(kāi)腹腔，繼續(xù)向上剪開(kāi)胸腔后自心尖取血5 mL，1 500 r/min 離心30 min，取上清儲(chǔ)存于-80 ℃冰箱用于化學(xué)發(fā)光法和酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）等的檢測(cè)；切取肝組織用生理鹽水沖洗干凈后分為3 塊，1 塊置于多聚甲醛中固定用于HE 染色，1 塊用RNA 保存液浸泡后置于-80 ℃冰箱用于定量實(shí)時(shí)聚合酶鏈鎖反應(yīng)（quantitative real time polymerase chain reaction，q-PCR）檢測(cè)，1 塊直接凍存于-80 ℃冰箱中用于Western blot 檢測(cè)。

1.4 HE 染色肝組織先用4%多聚甲醛固定，然后乙醇脫水，二甲苯透明，隨后制作石蠟塊，最后切片。切片后采用HE，觀(guān)察各組大鼠肝組織病理學(xué)變化。

1.5 血脂、ALT 及細(xì)胞因子水平測(cè)定取每個(gè)大鼠血清送至昆明醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)室，檢測(cè)總膽固醇（total cholesterol，CHOL）、甘油三酯（triglyceride，TG）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（alanine aminotransferase，ALT）水平。ELISA 檢測(cè)腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白細(xì)胞介素-1β（Interleukin-1β，IL-1β），具體步驟按照試劑盒的說(shuō)明。

1.6 q-PCR檢測(cè)取肝組織提取總mRNA，檢測(cè)總濃度及純度，用1%凝膠電泳確定mRNA 片段完整性，嚴(yán)格按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明書(shū)將mRNA 逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。再按SYBR?Premix Ex TaqTM擴(kuò)增試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行擴(kuò)增，配制反應(yīng)體系于0.2 mL PCR八聯(lián)管：cDNA 溶液2 μL、SYBR Premix Ex Taq Ⅱ12.5 μL、滅菌水8.5 μL、正向引物1 μL（10 μmol/μL）和反向引物1 μL（10 μmol/μL）。采用二步法PCR標(biāo)準(zhǔn)擴(kuò)增程序：95 ℃ 30s 共1 個(gè)循環(huán)及95 ℃ 5s、60 ℃ 50s 共40 個(gè)循環(huán)，每個(gè)標(biāo)本重復(fù)3 次。以GAPDH 為內(nèi)參，用2-△△CQ分析相關(guān)基因的mRNA表達(dá)情況。引物序列（表1）由北京擎科生物有限公司合成。

表1 擴(kuò)增蛋白的引物序列Tab.1 Primer sequences for amplifying proteins

1.7 Western blot取80 mg 肝組織裂解研磨后提取總蛋白，BCA 法測(cè)定蛋白濃度。取50 μg 蛋白進(jìn)行十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠（SDS-PAGE）電泳，蛋白轉(zhuǎn)至聚偏氟乙烯（PVDF）膜，封閉液室溫封閉2 h，一抗4 ℃孵育過(guò)夜，二抗室溫孵育2 h，洗膜3次，每次5 min。使用增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光法（ECL）試劑盒，成像系統(tǒng)曝光，Image lab 5.0 凝膠成像系統(tǒng)軟件進(jìn)行目標(biāo)條帶灰度值分析。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法所有數(shù)據(jù)輸入SPSS 22.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。多組間比較采用單因素方差分析，方差齊用LSD檢驗(yàn)，方差不齊采用Dunnett's T3 檢驗(yàn)。P＜ 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠肝組織HE 染色正常對(duì)照組肝小葉結(jié)構(gòu)正常，未見(jiàn)脂肪變及炎癥損傷；模型對(duì)照組肝小葉結(jié)構(gòu)紊亂，肝細(xì)胞索消失，出現(xiàn)嚴(yán)重的大泡小泡混合型肝脂肪變性，可見(jiàn)炎細(xì)胞聚集及點(diǎn)片狀壞死；龍膽苦甙組、二甲雙胍陽(yáng)性對(duì)照組肝脂肪變及炎癥損傷均有所減輕，偶可見(jiàn)點(diǎn)狀壞死，未見(jiàn)片狀壞死形成；龍膽苦甙+3MA 組肝脂肪變和炎癥損傷較龍膽苦甙組明顯加重，肝小葉結(jié)構(gòu)紊亂，壞死增多。見(jiàn)圖1。

圖1 各組大鼠肝組織HE 染色圖片（Bar=50 μm）Fig.1 HE staining images of liver tissue of rats in each group（Bar=50 μm）

2.2 各組大鼠血清ALT 及血脂（CHOL、TG）水平模型對(duì)照組ALT、CHOL、TG 水平較正常對(duì)照組升高，龍膽苦甙組及二甲雙胍陽(yáng)性對(duì)照組在一定程度上得到逆轉(zhuǎn)，而龍膽苦甙+3-MA 組的ALT、CHOL、TG 水平又較龍膽苦甙組升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜ 0.05）。見(jiàn)表2。

表2 各組大鼠血清ALT、CHOL、TG 水平Tab.2 Serum ALT，CHOL，and TG levels of rats in each group ±s

表2 各組大鼠血清ALT、CHOL、TG 水平Tab.2 Serum ALT，CHOL，and TG levels of rats in each group ±s

注：與正常對(duì)照組比較，aP ＜ 0.05；與模型對(duì)照組比較，bP ＜ 0.05；與龍膽苦甙組比較，cP ＜ 0.05

組別正常對(duì)照組模型對(duì)照組龍膽苦甙組龍膽苦甙+3-MA組二甲雙胍陽(yáng)性對(duì)照組F值P值TG（mg/mL）0.505 2 ± 0.004 2 0.617 3 ± 0.002 0a 0.503 9 ± 0.002 5b 0.586 2 ± 0.003 0c 0.513 8 ± 0.003 1b 15.852＜ 0.05 ALT（U/L）37.43 ± 0.27 67.44 ± 0.24a 36.37 ± 0.20b 60.37 ± 0.22c 35.57 ± 0.26b 16.018＜ 0.05 CHOL（μmol/mL）0.543 9 ± 0.003 1 0.754 1 ± 0.002 1a 0.555 3 ± 0.001 2b 0.694 0 ± 0.002 2c 0.547 2 ± 0.002 0b 17.965＜ 0.05

2.3 各組大鼠血清炎癥因子（IL-1β、TNF-α）水平模型對(duì)照組IL-1β、TNF-α 水平較正常對(duì)照組升高，龍膽苦甙組及二甲雙胍陽(yáng)性對(duì)照組中得到逆轉(zhuǎn)，而龍膽苦甙+3-MA 組又高于龍膽苦甙組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜ 0.05）。見(jiàn)表3。

表3 各組大鼠血清IL-1β、TNF-α 水平Tab.3 Serum IL-1 of rats in each group β，TNF-α level ± s，pg/mL

表3 各組大鼠血清IL-1β、TNF-α 水平Tab.3 Serum IL-1 of rats in each group β，TNF-α level ± s，pg/mL

注：與正常對(duì)照組比較，aP ＜ 0.05；與模型對(duì)照組比較，bP ＜ 0.05；與龍膽苦甙組比較，cP ＜ 0.05

TNF-α 49.52 ± 0.32 68.46 ± 0.30a 49.47 ± 0.26b 57.41 ± 0.37c 50.63 ± 0.34b 15.179＜ 0.05組別正常對(duì)照組模型對(duì)照組龍膽苦苷組龍膽苦苷+3-MA組二甲雙胍陽(yáng)性對(duì)照組F值P值IL-1β 74.45 ± 0.20 97.57 ± 0.30a 72.59 ± 0.32b 86.49 ± 0.28c 71.63 ± 0.33b 16.127＜ 0.05

2.4 各組大鼠肝組織LC3Ⅱ mRNA 表達(dá)及與LC3Ⅰ的比值模型對(duì)照組大鼠肝組織的LC3ⅡmRNA 表達(dá)較正常對(duì)照組下調(diào)，龍膽苦甙組和二甲雙胍陽(yáng)性對(duì)照組得到逆轉(zhuǎn)，而龍膽苦甙+3-MA 組的LC3Ⅱ mRNA 又轉(zhuǎn)為表達(dá)下調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜ 0.05）。見(jiàn)圖2A。

2.5 各組大鼠肝組織LC3Ⅱ的蛋白質(zhì)表達(dá)及與LC3Ⅰ的比值進(jìn)一步采用Western blot 檢測(cè)大鼠肝組織中LC3Ⅰ和LC3Ⅱ的蛋白質(zhì)表達(dá)，結(jié)果顯示（圖3），LC3Ⅱ的蛋白質(zhì)與mRNA 的表達(dá)模式一致，即：模型對(duì)照組LC3Ⅱ的蛋白質(zhì)表達(dá)較正常對(duì)照組下調(diào)，龍膽苦甙組和二甲雙胍陽(yáng)性對(duì)照組出現(xiàn)逆轉(zhuǎn)，而龍膽苦甙+3-MA 組又轉(zhuǎn)為下調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜ 0.05）。見(jiàn)圖3A。

2.6 LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的mRNA 比值及蛋白質(zhì)表達(dá)量比值的變化情況與LC3Ⅱ的mRNA 和蛋白質(zhì)表達(dá)模式一致，模型對(duì)照組LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的mRNA比值和蛋白質(zhì)表達(dá)量比值均較正常對(duì)照組低，龍膽苦甙組和二甲雙胍陽(yáng)性對(duì)照組得到逆轉(zhuǎn)，而龍膽苦甙+3-MA 組又轉(zhuǎn)為降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜ 0.05）。見(jiàn)圖2B 和圖3B。

圖2 大鼠肝組織LC3Ⅱ的mRNA 表達(dá)情況及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ mRNA 表達(dá)量的比值Fig.2 The mRNA expression of LC3Ⅱ and the ratio of LC3Ⅱ/LC3Ⅰ mRNA expression in rat liver tissue

3 討論

NASH 是一種炎癥性肝病，與代謝應(yīng)激有關(guān)，往往伴有脂肪過(guò)度堆積。自噬與機(jī)體組織的自我防御和細(xì)胞的自我修復(fù)有關(guān)，能夠維持細(xì)胞能量平衡，可以調(diào)控肝臟脂肪代謝、氧化應(yīng)激及炎癥反應(yīng)，研究表明飲食誘導(dǎo)的NAFLD 小鼠模型與肝臟自噬有關(guān)，恢復(fù)自噬可以緩解肥胖小鼠模型中的肝臟脂肪變性［12］。自噬是一種細(xì)胞自我消化過(guò)程，涉及溶酶體降解靶細(xì)胞成分，如受損的細(xì)胞器、未折疊的蛋白質(zhì)和細(xì)胞內(nèi)病原體。哺乳動(dòng)物細(xì)胞中，自噬相關(guān)基因（autophagy-related genes，ATGs）編碼的蛋白質(zhì)形成的系列復(fù)合物在自噬過(guò)程中發(fā)揮重要作用，主要參與自噬的啟動(dòng)、自噬泡的形成、延伸及成熟和降解，比如，Atg8-磷脂酰乙醇胺（phosphatidylethanolamine，PE）系統(tǒng)在自噬過(guò)程中必不可少，如果該系統(tǒng)中蛋白質(zhì)發(fā)生缺失或突變，自噬泡就形成不了，也就不會(huì)發(fā)生自噬現(xiàn)象［13］。

mTOR 是經(jīng)典途徑自噬的主要抑制通路之一，在自噬的發(fā)生及發(fā)展中發(fā)揮重要作用，上游蛋白AMPK磷酸化增加可抑制mTOR，進(jìn)而増強(qiáng)自噬［14］。ULK1 復(fù)合物在體內(nèi)是連接上游營(yíng)養(yǎng)或能量感受器mTOR 和AMPK 與下游自噬體形成的橋梁。微管相關(guān)蛋白1 輕鏈3（microtubule associated protein 1 light chain，LC3）是Atg8 的同系物，LC3 蛋白在自噬形成過(guò)程中具有重要作用，參與細(xì)胞自噬泡的形成，其主要有LC3Ⅰ、LC3Ⅱ兩種形式，其中LC3Ⅱ被定義為自噬的一種表面標(biāo)記。

HANDA 等［15］在喂養(yǎng)富含ω-6 脂肪酸飲食的小鼠模型中，復(fù)制了從NAFLD 到NASH 的模型，并用小鼠肝細(xì)胞系以及原代肝細(xì)胞進(jìn)行體外機(jī)制研究，他們證實(shí)了：脂聯(lián)素能導(dǎo)致AMPK 活化減少；且較低的酰基輔酶A 羧化酶（ACC）（AMPK 的直接下游靶標(biāo)）也能活化AMPK 的上游蛋白激酶之一的肝激酶B1（LKB1）。且有研究顯示［16］，樺木酸通過(guò)調(diào)控AMPK-mTOR-SREBP 信號(hào)通路抑制SREBP1的活性，從而減輕NAFLD，在HepG2 細(xì)胞和原代肝細(xì)胞中，樺木酸顯著抑制HepG2 細(xì)胞中過(guò)量的甘油三酯積累，并在小鼠肝臟中通過(guò)調(diào)控mTOR-S6K通路抑制HFD；大黃素通過(guò)調(diào)控CaMKK-AMPKmTOR-p70S6K-SREBP1 信號(hào)通路有效改善肝臟脂肪變性［17］?？傊?xì)胞自噬功能異常與胰島素抵抗、肝臟細(xì)胞脂肪代謝異常及炎癥反應(yīng)有著密切聯(lián)系，且與自噬相關(guān)信號(hào)通路密切相關(guān)，本文通過(guò)通過(guò)檢測(cè)LC3Ⅱ的mRNA 和蛋白質(zhì)表達(dá)來(lái)探索LC3Ⅱ和自噬現(xiàn)象在大鼠NASH 中的作用和具體的調(diào)控機(jī)制。

LC3 是Atg8 同源蛋白質(zhì)中的明星物質(zhì)，存在LC3Ⅰ和LC3Ⅱ兩種形式，LC3Ⅰ是胞質(zhì)的，而LC3Ⅱ是膜結(jié)合的。LC3 中去除C 端22 個(gè)氨基酸形成LC3Ⅰ，然后部分LC3Ⅰ將轉(zhuǎn)化為L(zhǎng)C3Ⅱ。LC3Ⅱ存在于自噬體的內(nèi)部和外部，突變分析表明，LC3Ⅱ的量與自噬體形成的程度相關(guān)［18］，因此，LC3Ⅱ是檢測(cè)細(xì)胞發(fā)生自噬的重要指標(biāo)。另外，LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值一定程度上代表了LC3Ⅰ向LC3Ⅱ轉(zhuǎn)換過(guò)程，在自噬激活中也尤為重要［19］。LC3Ⅱ蛋白質(zhì)表達(dá)情況與NASH 密切相關(guān)［20］。朱稀雯等［21］發(fā)現(xiàn)，NASH 大鼠肝組織自噬程度減弱，蛋白質(zhì)合成功能降低。羅莉川等［22］的研究也進(jìn)一步證實(shí)，NASH大鼠肝臟LC3Ⅱ的蛋白質(zhì)表達(dá)明顯下調(diào)，這種趨勢(shì)逆轉(zhuǎn)后肝臟炎癥將得到改善。

裂環(huán)烯醚萜類(lèi)化合物可以促進(jìn)自噬［23］，GPS也屬于一種裂環(huán)烯醚萜苷化合物，具有顯著的抗炎保肝作用［24］。本研究中，模型對(duì)照組LC3ⅡmRNA、蛋白質(zhì)、以及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值（mRNA和蛋白質(zhì)）均較正常對(duì)照組明顯降低，而給予GPS或二甲雙胍逆轉(zhuǎn)了這種趨勢(shì)后，肝脂肪變或組織炎癥情況得到了改善，而進(jìn)一步給予自噬抑制劑3-MA 后，LC3Ⅱ mRNA、蛋白質(zhì)、以及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值（mRNA 和蛋白質(zhì)）又下降，與該研究［25］是一致的，且全身性炎癥或肝組織的局部炎癥狀況、以及肝脂肪變情況均明顯加重。這些結(jié)果表明自噬的干預(yù)可以調(diào)控肝臟炎癥及脂肪變的情況，且顯示GPS 可以調(diào)控LC3Ⅱ水平。

炎癥因子IL-1β 和TNF-α 在NASH 的發(fā)生發(fā)展中是十分重要的，參與了單純性肝脂肪變進(jìn)展為NASH、以及NASH 進(jìn)展為肝硬化或HCC 的過(guò)程［26］，可作為評(píng)價(jià)NASH 病情嚴(yán)重程度的重要指標(biāo)之一。另外，自噬功能障礙又可導(dǎo)致NLRP3 炎癥小體過(guò)度激活，促進(jìn)炎癥性疾病進(jìn)展［27］。有研究［28］表明，GPS 衍生物可下調(diào)炎癥因子發(fā)揮抗炎活性，且有研究［29］表明其可以起明顯的抗炎保肝作用。本研究中，GPS 降低了血清ALT、CHOL、TG水平，又降低了炎癥細(xì)胞因子IL-1β、TNF-α 的水平，而且這種治療作用與LC3Ⅱ表達(dá)情況和自噬受到調(diào)控是密切相關(guān)的。進(jìn)一步說(shuō)明調(diào)控自噬的確是治療NASH 的重要手段之一，且GPS 是通過(guò)調(diào)控LC3Ⅱ的表達(dá)促進(jìn)自噬實(shí)現(xiàn)對(duì)NASH 的治療作用的。

綜上所述，GPS 通過(guò)上調(diào)LC3Ⅱ mRNA 和蛋白質(zhì)表達(dá)激活細(xì)胞自噬，降低血清IL-1β、TNF-α 水平發(fā)揮抗炎作用，緩解肝組織炎癥狀況，并減輕肝脂肪變程度。本研究為進(jìn)一步探索GPS 治療NASH 的作用及機(jī)制奠定了科學(xué)的理論根據(jù)和數(shù)據(jù)基礎(chǔ)，為制定NASH 的治療策略提供了新思路。但是GPS 是否影響自噬信號(hào)通路的其他基因，后續(xù)還需進(jìn)一步研究。

【Author contributions】DING Jie and LIU Siqi performed the experiments and wrote the article.WANG Lin，WANG Fang，CHANG Guoji，HUA Lijuan and CHEN Huayi performed the experiments.LI Shenghao and WANG Qingqing revised the article.LI Shenghao，WANG Qingqing，WANG Yiying and SHI Chenghong designed the study and reviewed the article.All authors read and approved the final manuscript as submitted.