黃軻琳,陳 亮,袁紅霞,陳虹亮,歐陽育琪

(郴州市第一人民醫(yī)院 1. 感控科; 2. 檢驗(yàn)科,湖南 郴州 423000)

苛養(yǎng)菌與眾多呼吸道疾病相關(guān),如中耳炎、鼻竇炎、支氣管炎、肺炎等,嚴(yán)重會(huì)導(dǎo)致敗血癥、心內(nèi)膜炎、腦膜炎等疾病。由于小兒用藥的局限、基層醫(yī)院對苛養(yǎng)菌的分離培養(yǎng)鑒定技術(shù)掌握有限,以及苛養(yǎng)菌培養(yǎng)條件高等原因,臨床一線常在小兒病原學(xué)診斷未明確前早期予以經(jīng)驗(yàn)用藥,導(dǎo)致苛養(yǎng)菌對常用抗菌藥物的耐藥率呈上升趨勢[1-4]。細(xì)菌的分布及對抗菌藥物的耐藥性具有地域性差異,作為湘南地區(qū)最大的兒童專科醫(yī)院,調(diào)查近年來苛養(yǎng)菌的耐藥性變遷具有一定的區(qū)域代表性和臨床指導(dǎo)意義。本研究旨在通過了解小兒呼吸道苛養(yǎng)菌的分布及對常用抗菌藥物的耐藥性特點(diǎn),為臨床醫(yī)生在小兒病原菌感染初期及早合理使用抗菌藥物提供參考。

1 對象與方法

1.1 研究對象 收集2018年1月—2022年12月湘南地區(qū)某醫(yī)院患兒呼吸道標(biāo)本(痰、肺泡灌洗液等)分離出的8 510株苛養(yǎng)菌及相關(guān)患兒的臨床資料。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)符合小兒感染性肺炎的診斷標(biāo)準(zhǔn);(2)同一患兒相同菌株選取首次分離的菌株。排除標(biāo)準(zhǔn):同一患兒相同部位分離得到的重復(fù)菌株,若抗菌藥物敏感性(藥敏)試驗(yàn)分析結(jié)果相同,可判定為同一菌株,不重復(fù)記錄。

1.2 研究方法

1.2.1 細(xì)菌培養(yǎng)、分離純化及鑒定 細(xì)菌的培養(yǎng):使用無菌接種環(huán),以三區(qū)劃線方式將收集的痰標(biāo)本接種于哥倫比亞血瓊脂培養(yǎng)基與巧克力瓊脂培養(yǎng)基上,隨后置于5% CO2恒溫培養(yǎng)箱中,在35～37℃條件下培養(yǎng)24～48 h。病原菌分離純化及鑒定:觀察哥倫比亞血瓊脂培養(yǎng)基與巧克力瓊脂培養(yǎng)基上菌株的形態(tài),用無菌接種環(huán)挑選可疑的單個(gè)菌落三區(qū)劃線接種于對應(yīng)的培養(yǎng)基,于5% CO2恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)35～37℃條件下培養(yǎng)18 h,挑取單個(gè)純菌落進(jìn)行鑒定,標(biāo)本采集、培養(yǎng)及菌株鑒定等參照《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程(第四版)》[5]和科室檢驗(yàn)操作程序文件執(zhí)行。

1.2.2 藥敏試驗(yàn) 在新鮮分離純化的培養(yǎng)基上挑取單個(gè)菌落,采用細(xì)菌藥敏分析系統(tǒng)進(jìn)行菌株的藥敏試驗(yàn),部分藥敏試驗(yàn)采用Kirby-Bauer(K-B)紙片擴(kuò)散法和E試驗(yàn)法。藥敏折點(diǎn)及抗菌藥物選擇參照美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)(CLSI)文件標(biāo)準(zhǔn)。

1.3 主要儀器和試劑 儀器:CO2培養(yǎng)箱購自賽默飛生物醫(yī)療股份有限公司,基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI-TOF MS)、Vitek 2 Compact微生物鑒定儀、自動(dòng)微生物鑒定及藥敏系統(tǒng)(ATB)均購自法國梅里埃公司。試劑:哥倫比亞血平板、巧克力平板購自廣州迪景微生物科技有限公司;奈瑟菌-嗜血桿菌藥敏條、GP68藥敏條購自法國梅里埃公司;奧普托欣(Optochin)紙片、青霉素藥敏條購自溫州康泰有限公司;質(zhì)控菌株為肺炎鏈球菌(Spn)ATCC 49619、流感嗜血桿菌(Hi)ATCC 49274,均購自國家衛(wèi)生健康委員會(huì)(衛(wèi)健委)臨床檢驗(yàn)中心。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析 應(yīng)用WHONET 5.6軟件及SPSS 25.0進(jìn)行分析,計(jì)數(shù)資料用百分?jǐn)?shù)(%)表示,采用χ2趨勢檢驗(yàn),P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 2018—2022年苛養(yǎng)菌分布情況 共送檢呼吸道標(biāo)本46 773份,分離苛養(yǎng)菌8 510株,分離率為18.19%,其中Spn為3 826株(8.18%),Hi為2 723株(5.82%),卡他莫拉菌(Mc)為1 961株(4.19%)。以細(xì)菌為分組變量,Spn占比最高(44.96%),Mc占比最低(23.04%)。以年份為分組變量,2018、2020年以Spn、Mc為主,2021、2022年以Hi為主。見表1。

表1 2018—2022年該院苛養(yǎng)菌分布情況[株(%)]

2.2 苛養(yǎng)菌在不同科室中的分布 苛養(yǎng)菌以非重癥科室檢出為主,分別為Spn 3 617株(94.54%),Hi 2 674株(98.20%),Mc 1 899株(96.84%)。新生兒重癥監(jiān)護(hù)室(NICU)檢出Hi 3株,兒童重癥監(jiān)護(hù)室(PICU)以檢出Spn為主,非重癥科室以檢出Spn為主。見表2。

表2 2018—2022年該院不同科室苛養(yǎng)菌分布[株(%)]

2.3 主要苛養(yǎng)菌的耐藥情況

表3 2018—2022年該院Spn耐藥率變遷(%)

表4 2018—2022年該院Hi耐藥率變遷(%)

表5 2018—2022年該院Mc耐藥率變遷(%)

3 討論

本研究通過分析2018—2022年監(jiān)測數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn),該地區(qū)苛養(yǎng)菌分離率為18.19%,低于蘇州地區(qū)(67.14%)和南寧地區(qū)(37.48%),但高于寧波市(2.64%),分離率的高低與不同地區(qū)疫苗接種普及度有關(guān)[1-3]。該地區(qū)小兒呼吸道感染常見苛養(yǎng)菌排名前三分別為Spn、Hi和Mc,與對成年患者的研究[4,6]結(jié)果不一致。鑒于本研究僅針對14歲以下兒童,研究結(jié)果提示小兒呼吸道感染苛養(yǎng)菌與成人有差別。2020年后Spn、Hi、Mc的菌株檢出量下降,推測新型冠狀病毒疫情后,由于提倡戴口罩,減少出行,輔導(dǎo)機(jī)構(gòu)停止授課,以及采用線上教學(xué)等,減少了包括學(xué)校在內(nèi)的各類場所的聚集,使以呼吸道感染為主要就診原因的患兒數(shù)量驟減,標(biāo)本送檢量減少。此外,研究結(jié)果顯示96.24%的苛養(yǎng)菌來源于非重癥科室,可能與病房患者呼吸道感染致病菌不同、診治藥物差異及侵入性醫(yī)療操作等因素有關(guān)。

Mc又名卡他微球菌,過去一直認(rèn)為對人體無致病性,隨著研究的深入,發(fā)現(xiàn)Mc菌體可以刺激呼吸道上皮細(xì)胞和單核細(xì)胞分泌炎性因子,引發(fā)一系列呼吸道癥狀。Mc的藥敏結(jié)果顯示其僅對氨芐西林耐藥率高,對其余常用抗菌藥物的耐藥率均較低,可能與Mc的分離率低有關(guān),不建議將氨芐西林用于臨床一線治療。五年數(shù)據(jù)顯示每年都檢出Mc對阿莫西林/克拉維酸的耐藥菌株,且有上升趨勢,其平均耐藥率1.07%高于2020年兒童細(xì)菌耐藥監(jiān)測報(bào)告的0.8%[7],應(yīng)重視產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶Mc菌株增多的趨勢。隨著磺胺類藥物在兒科廣泛使用,Mc對磺胺類的耐藥率較2020年前有升高趨勢,亦需引起臨床重視。

肺炎是我國住院小兒死亡的第一位原因,被國家衛(wèi)健委列為重點(diǎn)防治的小兒四病之一。本研究結(jié)果顯示,引起嬰幼兒肺炎最常見的苛養(yǎng)菌是Spn、Hi和Mc,說明要重視呼吸道標(biāo)本,特別是無菌標(biāo)本(如肺泡灌洗液等)的送檢,同時(shí)必須嚴(yán)格按照操作規(guī)程進(jìn)行相關(guān)標(biāo)本的采集、送檢及鑒定。由于兒童使用抗菌藥物的特殊性,氧氟沙星、四環(huán)素、氯霉素和利福平均不宜用于兒童,可以在最終病原學(xué)結(jié)果出來之前經(jīng)驗(yàn)性使用β-內(nèi)酰胺類、頭孢菌素類等抗生素,后期根據(jù)藥敏結(jié)果回報(bào)再調(diào)整用藥方案。

利益沖突:所有作者均聲明不存在利益沖突。