黃艷花 黃 強 覃連紅 張燕杏 崔忠吉 蒙 成*

（1廣西農業(yè)職業(yè)技術大學，廣西南寧 530007；2廣西現(xiàn)代農業(yè)技術展示中心，廣西南寧 530007）

百香果（Passiflora edulisSims）具有較高的營養(yǎng)價值和藥用價值[1-3]，在我國亞熱帶地區(qū)被列為重點開發(fā)作物之一，近年來廣西、福建和貴州等地百香果的種植面積迅速擴大[4]?？煽擅呔↙. theobromae）是子囊菌門座囊菌綱葡萄座腔菌目葡萄座腔菌科的一種植物病原菌，病原菌引起的植物病害寄主范圍廣，可侵染茶樹[5]、獼猴桃[6]、橡膠樹[7]、春芋[8]、桉樹[9]、肉桂[10]、白木香[11]、毛葡萄[12]、南洋楹[13]、欒樹[14]、檳榔[15]、劍麻[16]等500 多種植物，致病時呈現(xiàn)葉斑、潰瘍、梢枯、枝枯、根腐、果腐、流膠、壞死等癥狀[17]，對農業(yè)產業(yè)造成了重大經濟損失。黃艷花等[18]報道了可可毛色二孢菌引起百香果莖基腐病，在高溫高濕條件下，受該病原菌為害，百香果植株可在3～7 d 失水萎蔫死亡，嚴重年份部分連作果園病株死亡率高達50%～60%[18]?？煽擅呔诔Ｒ?guī)培養(yǎng)條件下分生孢子難產生且周期長，而獲得病原菌大量分生孢子是開展基因功能、侵染過程、致病機理、藥劑生物測定和寄主抗病品種抗性鑒定等研究的關鍵環(huán)節(jié)，因此，研究可可毛色二孢菌產孢適宜條件，對進一步研究百香果莖基腐病及可可毛色二孢菌具有重大意義。

關于可可毛色二孢菌產孢條件的描述，薛振南等[10]認為，在連續(xù)光照的OMA 培養(yǎng)基上，該菌產孢較快且較多。史國英等[13]認為，在pH 為3～4的PSB 培養(yǎng)基上培養(yǎng)30 d 后可產生子座及分生孢子。迄今為止，國內外系統(tǒng)性對可可毛色二孢菌（L. theobromae）產孢因素的研究尚處于空白，為獲得產量高的可可毛色二孢菌分生孢子，筆者以查氏培養(yǎng)基粉、燕麥瓊脂培養(yǎng)基粉、玉米粉瓊脂培養(yǎng)基粉、瓊脂粉、PCA 培養(yǎng)基為主要材料，以百香果枝條小節(jié)、百香果枝條碎粒、百香果煮枝液、甘露醇、維生素B1、維生素B2、維生素B6、維生素C 等為輔料，單因素組配32 種培養(yǎng)基開展產孢量試驗，同時對不同溫度、pH、光照、植物枝條等影響產孢的因素進行進行了較深入的研究，以期掌握可可毛色二孢菌簡易、快速、大量獲取其分生孢子產孢技術因素，也為此類真菌的進一步研究奠定基礎。

1 材料與方法

1.1 供試菌株

百香果可可毛色二孢莖基腐病菌（L.theobromae），由廣西農業(yè)職業(yè)技術大學植保實驗室分離、鑒定并保存。

1.2 供試培養(yǎng)基

供試培養(yǎng)基，分別由山東拓普生物工程有限公司生產的查氏培養(yǎng)基粉、燕麥瓊脂培養(yǎng)基粉、玉米粉瓊脂培養(yǎng)基粉和北京索萊寶科技有限公司生產的瓊脂粉、自制PCA 培養(yǎng)基為主要材料，以百香果枝條小節(jié)、百香果枝條碎粒、百香果煮枝液、甘露醇、維生素B1、維生素B2、維生素B6、維生素C 等為輔料，單因素組配32 種培養(yǎng)基，以PDA 培養(yǎng)基為對照（表1）。

表1 培養(yǎng)基配方

枝條小節(jié)：選取長勢一致百香果綠枝條切3.0～4.0 cm 小段，于121 ℃高壓滅菌鍋滅菌20 min，置于70 ℃烘箱24 h烘干，得到滅菌的百香果枝條小節(jié)備用。

枝條碎粒：選取長勢一致百香果綠枝條剪0.2 cm 左右碎粒，于121 ℃高壓滅菌鍋滅菌20 min，置于70 ℃烘箱24 h烘干，得到滅菌的百香果枝條碎粒備用。

煮枝液：選取長勢一致百香果綠枝條，去掉葉片和嫩梢，切1.0～2.0 cm 小段，稱取30 g 枝條節(jié)加入水中熬制，大火煮開，小火熬煮1 h，加水定容至100 mL，獲得百香果煮枝液備用。

1.2.1基礎培養(yǎng)基配方CMA（玉米粉瓊脂培養(yǎng)基粉2.2 g+水100 mL）；Czapek（查氏培養(yǎng)基粉5.0 g+水100 mL）；OA（燕麥瓊脂培養(yǎng)基粉7.3 g+水100 mL）；WA（瓊脂粉2.0 g+水100 mL）；PCA培養(yǎng)基（土豆20.0 g+蔗糖2.0 g+瓊脂粉2.0 g+水100 mL）；PDA 培養(yǎng)基（土豆20.0 g+葡萄糖2.0 g+瓊脂粉2.0 g+水100 mL）。按常規(guī)配制方法配制好后經121 Pa高壓滅菌25 min備用。

1.2.2植物組織培養(yǎng)基配制方法取配方中所需的基礎培養(yǎng)基倒入平板，每皿15 mL，冷卻后加入2～3節(jié)枝條小節(jié)，使枝條大部分暴露在平板培養(yǎng)基外面，得到枝條小節(jié)培養(yǎng)基。在超凈工作臺中，每100 mL 平板培養(yǎng)基中加入30.0 g 枝條碎粒，混勻后倒入平板，每皿15 mL，得到枝條碎粒培養(yǎng)基。

1.2.3合成培養(yǎng)基配制方法以煮枝液或基礎培養(yǎng)基為溶液加熱，添加配方中所需成分，充分溶解混勻，經121 Pa高壓滅菌25 min備用。

1.3 供試儀器

供試培養(yǎng)箱為珠江牌培養(yǎng)箱，型號：LRH-250-GSB1。

1.4 病原菌產孢條件篩選

1.4.1不同培養(yǎng)基對病原菌產孢量的影響參考羅利娟等[19]的方法并改進，單因素組配32 種營養(yǎng)培養(yǎng)基進行產孢量試驗。分植物組織培養(yǎng)基組和合成培養(yǎng)基培養(yǎng)基組，分植物源培養(yǎng)基組10個處理（表1 中K1、K8、k15、K22、K31；K2、K9、K16、K23、K32），純平板培養(yǎng)基組22 個處理（表1 中K3、K4、k5、K6、K7；K10、K11、K12、K13、K14、K16、K17、k18、K19、K20；K21、K24、K25、K26、K27、K128、K29、k30），每處理4次重復。供試菌株在PDA 培養(yǎng)基上擴繁3 d，用6 mm 打孔器取菌餅，接到各培養(yǎng)基處理平板中央，置于28 ℃、12 h 黑暗、12 h 光照（光照強度300 lx）的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，7 d 后拍照，觀察記錄載孢體形態(tài)；第10 天測定產孢量；第20 天測定孢子成熟比例。

1.4.2不同溫度對病原菌產孢量的影響參考孫光軍等[20]的方法并改進，以K20和K25培養(yǎng)基為供試培養(yǎng)基，供試菌株在PDA 培養(yǎng)基上擴繁3 d，用6 mm 打孔器取菌餅，接種到培養(yǎng)基處理平板中央，分別在10、15、20、25、30和35 ℃共6個溫度梯度，黑暗12 h、光照12 h（光照強度300 lx）條件下培養(yǎng)，每處理4 次重復，7 d后拍照，觀察記錄載孢體形態(tài)，分別在第10、18天測定產孢量。

1.4.3pH 值對病原菌產孢量的影響參考孫光軍等[20]的方法等并改進，以K20培養(yǎng)基為供試培養(yǎng)基，配置1.0 mol/L NaOH、1.0 mol/L HCl 滅菌，在無菌條件下用NaOH 和HCl 把K20培養(yǎng)基pH 分別調為3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0、11.0和12.0共10個梯度，倒入培養(yǎng)基平板，待冷卻后將直徑6.0 mm 的病原菌菌餅接種于不同pH 平板中央，每處理4 次重復，置于28 ℃、黑暗12 h、光照12 h（光照強度300 lx）培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，7 d 后拍照，觀察記錄載孢體形態(tài)；第10天測定產孢量。

1.4.4不同光照對病原菌產孢量的影響參考孫光軍等[20]的方法等并改進，以K20和K25培養(yǎng)基為供試培養(yǎng)基，將6 mm病原菌菌餅分別接種于K20和K25培養(yǎng)基平板中央，進行全黑暗（0 lx）、半光半暗（黑暗12 h、光照12 h，光照強度300 lx）、全光照（光照24 h，光照強度300 lx）3種光照環(huán)境處理，全黑暗處理使用4 層錫箔紙包裹遮光，每處理4 次重復，置于28 ℃人工氣候箱培養(yǎng)，7 d后拍照，觀察記錄載孢體形態(tài)；第10天測定產孢量。

1.4.5不同植物枝條對病原菌產孢量的影響以K31培養(yǎng)基為基礎培養(yǎng)基，分別添加荔枝（編號T1，下類同）、桑樹（T2）、扶桑（T3）、柑橘（T4）、桂花樹（T5）、木瓜（T6）、杧果（T7）、陽桃（T8）、李樹（T9）、黃皮（T10）、堅果（T11）、黃素梅（T12）、龍眼（T13）、百香果（T14）、葡萄（T15）15 種植物枝條小節(jié)，制成15 種不同植物的植物源培養(yǎng)基，每種植物源培養(yǎng)基為1 個處理，每處理4 次重復，將6 mm 病原菌菌餅分別接種于培養(yǎng)基中央，置于28 ℃人工氣候箱培養(yǎng)，7 d 后拍照，觀察記錄載孢體形態(tài)；第10 天測定產孢量。

1.5 病原菌產孢量測定

將10 mL 無菌水加入產孢培養(yǎng)基中，用一次性滅菌涂布器輕磨培養(yǎng)基上的菌落，碾碎載孢體，用雙層滅菌擦鏡紙過濾，洗下分生孢子，用血球計數板統(tǒng)計產孢量。

1.6 病原菌孢子成熟度的測定

顯微鏡下觀察孢子成熟情況，分生孢子單胞無色計為未成熟，分生孢子雙胞褐色計為成熟，每處理連續(xù)統(tǒng)計孢子100 個以上，4 次重復，用計數器統(tǒng)計分生孢子成熟率。

2 結果與分析

2.1 不同培養(yǎng)基對病原菌產孢量的影響

2.1.1植物組織培養(yǎng)基從表2、圖1中可知，百香果可可毛色二孢莖基腐病菌（L. theobromae）在5 種枝條小節(jié)培養(yǎng)基中均產生載孢體，除K8（CMA+枝條）培養(yǎng)基無分生孢子外，其他4個處理均產生分生孢子。在K31（PCA+枝條）培養(yǎng)基上，載孢體粒大、量多、凸出，產生的分生孢子量為14.91×104 個/cm2，極顯著高于其他培養(yǎng)基；在K1（OA+枝條）培養(yǎng)基上，載孢體粒大、量中等、凸出，產生的分生孢子量為11.54×104 個/cm2，極顯著高于K22（Czapek+枝條）和K15（WA+枝條）培養(yǎng)基。百香果可可毛色二孢莖基腐病菌在5種枝條碎粒培養(yǎng)基中均產生載孢體及分生孢子，在K2（OA+碎粒）培養(yǎng)基上產生的載孢體粒大、量多，半埋生，產生的分生孢子量為28.56×105 個/皿，極顯著高于其他培養(yǎng)基；在K32（PCA+碎粒）培養(yǎng)基上，載孢體粒大、量多、多數凸出，產生的分生孢子量為22.10×105 個/皿，極顯著高于K16（WA+碎粒）、K23（Czapek+碎粒）、K9（CMA+碎粒）培養(yǎng)基；K9（CMA+碎粒）產生的分生孢子量極顯著低于其他處理的產孢量。

圖1 病原菌在部分培養(yǎng)基上生長7 d的狀態(tài)

表2 不同植物組織培養(yǎng)基對病原菌產孢量的影響

在10 種植物組織培養(yǎng)基上培養(yǎng)20 d 后，K9（CMA+碎粒）產生的分生孢子成熟率為90.91%，其他處理孢子成熟率在1.11%～29.41%。

可知，百香果可可毛色二孢莖基腐病菌（L. theobromae）在植物組織培養(yǎng)基上容易產生分生孢子，以OA、CPA+枝條組織的培養(yǎng)基產孢量較高，WA、Czapek+枝條組織的培養(yǎng)基產孢量次之，CMA+枝條組織的培養(yǎng)基產孢量較少或不產孢。

2.1.2合成培養(yǎng)基將供試菌株分別接種在22種合成培養(yǎng)基上，培養(yǎng)7 d 后觀察發(fā)現(xiàn)15 種合成培養(yǎng)基產生載孢體，7 種合成培養(yǎng)基沒有產生載孢體，PDA（CK）培養(yǎng)基沒有產生載孢體（圖1）；培養(yǎng)10 d后測定發(fā)現(xiàn)，沒有產生載孢體的培養(yǎng)基都沒有產生分生孢子，K14和K19號培養(yǎng)基上產生載孢體但沒有產生分生孢子。K4（燕麥培養(yǎng)基粉7.3 g+煮枝液100 mL+甘露醇2.5 g）培養(yǎng)基載孢體粒較大、多、多數立生，產生的分生孢子量最多，為5.27×105個/皿，極顯著高于其他培養(yǎng)基；K6（燕麥培養(yǎng)基粉7.5 g+煮枝液100 mL+維生素B13.0 mg+甘露醇2.5 g）和K7（燕麥培養(yǎng)基粉7.5 g+煮枝液100 mL+B130 mg、維生素B21.5 mg、維生素B60.2 mg、維生素C 100 mg）培養(yǎng)基載孢體粒較大、多、多數立生，產生的分生孢子量排第2、3位，分別為4.65×105個/皿和4.62×105個/皿，極顯著高于除K4以外的培養(yǎng)基；K20（白瓊脂粉2 g+煮枝液100 mL+維生素B13.0 mg+甘露醇2.5 g）培養(yǎng)基載孢體粒大、多、立生，產生的分生孢子量為2.91×105個/皿，排第4 位，極顯著高于除K4、K6和K7外的培養(yǎng)基；產生的分生孢子量排第5～10 的培養(yǎng)基分別為K3、K25、K27、K21、K5、K17，分生孢子量分別為2.06×105、1.22×105、1.16×105、0.37×105、0.36×105、0.45×105個/皿，其間存在顯著性差異；K24、K26和K28培養(yǎng)基產孢量排第11～13位，3個處理間沒有顯著性差異；K10、K11、K12、K13、K14、K18、K19、K29、K30和K33（CK）10個處理培養(yǎng)基沒有產生分生孢子（表3）。

表3 不同合成培養(yǎng)基對病原菌產孢量的影響

因此，K4（燕麥培養(yǎng)基粉7.5 g+煮枝液100 mL+甘露醇2.5 g）培養(yǎng)基為百香果可可毛色二孢莖基腐病菌（L. theobromae）分生孢子產生的最佳合成培養(yǎng)基，其次為K6（燕麥培養(yǎng)基粉7.3 g+煮枝液100 mL+維生素B13.0 mg+甘露醇2.5g）和K7（燕麥培養(yǎng)基粉7.5 g+煮枝液100 mL+維生素B13.0 mg、維生素B21.5 mg、維生素B60.2 mg、維生素C 100 mg）培養(yǎng)基，再次為K20（白瓊脂粉2.0 g+煮枝液100 mL+維生素B13.0 mg+甘露醇2.5 g）培養(yǎng)基。

在12種合成培養(yǎng)基上均可產生分生孢子，培養(yǎng)20 d后，孢子成熟率在3.33%～50.00%。

2.2 不同溫度對病原菌產孢量的影響

培養(yǎng)溫度對百香果可可毛色二孢莖基腐病菌（L. theobromae）載孢體和分生孢子產生的影響較大，溫度過低或過高都不利于載孢體和分生孢子產生。由圖2 可知，病原菌在K20號培養(yǎng)基上、溫度為15～30 ℃產生載孢體，溫度≤15 ℃或≥35 ℃時，未產生載孢體。K20和K25培養(yǎng)基在不同溫度條件下培養(yǎng)10 d，25 ℃條件下產孢量極顯著高于其他處理，20 ℃條件下產孢量其次，30 ℃條件下產孢量較少，溫度≤15 ℃或≥35 ℃時，未產生分生孢子。K20和K25培養(yǎng)基在不同溫度條件下培養(yǎng)18 d，25 ℃條件下產孢量極顯著高于其他，20、30 ℃條件下產孢量其次，15 ℃條件下產孢量較少，溫度≤10 ℃或≥35 ℃時，未產生分生孢子，培養(yǎng)18 d 產生的分生孢子量高于培養(yǎng)10 d產生的分生孢子量（圖3）。

圖2 病原菌在K20號培養(yǎng)基上不同溫度條件下生長7 d的狀態(tài)

圖3 不同溫度對病原菌產孢量的影響

因此，百香果可可毛色二孢莖基腐病菌分生孢子產生的最適宜的溫度條件為25 ℃。

2.3 不同pH值對病原菌產孢量的影響

由圖4 可知，百香果可可毛色二孢莖基腐病菌（L. theobromae）在pH 3～6 培養(yǎng)基上產生的載孢體較多，在pH 7～12培養(yǎng)基上產生的載孢體較少。由圖5 可知，在pH 為4 時產生的分生孢子量最多，為5.41×105個/皿，極顯著高于其他pH 條件；pH 為3 時產生的分生孢子量次之，為4.31×105個/皿，極顯著高于除pH 為4 以外的pH 條件；產生的分生孢子量排在第3、4、5位的pH值為5～7，產生的分生孢子量分別為3.13×105、2.67×105、0.78×105個/皿，分生孢子產孢量與pH 值呈反比，pH 越高，產孢量越少，處理間存在顯著性差異；pH 為8～12 條件下分生孢子產孢量最少，為0.05×105～0.01×105個/皿，處理間沒有顯著性差異。

圖4 病原菌在不同pH值條件下生長7 d的狀態(tài)

圖5 不同pH值對病原菌產孢量的影響

因此，偏酸性條件有利于百香果可可毛色二孢莖基腐病菌（L. theobromae）分生孢子產生，最適宜pH值條件是pH 4。

2.4 不同光照條件對病原菌產孢量的影響

由圖6、圖7 可知，光照條件對百香果可可毛色二孢莖基腐病菌（L. theobromae）產生分生孢子的影響較大，在K20和K25培養(yǎng)基上全黑暗光照條件下未產生載孢體，在半光半暗和全光照條件下產生載孢體；K20和K25培養(yǎng)基在半光半暗條件產生的分生孢子量極顯著大于全光照和全黑暗，全黑暗條件下產孢量為0。

圖6 病原菌在不同光照條件下生長7 d的狀態(tài)

圖7 不同光照條件對病原菌產孢量的影響

因此，可知半光半暗是百香果可可毛色二孢莖基腐病菌（L. theobromae）分生孢子產生的最佳光照條件，全光照次之，全黑暗沒有產生分生孢子。

2.5 不同植物枝條培養(yǎng)基對病原菌產孢量的影響

由圖8、圖9 可知，百香果可可毛色二孢莖基腐病菌（L. theobromae）在15種不同植物組織培養(yǎng)基上培養(yǎng)7 d 后均產生載孢體。其中，在柑橘+PCA 的T4培養(yǎng)基產孢量最多，為19.93×104個/cm2，產生的分生孢子量極顯著高于其他培養(yǎng)基；在桑樹、扶桑+PCA的T2、T3培養(yǎng)基上，產生的分生孢子量次之，分別為18.13×104、16.72×104個/cm2，極顯著高于除T4外的培養(yǎng)基；堅果、百香果、桂花樹+PCA的T11、T14、T15培養(yǎng)基產生的分生孢子量排第3 位，為14.40×104、14.14×104、13.86×104個/cm2，極顯著高于除T4、T2和T3外的培養(yǎng)基；桑樹、李樹、龍眼、木瓜、葡萄、陽桃、杧果、黃素梅+PCA 的T2、T9、T13、T6、T15、T8、T7、T12培養(yǎng)基孢子量較少、依次降低。

圖8 病原菌在不同植物枝條培養(yǎng)基上生長7 d的狀態(tài)

圖9 不同植物枝條培養(yǎng)基對病原菌產孢量的影響

因此，可知病原菌在15種不同植物枝條培養(yǎng)基上培養(yǎng)均產生分生孢子，柑橘、桑樹、扶桑、堅果、百香果、桂花樹依次為較適合百香果可可毛色二孢莖基腐病菌（L. theobromae）產孢的植物枝條。

3 討論

方中達［21］認為，在促進植物病原真菌產孢的研究進程中，培養(yǎng)基與孢子產生關系最大，采用不同培養(yǎng)基或改變它們成分，是促進孢子產生的最主要途徑。本次研究結果顯示，培養(yǎng)基營養(yǎng)成分對百香果可可毛色二孢莖基腐病菌（L. theobromae）分生孢子產生影響較大，參試的32 個配方培養(yǎng)基中，21 個配方培養(yǎng)基產生分生孢子，11個配方培養(yǎng)基未產生分生孢子。在植物組織培養(yǎng)基上容易產生分生孢子，以OA、CPA+枝條組織培養(yǎng)基產孢量較高，WA、Czapek+枝條組織培養(yǎng)基產孢量次之，CMA+枝條組織培養(yǎng)基產孢量較少或沒有產孢，在一定面積的合適基礎培養(yǎng)基上，載孢體數量與組織材料面積呈正相關，而分生孢子量與載孢體數量、體積也呈正相關；病原菌在不同合成培養(yǎng)基上產生分生孢子情況差異較大，最佳合成培養(yǎng)基是K4（燕麥培養(yǎng)基粉7.3 g+煮枝液100 mL+甘露醇2.5 g）培養(yǎng)基，其次為K6（燕麥培養(yǎng)基粉7.3 g+煮枝液100 mL+維生素B13.0 mg+甘露醇2.5 g）和K7（燕麥培養(yǎng)基粉7.3 g+煮枝液100 mL+維生素B13.0 mg、維生素B21.5 mg、維生素B60.2 mg、維生素C 100.0 mg）培養(yǎng)基，再次為K20（白瓊脂粉2.0 g+煮枝液100 mL+維生素B13.0 mg+甘露醇2.5 g）培養(yǎng)基，其中K4、K6、K7為同一系列營養(yǎng)的培養(yǎng)基，都是以“燕麥培養(yǎng)基粉7.5 g+煮枝液”添加不同微量元素組成，K4和K20培養(yǎng)基添加的微量元素為甘露醇，可知燕麥培養(yǎng)基粉、煮枝液、甘露醇成分可促進載孢體及分生孢子快速產生。在10 種植物組織培養(yǎng)基上培養(yǎng)20 d 后，K9（CMA+碎粒）產生的分生孢子成熟率為90.91%，其他處理孢子成熟率在1.11%～29.41%，在可產生分生孢子的12 種合成培養(yǎng)基培養(yǎng)20 d 后，孢子成熟率在3.33%～50.00%。

本次研究結果表明，培養(yǎng)溫度對百香果可可毛色二孢莖基腐病菌分生孢子產生的影響較大，溫度過低或過高都不利于分生孢子產生。培養(yǎng)10 d時，只有在20～30 ℃條件下產生孢子，25 ℃產孢量最高，≤10 ℃或≥35 ℃時，沒有產生分生孢子；培養(yǎng)18 d時，在15～30 ℃條件下產生孢子，25 ℃產孢量最高，≤10 ℃或≥35 ℃時，沒有產生分生孢子，培養(yǎng)18 d產生的分生孢子量高于培養(yǎng)10 d 產生的分生孢子量。因此，百香果可可毛色二孢莖基腐病菌分生孢子產生的最適宜培養(yǎng)溫度條件為25 ℃。pH 值對病原菌產孢量的影響較大，史國英等[13]研究結果表明，可可毛色二孢菌在pH 3～4的PSB培養(yǎng)基上培養(yǎng)30 d后可產生子座及分生孢子，在其他pH值條件下沒有產生子座及分生孢子。本研究結果表明，百香果可可毛色二孢莖基腐病菌（L. theobromae）在K20（白瓊脂粉2 g+煮枝液100 mL+維生素B13.0 mg+甘露醇2.5 g）培養(yǎng)基上培養(yǎng)10 d，pH 3～7均可產生分生孢子及載孢體，pH 4產孢量最多，其次為pH 3，偏酸性條件有利于分生孢子產生。光照條件對可可毛色二孢菌（L. theobromae）產孢量的影響較大，薛振南等[10]研究病原菌在連續(xù)光照和12 h 光暗交替處理下產孢結果，認為在連續(xù)光照的OMA 培養(yǎng)基上病原菌產孢較快較多；楊德潔等[15]]和謝紅輝等[22]研究病原菌在全黑暗及全光照條件下培養(yǎng)產孢情況，認為病原菌在黑暗條件培養(yǎng)處理沒有子實體，持續(xù)光照有利于分生孢子器的形成和分生孢子的產生。本研究結果認為百香果可可毛色二孢莖基腐病菌（L. theobromae）在全黑暗條件下未形成載孢體及產生分生孢子，在半光半暗條件下產孢量最多，全光照條件下產孢量次之，本研究結果與楊德潔等[15]和謝紅輝等[22]研究結果一致，與薛振南等[10]有些不同，可能與所研究的光照強度、病原菌寄主不同有關，可繼續(xù)在光照強度、光暗間隔時間等方面進一步研究。病原菌在隨機挑選的15 種不同植物枝條培養(yǎng)基上培養(yǎng)均形成載孢體及產生分生孢子，柑橘、桑樹、扶桑、堅果、百香果和桂花樹依次是較適合百香果可可毛色二孢莖基腐病菌產孢的植物枝條，本研究結果再次證明可可毛色二孢菌浸染寄主范圍廣泛。

4 結論

百香果可可毛色二孢莖基腐病菌在OA、CPA+枝條組織的培養(yǎng)基上培養(yǎng)產孢量較高，最佳合成培養(yǎng)基為配方燕麥培養(yǎng)基粉7.3 g+煮枝液100 mL+甘露醇2.5 g的K4培養(yǎng)基，最佳培養(yǎng)溫度條件為25 ℃，最適pH為4，最佳光照條件為半光半暗，柑橘、桑樹、扶桑、堅果、百香果和桂花樹依次是較適合病原菌產孢的植物枝條。