余 輝，徐 楚，陳志明，劉依和，龔春燕，刁義平

（中國醫(yī)學科學院皮膚病醫(yī)院，江蘇 南京 210042）

他汀類藥物為臨床常用調(diào)脂藥，其作用機制為控制膽固醇的生物合成。有研究表明，外用劑型他汀類藥物在皮膚科有廣泛的潛在應用價值。如2.0%他汀類藥物（包括洛伐他汀和辛伐他?。?2.0%膽固醇軟膏可有效緩解汗孔角化癥皮損癥狀［1-2］；2.5%或5.0%辛伐他汀軟膏可治療單側魚鱗癬樣紅皮病伴同側畸形（CHILD）綜合征［3］；2.0%洛伐他汀/2.0%膽固醇軟膏聯(lián)合10.0%乙醇酸軟膏可緩解常染色體隱性遺傳先天性魚鱗?。ˋRCI）的角化鱗屑癥狀［4］等。前期試驗以辛伐他汀為主藥，采用D 相乳化法配制出2.0%辛伐他汀乳膏并用于播散性淺表性光線性汗孔角化癥（DSAP），取得良好效果［5］。本研究中建立了測定該乳膏中辛伐他汀含量的超高效液相色譜（UPLC）法?，F(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

ACQUITY UPLC超高效液相色譜儀，包括四元梯度泵、恒溫自動進樣器、柱溫箱及Empower2 軟件（美國Waters 公司）；AE240 型電子分析天平（瑞士Mettler Toledo 公司，精度為0.01 mg）；HH - 4 型水浴鍋（常州國華電器有限公司）；Milli - Q Synergy 超純水系統(tǒng)（美國Millipore公司）。

1.2 試藥

辛伐他汀對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號為100601 - 201504，含量為99.4%）；辛伐他汀乳膏［醫(yī)院制劑中心配制，規(guī)格為每支20 g（含辛伐他汀400 mg），批號分別為20220920 - 1，20220920 - 2，20220920-3］；辛伐他汀空白乳膏基質(zhì)（醫(yī)院制劑中心配制，規(guī)格為每支20 g，批號為20220920 - 0）；輔料均為藥用規(guī)格；甲醇、乙腈均為色譜純，其余試劑均為分析純，水為超純水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：ACQUITY UPLC BEH C18柱（100 mm ×2.1 mm，1.7 μm）；流動相：乙腈- 水（52∶48，V/V）；流速：0.6 mL/ min；檢測波長：238 nm；柱溫：30 ℃；進樣量：5μL。

2.2 溶液制備

對照品溶液：取辛伐他汀對照品10 mg，精密稱定，置50 mL容量瓶中，加丙酮溶解并定容，搖勻，作為對照品貯備液（質(zhì)量濃度為200μg/mL）；精密量取5 mL，置100 mL容量瓶中，加甲醇定容，搖勻，即得。

供試品溶液：取樣品2.5 g，精密稱定，置100 mL燒杯中，加入丙酮30 mL，水浴加熱，攪拌使溶解，冰浴30 min，待基質(zhì)凝固后，過濾至50 mL 容量瓶中。用丙酮洗滌燒杯和玻璃棒，并全部轉移至該容量瓶中，加丙酮定容，精密量取1 mL，置100 mL容量瓶，加甲醇定容，經(jīng)0.45μm有機系微孔濾膜濾過，即得。

陰性對照品溶液：取辛伐他汀空白乳膏基質(zhì)適量，按供試品溶液制備方法制備，即得。

2.3 方法學考察

系統(tǒng)適用性試驗：精密吸取2.2 項下對照品溶液、供試品溶液和陰性對照品溶液各適量，按2.1項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖。結果供試品溶液色譜在對照品溶液相應位置有吸收峰，理論板數(shù)按辛伐他汀峰計為15 143，峰形及分離良好，且陰性對照無干擾。詳見圖1。

圖1 超高效液相色譜圖Fig.1 UPLC chromatograms

線性關系考察：精密吸取2.2 項下對照品貯備液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL，分別置50 mL 容量瓶中，用甲醇定容，搖勻，取適量，按2.1 項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖。以辛伐他汀質(zhì)量濃度（C，μg/mL）為橫坐標、峰面積（A）為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程為A= 22 872C- 6 914.8，R2 = 0.999 4（n= 5）。結果表明，辛伐他汀質(zhì)量濃度在4.132～20.660 μg/ mL 范圍內(nèi)與峰面積線性關系良好。

精密度試驗：取2.2項下對照品溶液適量，按2.1項下色譜條件連續(xù)進樣測定5 次，記錄辛伐他汀峰面積。結果的RSD為1.19%（n=5），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗：取2.2 項下供試品溶液適量，分別于室溫下放置0，2，4，6，8 h 時按2.1 項下色譜條件進樣測定，記錄辛伐他汀峰面積。結果的RSD為0.36%（n=5），表明供試品溶液室溫下放置8 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

重復性試驗：取同一批樣品適量，按2.2 項下方法平行制備6 份供試品溶液，按2.1 項下色譜條件進樣測定，記錄辛伐他汀峰面積，并按外標法計算平均含量。結果平均含量為標示量的99.25%，RSD為0.82%（n=6），表明方法重復性良好。

回收試驗：取辛伐他汀對照品105.20 mg，精密稱定，配制成質(zhì)量濃度為10.52 mg/mL 的溶液，分別量取4.0，5.0，6.0 mL，置2.5 g 辛伐他汀空白乳膏基質(zhì)中，攪拌均勻，按2.2項下方法制成低、中、高質(zhì)量濃度的供試品溶液，共9 份，按2.1 項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積，并計算回收率。結果見表1。

表1 回收試驗結果（n=9）Tab.1 Results of the recovery test（n=9）

耐用性試驗：取樣品適量，按2.2 項下方法制備供試品溶液，再按2.1 項下色譜條件［分別設置色譜柱為Waters ACQUITY UPLC BEH C18柱（100 mm × 2.1 mm，1.7 μm）和Agilent Eclipse Plus RRHD C18柱（100 mm ×2.1 mm，1.8μm）］進樣測定，記錄峰面積。結果表明，色譜柱發(fā)生一定程度變化時，本方法能滿足試驗要求，耐用性良好。

2.4 樣品含量測定

取3 批樣品各適量，按2.2 項下方法制備供試品溶液，取供試品溶液和對照品溶液各5μL，按2.1 項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積，并按外標法計算含量。結果批號為20220920 - 1，20220920 - 2，20220920 - 3樣品的含量分別為98.73%，96.31%，95.65%，平均含量為96.90%，RSD為1.67%（n=3）。

3 討論

有研究發(fā)現(xiàn)，局部外用他汀類藥物可用于治療某些常見及罕見遺傳性皮膚疾病，如汗孔角化癥、斑塊狀銀屑病、CHILD 綜合征等，普遍認為其作用機制為拮抗3-羥基-3 甲基戊二酸單酰輔酶A（HMG-CoA）還原酶的活性，從而阻止甲羥戊酸途徑的毒性代謝物累積，并抑制炎癥途徑中組蛋白修飾誘導的先天免疫細胞的活化［1，6］。盡管已有諸多文獻報道外用他汀類藥物的安全性和有效性，但臨床并未見已上市相關制劑。本研究中以2.0%辛伐他汀乳膏為研究對象進行質(zhì)量控制研究，為藥物的轉化開發(fā)提供了支持。

本制劑為水包油（O/ W）型乳膏，以單/ 雙硬脂酸甘油酯、液體石蠟、白凡士林、十八醇等為油相，以聚乙二醇4000、純化水等為水相，以吐溫80 為表面活性劑，以丙二醇為溶劑，以羥苯乙酯為防腐劑。具有外用乳膏制劑的基本成分，試制了較完善的乳膏制劑處方，成分安全，刺激性?。?-9］。相比普通乳化技術，本制劑采用D 相乳化法配制［10］，可得到微細的O/ W 乳化粒子，增加了乳膏的穩(wěn)定性，使獲得的乳膏性狀、涂抹性良好，膚感細膩［11-12］。

以往對辛伐他汀口服制劑的質(zhì)量控制方法主要采用高效液相色譜法、紫外吸收光譜法等［13-14］。與之相比，本研究中采用的UPLC 法快速、靈敏，結果準確，分離度高［15］。此外，該方法的流動相無離子對試劑，操作簡便，平衡時間短，且不易對色譜柱造成損傷，便于后續(xù)進行制劑穩(wěn)定性試驗和破壞性試驗等研究，以及未來大樣本量的常規(guī)檢測。

預試驗中分別采用甲醇、乙醇、甲醇/水、環(huán)己烷、四氫呋喃等溶劑提取制劑主要成分，通過增加提取次數(shù)或進行超聲提取，均未能完全提取主藥。改以丙酮為提取溶劑后提取率達到要求，并嘗試以丙酮作為定容溶劑進樣，結果保留時間較不穩(wěn)定，原因可能為常溫下丙酮的飽和蒸氣壓較高、易揮發(fā)，將其改為甲醇定容進樣后可獲得較穩(wěn)定的測定結果［16］。預試驗中還對流動相進行了研究，發(fā)現(xiàn)以乙腈/水體系作為流動相即可獲得良好的分離度及峰形，當流動相為乙腈-水（52∶48，V/V），流速為0.6 mL/ min 時，主藥保留時間約為4.15 min［16-19］，分離效果較好。

本研究也存在一定局限性，如尚未完成制劑長期穩(wěn)定性試驗、加速試驗，以及高溫、高濕、強光照試驗，故辛伐他汀乳膏尚不能作為新制劑應用于臨床。據(jù)國外文獻報道，外用他汀類藥物時通常會輔以膽固醇作為聯(lián)合用藥，或將其制成復方制劑使用。他汀類藥物誘導的膽固醇缺乏可引起表皮板層小體數(shù)量和內(nèi)容物的減少，導致皮膚產(chǎn)生魚鱗狀改變［4，6］?？梢?，膽固醇在表皮屏障中具有關鍵作用，若單獨外用辛伐他汀乳膏可能會導致不良反應。因此，未來將進一步開發(fā)辛伐他汀/膽固醇的復方外用制劑，并對其進行質(zhì)量控制。

綜上所述，本研究中所建立的方法快速，結果準確，可用于辛伐他汀乳膏的質(zhì)量控制。