鄭壽招

近年來, TP 感染在國(guó)人中檢出率不斷升高, 孕婦這特殊群體也不可避免, 現(xiàn)階段國(guó)內(nèi)絕大部分二三級(jí)醫(yī)院檢驗(yàn)科對(duì)人群的TP 抗體篩查使用CLIA 檢測(cè)［1,2］,CLIA 有較高的特異性與靈敏度, 并且能快速標(biāo)準(zhǔn)化及準(zhǔn)確的大批量檢測(cè)出結(jié)果。目前為止任何檢測(cè)方法在檢驗(yàn)過程中難免出現(xiàn)假陽(yáng)性與假陰性結(jié)果［3,4］, 本文主要探討使用CILA 檢測(cè)孕婦的TP 抗體篩查引起假陽(yáng)性的原因。TP 感染的孕婦由于此時(shí)人體激素水平的改變可使部分孕婦心身壓力更大, 同時(shí)還危及到胎兒的健康問題, 引起諸如胎兒神經(jīng)發(fā)育、早產(chǎn)、死胎等各種問題［5,6］。現(xiàn)階段TP 抗體檢測(cè)的方法包括熒光顯微鏡法、ELISA、TPPA 和CLIA 等［7,8］。目前商品化試劑主要應(yīng)用重組TP 抗原TP15、TP47 與TP17 包被［9-12］。TP17 是β-桶狀蛋白, 維護(hù)膜結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性、趨化因子、表達(dá)粘附分子等方面起重要作用, 是含量豐富的特異性外膜蛋白抗原, 存在于各期梅毒患者病灶中；TP15是TP 外膜含量相對(duì)較少的蛋白, 目前功能還未發(fā)現(xiàn)；TP47 是青霉素結(jié)合蛋白, 可誘導(dǎo)血管間粘附分子, 是TP 外膜蛋白中含量最高的成分之一。所有的檢測(cè)方法均會(huì)受非特異性因素干擾導(dǎo)致的假陽(yáng)性, 為了使孕婦避免TP 抗體假陽(yáng)性承受不必要的精神與身體壓力、社會(huì)壓力, 緩解醫(yī)患之間的關(guān)系, 本研究探討了引起CLIA 檢測(cè)孕婦TP 抗體假陽(yáng)性的主要因素?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料 收集本院2019～2022 年期間32 份使用CLIA 檢測(cè)孕婦TP 抗體陽(yáng)性、而產(chǎn)后6 個(gè)月后再次進(jìn)行TP 抗體檢測(cè)為陰性的標(biāo)本作為假陽(yáng)性組, 同時(shí)隨機(jī)選取32 份確診為TP 感染抗體陽(yáng)性的孕婦標(biāo)本作為真陽(yáng)性組。

1.2 儀器與試劑 CLIA 為深圳邁瑞CL-6000i 化學(xué)發(fā)光免疫分析儀；所用試劑、校準(zhǔn)品與耗材均為配套,邁瑞TP 抗體檢測(cè)試劑包被TP 重組抗原(TP15-TP17-TP47), 發(fā)光物質(zhì)為3-(2-螺旋金剛烷)-4-甲氧基-4-(3-磷氧酰)-苯基-1, 2-二氧環(huán)乙烷(AMPPD), 酶為堿性磷酸酶(ALP)；TPPA 試劑采用日本株式會(huì)社檢測(cè)試劑盒, 用超聲裂解的TP(Nichols 株)作為抗原, 致敏紅色明膠顆粒, 與樣品中的TP 抗體結(jié)合, 產(chǎn)生肉眼可見的凝集反應(yīng), 稀釋倍數(shù) 1∶80 凝集判讀為陽(yáng)性結(jié)果；采用北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司包被TP 重組單一抗原的酶聯(lián)免疫試劑盒(TP15 試劑盒、TP17 試劑盒與TP47 試劑盒), 酶標(biāo)儀為鄭州安圖生物工程有限公司的Anthos2010 酶標(biāo)分析儀。

1.3 檢測(cè)方法 CLIA 檢測(cè)孕婦TP 抗體陽(yáng)性的標(biāo)本,進(jìn)行類風(fēng)濕因子(RF)檢測(cè)(自身抗體問題)與高速離心(纖維蛋白問題)后再次檢測(cè), 如仍然為TP 抗體陽(yáng)性, 進(jìn)行TPPA 驗(yàn)證以及產(chǎn)后6 個(gè)月后再次檢測(cè)TP 抗體與TPPA。兩組均應(yīng)用單基因片段包被TP15、TP17與TP47 抗原檢測(cè)相應(yīng)的抗體。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS18.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)研究數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05 表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 假陽(yáng)性組TP 抗體表達(dá)情況 32 份假陽(yáng)性組孕婦TP 抗體檢測(cè)陽(yáng)性標(biāo)本的COI 值為1.03～6.09, 其中29 份標(biāo)本TPPA 為陰性, 3 份標(biāo)本TPPA 為陽(yáng)性, 稀釋倍數(shù)在1∶80 內(nèi), 產(chǎn)后6 個(gè)月后復(fù)檢TP 與TPPA 均為陰性。

2.2 兩組抗體基因片段檢測(cè)結(jié)果比較 假陽(yáng)性組TP檢測(cè)陽(yáng)性標(biāo)本采用單基因片段包被TP15、TP17 與TP47 抗原檢測(cè)相應(yīng)的抗體, TP15 均為陰性, TP17 陽(yáng)性6 份, TP47 陽(yáng)性22 份；產(chǎn)后6 個(gè)月后復(fù)查TP、TPPA、TP15、TP17 與TP47 均為陰性。見表1。真陽(yáng)性組標(biāo)本中, TP15 陽(yáng)性20 份, TP17 陽(yáng)性26 份, TP47 陽(yáng)性11 份。見表2。假孕婦組孕期TP17、TP47 陽(yáng)性率分別為18.75%(6/32)、68.75%(22/32), 高于本組產(chǎn)后6 個(gè)月的0、0, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=6.621、33.524,P=0.010、0.000＜0.05)。假陽(yáng)性組孕期TP15 陽(yáng)性率0、TP17 陽(yáng)性率18.75%(6/32)低于真陽(yáng)性組的62.50%(20/32)、81.25%(26/32), TP47 陽(yáng)性率68.75%(22/32) 高于真陽(yáng)性組的34.38%(11/32), 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=29.091、25.000、7.570, P=0.000、0.000、0.006＜0.05)。

表1 假陽(yáng)性組孕期與產(chǎn)后6 個(gè)月TP 特異性抗體的表達(dá)

3 討論

現(xiàn)階段大部分二三級(jí)醫(yī)院已開展CLIA 檢測(cè)感染性病毒相關(guān)的抗原抗體。CLIA 有著較高的特異性與敏感性［1］, 并可批量檢測(cè)能滿足逐年增長(zhǎng)的標(biāo)本量, 特別適用于一些檢測(cè)體量比較大的綜合性醫(yī)院［2］。每種檢測(cè)方法均由非特異性的干擾引起假陽(yáng)性, 雖然現(xiàn)在多采用CLIA 進(jìn)行TP 抗體篩查, 初篩陽(yáng)性結(jié)果均會(huì)結(jié)合患者流行病學(xué)特點(diǎn)以及 TPPA 確證試驗(yàn), 以保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性, 避免引發(fā)不必要的醫(yī)療事件。但國(guó)人對(duì)性感染性疾病的認(rèn)知還是存在比較大的歧義, 會(huì)感到自卑、心身壓力與社會(huì)壓力, 特別對(duì)于一些特殊人群,例如孕婦。

通過以上分析, 孕婦TP 抗體假陽(yáng)性主要是由TP47 基因片段引起的, 可能是由于妊娠期間內(nèi)分泌自身激素的變化與胎兒異質(zhì)性問題產(chǎn)生了干擾物質(zhì)或可引起交叉反應(yīng)的自身抗體, 產(chǎn)生了體外診斷非特異性的假陽(yáng)性。相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道TP15、TP17 與TP47 重組基因片段在檢測(cè)TP 抗體的敏感性均為100%, 但特異性方面TP15 重組基因片段為96%, TP17 重組基因片段為100%, 而TP47 重組基因片段只有近20%［12］。故TP47重組基因片段對(duì)TP 抗體的檢測(cè)特異性比較低, 孕婦這種特殊的人群由于體內(nèi)巨大的變化產(chǎn)生了某些物質(zhì)影響了TP47 重組抗原與酶標(biāo)記相應(yīng)抗原非特異性結(jié)合,使體外檢測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果呈假陽(yáng)性。

雖然可通過現(xiàn)有的一些醫(yī)療手段驗(yàn)證其假陽(yáng)性的問題, 但還是會(huì)導(dǎo)致部分人的身心問題、家庭矛盾與社會(huì)壓力, 特別是孕婦這種特殊人群, 妊娠期間激素的巨大變化引起性情的改變外加假陽(yáng)性的傳染性病毒感染問題可能會(huì)引發(fā)更強(qiáng)的心身負(fù)擔(dān)、家庭與社會(huì)問題。故需進(jìn)一步研究為什么TP47 重組基因片段可引起孕婦TP 抗體假陽(yáng)性以及建議試劑產(chǎn)家生產(chǎn)單獨(dú)包被TP47重組基因片段抗原的試劑盒［13］, 對(duì)于懷疑CLIA 檢測(cè)TP 可能假陽(yáng)性的孕婦患者進(jìn)一步除檢測(cè)TPPA 驗(yàn)證外,再檢測(cè)單獨(dú)包被TP47 重組基因片段抗原的抗體, 可進(jìn)一步確定引起假陽(yáng)性的原因所在, 向患者解釋引起的問題關(guān)鍵［14］, 避免與緩解引起孕婦的各種壓力問題。本研究的主要目的是研究TP47 重組基因片段抗原易引起部分孕婦TP 抗體體外檢測(cè)假陽(yáng)性的原因, 更改試劑的非特異性問題［13,15］, 避免一些不必要的因素引起孕婦的各種壓力。

查閱一些資料與文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn), 現(xiàn)階段不論是進(jìn)口的還是國(guó)產(chǎn)的CLIA 均存在非特異性干擾, 然而熒光顯微鏡法、ELISA 與TPPA 存在敏感性、自動(dòng)化與檢測(cè)隨時(shí)性等問題, 故而目前大部分二、三級(jí)醫(yī)院采用自動(dòng)化化學(xué)發(fā)光分析儀檢測(cè)感染性病毒的抗原抗體［16］。在現(xiàn)有未改進(jìn)多重組基因片段抗原試劑盒特異性以及產(chǎn)生出單獨(dú)包被TP47 重組基因片段抗原試劑盒前, 不可避免的情況下首先需要進(jìn)行多方向的驗(yàn)證TP 抗體假陽(yáng)性的問題。另外特別需要醫(yī)務(wù)人員的解釋與關(guān)懷,消除孕婦這種特殊人群的心身負(fù)擔(dān), 積極引導(dǎo)孕婦理解檢測(cè)方法的非特異性問題, 共建和諧的醫(yī)患環(huán)境, 提高對(duì)患者的人文關(guān)懷。