李娜 劉孜 李哲 趙藍(lán)青青 熊輝

原發(fā)性痛經(jīng)(primary dysmenorrhea,PD)是指生殖器官無(wú)器質(zhì)性病變的痛經(jīng),常見(jiàn)行經(jīng)前或月經(jīng)期出現(xiàn)下腹疼痛、墜脹,伴腰酸或其他不適,程度較重可致影響生活和工作[1]。白芍為毛茛科植物芍藥PaeonialactifloraPall.的干燥根,微寒,味苦、酸,具有養(yǎng)血調(diào)經(jīng)、斂陰止汗、柔肝止痛、平抑肝陽(yáng)等功效。白芍化學(xué)成分豐富,主要包括萜類(lèi)類(lèi)、黃酮類(lèi)、鞣質(zhì)類(lèi)等。程天緣[2]等人通過(guò)中醫(yī)傳承輔助平臺(tái)中的“方劑分析”功能,經(jīng)過(guò)篩選與總結(jié),得到治療痛經(jīng)的中成藥配方中常用中藥10味,其中白芍排在第四位?！侗静菡x》記載“補(bǔ)血,益肝脾真陰,而收攝脾氣之散亂,肝氣之恣橫,則白芍也”“故益陰養(yǎng)血,滋潤(rùn)肝脾,皆用白芍”,說(shuō)明白芍正是治療痛經(jīng)的首選中藥。白芍藥效的發(fā)揮與其質(zhì)量密切相關(guān),現(xiàn)行白芍質(zhì)控指標(biāo)主要定位在芍藥苷,指標(biāo)單一,且與有效性和安全性關(guān)聯(lián)性差,無(wú)法有效控制白芍質(zhì)量[3]。因此本研究擬采用UPLC-Q-TOF-MS對(duì)白芍中的化學(xué)成分進(jìn)行系統(tǒng)表征,聯(lián)合網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法和質(zhì)量標(biāo)志物的理論,對(duì)白芍的質(zhì)量標(biāo)志物進(jìn)行預(yù)測(cè)。

1 材料與方法

1.1 儀器與材料

SOIENTZ-18N型冷凍干燥機(jī)(寧波新芝生物科技股份有限公司);Triple TOFTM5600質(zhì)譜儀(美國(guó)AB SCIEX公司);ExionLCTM型超高效液相色譜儀(美國(guó)AB SCIEX公司);Analsyt TF 1.6軟件(美國(guó)AB SCIEX公司);CPA225D型電子天平(北京賽多利斯科學(xué)儀器有限公司);白芍飲片購(gòu)自河北荷花池藥業(yè)有限公司(批號(hào):C2232012004),經(jīng)承德醫(yī)學(xué)院蘇占輝教授鑒定為毛茛科植物芍藥PaeonialactifloraPall.的干燥根;屈臣氏飲用水(廣州屈臣氏食品飲料有限公司);甲酸(賽默飛世爾科技(中國(guó))有限公司);乙腈(美國(guó)Fisher公司);甲醇(德國(guó)Merck公司)。

1.2 供試品的制備

取白芍飲片粉末0.1 g,精密稱(chēng)定,置于具塞錐形瓶中,精密加入50%甲醇5 mL,稱(chēng)定重量,超聲處理(800 W,40 kHZ)30分鐘,放冷,再稱(chēng)定重量,用50%甲醇補(bǔ)足重量,13000 r/min 4℃離心10分鐘,取上清液過(guò)0.22 μm有機(jī)濾膜,即為供試品溶液。

1.3 色譜條件

色譜柱為Waters ACQUITY UPLC?HSS T3 (2.1×100 mm, 1.8 μm );流動(dòng)相A為0.1%甲酸水,流動(dòng)相B為0.1%甲酸乙腈,梯度洗脫見(jiàn)表1;進(jìn)樣量3 μL;柱溫:30 ℃。

表1 色譜條件

1.4 質(zhì)譜條件

離子源為ESI源,采用正負(fù)離子化模式檢測(cè):正負(fù)離子模式噴霧電壓為5.5 kV/-4.5 kV,裂解電壓為100 V/-100 V,碰撞能35 eV/-35 eV,霧化氣55 psi,輔助氣55 psi,氣簾氣35 psi。數(shù)據(jù)采用一級(jí)和二級(jí)結(jié)合的掃描模式(MS/MS2),質(zhì)量范圍均為m/z50～1200,裂解電壓100 V/-100 V,離子源溫度為550 ℃,儀器每隔2小時(shí)校正一次質(zhì)量軸。

1.5 化學(xué)成分鑒定

使用MarkerView軟件將質(zhì)譜原始導(dǎo)入。進(jìn)行保留時(shí)間矯正、峰識(shí)別、峰提取、峰積分、峰對(duì)齊等工作,同時(shí)創(chuàng)建復(fù)方中相應(yīng)中藥代謝庫(kù),利用標(biāo)準(zhǔn)品二級(jí)質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫(kù)(HMDB、Massbank等)、參考文獻(xiàn)及相應(yīng)裂解規(guī)律匹配法對(duì)含有MSMS數(shù)據(jù)的峰進(jìn)行物質(zhì)鑒定。

1.6 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析

1.6.1 白芍成分作用靶點(diǎn)預(yù)測(cè) 將鑒定得到的化合物根據(jù)OB≥20%或者DL≥0.1篩選出活性成分。在TCMSP中搜索成分,得到對(duì)應(yīng)的相關(guān)靶點(diǎn)。未在TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)記錄靶點(diǎn)的化合物,通過(guò)PubChem搜索得到SMILE號(hào),使用SMILE號(hào)在Swiss Target Prediction預(yù)測(cè)相關(guān)靶點(diǎn)。

1.6.2 疾病靶點(diǎn)篩選 在Therapeuic Tarrget Database數(shù)據(jù)庫(kù)與Comparative Toxicogenomics Database數(shù)據(jù)庫(kù)中搜索“primary dysmenorrhea”,將得到的疾病靶點(diǎn)取并集,作為疾病靶點(diǎn)。

1.6.3 蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 將交集靶點(diǎn)導(dǎo)入String數(shù)據(jù)庫(kù)中,進(jìn)行蛋白—蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)分析,并導(dǎo)出數(shù)據(jù)。將數(shù)據(jù)導(dǎo)入Cytoscape 3.9.1軟件,獲得PPI網(wǎng)絡(luò)圖,計(jì)算節(jié)點(diǎn)連接數(shù)degree,篩選出大于雙倍平均值作為核心靶點(diǎn)。

1.6.4 GO和KEGG通路富集 將核心靶點(diǎn)導(dǎo)入DAVID數(shù)據(jù)庫(kù),進(jìn)行白芍治療原發(fā)性痛經(jīng)的基因本體論(gene ontology,GO)與KEGG通路富集分析。篩選條件為FDR≤0.01和P-Value≤0.05。將數(shù)據(jù)按照counts降序排序,分子功能(molecular function,MF)、生物過(guò)程(biological process,BP)、細(xì)胞組分(cell components,CC)分別取前10,KEGG通路取前20,作為分析對(duì)象,并進(jìn)行可視化繪圖。

1.6.5 候選質(zhì)量標(biāo)志物與核心靶點(diǎn)分子對(duì)接分析 利用Cytoscape在“成分—靶點(diǎn)—疾病網(wǎng)絡(luò)圖”中選擇Degree值高的活性成分作為候選質(zhì)量標(biāo)志物,與核心靶點(diǎn)進(jìn)行分析對(duì)接。從PubChem數(shù)據(jù)庫(kù)中下載候選質(zhì)量標(biāo)志物小分子SDF格式文件,使用Chem3D軟件將SDF文件轉(zhuǎn)化為mol文件。從PDB數(shù)據(jù)庫(kù)獲得核心靶點(diǎn)的蛋白結(jié)構(gòu)。運(yùn)用AutoDockTools1.5.6軟件對(duì)蛋白結(jié)構(gòu)進(jìn)行優(yōu)化,找到蛋白活性口袋。使用AutoDock Vina和Python腳本進(jìn)行分子對(duì)接,得到結(jié)果數(shù)據(jù)。在Protein-Ligand Interaction Profiler網(wǎng)站進(jìn)行驗(yàn)證。然后使用PyMOL對(duì)小分子和蛋白結(jié)合模式進(jìn)行可視化,并分析關(guān)鍵結(jié)合位點(diǎn)。

2 結(jié)果

2.1 基于UPLC-QTOF-MS/MS的白芍化學(xué)成分識(shí)別

共鑒定得到64種化合物(表2和表3),在PeakView軟件中導(dǎo)出基峰色譜圖(如圖1,圖2),將64個(gè)化合物標(biāo)在相應(yīng)位置上。這些化合物主要包括有機(jī)酸類(lèi)、單萜苷類(lèi)、黃酮類(lèi)化合物等。有機(jī)酸類(lèi)化合物有檸檬酸、丹皮酚等。單萜類(lèi)化合物主要有芍藥內(nèi)酯苷、牡丹皮苷F、羥基芍藥苷、芍藥苷亞硫酸酯等。黃酮類(lèi)有柚皮素、兒茶素、表兒茶素,鞣質(zhì)有沒(méi)食子酸、沒(méi)食子酸乙酯等。以芍藥內(nèi)酯苷為例進(jìn)行成分表征闡述,如圖2,二級(jí)質(zhì)譜有m/z77.0387、m/z121.0284、m/z283.0817、m/z479.1542四個(gè)峰。根據(jù)參考文獻(xiàn)推斷,m/z479.1542為[M-H]-準(zhǔn)分子離子峰,特征離子峰m/z283為[M-H-CO2-C7H5O2]-,其中CO2為內(nèi)酯環(huán)斷裂失去酯基,m/z121.0287是分子源內(nèi)裂解形成的苯甲酸負(fù)離子。

圖1 在正負(fù)離子模式下采集白芍飲片的基峰色譜圖

圖2 在負(fù)離子模式下推斷的芍藥內(nèi)酯苷二級(jí)裂解機(jī)制

表2 負(fù)離子模式下鑒定白芍飲片的化學(xué)成分信息

表3 正離子模式下鑒定的白芍化學(xué)成分信息

2.2 活性成分靶點(diǎn)與疾病靶點(diǎn)預(yù)測(cè)

篩選得到活性成分36個(gè),在TCMSP與Swiss Target Prediction數(shù)據(jù)庫(kù)檢索到對(duì)應(yīng)的靶點(diǎn)697個(gè)。Therapeuic Tarrget Database與Comparative Toxicogenomics Database數(shù)據(jù)庫(kù)搜索到疾病靶點(diǎn)1693個(gè)。共有靶點(diǎn)去除重復(fù)后結(jié)果表明,36個(gè)有效成分與原發(fā)性痛經(jīng)有共同靶基因76 個(gè)。將白芍活性成分、原發(fā)性痛經(jīng)及其共同靶點(diǎn)導(dǎo)入Cytoscape進(jìn)行可視化得到成分—靶點(diǎn)—疾病網(wǎng)絡(luò)圖(圖3)。結(jié)果表明,同一個(gè)化合物分子可以對(duì)應(yīng)多個(gè)靶標(biāo),一個(gè)靶標(biāo)基因亦對(duì)應(yīng)多個(gè)化合物,體現(xiàn)了白芍多成分、多靶點(diǎn)和多通路的作用機(jī)制。

2.3 蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

利用String數(shù)據(jù)庫(kù)獲得各個(gè)核心靶點(diǎn)的Degree值,并進(jìn)行排序,篩選得到核心靶點(diǎn)10個(gè)(圖4),包括腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor,TNF)、白細(xì)胞介素6(interleukin 6,IL-6)、雌激素受體1(estrogen receptor1,ESR1)、前列腺素內(nèi)過(guò)氧化物酶合酶2(prostaglandin-endoperoxidase synthase 2,PTGS2)、Bcl-2樣蛋白1(Bcl-2-like protein 1,BCL2L1)、熱休克蛋白90α(heat shock protein HSP 90-alpha,HSP90AA1)、基質(zhì)金屬蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP9)、信號(hào)傳導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)、過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ(peroxisome proliferator-activated receptor gamma,PPARG)、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子A(vascular endothelial growth factor A,VEGFA)使用Cytoscape將蛋白互作網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行可視化(圖5)。

圖4 基于String數(shù)據(jù)庫(kù)獲得的核心靶點(diǎn)Degree排序條狀圖

圖5 基于Cytoscape軟件繪制76個(gè)核心蛋白靶點(diǎn)互作網(wǎng)絡(luò)和Degree熱圖

2.4 GO分類(lèi)富集分析

將蛋白靶點(diǎn)互作網(wǎng)絡(luò)中的76靶點(diǎn)蛋白靶點(diǎn)導(dǎo)入DAVID數(shù)據(jù)庫(kù),導(dǎo)出通路分析結(jié)果,篩選FDR≤0.01,且PValue≤0.05的通路,得到BP 55條,CC 16條,MF 19條。根據(jù)Counts值分別取前10條進(jìn)行GO分析(圖6)。

圖6 基于76個(gè)核心靶點(diǎn)富集的排名前10的GO富集分析氣泡圖

2.5 KEGG通路分析

在DAVID數(shù)據(jù)庫(kù)導(dǎo)出結(jié)果中,按照counts進(jìn)行排序,篩選FDR≤0.01,且PValue≤0.05的通路,選取前20條進(jìn)行分析,結(jié)果如圖7。包括15條通路與人類(lèi)疾病相關(guān),有癌癥通路、心血管疾病、神經(jīng)變性疾病、病毒性傳染病、細(xì)菌性傳染病、內(nèi)分泌和代謝性疾病相同通路;4條為環(huán)境信息處理類(lèi),參與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),包括磷脂酰肌醇三羥基激酶—蘇氨酸激酶(phosphoInositide-3 kinase-protein kinase B,PI3K/Akt)、絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)、腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor,TNF)、低氧誘導(dǎo)因子1(hypoxia induced factor 1,HIF-1)的信號(hào)通路;1條為免疫系統(tǒng)相關(guān),是白細(xì)胞介素17(interleukin 17,IL-17)信號(hào)通路。

圖7 基于76個(gè)核心靶點(diǎn)富集的排名前20的KEGG通路氣泡圖

2.6 分子對(duì)接

選擇6個(gè)核心靶點(diǎn)蛋白BCL2L1、HSP90AA1、MMP9、STAT3、PPARG、VEGFA與對(duì)應(yīng)的4個(gè)活性成分(柚皮素、牡丹皮苷I、芍藥內(nèi)酯苷、芍藥內(nèi)酯C)進(jìn)行分子對(duì)接。一般認(rèn)為結(jié)合能<-5 kcal/mol的對(duì)接結(jié)果較為理想,對(duì)接結(jié)果均滿(mǎn)足要求,結(jié)合位點(diǎn)視圖如圖7。小分子多用非共價(jià)鍵相互作用與蛋白連接,包括氫鍵、離子鍵與π-π堆積作用。如牡丹皮苷I與HSP90AA1的分子對(duì)接(圖8 K),有平行π-π堆積作用(PHE-138)、垂直的π-π堆積作用(TRP-162)以及5個(gè)氫鍵連接位點(diǎn)(ASN-51、ASN-51、ASP-54、LYS-58、GLY-135)和疏水相互作用(VAL-150)。芍藥內(nèi)酯苷通過(guò)離子鍵(ARG-143)與MMP9的連接(圖8B)。

注:A 柚皮素-BCL2L1;B 牡丹皮苷I-HSP90AA1;C 芍藥內(nèi)酯苷-HSP90AA1;D 牡丹皮苷I-MMP9;E 芍藥內(nèi)酯苷-MMP9;F 芍藥內(nèi)酯C-MMP9;G 芍藥內(nèi)酯C-STAT3;H 柚皮素-PPARG;I 柚皮素-VEGFA;J 牡丹皮苷I-VEGFA;K 芍藥內(nèi)酯苷-VEGFA圖8 活性成分與核心靶點(diǎn)分子對(duì)接結(jié)合能<-5 kcal/mol的各個(gè)對(duì)接可視化圖

3 討論

本實(shí)驗(yàn)聯(lián)合UPLC-Q-TOF-MS與網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)技術(shù)對(duì)白芍治療原發(fā)性痛經(jīng)的質(zhì)量標(biāo)志物進(jìn)行探究。首先利用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)共鑒定出62種化學(xué)成分,篩選出活性成分36個(gè)。在“白芍—成分—靶點(diǎn)—疾病”網(wǎng)路圖中,篩選出高degree值作為關(guān)鍵成分,包括芍藥內(nèi)酯苷、牡丹皮苷I、柚皮素和芍藥內(nèi)酯C。Liu等[4]發(fā)現(xiàn)芍藥內(nèi)酯苷對(duì)神經(jīng)病理性疼痛大鼠具有鎮(zhèn)痛作用,其機(jī)制可能與調(diào)控中樞核苷酸結(jié)合寡聚結(jié)構(gòu)域,富含亮氨酸重復(fù)序列和含1個(gè)Pyrin結(jié)構(gòu)域(nucleotide- binding oligomerization domain, leucine- rich repeat and pyrin domain- containing 1,NLRP1)和核苷酸結(jié)合寡聚結(jié)構(gòu)域,富含亮氨酸重復(fù)序列和含Pyrin結(jié)構(gòu)域3(nucleotide- binding oligomerization domain, leucine- rich repeat and pyrin domain- containing 1,NLRP1)炎癥小體活性以及抑制脊髓膠質(zhì)細(xì)胞激活降低白細(xì)胞介素1β(interleukin 1β,IL-1β)水平有關(guān)。柚皮素來(lái)源豐富,藥理作用廣泛。Arora等[5]研究柚皮素對(duì)慢性睡眠剝奪誘導(dǎo)的小鼠機(jī)械和熱痛覺(jué)過(guò)敏的影響,發(fā)現(xiàn)柚皮素對(duì)抗痛覺(jué)過(guò)敏反應(yīng)的同時(shí)降低氧化應(yīng)激和炎癥因子的表達(dá)水平。Kim等[6]發(fā)現(xiàn)芍藥甘草湯中治療神經(jīng)性疼痛的有效成分包括芍藥內(nèi)酯C、丹皮酚和苯甲酸等,其發(fā)揮作用的機(jī)制與調(diào)節(jié)亞油酸代謝、α-亞麻酸代謝和花生四烯酸代謝等途徑有關(guān)。牡丹皮苷I目前尚無(wú)藥理學(xué)研究和報(bào)道,但從本實(shí)驗(yàn)可以看出與核心靶點(diǎn)親合力強(qiáng)。從以上文獻(xiàn)調(diào)研可以看出芍藥內(nèi)酯苷、牡丹皮苷I、柚皮素和芍藥內(nèi)酯C對(duì)原發(fā)性痛經(jīng)具有潛在的止痛效應(yīng)。

通過(guò)蛋白互作網(wǎng)絡(luò)分析獲得6個(gè)核心靶點(diǎn),包括BCL2L1、HSP90AA1、MMP9、PPARG、STAT3、VEGFA。將這些核心靶點(diǎn)進(jìn)行KEGG通路富集分析,涉及PI3K-Akt、MAPK、TNF、HIF-1、IL-17等信號(hào)通路。IL-17和TNF信號(hào)通路被認(rèn)為是炎癥反應(yīng)的關(guān)鍵通路,在類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型中發(fā)現(xiàn)關(guān)節(jié)內(nèi)注射IL-17可增加TNF-α、IL-1β的表達(dá),誘導(dǎo)痛覺(jué)反應(yīng)發(fā)生[7]。MMP9參與IL-17與TNF信號(hào)通路的調(diào)節(jié),推測(cè)白芍可能通過(guò)調(diào)節(jié)體炎癥因子的表達(dá),抑制炎癥反應(yīng),從而起到緩解痛經(jīng)的作用。PI3K/Akt信號(hào)通路是調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖和凋亡的重要通路,該通路中的PI3K、Akt以磷酸化的形式發(fā)生激活后能夠?qū)Φ蛲稣{(diào)節(jié)因子BAX(apoptosis regulator BAX,Bax)、Bcl-2相關(guān)細(xì)胞死亡激動(dòng)劑(Bcl-2 associated agonist of cell death,Bad)等促凋亡基因的表達(dá)產(chǎn)生抑制作用而促進(jìn)Bcl-2等相關(guān)抗凋亡基因的表達(dá)。而當(dāng)缺血缺氧、缺血再灌注等病理因素作用于細(xì)胞時(shí),PI3K/Akt通路受到抑制并使其抗凋亡作用減弱。Pi等[8]研究發(fā)現(xiàn)在小鼠心臟手術(shù)期間,異氟醚通過(guò)PI3K/Akt信號(hào)通路減輕疼痛并抑制小鼠心肌細(xì)胞凋亡,提示激活PI3K/Akt信號(hào)通路,可能緩解疼痛。也有研究顯示單神經(jīng)病理性疼痛的早期發(fā)展階段MAPK信號(hào)通路發(fā)揮重要作用,一旦被激活會(huì)介導(dǎo)TNF-α引發(fā)痛覺(jué)效應(yīng)[9]。有報(bào)道激活HIF-1信號(hào)通路可減少神經(jīng)病理性疼痛中的機(jī)械性痛覺(jué)反應(yīng)行為,其通路上的關(guān)鍵靶點(diǎn)VEGFA,可特異性地作用于內(nèi)皮細(xì)胞,誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng),促進(jìn)細(xì)胞遷移和抑制細(xì)胞凋亡[10]。實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)原發(fā)性痛經(jīng)患者子宮內(nèi)膜VEGFA的表達(dá)顯著高于正常女性子宮內(nèi)膜的表達(dá)[11],說(shuō)明我們篩選出的靶點(diǎn)的可信度較高。STAT3是一種轉(zhuǎn)錄激活因子,STAT3能與HIF-1α結(jié)合促進(jìn)炎癥因子的釋放,研究發(fā)現(xiàn)STAT3的激活有效減輕大鼠神經(jīng)病理性疼痛和炎癥反應(yīng)[12]。HSP90AA1屬于HSP家族的HSP90亞家族,是最重要的熱休克蛋白之一,在免疫和炎癥中發(fā)揮重要作用。PPARG是一種配體依賴(lài)的核轉(zhuǎn)錄因子,可通過(guò)調(diào)節(jié)IL-17和TNF信號(hào)通路參與免疫炎癥反應(yīng)調(diào)控機(jī)體的生理和病理過(guò)程[13]。將6個(gè)核心靶點(diǎn)與其對(duì)應(yīng)的4個(gè)活性成分進(jìn)行分子對(duì)接。我們發(fā)現(xiàn)對(duì)接結(jié)果均符合結(jié)合能<-5 kal/mol,可認(rèn)為親和力較強(qiáng)。

質(zhì)量標(biāo)志物需要滿(mǎn)足復(fù)方配伍、質(zhì)量傳遞與溯源、特有性、有效性、可測(cè)性的五原則。芍藥內(nèi)酯苷是芍藥屬植物主要的單萜類(lèi),就目前所知僅分布于芍藥屬植物,因此是芍藥屬特征性化學(xué)成分。芍藥內(nèi)酯C是來(lái)自芍藥的薄荷烷類(lèi)似物,也屬于白芍特有成分,滿(mǎn)足特有性原則。曾潔等[14]利用高效液相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用方法建立測(cè)定大鼠血漿中芍藥內(nèi)酯苷含量的分析方法,發(fā)現(xiàn)芍藥內(nèi)酯苷在大鼠體內(nèi)能夠被迅速吸收。另有中藥復(fù)方的藥動(dòng)學(xué)研究發(fā)現(xiàn),白芍與當(dāng)歸配伍可以顯著增加芍藥內(nèi)酯苷的達(dá)峰時(shí)間以及末端消除半衰期,延長(zhǎng)其在體內(nèi)的滯留時(shí)間[15],證明芍藥內(nèi)酯苷能有效傳遞至血液中,滿(mǎn)足傳遞性原則。而牡丹皮苷I和柚皮素來(lái)源豐富,特有性較差,不適合作為質(zhì)量標(biāo)志物。結(jié)合芍藥內(nèi)酯苷、芍藥內(nèi)酯C的化學(xué)結(jié)構(gòu)分析可知有紫外吸收,推測(cè)其可用于定性定量分析。綜上所述,我們認(rèn)為芍藥內(nèi)酯苷、芍藥內(nèi)酯C可作為白芍的質(zhì)量標(biāo)志物。

本項(xiàng)目以辨識(shí)白芍治療原發(fā)性痛經(jīng)的定向藥效質(zhì)量標(biāo)志物為主要研究目標(biāo),綜合采用UPLC-Q-TOF-MS和網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)技術(shù)探究白芍化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)及其作用機(jī)制,鎖定白芍治療原發(fā)性痛經(jīng)定向功效的質(zhì)量標(biāo)志物,包括芍藥內(nèi)酯C、芍藥內(nèi)酯苷,為基于定向功效的白芍質(zhì)量有效性評(píng)價(jià)提供科學(xué)依據(jù)。