高建華，杜甲錄，李今

1.榆林市第一醫(yī)院普通外科二病區(qū)，陜西 榆林 719000；2.西北婦女兒童醫(yī)院乳腺甲狀腺外科，陜西 西安 710061

甲狀腺癌是一種常見(jiàn)惡性腫瘤，嚴(yán)重影響患者生存質(zhì)量[1-3]。微小RNA(microRNA，miRNA)在多種惡性腫瘤中異常表達(dá)，并可參與腫瘤發(fā)生及發(fā)展過(guò)程[4]。例如，miR-139-5p[5]、miR-335-5p[6]、miR-4319[7]在甲狀腺癌中表達(dá)上調(diào)或下調(diào)，并可調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖及轉(zhuǎn)移等生物學(xué)過(guò)程從而參與甲狀腺癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程。微小RNA-214-5p (microRNA-214-5p，miR-214-5p)在胰腺癌[8]、骨肉瘤[9]中表達(dá)降低并可參與腫瘤發(fā)生及發(fā)展過(guò)程。但miR-214-5p 在甲狀腺癌中的研究尚未見(jiàn)報(bào)道。成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體樣1 (fibroblast growth factor receptor-like 1，F(xiàn)GFRL1)在膀胱癌[10]、喉癌[11]、食道鱗狀細(xì)胞癌[12]等腫瘤中表達(dá)升高，沉默F(xiàn)GFRL1 可阻礙細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移。靶基因預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn)FGFRL1 與miR-214-5p 存在結(jié)合位點(diǎn)。本研究通過(guò)對(duì)比甲狀腺癌細(xì)胞中miR-214-5p 與FGFRL1 表達(dá)水平，探究miR-214-5p對(duì)甲狀腺癌細(xì)胞增殖、遷移及侵襲的影響及調(diào)控機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料 于2019 年1 月至2019 年5 月收集榆林市第一醫(yī)院收治的47 例甲狀腺癌患者的癌組織及其相應(yīng)癌旁組織標(biāo)本置于-80℃冰箱內(nèi)保存，均經(jīng)病理診斷確診為甲狀腺癌，其中男性27 例，女性20 例，年齡50~67歲，平均(55.36±3.29)歲。

1.2 試劑 正常甲狀腺HT-ori3 細(xì)胞與甲狀腺癌BCPAP、TPC-1、SW1736 細(xì)胞均購(gòu)自中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心。Lipofectamine2000 購(gòu)自上海陽(yáng)光生物；miR-214-5p 抑制劑/模擬物(anti-miR-214-5p/miR-214-5p mimics) 及其陰性對(duì)照(anti-miR-con/miR-con)、FGFRL1 小干擾RNA(si-FGFRL1)及其陰性對(duì)照(si-con)均購(gòu)自上海吉瑪制藥；FGFRL1 過(guò)表達(dá)載體(pcDNA-FGFRL1)及其對(duì)照(pcDNA-con)購(gòu)自美國(guó)Invitrogen；Matrigel基質(zhì)膠購(gòu)自美國(guó)BD公司；Transwell小室購(gòu)自美國(guó)Corning 公司；MTT檢測(cè)試劑盒、PBS 緩沖液購(gòu)自上海碧云天生物技術(shù)有限公司；Trizol試劑購(gòu)自美國(guó)Thermo Fisher公司；反轉(zhuǎn)錄試劑盒購(gòu)于大連寶生物；實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒購(gòu)于上海欣百諾生物工程有限公司；兔抗人FGFRL1、CyclinD1、MMP-2、MMP-9抗體均購(gòu)自北京博爾邁生物技術(shù)有限公司；山羊抗兔IgG二抗(HRP)購(gòu)于武漢艾美捷。

1.3 方法

1.3.1 免疫組化檢測(cè)甲狀腺癌組織中FGFRL1 陽(yáng)性率 使用乙醇對(duì)制備的甲狀腺癌組織石蠟切片進(jìn)行梯度脫水，加入檸檬酸鹽溶液反應(yīng)20 min，添加3%過(guò)氧化氫，25 min 后加山羊血清，15 min 后加入FGFRL1一抗，4℃過(guò)夜孵育加入二抗，室溫下反應(yīng)2 h，使用DAB 顯色，蘇木素復(fù)染，經(jīng)蒸餾水沖洗后置于1%鹽酸中5 s 后清洗，二甲苯透明，中性樹(shù)脂封片，顯微鏡下選10個(gè)較清晰的視野統(tǒng)計(jì)陽(yáng)性染色細(xì)胞數(shù)量，并計(jì)算其百分比。根據(jù)染色程度進(jìn)行計(jì)數(shù)：未顯色，0 分；淺黃色，1 分；棕黃色，2 分；棕褐色，3 分。陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目<25%為0 分；陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目在25%~50%為1分；數(shù)目在50~75%記為2分；陽(yáng)性數(shù)目≥75%記為3分。取兩組計(jì)分乘積：≤1分記為陰性，>1分記為陽(yáng)性。

1.3.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染及實(shí)驗(yàn)分組 甲狀腺癌TPC-1細(xì)胞以2×105個(gè)/mL的密度接種于6孔板，分別將miR-con(miR-con 組)、miR-214-5p mimics (miR-214-5p 組)、anti-miR-con (anti-miR-con 組)、anti-miR-214-5p (anti-miR-214-5p組)、si-con(si-con組)、si-FGFRL1(si-FGFRL1組)、miR-214-5p mimics與pcDNA-con(miR-214-5p+pcDNA-con組)、miR-214-5p mimics與pcDNA-FGFRL1(miR-214-5p+pcDNA-FGFRL1組)轉(zhuǎn)染至TPC-1細(xì)胞。未進(jìn)行任何處理的細(xì)胞為NC組。

1.3.3 qRT-PCR檢測(cè)miR-214-5p、FGFRL1 mRNA表達(dá) 參照廠家說(shuō)明書(shū)，使用Trizol 從組織或細(xì)胞中分離總RNA。使用反轉(zhuǎn)錄試劑盒合成cDNA。然后，將稀釋后的cDNA用實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒在ABI StepOnePlus 實(shí)時(shí)熒光定量PCR 儀上進(jìn)行qRT-PCR。以U6 和β-actin 為內(nèi)參，分析miR-214-5p、FGFRL1 mRNA的表達(dá)量。

1.3.4 MTT 檢測(cè)甲狀腺癌TPC-1 細(xì)胞存活率 TPC-1細(xì)胞(5×103/孔)接種于96孔板。轉(zhuǎn)染后，用移液槍向每孔中加入MTT溶液(50 μL)，37℃孵育4 h。接下來(lái)，用移液槍小心地去除培養(yǎng)基，加入DMSO(150 μL/孔)溶解甲瓚。最后，通過(guò)在490 nm處用酶標(biāo)儀檢測(cè)吸光度(OD)來(lái)計(jì)算細(xì)胞存活率(以實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組OD值的百分比表示)。

1.3.5 Transwell 實(shí)驗(yàn)檢測(cè)TPC-1 細(xì)胞遷移 將經(jīng)過(guò)1.3.2 處理的各組TPC-1 細(xì)胞加入Transwell小室的上室，同時(shí)將含有10%FBS的DMEM培養(yǎng)基加入下室，孵育24 h 后，過(guò)濾細(xì)胞的下室用4%的多聚甲醛固定15 min，用0.2%結(jié)晶紫染色，25 min，然后用顯微鏡成像，計(jì)數(shù)遷移細(xì)胞數(shù)。Transwell 上室預(yù)先涂上Matrigel，每孔30 μL，其他步驟與遷移實(shí)驗(yàn)相同。

1.3.6 雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)miR-214-5p靶基因 miR-214-5p 和FGFRL1 的結(jié)合序列由TargetScan 提供。將含有miR-214-5p 結(jié)合位點(diǎn)的FGFRL1 3'UTR的野生型(WT)或突變型(MUT)序列分別插入pmirGLO 熒光素酶報(bào)告載體，以創(chuàng)建WT 和MUT 質(zhì)粒(WT-FGFRL1 和MUT-FGFRL1)。將上述報(bào)告質(zhì)粒與miR-214-5p mimics或其對(duì)照(miR-NC)共轉(zhuǎn)染TPC-1細(xì)胞。共轉(zhuǎn)染24 h后，測(cè)定熒光素酶活性。

1.3.7 Western blot 檢測(cè)FGFRL1、CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白表達(dá) 提取組織或細(xì)胞總蛋白，用BCA 法定量蛋白后，將蛋白煮沸變性。10%~12%SDS-PAGE 分離蛋白，將蛋白轉(zhuǎn)移到PVDF 膜上。然后，將膜封閉2 h，與FGFRL1、CyclinD1、MMP-2、MMP-9一抗(1∶1 000)的條件與時(shí)間分別為4℃孵育，24 h，TBST 洗膜后孵育二抗(1∶5 000)1 h，用ECL 檢測(cè)結(jié)合信號(hào)。用Image J軟件評(píng)估蛋白表達(dá)水平。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS21.0 統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)。計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料符合正態(tài)分布，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示，兩組間比較采用t 檢驗(yàn)，多個(gè)組間比較采用單因素方差分析，進(jìn)一步兩兩比較行LSD-t檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 甲狀腺癌組織與癌旁組織的miR-214-5p和FGFRL1 表達(dá)水平比較 與癌旁組織比較，甲狀腺癌組織的miR-214-5p 表達(dá)下降，F(xiàn)GFRL1 的表達(dá)量升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)圖1和表1。同時(shí)免疫組化檢測(cè)結(jié)果顯示，甲狀腺癌組織中的FGFRL1陽(yáng)性率為68.09%(32/47)，明顯高于癌旁組織的6.38%(3/47)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=453.729，P<0.05)。

圖1 FGFRL1在甲狀腺癌患者中的表達(dá)情況Figure 1 Expression of FGFRL1 in patients with thyroid cancer

表1 甲狀腺癌組織與癌旁組織的miR-214-5p和FGFRL1表達(dá)水平比較(，n=47)Table 1 Comparison on the expression levels of miR-214-5p and FGFRL1 in thyroid cancer tissues and adjacent tissues (,n=47)

表1 甲狀腺癌組織與癌旁組織的miR-214-5p和FGFRL1表達(dá)水平比較(，n=47)Table 1 Comparison on the expression levels of miR-214-5p and FGFRL1 in thyroid cancer tissues and adjacent tissues (,n=47)

組別癌旁組織癌組織miR-214-5p 1.00±0.15 0.40±0.06a FGFRL1 mRNA 1.00±0.03 2.18±0.25 FGFRL1蛋白0.42±0.04 0.86±0.10 t值P值25.461 0.001 32.128 0.001 28.007 0.001

2.2 甲狀腺癌細(xì)胞系的miR-214-5p 和FGFRL1表達(dá)水平比較 miR-214-5p 在甲狀腺癌BCPAP、TPC-1、SW1736 細(xì)胞中表達(dá)低于HT-ori3，F(xiàn)GFRL1 mRNA及蛋白表達(dá)高于HT-ori3，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。TPC-1 細(xì)胞中miR-214-5p 表達(dá)最低，表明miR-214-5p 可能通過(guò)負(fù)向調(diào)控FGFRL1 的表達(dá)而參與甲狀腺癌發(fā)生過(guò)程。故選擇TPC-1 細(xì)胞進(jìn)行下一步研究，見(jiàn)圖2和表2。

圖2 Western Blot檢測(cè)FGFRL1蛋白表達(dá)情況Figure 2 Detection of FGFRL1 protein expression by Western blot

表2 甲狀腺癌細(xì)胞系和正常甲狀腺細(xì)胞中miR-214-5p、FGFRL1 mRNA和FGFRL1 protein表達(dá)量比較(，n=9)Table 2Comparison of miR-214-5p, FGFRL1 mRNA, and FGFRL1 protein expression levels in thyroid cancer cell lines and normal thyroid cells(,n=9)

表2 甲狀腺癌細(xì)胞系和正常甲狀腺細(xì)胞中miR-214-5p、FGFRL1 mRNA和FGFRL1 protein表達(dá)量比較(，n=9)Table 2Comparison of miR-214-5p, FGFRL1 mRNA, and FGFRL1 protein expression levels in thyroid cancer cell lines and normal thyroid cells(,n=9)

注：與HT-ori3細(xì)胞組比較，aP<0.05.Note:Compared with HT-ori3 cell group,aP<0.05.

組別HT-ori3組BCPAP組TPC-1組SW1736組F值P值miR-214-5p 1.03±0.11 0.66±0.09a 0.26±0.03a 0.35±0.02a 67.705 0.001 FGFRL1 mRNA 1.00±0.10 3.59±0.36a 4.01±0.40a 3.21±0.32a 53.746 0.001 FGFRL1蛋白0.36±0.05 1.02±0.10a 1.15±0.11a 0.95±0.09a 44.759 0.001

2.3 miR-214-5p 對(duì)TPC-1 甲狀腺癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的影響 與miR-con組比較，miR-214-5p組甲狀腺癌TPC-1細(xì)胞存活率、遷移、侵襲細(xì)胞數(shù)及蛋白CyclinD1、MMP-2、MMP-9表達(dá)降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與anti-miR-con組比較，anti-miR-214-5p組甲狀腺癌TPC-1細(xì)胞存活率、遷移、侵襲細(xì)胞數(shù)及蛋白CyclinD1、MMP-9、MMP-2表達(dá)升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，表明miR-214-5p 可阻礙甲狀腺癌細(xì)胞增殖、遷移及侵襲，而抑制miR-214-5p 表達(dá)可促進(jìn)甲狀腺癌細(xì)胞增殖、遷移及侵襲，見(jiàn)圖3和表3。

圖3 miR-214-5p對(duì)TPC-1甲狀腺癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的影響Figure 3 Effect of miR-214-5p on proliferation,migration,and invasion of TPC-1 thyroid cancer cells

表3 miR-214-5p對(duì)TPC-1甲狀腺癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的影響(,n=3)Table 3 Effect of miR-214-5p on the proliferation,migration,and invasion of TPC-1 thyroid cancer cells(,n=3)

表3 miR-214-5p對(duì)TPC-1甲狀腺癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的影響(,n=3)Table 3 Effect of miR-214-5p on the proliferation,migration,and invasion of TPC-1 thyroid cancer cells(,n=3)

注：與miR-con組比較，aP<0.05；與anti-miR-con組比較，bP<0.05。Note:Compared with miR-con group,aP<0.05;compared with anti-miR-con group,bP<0.05.

組別miR-con anti-miR-con miR-214-5p anti-miR-214-5p F值P值細(xì)胞侵襲數(shù)量(個(gè))95.23±9.56 94.56±9.50 42.79±4.30a 128.63.±12.90b 41.128 0.001 miR-214-5p 1.00±0.10 1.02±0.10 3.45±0.35a 0.35±0.05b 154.266 0.001 CyclinD1 1.25±0.12 1.20±0.12 0.40±0.05a 1.65±0.16b 57.686 0.001 MMP-2 1.15±0.11 1.13±0.11 0.35±0.04a 1.50±0.15b 58.445 0.001 MMP-9 1.00±0.10 1.01±0.12 0.40±0.05a 1.48±0.15b 47.414 0.001細(xì)胞活力(%)100.00±10.01 102.16±10.22 55.26±5.25a 135.48±13.5b 31.394 0.001細(xì)胞遷移數(shù)量(個(gè))201.36±20.11 200.16±20.01 146.45±14.60a 286.06±28.62b 21.744 0.001

2.4 敲減FGFRL1 抑制TPC-1 甲狀腺癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲 與si-con 組比較，si-FGFRL1 組甲狀腺癌TPC-1細(xì)胞存活率、遷移及侵襲細(xì)胞數(shù)降低，蛋白FGFRL1、CyclinD1、MMP-9、MMP-2表達(dá)降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，表明敲減FGFRL1可明顯降低甲狀腺癌細(xì)胞增殖、遷移及侵襲能力，見(jiàn)圖4、表4。

圖4 敲減FGFRL1，Western Blot 檢測(cè)FGFRL1、CyclinD1、MMP2、MMP9的蛋白表達(dá)Figure 4 Knockdown of FGFRL1 and detection of the expression of FGFRL1, CyclinD1, MMP2, and MMP9 protein by Western blot

表4 敲減FGFRL1抑制甲狀腺癌細(xì)胞系TPC-1增殖、遷移和侵襲(,n=3)Table 4 Knockdown of FGFRL1 inhibits the proliferation,migration,and invasion of thyroid cancer cell line TPC-1(,n=3)

表4 敲減FGFRL1抑制甲狀腺癌細(xì)胞系TPC-1增殖、遷移和侵襲(,n=3)Table 4 Knockdown of FGFRL1 inhibits the proliferation,migration,and invasion of thyroid cancer cell line TPC-1(,n=3)

注：與si-con組比較，aP<0.05。Note:Compared with si-con group,aP<0.05.

組別NC si-con si-FGFRL1 F值P值FGFRL1 1.18±0.12 1.15±0.11 0.41±0.05a 58.352 0.001 CyclinD1 1.21±0.12 1.18±0.11 0.36±0.05a 71.410 0.001 MMP2 1.15±0.11 1.12±0.11a 0.43±0.05a 55.713 0.001 MMP9 1.01±0.12 1.00±0.10a 0.35±0.05a 48.224 0.001細(xì)胞活力(%)100.00±10.03 101.05±10.11 48.35±4.84a 36.146 0.001細(xì)胞遷移數(shù)量(個(gè))205.12±20.06 202.46±20.24 135.16±13.64a 14.173 0.001細(xì)胞侵襲數(shù)量(個(gè))96.08±9.65 95.14±9.52 50.28±5.19a 29.268 0.001

2.5 miR-214-5p 靶向FGFRL1 靶基因預(yù)測(cè)顯示FGFRL1 的3’UTR 區(qū)域存在miR-214-5p 的結(jié)合位點(diǎn)。miR-214-5p過(guò)表達(dá)抑制了WT-FGFRL1的熒光素酶活性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。miR-214-5p 組甲狀腺癌TPC-1 細(xì)胞中FGFRL1 蛋白表達(dá)水平明顯低于miR-con 組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；anti-miR-214-5p組甲狀腺癌TPC-1細(xì)胞中FGFRL1蛋白表達(dá)水平明顯高于anti-miR-con組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，表明miR-214-5p 可靶向結(jié)合FGFRL1，并可負(fù)向調(diào)控FGFRL1的表達(dá)及活性，見(jiàn)圖5。

圖5 miR-214-5p靶向調(diào)控FGFRL1表達(dá)Figure 5 MiR-214-5p targeted regulation of FGFRL1 expression

2.6 FGFRL1高表達(dá)可部分逆轉(zhuǎn)miR-214-5p高表達(dá)對(duì)TPC-1增殖、遷移和侵襲的抑制作用 miR-214-5p+pcDNA-FGFRL1組甲狀腺癌TPC-1細(xì)胞存活率、遷移及侵襲細(xì)胞數(shù)、蛋白CyclinD1、MMP-2、MMP-9 表達(dá)較miR-214-5p+pcDNA-con 組增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，表明高表達(dá)FGFRL1 可以部分逆轉(zhuǎn)miR-214-5p高表達(dá)對(duì)TPC-1增殖、遷移和侵襲的抑制作用，見(jiàn)圖6和表5。

圖6 Western blot檢測(cè)FGFRL1、CyclinD1、MMP2、MMP9蛋白表達(dá)Figure 6 Detection of FGFRL1, CyclinD1, MMP2, MMP9 protein expression by Western blot

表5 FGFRL1高表達(dá)可部分逆轉(zhuǎn)miR-214-5p高表達(dá)對(duì)TPC-1增殖、遷移和侵襲的影響(,n=3)Table 5 FGFRL1 overexpression can partially reverse the effects of miR-214-5p overexpression on TPC-1 proliferation, migration, and invasion(,n=3)

表5 FGFRL1高表達(dá)可部分逆轉(zhuǎn)miR-214-5p高表達(dá)對(duì)TPC-1增殖、遷移和侵襲的影響(,n=3)Table 5 FGFRL1 overexpression can partially reverse the effects of miR-214-5p overexpression on TPC-1 proliferation, migration, and invasion(,n=3)

注：與miR-con組比較，aP<0.05；與miR-214-5p+pcDNA-con組比較，bP<0.05。Note:Compared with miR-con group,aP<0.05;compared with miR-214-5p+pcDNA-con group,bP<0.05.

組別miR-con組miR-214-5p組miR-214-5p+pcDNA-con組miR-214-5p+pcDNA-FGFRL1組F值P值FGFRL1 1.15±0.11 0.38±0.05a 0.40±0.05 0.99±0.10b 69.826 0.001 CyclinD1 1.22±0.12 0.42±0.05a 0.40±0.05 1.05±0.11b 68.949 0.001 MMP-2 1.15±0.11 0.38±0.04a 0.40±0.05 1.00±0.11b 66.843 0.001 MMP-9 1.05±0.10 0.35±0.05a 0.40±0.05 0.90±0.09b 63.910 0.001細(xì)胞活力(%)100.01±2.46 50.26±5.03a 52.04±5.20 91.23±9.12b 57.011 0.001細(xì)胞遷移數(shù)量(個(gè))202.79±20.28 140.24±14.25a 138.89±13.90a 182.78±18.30b 10.621 0.001細(xì)胞侵襲數(shù)量(個(gè))95.79±9.50 41.25±4.12a 40.14±4.02a 83.35±8.34b 51.140 0.001

3 討論

miR-214在卵巢癌、舌鱗癌等腫瘤中呈高表達(dá)，并可影響腫瘤發(fā)生及發(fā)展進(jìn)程[13-14]。Yao 等[15]研究表明miR-214-5p 在胰腺癌細(xì)胞中下調(diào)表達(dá)，LncRNA DANCR 可通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性吸附miR-214-5p 而上調(diào)E2F2表達(dá)進(jìn)而加速胰腺癌惡性進(jìn)展。有報(bào)道顯示miR-214-5p 可抑制肝癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移[16]。本研究結(jié)果顯示，甲狀腺癌組織及細(xì)胞中miR-214-5p 表達(dá)下降，上調(diào)miR-214-5p 表達(dá)后甲狀腺癌細(xì)胞增殖、遷移及侵襲能力均明顯降低；下調(diào)miR-214-5p 表達(dá)后可促進(jìn)甲狀腺癌細(xì)胞增殖、遷移及侵襲，提示miR-214-5p 在甲狀腺癌細(xì)胞中發(fā)揮抑癌作用。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)CyclinD1、MMP-2、MMP-9 表達(dá)水平與甲狀腺癌細(xì)胞增殖、遷移及侵襲能力的強(qiáng)弱呈正相關(guān)，提示上調(diào)miR-214-5p 表達(dá)可通過(guò)降低CyclinD1、MMP-2、MMP-9 表達(dá)水平抑制甲狀腺癌細(xì)胞增殖、遷移及侵襲。

FGFRL1 通過(guò)調(diào)控Hedgehog 信號(hào)進(jìn)而促進(jìn)卵巢癌進(jìn)展[17]。miR-210 通過(guò)靶向FGFRL1 進(jìn)而促進(jìn)肝細(xì)胞癌、肺腺癌細(xì)胞增殖[18-19]。本研究結(jié)果表明FGFRL1在甲狀腺癌組織及細(xì)胞中表達(dá)升高，抑制FGFRL1 表達(dá)可明顯抑制甲狀腺癌細(xì)胞增殖、遷移及侵襲，提示FGFRL1的高表達(dá)可能是促進(jìn)甲狀腺癌發(fā)生及發(fā)展的重要原因之一。靶基因預(yù)測(cè)顯示FGFRL1與miR-210存在結(jié)合位點(diǎn)，本研究采用雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)證實(shí)miR-210 可靶向結(jié)合FGFRL1，進(jìn)一步研究證實(shí)miR-210可負(fù)向調(diào)控FGFRL1表達(dá)；通過(guò)上調(diào)FGFRL1表達(dá)發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)GFRL1可明顯逆轉(zhuǎn)miR-214-5p的抗甲狀腺癌細(xì)胞增殖、遷移、侵襲功能。表明miR-214-5p 可通過(guò)下調(diào)FGFRL1 表達(dá)抑制甲狀腺癌細(xì)胞增殖、遷移及侵襲。提示miR-214-5p 可能作為甲狀腺癌靶向治療的潛在靶點(diǎn)。

綜上所述，miR-214-5p在甲狀腺癌中發(fā)揮抑癌作用，其通過(guò)負(fù)向調(diào)控靶基因FGFRL1 表達(dá)抑制甲狀腺癌細(xì)胞增殖、遷移及侵襲，為甲狀腺癌早期診斷及治療靶點(diǎn)提供新方向。但本研究?jī)H采用一種甲狀腺癌細(xì)胞進(jìn)行研究，miR-214-5p/FGFRL1對(duì)其他甲狀腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響尚需進(jìn)一步探究。