陳土榮，吳啟端，吳雪茹

（1. 廣州中醫(yī)藥大學(xué)第三附屬醫(yī)院，廣東 廣州 510378； 2. 廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，廣東 廣州 510405）

健步消腫止痛油是廣州中醫(yī)藥大學(xué)第三附屬醫(yī)院（下文以我院代稱）的院內(nèi)制劑，有活血化瘀、舒筋通絡(luò)、消腫止痛功效。臨床治療跌打損傷、慢性勞損、筋傷、扭挫傷，以及骨質(zhì)增生、骨質(zhì)疏松等引起的疼痛腫脹、瘀斑等癥20 余年，其組成藥物略有調(diào)整。本研究中根據(jù)目前組方藥物特點(diǎn)［1］，采用氣相色譜- 質(zhì)譜聯(lián)用（GC-MS）法分析其主要成分，并考察在不同條件下主要成分的變化，系統(tǒng)評(píng)價(jià)其內(nèi)在質(zhì)量和穩(wěn)定性，為健步消腫止痛油的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供參考?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 7890A-5975C 型氣質(zhì)聯(lián)用儀（美國Agilent公司）；AE-200 型分析天平（瑞士Mettler Toledo 公司，精度為0.1 mg）；0.45μm針筒式微孔濾膜過濾器（天津市騰達(dá)過濾器件廠）。

1.2 試藥

健步消腫止痛油（批號(hào)分別為20180701，20180901，20181001，記為樣品1，2，3），薄荷腦（南通薄荷廠有限公司，批號(hào)為180102），丁香油（湛江市睿致香料有限公司，批號(hào)為20180601），冰片（株洲松本藥業(yè)有限公司，批號(hào)為180201），桉油（佛山市南海中南藥化廠，批號(hào)為170901），松節(jié)油（湖南爾康制藥股份有限公司，批號(hào)為060620180502），均由我院制劑室提供；無水乙醇為色譜純，無水硫酸鈉為分析純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 試驗(yàn)條件

色譜柱為DB-1ms石英毛細(xì)管柱（30 m×0.25 mm，0.25μm），進(jìn)樣口溫度為250 ℃，接口溫度為260 ℃，載氣為氦氣，流速為1.0 mL/min，柱壓為80 kPa，分流比為20∶1，進(jìn)樣量為1.0 μL；升溫程序：初始溫度為60 ℃，以5 ℃/ min 的速率升至75 ℃，以2 ℃/ min 的速率升至81 ℃，以1 ℃/min的速率升至83 ℃，以5 ℃/min的速率升至103 ℃，以30 ℃/min 的速率升至200 ℃，保持2 min。電子轟擊離子源（70 eV），雙燈絲；電離電壓為1.2 kV，掃描范圍40～400 aum，掃描間歇0.5 s。

2.2 供試品溶液制備

取樣品約50 mg，精密稱定，置5 mL容量瓶中，加無水乙醇定容，再加適量無水硫酸鈉適量，用0.45μm 針筒式微孔濾膜過濾器濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3 方法學(xué)考察

精密度試驗(yàn)：取同一批供試品溶液（樣品批號(hào)為20180901）適量，按2.1項(xiàng)下試驗(yàn)條件連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次，記錄峰面積。結(jié)果各成分峰面積的RSD均小于3.0%（n=6），表明方法精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一批供試品溶液（樣品批號(hào)為20180901）適量，分別于室溫下放置0，2，4，6，8，12，24 h時(shí)按2.1 項(xiàng)下試驗(yàn)條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果各成分峰面積的RSD均小于3.0%（n=7），表明供試品溶液在室溫下放置24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn)：取樣品（批號(hào)為20180901）適量，共6份，按2.2 項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按2.1 項(xiàng)下試驗(yàn)條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果各成分的RSD均小于3.0%（n=6），表明方法重復(fù)性良好。

2.4 樣品檢測(cè)

取樣品（批號(hào)為20180701）適量，按2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按2.1 項(xiàng)下試驗(yàn)條件進(jìn)樣測(cè)定，部分成分GC - MS 總離子流圖見圖1（峰號(hào)1 - 21 對(duì)應(yīng)表1 中的化合物1-21）。經(jīng)譜庫檢索，結(jié)合質(zhì)譜數(shù)據(jù)與人工圖譜解析，鑒定樣品中的21 個(gè)成分，與原料藥對(duì)比，確定其來源。采用峰面積歸一化法計(jì)算各成分的相對(duì)百分含量。其中，平均相對(duì)百分含量＞1%的主要成分有11個(gè)，分別為α-蒎烯、β-蒎烯、α-松油烯、β-水芹烯、1，8-桉葉素、異龍腦、龍腦、薄荷醇、丁香酚、石竹烯、傘花烴。21 個(gè)成分總相對(duì)百分含量＞98%，11 個(gè)主要成分總相對(duì)百分含量＞95%。詳見表1。

表1 樣品中21個(gè)成分的相對(duì)百分含量及其來源Tab.1 Relative percentage content and source of 21 components in samples

圖1 總離子流圖Fig.1 Total ion chromatogram

2.5 穩(wěn)定性研究

室溫敞口放置：取3批樣品各1瓶，分別于室溫敞口放置0，6，12，24，48 h 時(shí)取樣，按2.2 項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按2.1 項(xiàng)下試驗(yàn)條件測(cè)定。結(jié)果11 個(gè)主要成分的相對(duì)百分含量的RSD均小于5.0%（n=5）。詳見表2。

表2 室溫敞口放置下樣品主要成分相對(duì)百分含量（%）Tab.2 Relative percentage content of main components in samples under the condition of exposure at room temperature（%）

加熱破壞與光照破壞：取3 批樣品各50 mg，置5 mL 容量瓶中，于60 ℃加熱2 h，按2.2 項(xiàng)下方法制備加熱破壞供試品溶液，按2.1 項(xiàng)下試驗(yàn)條件進(jìn)樣測(cè)定。另取3 批樣品各50 mg，置5 mL 容量瓶中，分別于紫外燈下254 nm和366 nm波長處各照射2 h，按“加熱破壞”方法制備供試品溶液和進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果0 h、加熱和光照后，11 個(gè)主要成分的相對(duì)百分含量的RSD均小于5.0%。詳見表3。

表3 加熱破壞與光照破壞條件下樣品主要成分相對(duì)百分含量（%）Tab.3 Relative percentage content of main components in samples under heating and lighting damage（%）

長期穩(wěn)定性：將3 批樣品在上市包裝條件下室溫存放36 個(gè)月，每2～3 個(gè)月取樣1 次，按2.2 項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按2.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算其平均相對(duì)百分含量。結(jié)果共檢測(cè)14 次，11 個(gè)主要成分中9 個(gè)無明顯變化，α- 松油烯逐漸減少，傘花烴逐漸增加，3 批樣品中二者總平均相對(duì)百分含量分別為（2.366 ± 0.048）% 、（2.325 ± 0.047）% 、（0.769 ±0.027）%，RSD分別為2.01%，2.01%，3.48%。提示2 種成分相對(duì)百分含量互相消長，合計(jì)無明顯變化。詳見表4 和圖2。

表4 樣品36個(gè)月內(nèi)主要成分相對(duì)百分含量（%）Tab.4 Relative percentage content of main components of samples within 36 months（%）

圖2 36個(gè)月內(nèi)3批樣品中α-松油烯和傘花烴相對(duì)百分含量變化趨勢(shì)Fig.2 Trends of relative percentage content change of α - terpinene and cymene in three batches of samples within 36 months

3 討論

健步消腫止痛油含丁香油、薄荷腦、冰片、桉油、松節(jié)油等藥物。松節(jié)油的主要成分為α-蒎烯，能增進(jìn)局部血液循環(huán)、緩解腫脹和輕微止痛作用，穿透力強(qiáng)，能滲入深部組織而引起刺激，進(jìn)而促進(jìn)血液循環(huán)。故松節(jié)油在臨床中常作為皮膚刺激藥，用于治療肌肉痛或關(guān)節(jié)痛等［2］。薄荷腦具有多種藥理活性，能選擇性地刺激人體皮膚或黏膜的冷覺感受器，產(chǎn)生冷覺反射和冷感。有研究表明，低溫有利于抑制炎性反應(yīng)［3］。薄荷腦外用可抗炎、止痛、止癢、抗菌、促進(jìn)血液循環(huán)、減輕浮腫等［4-9］。桉油主要成分為1，8 - 桉葉素，具有促進(jìn)透皮吸收、抗炎、抗氧化、抗微生物、抗腫瘤等藥理作用，對(duì)機(jī)體的呼吸系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、循環(huán)系統(tǒng)和消化系統(tǒng)均有一定的保護(hù)作用［10］。冰片主要成分是龍腦和異龍腦，具有開竅醒神、消腫止痛、抗菌、抗炎等功效［11］。丁香油具有抗菌、消炎和止痛等功效［12］。上述藥物合用，可發(fā)揮抗炎、消腫、止痛作用。臨床可有效治療腰腿痛、肩頸痛、風(fēng)濕痛、關(guān)節(jié)痛、跌打腫痛、肌肉勞損等癥。

本研究中根據(jù)健步消腫止痛油組方，采用GC-MS法分析其成分，鑒定其中的21個(gè)化學(xué)成分，其總相對(duì)百分含量＞98%。主要成分有11個(gè)，其總相對(duì)百分含量＞95%。其中薄荷醇占27%，α- 蒎烯占25%，1，8 - 桉葉素、龍腦、丁香酚各占10%，異龍腦占6%。其余5 個(gè)成分相對(duì)百分含量均低于2%。通過室溫敞口放置、加熱破壞、光照破壞、室溫放置36個(gè)月考察樣品的穩(wěn)定性，結(jié)果前3種條件下，樣品中主要成分相對(duì)百分含量均無明顯變化。室溫下放置36 個(gè)月后，其中9 個(gè)主要成分相對(duì)百分含量無明顯變化，α- 松油烯和傘花烴互相消長，但總量無明顯變化。研究中發(fā)現(xiàn)，α- 松油烯和傘花烴轉(zhuǎn)化速率與二者的比值有關(guān)，比值越大轉(zhuǎn)化越慢；且單一原料藥中未見二者轉(zhuǎn)化的現(xiàn)象。推測(cè)可能是其他藥物成分促成這2 個(gè)成分的轉(zhuǎn)化，具體原因有待進(jìn)一步研究。

綜上所述，本研究中所建立的方法操作簡便，結(jié)果穩(wěn)定可靠，可為健步消腫止痛油的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供參考；健步消腫止痛油的主要成分在室溫放置（短期、長期）、加熱、光照條件下基本穩(wěn)定。