梁志勇

清遠(yuǎn)市慢性病防治醫(yī)院(廣東 清遠(yuǎn) 511500)

肺結(jié)核為常見(jiàn)結(jié)核感染性疾病的一種，涂陰活動(dòng)性肺結(jié)核指的是3份以上痰圖片鏡檢抗酸桿菌陰性，且胸部X線檢查顯示特征符合于活動(dòng)性肺結(jié)核的病例，病情隱匿，傳染性較小，可接觸更多人群，致使肺結(jié)核廣泛傳播[1-2]。不僅如此，大量研究均顯示，涂陰活動(dòng)性肺結(jié)核若未及時(shí)得到有效治療，1～5年內(nèi)有極大的風(fēng)險(xiǎn)可轉(zhuǎn)化為涂陽(yáng)肺結(jié)核，增大治療難度[3]。因此，對(duì)于涂陰活動(dòng)性肺結(jié)核，臨床上應(yīng)早期確診，并及時(shí)干預(yù)，以往臨床上對(duì)肺結(jié)核的診斷方法包括TB-AB、PPD等，診斷結(jié)果受多方面因素的影響，準(zhǔn)確率不夠理想。結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)(T-SPOT.TB)為γ干擾素釋放試驗(yàn)的一種，對(duì)結(jié)合分歧桿菌感染由較高的敏感度、特異度，近年來(lái)逐漸被廣泛應(yīng)用于肺結(jié)核診斷中[4]。本院近年來(lái)通過(guò)T-SPOT.TB對(duì)涂陰活動(dòng)性肺結(jié)核進(jìn)行診斷，現(xiàn)以2021年11月-2022年11月接收的46例涂陰肺結(jié)核患者、健康人員為對(duì)象展開(kāi)研究，以進(jìn)一步探討其診斷價(jià)值，并報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料于2021年11月-2022年11月在本院接受治療的涂陰活動(dòng)性肺結(jié)核患者中選取46例，設(shè)為觀察組。46例患者中，24例為男性，22例為女性；年齡24～58歲，平均(41.02±6.53)歲。另選取同期在本院體檢的46例健康人員，設(shè)為對(duì)照組，包括男性25例，女性21例，年齡25～58歲，平均(41.10±6.55)歲。

納入標(biāo)準(zhǔn)：以《肺結(jié)核基層診療指南(實(shí)踐版·2018)》[5]為參照，觀察組明確確診為涂陰活動(dòng)性肺結(jié)核，對(duì)照組則排除肺結(jié)核；年齡＞18歲，且＜60歲；病歷、檢查資料完整；知曉研究，并配合簽署知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：肺外結(jié)核合并；復(fù)治肺結(jié)核；免疫系統(tǒng)疾病、艾滋病合并；長(zhǎng)期免疫抑制劑服用；妊娠、哺乳期女性。本院醫(yī)學(xué)倫理會(huì)審批通過(guò)了此次研究，且對(duì)比兩組性別、年齡，發(fā)現(xiàn)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，有可比性。

1.2 方法

1.2.1 T-SPOT.TB 采集受檢者5mL外周靜脈血液標(biāo)本，肝素抗凝，室溫下運(yùn)送保存，4h內(nèi)送檢。對(duì)外周血單個(gè)核細(xì)胞進(jìn)行分離，洗滌后進(jìn)行計(jì)數(shù)。檢測(cè)試劑盒購(gòu)自英國(guó)Oxford Immunotec Liminted公司，按試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行檢測(cè)。取單核細(xì)胞，于4個(gè)預(yù)包被有γ干擾素抗體的反應(yīng)孔內(nèi)加入，并以此加入結(jié)核特異抗原、抗原B。置入37℃、5%CO2環(huán)境，進(jìn)行孵育，過(guò)夜。次日，洗板，隨后予以60min孵育，再次進(jìn)行洗板，取底物顯色液進(jìn)行加入，孵育7min。通過(guò)蒸餾水實(shí)施反應(yīng)終止處理，記錄斑點(diǎn)形成細(xì)胞，1個(gè)效應(yīng)T淋巴細(xì)胞通過(guò)1個(gè)斑點(diǎn)表示，以抗原A和(或)抗原B孔反應(yīng)情況為依據(jù)對(duì)結(jié)果進(jìn)行判斷，具體如下：對(duì)照孔斑點(diǎn)數(shù)介于0～5 SFCs/2.5＊105PBMCs，樣本斑點(diǎn)數(shù)-對(duì)照組斑點(diǎn)數(shù)≥6 SFCs/2.5＊105PBMCs表示陽(yáng)性，對(duì)照孔斑點(diǎn)數(shù)≥6個(gè)，樣本斑點(diǎn)數(shù)≥對(duì)照孔斑點(diǎn)數(shù)2倍也表示陽(yáng)性[6]。

1.2.2 結(jié)核抗體(TB-AB)檢測(cè) 采集受檢者5mL外周靜脈血液標(biāo)本，肝素抗凝，室溫下運(yùn)送保存，4h內(nèi)送檢。檢測(cè)試劑盒由上海奧普生物醫(yī)藥有限公司提供，按試劑說(shuō)明書(shū)展開(kāi)檢測(cè)。取2滴封閉液，于反應(yīng)板的反應(yīng)孔中加入，隨后取血清標(biāo)本(40μL)加入，再依次加入洗活液(6滴)、金標(biāo)液(2滴)、洗滌液(6滴)，目測(cè)觀察與判讀結(jié)果：可見(jiàn)質(zhì)控點(diǎn)為紅色，且反應(yīng)孔內(nèi)有紅色斑點(diǎn)出現(xiàn)，即判定為陽(yáng)性[7]。

1.3 觀察指標(biāo)(1)兩組患者的T-SPOT.TB、TB-AB陽(yáng)性檢出率。(2)觀察組患者的診斷結(jié)果。(3)對(duì)照組患者的檢測(cè)結(jié)果。診斷效能判定與計(jì)算方法：真陽(yáng)性(TP)、假陽(yáng)性(FP)、真陰性(TN)、假陰性(FN)。診斷符合率=(TP+TN)/總例數(shù)×100；敏感度=TP/(TP+FN)×100%；特異度=TN/(TN+FP)×100%。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析此研究數(shù)據(jù)以SPSS 20.0進(jìn)行處理，計(jì)數(shù)資料采用百分率(%)表示，兩組間比較檢驗(yàn)方法是χ2，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩組患者T-SPOT.TB、TB-AB陽(yáng)性檢出率觀察組T-SPOT.TB陽(yáng)性檢出率是86.96%，比對(duì)照組的19.57%高，觀察組TB-AB陽(yáng)性檢出率是80.43%，比對(duì)照組的34.78%高(P＜0.05)，見(jiàn)表1。

表1 兩組患者T-SPOT.TB、TB-AB陽(yáng)性檢對(duì)比[n(%)]

表1 兩組患者T-SPOT.TB、TB-AB陽(yáng)性檢對(duì)比[n(%)]

組別 例數(shù)(n) T-SPOT.TB TB-AB對(duì)照組 46 9(19.57) 16(34.78)觀察組 46 40(86.96) 37(80.43)χ2值 - 41.961 19.628 P值 - 0.000 0.000

2.2 觀察組患者檢測(cè)結(jié)果在觀察患者中，T-SPOT.TB診斷符合率是95.65%，敏感度是77.56%，特異度是80.00%，比TB-AB的82.61%、90.00%、50.00%高(P＜0.05)，見(jiàn)表2。

表2 觀察組患者檢測(cè)結(jié)果[n(%)]

2.3 對(duì)照組患者檢測(cè)結(jié)果在對(duì)照組患者中，T-SPOT.TB診斷符合率是97.83%，敏感度是97.62%，特異度是100.00%，比TB-AB的89.13%、90.00%、42.86%高(P＜0.05)，見(jiàn)表3。

表3 對(duì)照組患者檢測(cè)結(jié)果[n(%)]

3 討 論

結(jié)核病指的是由結(jié)核分歧桿菌感染導(dǎo)致的慢性疾病，肺結(jié)核為其中常用的一種，由肺部受結(jié)核分歧桿菌感染導(dǎo)致。肺部與外界環(huán)境相通，通過(guò)呼吸進(jìn)行氣體交換，可致使結(jié)核桿菌經(jīng)呼吸道侵入，導(dǎo)致肺結(jié)核傳播，引發(fā)社會(huì)功能衛(wèi)生問(wèn)題[8]。除此以外，肺結(jié)核患者若未及時(shí)得到有效治療，可對(duì)肺部組織產(chǎn)生嚴(yán)重?fù)p害，增加治療難度，致使患者生存質(zhì)量嚴(yán)重下降。因此，臨床上不斷強(qiáng)調(diào)肺結(jié)核的早期確診與治療，涂陰活動(dòng)性肺結(jié)核患者多無(wú)明顯肺結(jié)核臨床癥狀，且痰涂片鏡檢、抗酸桿菌等檢查結(jié)果為陰性，確診難度較大，而此病病情進(jìn)一步發(fā)展可轉(zhuǎn)變?yōu)橥筷?yáng)肺結(jié)核，增大傳染性與治療難度[9-10]?；诖耍R床上應(yīng)不斷探尋涂陰活動(dòng)性肺結(jié)核患者的有效診斷方法，進(jìn)一步提升此病早期診斷準(zhǔn)確性，進(jìn)而有效防控肺結(jié)核。

現(xiàn)階段，臨床上對(duì)肺結(jié)核的診斷方法較多，T-SPOT.TB、TB-AB等均較為常用，本次研究通過(guò)T-SPOT.TB對(duì)涂陰活動(dòng)性肺結(jié)核實(shí)施診斷，并與TB-AB進(jìn)行對(duì)比，結(jié)果顯示，觀察組T-SPOT.TB、TB-AB陽(yáng)性檢出率均比對(duì)照組高(P＜0.05)，與王奕[11]等人的研究結(jié)果相似；另外，本次研究還發(fā)現(xiàn)，在觀察組、對(duì)照組診斷中，T-SPOT.TB診斷符合率、敏感度、特異度均比TB-AB高(P＜0.05)，相似于Wa A[12]等人的研究，提示在涂陰活動(dòng)性肺結(jié)核患者診斷中，T-SPOT.TB、TB-AB陽(yáng)性檢出率均較為理想，但T-SPOT.TB診斷效能更佳。T-SPOT.TB是一種γ-干擾素釋放試驗(yàn)，通過(guò)對(duì)結(jié)核分枝桿菌進(jìn)行特異性的抗原刺激，采用酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)技術(shù)對(duì)此條件下外周血單個(gè)核細(xì)胞中γ-干擾素釋放效應(yīng)下的T細(xì)胞數(shù)目。在肺結(jié)核診斷中，T-SPOT.TB具體原理如下：受到結(jié)核分枝桿菌特異性抗原后，人體內(nèi)的T細(xì)胞可發(fā)生致敏改變，成為效應(yīng)性的T細(xì)胞，外周血單核細(xì)胞結(jié)合結(jié)核分枝桿菌特異性抗原后，T細(xì)胞可大量分泌γ-干擾素，對(duì)巨噬細(xì)胞產(chǎn)生激活作用，對(duì)結(jié)核分枝桿菌進(jìn)行吞噬、殺滅[13]。而肺結(jié)核患者外周血液中已經(jīng)有效應(yīng)T細(xì)胞存在，被T-SPOT特異性抗原刺激后，可直接分泌γ-干擾素，T-SPOT.TB可捕獲此γ-干擾素，以斑點(diǎn)數(shù)的方式呈現(xiàn)最終結(jié)果，每一斑點(diǎn)表示一個(gè)效應(yīng)T細(xì)胞，斑點(diǎn)數(shù)量即為致敏T細(xì)胞數(shù)目[14]。我國(guó)相關(guān)診療指南建議，T-SPOT.TB尚無(wú)法排除活動(dòng)性肺結(jié)核，但對(duì)于涂陰肺結(jié)核等缺少病原學(xué)診斷依據(jù)的肺結(jié)核，可作為常規(guī)檢查手段。國(guó)內(nèi)關(guān)于T-SPOT.TB的診斷肺結(jié)核的研究顯示，靈敏度、特異度有較高差異，靈敏度介于53.0%～98.0%，特異度介于60.0%～90.0%以上，本次研究中，T-SPOT.TB診斷符合率是95.65%，敏感度是77.56%，特異度是80.00%，與報(bào)道基本一致，進(jìn)一步表明，在涂陰活動(dòng)性肺結(jié)核診斷中，T-SPOT.TB有良好價(jià)值[15-16]。TB-AB試驗(yàn)是肺結(jié)核的常用診斷技術(shù)，操作簡(jiǎn)單、快速，但免疫功能可對(duì)溶血樣本、高脂血樣本產(chǎn)生影響，致使假陰性結(jié)果出血，降低診斷的敏感度與特異度。

相關(guān)研究顯示，在具體臨床應(yīng)用中，T-SPOT.TB診斷涂陰活動(dòng)性肺結(jié)核的效能會(huì)受免疫狀態(tài)、年齡等因素的影響[17]。一項(xiàng)原因T-SPOT.TB診斷活動(dòng)性肺結(jié)核影響因素的調(diào)查顯示，免疫抑制劑使用、高齡、合并淋巴細(xì)胞減少癥、合并艾滋病等均可導(dǎo)致T-SPOT.TB診斷出現(xiàn)假陰性結(jié)果，因此，此次研究排除了此類(lèi)患者[18]。另外，在部分臨床研究中，T-SPOT.TB診斷涂陰活動(dòng)性肺結(jié)核的的特異度、敏感度均比此次研究高，究其原因，可能由于此次研究患者均接受了抗結(jié)核治療，而效應(yīng)T淋巴細(xì)胞存活的時(shí)間僅為4～6d，經(jīng)抗結(jié)核治療后，結(jié)核均的數(shù)量降低，效應(yīng)T淋巴細(xì)胞技術(shù)隨之下降，行T-SPOT.TB檢測(cè)時(shí)，部分結(jié)核分歧桿菌已經(jīng)消滅，因此可導(dǎo)致靈敏度與特異度降低?；谝陨戏治觯R床上選擇T-SPOT.TB檢測(cè)對(duì)涂陰活動(dòng)性肺結(jié)核患者實(shí)施診斷時(shí)，應(yīng)全面考慮患者診斷效能影響因素，對(duì)于存在可能影響T-SPOT.TB診斷準(zhǔn)確性的患者，可聯(lián)合使用其他診斷技術(shù)，如TB-AB、結(jié)核菌素試驗(yàn)等，以進(jìn)一步提升涂陰活動(dòng)性肺結(jié)核的確診率。

綜上所述，對(duì)涂陰活動(dòng)性肺結(jié)核進(jìn)行診斷時(shí)，選擇T-SPOT.TB診斷效能良好，診斷符合率、敏感度、特異度均較高，臨床上可結(jié)合患者實(shí)際情況積極實(shí)施此檢測(cè)，必要時(shí)可選擇聯(lián)用其他檢測(cè)方法，以達(dá)到有效提升此病診斷準(zhǔn)確率的效果。但此次研究存在不足，包括僅選取46例樣本、未與更多檢測(cè)方法對(duì)比，且未考慮更多診斷影響因素等，需展開(kāi)更大規(guī)模的研究，以進(jìn)一步驗(yàn)證T-SPOT.TB在涂陰活動(dòng)性肺結(jié)核患者診斷中的臨床價(jià)值。