李素華，吳紹鋒

（1.廣東省中醫(yī)院藥學(xué)部，廣東 廣州 510006；2.廣州中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院實驗教學(xué)中心，廣東 廣州 510006）

硫酸氫氯吡格雷[1-2]是血小板聚集抑制劑，主要用于患者預(yù)防動脈粥樣硬化血栓的形成。目前已有報道測定本品殘留溶劑，但是，由于生產(chǎn)工藝不同，所用到的殘留溶劑也各有差異，本品在生產(chǎn)過程中用到的4 種殘留溶劑，分別為甲醇、乙醇、丙酮和乙酸乙酯。目前未見報道同時測定上述4 種殘留溶劑[3-5]。參照《中國藥典》2015 年版與人用藥品注冊技術(shù)規(guī)范國際協(xié)調(diào)會（ICH）相關(guān)要求，建立適合生產(chǎn)工藝的頂空氣相色譜法測定硫酸氫氯吡格雷中甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯4 種殘留溶劑方法。本法靈敏、準(zhǔn)確，可用于有效檢測硫酸氫氯吡格雷中有機殘留溶劑。

1 儀器、樣品與試劑

儀器：7890B 氣相色譜儀，氫火焰離子化檢測器（FID）；Agilent 7694E 頂空進樣器。

硫酸氫氯吡格雷，北京藥物研究院化藥部提供；甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯，色譜純，邁瑞達；N,N-二甲基甲酰胺（DMF），HS-GC，CNW。

2 實驗方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：DB-624（6%氰丙基苯基-94%甲基聚硅氧烷，30 m×0.53 mm×3.0 μm）毛細管色譜柱；檢測器：FID；檢測器溫度：250 ℃；氮氣為載氣，流速為3.0 mL/min，分流進樣，分流比為3∶1；程序升溫：起始溫度為40 ℃，維持6 min，以10 ℃/min 的速率升溫至200 ℃，維持8 min；頂空平衡溫度為80 ℃，平衡時間為30 min；進樣量：1 mL。

2.2 溶液的配制

2.2.1 對照品貯備溶液

精密稱取甲醇615.20 mg、乙醇1 002.12 mg、丙酮1 000.25 mg、乙酸乙酯1 020.19 mg，置于同一20 mL量瓶中，加DMF 溶解并稀釋至刻度，精密量取1 mL置于50 mL 量瓶中，加DMF 溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液。

2.2.2 對照品溶液

精密稱取對照品貯備液5.0 mL 置于10 mL 量瓶中，用DMF 溶解并稀釋至刻度，混勻，即得對照品溶液。精密量取2 mL 置于頂空瓶中，軋蓋，密封。

2.2.3 供試品溶液

精密稱取本品0.20 g 于頂空瓶中，加入DMF 2.0 mL，軋蓋密封，溶解，作為供試品溶液。

2.3 系統(tǒng)適用性實驗

取空白溶劑DMF、對照品溶液和供試品溶液，按“2.1”中色譜條件進樣分析，記錄色譜圖。結(jié)果表明，空白溶劑DMF 無干擾，上述4 種溶劑峰型良好，出峰順序分別為甲醇、乙醇、丙酮和乙酸乙酯，分離度均大于2.0。

2.4 線性關(guān)系考察

精密量取對照品貯備溶液1.0、2.5、4.0、5.0、9.0 mL置10 mL 量瓶中，用DMF 稀釋至刻度，混勻，得到對照品系列溶液Ⅰ-Ⅵ。分別量取對照品系列溶液2.0 mL 置頂空瓶中，密閉，按上述“2.1”中色譜條件進樣分析。以峰面積（A）為縱坐標(biāo)，質(zhì)量濃度（ρ）為橫坐標(biāo)，進行線性回歸，結(jié)果表明甲醇質(zhì)量濃度在61.52～615.20 μg/mL 范圍內(nèi)、乙醇質(zhì)量濃度在100.21～10 002.12 μg/mL 范圍內(nèi)、丙酮質(zhì)量濃度在100.03～1 000.25 μg/mL范圍內(nèi)、乙酸乙酯質(zhì)量濃度在102.02～1 020.19μg/mL 范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好（見圖1）。

圖1 甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯線性圖

2.5 進樣精密度實驗

精密量取對照品溶液2.0mL 置頂空瓶中，軋蓋，密封，平行6 份，按“2.1”中色譜條件進樣分析，計算甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯的RSD，結(jié)果見表1。

表1 進樣精密度結(jié)果

由表1 可知：甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯RSD 均不大于40%，表明儀器進樣精密度良好。

2.6 定量限和檢測限

將“2.2.2”項下對照品溶液用DMF 逐級稀釋進樣，當(dāng)信噪比（S/N）=10 時，為檢測限濃度，當(dāng)信噪比（S/N）=3 時為檢測限濃度，結(jié)果見表2。

表2 靈敏度結(jié)果

由表2 可知，該法靈敏度高，供試品濃度滿足本品中殘留溶劑檢測。

2.7 重復(fù)性

同一批樣品平行測定6 次，按外標(biāo)法計算供試品中待測溶劑的殘留量，并對6 次測定結(jié)果進行比較，來評價方法的重復(fù)性。結(jié)果見表3。

表3 殘留溶劑-重復(fù)性結(jié)果

由表3 可知，同一批樣品6 次結(jié)果測定值基本一致，表明方法重復(fù)性好。

2.8 加樣回收率

精密稱取9 份20191212 批樣品0.20 g 于頂空瓶中，分別加入Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ對照品系列溶液2.0 mL，各3 份，密閉，使溶解。按“2.1”中色譜條件進樣分析結(jié)果見表4～表7。

表4 甲醇加樣回收實驗結(jié)果（n=9）

表5 乙醇加樣回收實驗結(jié)果（n=9）

表6 丙酮加樣回收實驗結(jié)果（n=9）

表7 乙酸乙酯加樣回收實驗結(jié)果（n=9）

由表4～表7 可知，甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯的平均回收率均在90%～110%，RSD%均小于5，說明供試品對殘留溶劑的檢測無干擾，本方法準(zhǔn)確度高。

2.9 樣品測定

取硫酸氫氯吡格雷四批樣品（批號：20191213、20191215、20191217、20191219）按“2.2”中溶液配制方法，按“2.1”中色譜條件進樣分析，按外標(biāo)法計算4 種有機溶劑殘留量，結(jié)果見表8。

表8 樣品測定結(jié)果（n=3）

3 結(jié)論

該法選用DB-624 色譜柱是考慮到4 種溶劑的極性為中等偏高極性，且為實驗室常用的氣相色譜柱。方法驗證過程中對進樣口溫度±2 ℃，氮氣流速±0.2 mL/min，分流比±1，頂空平衡溫度±5 ℃，平衡時間±5 min 作了耐用性考察，結(jié)果顯示耐用性良好。綜上所述，本方法適用于同時分析硫酸氫氯吡格雷中4 種殘留溶劑，方法靈敏、準(zhǔn)確，可用于有效檢測硫酸氫氯吡格雷中有機殘留溶劑的檢測。