徐沛蕾，孫喜蓉，薛慧，夏雯瑩，龔恒芬

上海市浦東新區(qū)精神衛(wèi)生中心檢驗(yàn)科，上海 200124

抑郁癥是一種威脅人類身心健康的重要精神疾病，也是全球殘疾的主要原因之一，其往往具有致命性[1]。重度抑郁癥患者常表現(xiàn)出各種關(guān)鍵功能的改變，包括睡眠、食欲、精神運(yùn)動(dòng)活動(dòng)、認(rèn)知及情緒[2]。目前抑郁癥疾病嚴(yán)重程度的評(píng)估主要依賴于對(duì)患者體征的判斷，仍缺乏客觀明確的生物學(xué)標(biāo)志物，使得誤診率及漏診率較高[3]。研究顯示，環(huán)狀RNA 參與調(diào)控抑郁癥的進(jìn)展，但其在抑郁癥中的臨床價(jià)值需要進(jìn)一步探索[4]。circDYM是微小RNA-9的海綿，沉默微小RNA-9可抑制脂多糖誘導(dǎo)的海馬小膠質(zhì)細(xì)胞活化，而小膠質(zhì)細(xì)胞可參與各種神經(jīng)病理[5]?；诖?，本研究通過檢測抑郁癥患者血清circDYM水平，分析其表達(dá)變化與抑郁癥患者病情嚴(yán)重程度的關(guān)系，為疾病評(píng)估提供新思路。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2019年10月至2022年7月上海市浦東新區(qū)精神衛(wèi)生中心收治的118例抑郁癥患者作為觀察組。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)診斷符合國際疾病分類第11 版中抑郁障礙的標(biāo)準(zhǔn)[6]；(2)臨床資料完整者；(3)實(shí)驗(yàn)室相關(guān)檢查排除其他中樞神經(jīng)系統(tǒng)障礙疾病。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)急慢性感染、免疫功能異常者；(2)因外源性藥物等導(dǎo)致的認(rèn)知功能障礙者；(3)多器官受損者；(4)無法配合完成抑郁癥檢查者。同期選取109 例本院體檢正常、記憶力良好、無焦慮、抑郁等精神障礙的志愿者作為對(duì)照組。本研究經(jīng)上海市浦東新區(qū)精神衛(wèi)生中心臨床研究倫理委員會(huì)審批，所有研究對(duì)象家屬均知情并簽署知情同意書。

1.2 血清circDYM 水平檢測 采集觀察組和對(duì)照組受檢者清晨空腹5 mL外周靜脈血樣(抑郁癥患者取治療前和治療3個(gè)月后血清)，室溫放置1 h后，離心機(jī)3 500 r/min 離心處理10 min，保留上層血清保存于無菌干燥EP 管中，-80℃保存待測。按照Trizol 提取試劑盒(試劑盒購自北京百奧創(chuàng)新科技有限公司，貨號(hào)：EZB-TZ1)說明書提取血清總RNA，使用反轉(zhuǎn)錄試劑盒(試劑盒購自北京伊塔生物科技有限公司，貨號(hào)：YT9036)將RNA 反轉(zhuǎn)錄為cDNA，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(quantitative real-time PCR，qRT-PCR)法檢測血清circDYM 表達(dá)水平。反應(yīng)體系：cDNA 模板(50 ng/μL)2 μL，上下游引物(10 μmol/L)各0.8 μL，SYBR?Green Mix 10 μL，ddH2O 6.4 μL。反應(yīng)程序：95℃預(yù)熱30 s；95℃15 s，60℃15 s，72℃15 s。反應(yīng)結(jié)束后收集數(shù)據(jù)，對(duì)CT值進(jìn)行分析，采用2-△△CT法計(jì)算circDYM相對(duì)表達(dá)量，引物序列見表1，引物由北京華大基因公司合成。

表1 qRT-PCR引物序列Table 1 qRT PCR primer sequences

1.3 抑郁程度評(píng)估 采用17 項(xiàng)漢密爾頓抑郁量表(Hamilton Depression Scale 17，HAMD-17)評(píng)估觀察組患者的抑郁程度，無抑郁評(píng)分≤7分，輕度抑郁評(píng)分8~16 分，中度抑郁評(píng)分17~23 分，重度抑郁評(píng)分≥24分，評(píng)分越高代表抑郁程度越高。

1.4 治療及隨訪 采用成都康弘藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司生產(chǎn)的鹽酸文拉法辛緩釋片(國藥準(zhǔn)字H20070270)對(duì)觀察組患者進(jìn)行治療，口服劑量為75 mg/d，連續(xù)治療3 個(gè)月后評(píng)估療效。HAMD-17 評(píng)分減分率≥75%則為治療顯效，評(píng)分減分率50%~74%則為治療好轉(zhuǎn)，評(píng)分減分率<50%則為治療無效，治療有效=治療顯效+治療好轉(zhuǎn)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS23.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)。計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料檢驗(yàn)后符合正態(tài)分布，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示，兩組采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，三組采用單因素方差分析，進(jìn)一步兩兩比較采用SNK-q 檢驗(yàn)；采用Pearson 相關(guān)性分析檢驗(yàn)抑郁癥患者circDYM 水平與HAMD-17 評(píng)分的相關(guān)性；采用受試者工作特征曲線(receiver operating characteristic curve，ROC)分析血清circDYM 水平對(duì)抑郁癥嚴(yán)重程度的評(píng)估價(jià)值。以P<0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組受檢者的一般資料比較 兩組受檢者的年齡、性別、BMI、吸煙史、飲酒史、受教育年限、高血壓史、糖尿病史、結(jié)婚患者比例及甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)水平比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表2。

表2 兩組受檢者的一般資料比較[，例(%)]Table 2 Comparison of general information between two groups of subjects[,n(%)]

表2 兩組受檢者的一般資料比較[，例(%)]Table 2 Comparison of general information between two groups of subjects[,n(%)]

指標(biāo)年齡(歲)男性BMI(kg/m2)吸煙史飲酒史受教育年限(年)高血壓史糖尿病史結(jié)婚TG(mmol/L)TC(mmol/L)LDL-C(mmol/L)HDL-C(mmol/L)對(duì)照組(n=109)50.84±7.85 49(44.95)22.98±1.95 42(38.53)24(22.02)13.94±3.62 48(44.04)22(20.18)74(67.89)1.06±0.38 4.62±1.01 2.20±0.32 1.24±0.30觀察組(n=118)51.02±7.93 53(44.92)22.76±1.97 45(38.14)26(22.03)14.06±3.07 52(44.07)26(22.03)78(66.10)1.10±0.37 4.68±0.95 2.28±0.45 1.20±0.36 t/χ2值0.172 0.000 0.845 0.004 0.000 0.270 0.000 0.116 0.348 0.803 0.461 1.532 0.905 P值0.864 0.995 0.399 0.951 0.998 0.787 0.996 0.733 0.555 0.423 0.645 0.127 0.366

2.2 兩組受檢者的血清circDYM水平及HAMD-17評(píng)分比較 觀察組患者的血清circDYM水平明顯低于對(duì)照組，HAMD-17評(píng)分明顯高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表3。

表3 兩組受檢者的血清circDYM水平及HAMD-17評(píng)分比較()Table 3 Comparison of serum circDYM level and HAMD-17 score between the two groups()

表3 兩組受檢者的血清circDYM水平及HAMD-17評(píng)分比較()Table 3 Comparison of serum circDYM level and HAMD-17 score between the two groups()

組別對(duì)照組觀察組例數(shù)109 118 circDYM 1.02±0.23 0.47±0.14 HAMD-17評(píng)分(分)4.23±1.01 19.70±3.46 t值P值21.947 0.001 44.938 0.001

2.3 抑郁癥患者circDYM 水平與HAMD-17 評(píng)分的相關(guān)性 經(jīng)Pearson相關(guān)分析結(jié)果顯示，抑郁癥患者circDYM水平與HAMD-17評(píng)分呈負(fù)相關(guān)(r=-0.734，P<0.05)，見圖1。

圖1 抑郁癥患者circDYM水平與HAMD-17評(píng)分的相關(guān)性Figure 1 Correlation between circDYM level and HAMD-17 score in patients with depression

2.4 不同嚴(yán)重程度患者血清circDYM 水平及HAMD-17 評(píng)分比較 依據(jù)HAMD-17 評(píng)估結(jié)果將觀察組患者分為輕度組45 例、中度組40 例和重度組33 例。重度組患者的血清circDYM 水平明顯低于中度組和輕度組，HAMD-17 評(píng)分明顯高于中度組和輕度組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；中度組患者的血清circDYM 水平明顯低于輕度組，HAMD-17 評(píng)分明顯高于輕度組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表4。

表4 不同嚴(yán)重程度患者血清circDYM水平及HAMD-17評(píng)分比較()Table 4 Comparison of serum circDYM level and HAMD-17 score in patients with different disease severity()

表4 不同嚴(yán)重程度患者血清circDYM水平及HAMD-17評(píng)分比較()Table 4 Comparison of serum circDYM level and HAMD-17 score in patients with different disease severity()

注：與輕度組比較，aP<0.05；與中度組比較，bP<0.05。Note: Compared with the mild group,aP<0.05; Compared with the moderate group,bP<0.05.

組別輕度組中度組重度組F值P值HAMD-17評(píng)分(分)12.42±3.30 20.44±2.23a 28.72±2.45ab 338.396 0.001例數(shù)45 40 33 circDYM 0.62±0.20 0.48±0.16a 0.26±0.09ab 47.092 0.001

2.5 血清circDYM 水平對(duì)抑郁癥嚴(yán)重程度的評(píng)估價(jià)值 以血清circDYM 水平為檢驗(yàn)變量，以輕度組作為對(duì)照，將抑郁癥是否進(jìn)展為中度作為狀態(tài)變量繪制ROC 曲線，結(jié)果顯示，circDYM 評(píng)估中度抑郁癥的AUC 為0.780(0.684~0.876)，敏感度為55.6%，特異性為90.0%，見圖2。以血清circDYM 水平為檢驗(yàn)變量，以中度組作為對(duì)照，將抑郁癥是否進(jìn)展為重度作為狀態(tài)變量繪制ROC 曲線，結(jié)果顯示，circDYM 評(píng)估重度抑郁癥的AUC 為0.855 (0.768~0.943)，敏感度為75.1%，特異性為90.9%，見圖3。

圖2 血清circDYM水平評(píng)估中度抑郁癥的ROCFigure 2 ROC of moderate depression assessed by serum circDYM level

圖3 血清circDYM水平評(píng)估重度抑郁癥的ROCFigure 3 ROC of severe depression evaluated by serum circDYM level

2.6 治療有效和無效抑郁癥患者的血清circDYM水平比較 治療無效抑郁癥患者的血清circDYM 水平為0.35±0.09，明顯低于治療有效抑郁癥患者的0.52±0.16，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=5.895，P<0.05)。

3 討論

抑郁癥是世界上最常見的精神疾病之一，其主要特征為情緒功能障礙，目前已成為主要公共衛(wèi)生問題[7-8]。重度抑郁癥由遺傳因素和環(huán)境因素等引起，其中壓力是導(dǎo)致抑郁癥的主要風(fēng)險(xiǎn)因素[9-10]。抑郁癥具有異質(zhì)性，其個(gè)體識(shí)別率較低，僅以臨床癥狀作為抑郁癥診斷依據(jù)可能會(huì)導(dǎo)致漏診率增加。因此，需要進(jìn)一步了解抑郁癥的詳細(xì)機(jī)制，并尋找更有效的診斷和治療靶點(diǎn)[11]。

circRNAs是經(jīng)由初級(jí)線性轉(zhuǎn)錄物中的3'和5'剪接位點(diǎn)連接產(chǎn)生，是非編碼RNA家族成員，其特征在于環(huán)結(jié)構(gòu)穩(wěn)定、進(jìn)化保守[12]。CircRNA 已被證明參與神經(jīng)發(fā)育及可塑性、細(xì)胞生長、阿爾茨海默病等生理過程和疾病發(fā)展[13-14]。目前研究證實(shí)，circDYM 可通過一系列相關(guān)途徑減輕輕度應(yīng)激小鼠的抑郁樣行為和海馬神經(jīng)元損傷[15]。Zhang等[16]研究顯示，circDYM在抑郁癥患者血清及抑郁癥模型小鼠血漿和海馬中表達(dá)均下調(diào)。Song 等[17]研究表明，經(jīng)顱磁刺激治療后的的重度抑郁癥患者血漿circDYM 表達(dá)上調(diào)，circDYM可作為診斷重度抑郁癥的潛在生物標(biāo)志物。

本研究結(jié)果顯示，抑郁癥患者血清circDYM 低表達(dá)，且隨抑郁程度加重，circDYM 表達(dá)進(jìn)一步降低，與上述研究結(jié)果中circDYM 表達(dá)趨勢基本一致，提示circDYM 低表達(dá)可能參與抑郁癥的疾病進(jìn)展。既往研究顯示，小膠質(zhì)細(xì)胞的功能狀態(tài)與抑郁癥的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。而Yu 等[18]研究結(jié)果表明，系統(tǒng)性施用RNA藥物將circDYM遞送至大腦后，可減輕膠質(zhì)細(xì)胞功能障礙，進(jìn)而緩解小鼠抑郁樣行為?；诩韧芯客茰ycircDYM低表達(dá)加重抑郁癥的機(jī)制可能如下：抑郁癥早期，為使神經(jīng)元損害降低，患者機(jī)體將啟動(dòng)自我保護(hù)機(jī)制，病理狀態(tài)使血清circDYM 表達(dá)降低并負(fù)反饋調(diào)控其下游靶基因表達(dá)，進(jìn)而刺激膠質(zhì)細(xì)胞形成，抑郁程度越重，其保護(hù)機(jī)制越明顯，致血清circDYM下調(diào)越顯著。

HAMD-17 評(píng)分是目前常用的抑郁癥狀評(píng)估工具，17項(xiàng)版本常用于評(píng)估抑郁癥狀的嚴(yán)重程度[19]。而本研究結(jié)果顯示，抑郁癥患者血清circDYM 表達(dá)與HAMD17 評(píng)分呈負(fù)相關(guān)。提示HAMD-17 評(píng)分越高，circDYM 表達(dá)越低，患者抑郁程度也越嚴(yán)重，臨床可同時(shí)將血清指標(biāo)circDYM 作為監(jiān)測抑郁癥患者疾病嚴(yán)重程度的重要輔助指標(biāo)。ROC 曲線結(jié)果表明circDYM評(píng)估重度抑郁癥的效果最為顯著，其AUC達(dá)0.855，可為臨床提供重要參考。此外，本研究治療無效抑郁癥患者血清circDYM 水平顯著低于治療有效抑郁癥患者。進(jìn)一步表明檢測血清circDYM 水平有助于提前判斷抑郁癥患者預(yù)后。但由于circDYM 水平可能受其他疾病狀態(tài)的影響，后續(xù)將納入更多影響因素以排除干擾，進(jìn)一步驗(yàn)證circDYM的臨床價(jià)值。

綜上所述，抑郁癥患者血清circDYM 低表達(dá)，且隨著疾病嚴(yán)重程度增加而進(jìn)一步降低。此外，血清circDYM 表達(dá)與HAMD-17 評(píng)分呈負(fù)相關(guān)，檢測血清circDYM 水平可為臨床評(píng)估抑郁癥患者疾病嚴(yán)重程度提供參考。然而本研究納入排除標(biāo)準(zhǔn)仍需進(jìn)一步精確，以降低其他因素對(duì)本研究指標(biāo)circDYM 表達(dá)的干擾；同時(shí)需采取多中心研究，納入更多樣本量驗(yàn)證研究結(jié)果。