石 林，曾 媛，劉 輝，許寧寧

（1. 湖北科技學(xué)院藥學(xué)院，湖北 咸寧 437100； 2. 中國(guó)人民解放軍中部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院醫(yī)療保障中心藥劑科，湖北 武漢 430070； 3. 中國(guó)人民解放軍中部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院醫(yī)療保障中心，湖北 武漢 430070）

雙相控釋片系統(tǒng)適用于按2種不同的速率或在2個(gè)不同的時(shí)間段以速釋/ 緩釋或緩釋/ 速釋的方式釋放藥物。速釋/緩釋釋放系統(tǒng)提供藥物釋放的初始爆發(fā)，然后在規(guī)定的時(shí)間段內(nèi)以恒定速率釋放［1］。使用該類(lèi)系統(tǒng)藥物多需快速達(dá)到藥物的起效濃度并長(zhǎng)時(shí)間維持，以避免重復(fù)給藥，其合適的候選藥物包括非甾體抗炎藥（NSAID）、抗高血壓、抗組胺和抗過(guò)敏藥物［1］。酮咯酸氨丁三醇為具有強(qiáng)效鎮(zhèn)痛活性的NSAID，屬非選擇性環(huán)氧合酶（COX）抑制劑，通過(guò)阻斷花生四烯酸的代謝，抑制環(huán)氧合酶，減少前列腺素的合成，從而達(dá)到鎮(zhèn)痛效果［2］，常用于臨床需要阿片水平鎮(zhèn)痛的短期治療，其作用于外周神經(jīng)抑制，無(wú)呼吸抑制作用且無(wú)成癮性［3］。其國(guó)內(nèi)市售劑型主要有注射劑、片劑、膠囊劑、滴眼劑［4］，國(guó)內(nèi)外處于研發(fā)階段的劑型有骨架型緩釋片、口服緩釋微囊、緩釋植入劑、鼻噴劑、胃漂浮片、滲透泵片等［5-10］。目前，酮咯酸氨丁三醇在臨床用于劇烈疼痛的鎮(zhèn)痛，如骨科術(shù)前及術(shù)后鎮(zhèn)痛［11-13］、腫瘤科的鎮(zhèn)痛［14-16］、婦產(chǎn)科的鎮(zhèn)痛［17-18］等，普通口服制劑和注射劑雖然起效迅速，但1 d 內(nèi)需多次給藥，血藥濃度波動(dòng)大；口服緩釋制劑作用時(shí)間長(zhǎng)但起效慢，不能達(dá)到迅速止疼的效果［19］。該藥的雙相控釋片既能迅速鎮(zhèn)痛并減少用藥次數(shù)，又能長(zhǎng)時(shí)間穩(wěn)定持續(xù)作用及降低不良反應(yīng)發(fā)生率，具有顯著臨床優(yōu)勢(shì)。為此，本研究中探討了該雙相控釋片的制備方法及處方工藝的優(yōu)化?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

BT25S型超微量電子分析天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）；YDP-200C型片劑硬度測(cè)定儀、RCZ-8型藥物溶出度儀（上海黃海藥檢儀器有限公司）；PP-120型單沖壓片機(jī)（湖南省衡陽(yáng)市藥械設(shè)備廠(chǎng)）；Labcoating3型高效包衣機(jī)（深圳信宜特科技有限公司）；SDK-I-02型激光打孔機(jī)（天津市工業(yè)自動(dòng)化儀表研究所）；DHG9146A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；LC-20AT型高效液相色譜儀（日本Shimadzu公司）。

1.2 試藥

酮咯酸氨丁三醇對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)為101532-202001，含量99.8%）；酮咯酸氨丁三醇（海南卓科制藥有限公司，批號(hào)為Y-20200902）；醋酸纖維素（ESTMAN，批號(hào)為AC - 02080NF）；聚乙二醇4000（PEG 4000，南京威爾化工有限公司，批號(hào)為20190107B - 1）；丙酮（江蘇強(qiáng)盛功能化學(xué)股份有限公司，批號(hào)為20180702）；甲醇（批號(hào)為20191031）、冰醋酸（批號(hào)為20190121），均購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；硬脂酸鎂（安徽山河藥用輔料股份有限公司，批號(hào)為200701）；氧化鐵紅（批號(hào)為20200309）、氧化鐵黃（批號(hào)為20190524），均購(gòu)自上海一品顏料有限公司；羥丙甲纖維素K4M（HPMC - K4M，批號(hào)為D180J5U002）、PEO WSR303（批號(hào)為D682J57RR3）、PEO N10（批號(hào)為D682J3SRH4），均購(gòu)自陶氏化學(xué)公司；聚乙烯吡咯烷酮K30（PVP - K30，安徽山河藥用輔料股份有限公司，批號(hào)為190408）；NaCl（江蘇省勤奮藥業(yè)有限公司，批號(hào)為20190725）。

2 方法與結(jié)果

2.1 制備

酮咯酸氨丁三醇雙相控釋片包括速釋層和控釋層，采用壓制包衣法將速釋層粉末均勻包裹于控釋片外，即得雙相控釋片。

控釋片的制備：取控釋片含藥層處方量藥物和輔料各適量，分別過(guò)80 目篩，按等量遞加法使其充分混合。將處方量PVP - K30 溶于適量乙醇，將其與含藥層進(jìn)行混合制軟材，過(guò)20 目篩制得濕顆粒，置40 ℃烘箱內(nèi)干燥4 h，過(guò)18 目篩整粒，加入處方量潤(rùn)滑劑，混勻，得處方量含藥層顆粒。同法制備助推層顆粒。取處方量含藥層顆粒適量，置壓片機(jī)?？變?nèi)，預(yù)壓使其表面平整，再加入處方量的助推層顆粒，壓制成酮咯酸氨丁三醇控釋片片芯。為了保證藥片的成型性，壓制過(guò)程中保持片芯硬度為50～60 N。取處方量PEG 4 000于處方量水中完全溶解，緩慢加入處方量的醋酸纖維素，邊加邊攪拌，至完全溶解。對(duì)壓制好的雙層片芯進(jìn)行包衣。包衣參數(shù)：包衣鍋內(nèi)溫度40 ℃，包衣鍋轉(zhuǎn)速40 r/min，噴霧速率2～4 mL/min。包衣到一定增重后，置40 ℃烘箱中干燥24 h，最后將包衣完成的藥片含藥層一側(cè)打一個(gè)孔徑為1.0 mm 的釋藥孔，即得酮咯酸氨丁三醇控釋片。

速釋層的制備：將速釋層處方量的酮咯酸氨丁三醇及輔料分別過(guò)80 目篩后備用，按照等量遞加法混合均勻，加入潤(rùn)滑劑混勻，獲得速釋層粉末備用。

雙相控釋片的制備：將一定量的速釋層粉末置12 號(hào)沖模的底部進(jìn)行輕壓，使其平整，然后將制備好的控釋片置于沖模的中心位置，加入剩余量速釋層粉末，再次壓片，得雙相控釋片（樣品）。

2.2 釋放度測(cè)定

2.2.1 色譜條件

色譜柱：Diamonsil C18柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇-水-冰醋酸（65∶34∶1，V/V/V）；流速：0.9 mL/ min；檢測(cè)波長(zhǎng)：322 nm；柱溫：40 ℃；進(jìn)樣量：20μL。

2.2.2 溶液制備

取酮咯酸氨丁三醇對(duì)照品15 mg，精密稱(chēng)定，置250 mL棕色容量瓶中，加純化水溶解并定容，搖勻，得對(duì)照品溶液。取樣品適量，以600 mL 純化水作釋放介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為50 r/min，在規(guī)定時(shí)間點(diǎn)取樣，每次約4 mL，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。按處方量制備不含藥物的雙相控釋片，同法取樣，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得陰性對(duì)照品溶液。

2.2.3 方法學(xué)考察

專(zhuān)屬性試驗(yàn)：分別取供試品溶液、對(duì)照品溶液和陰性對(duì)照品溶液各適量，按2.2.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。結(jié)果陰性對(duì)照品溶液色譜中，在與對(duì)照品溶液色譜峰相同保留時(shí)間處無(wú)干擾峰，表明專(zhuān)屬性良好。詳見(jiàn)圖1。

圖1 高效液相色譜圖Fig.1 HPLC chromatograms

線(xiàn)性關(guān)系考察：取酮咯酸氨丁三醇對(duì)照品50 mg，精密稱(chēng)定，置100 mL棕色容量瓶中，加純化水溶解并定容；分別取0.5，1，2，5，10，20 mL，置50 mL 容量瓶?jī)?nèi)制成系列對(duì)照品溶液。各取10μL，按2.2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。以酮咯酸氨丁三醇質(zhì)量濃度（X，μg/mL）為橫坐標(biāo)、峰面積（Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線(xiàn)性回歸，得回歸方程Y=29 368X-36 329（R2=0.999 7）。結(jié)果表明，酮咯酸氨丁三醇質(zhì)量濃度在5～200μg/mL 范圍內(nèi)與峰面積線(xiàn)性關(guān)系良好。

定量限與檢測(cè)限考察：分別精密量取2.2.2項(xiàng)下對(duì)照品溶液適量，倍比稀釋?zhuān)?.2.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，以信噪比為10∶1、3∶1 時(shí)的質(zhì)量濃度分別記作定量限及檢測(cè)限。結(jié)果酮咯酸氨丁三醇定量限及檢測(cè)限分別為1.262 7，0.378 8μg/mL。

精密度試驗(yàn)：取2.2.2 項(xiàng)下對(duì)照品溶液適量，按2.2.1項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次或連續(xù)進(jìn)樣7 d，每天進(jìn)樣1次，記錄峰面積。結(jié)果，酮咯酸氨丁三醇峰面積的RSD分別為0.06%（n=6），0.12%（n=7），表明日內(nèi)、日間精密度均良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取2.2.2 項(xiàng)下供試品溶液適量，分別于室溫下放置0，4，8，12，24 h時(shí)按2.2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果，酮咯酸氨丁三醇峰面積的RSD為0.18%（n= 5），表明供試品溶液在室溫放置12 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn)：稱(chēng)取樣品適量，精密稱(chēng)定，共6 份，按2.2.2 項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按2.2.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并計(jì)算含量。結(jié)果，酮咯酸氨丁三醇平均含量的RSD為0.32%（n= 6），表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：取2.2.3項(xiàng)下系列對(duì)照品溶液各適量，加入相對(duì)應(yīng)處方量的輔料，制得濃度相當(dāng)于釋放度為10%，20%，40%，80%，120%的供試品溶液，再按2.2.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并計(jì)算回收率。結(jié)果，平均回收率為101.32%，RSD為0.98%（n= 5），表明方法準(zhǔn)確度良好。

2.2.4 樣品釋放度的測(cè)定

采用沉降籃法。取樣品6 片，以600 mL 純化水為釋放介質(zhì)，溶出液溫度為（37±0.5）℃，轉(zhuǎn)速為50 r/min。在0，1，2，4，6，8，10，12，14，16，18，20，22，24 h 時(shí)取樣4 mL，并及時(shí)補(bǔ)充，溶液經(jīng)0.45 μm 微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得待測(cè)溶液；另取2.2.2 項(xiàng)下對(duì)照品溶液；按2.2.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，平行3 次，記錄峰面積并計(jì)算含量及樣品在各時(shí)間點(diǎn)的累積釋放度（Q）。

2.3 單因素試驗(yàn)

速釋層MCC 型號(hào)：保持處方其他因素不變，分別以速藥層MCC 不同型號(hào)（MCC PH - 301、MCC UF - 711、MCC KG-802、MCC KG-1000）制成樣品，檢測(cè)其硬度和脆碎度。結(jié)果表明，將KG-802 型MCC 制成樣品時(shí)，硬度和脆碎度符合要求。詳見(jiàn)表1。

表1 速釋層MCC型號(hào)對(duì)樣品硬度和脆碎度的影響Tab.1 Effect of MCC type in rapid - release layer on the hardness and friability of samples

CCMC-Na 用量：保持處方其他因素不變，分別以速釋層CCMC-Na不同用量（速釋層總質(zhì)量的1%，2%，3%，4%，5%，6%）制成樣品，檢測(cè)崩解時(shí)限。結(jié)果崩解時(shí)限分別為182，156，124，96，71，42 s，表明CCMC-Na用量為3%～4%時(shí)，崩解時(shí)限符合要求。

速釋層硬脂酸鎂質(zhì)量占比：保持處方其他因素不變，將速釋層潤(rùn)滑劑硬脂酸鎂質(zhì)量占比分別設(shè)置為0.5%，1.0%，1.5%制成樣品，檢測(cè)樣品流動(dòng)性和硬度。結(jié)果表明，硬脂酸鎂質(zhì)量占比為1.5%時(shí)，樣品硬度和流動(dòng)性均符合要求。詳見(jiàn)表2。

表2 硬脂酸鎂的用量對(duì)樣品流動(dòng)性和硬度的影響Tab.2 Effect of magnesium stearate dosage on the fluidity and hardness of samples

速釋層總質(zhì)量：保持處方其他因素不變，將速釋層總質(zhì)量設(shè)置為200，300，400 g 制成樣品，檢測(cè)樣品成型性和脆碎度。結(jié)果表明，速釋層總質(zhì)量在300 g 時(shí)，樣品成型性最佳，且脆碎度符合要求。詳見(jiàn)表3。

表3 速釋層總質(zhì)量對(duì)樣品成型性和脆碎度的影響Tab.3 Effect of total mass of rapid - release layer on the formability and friability of samples

控釋片包衣增重：保持處方其他因素不變，將包衣增重設(shè)置為10%，12%，14%，16%制成樣品，測(cè)定含量并繪制體外釋放曲線(xiàn)。結(jié)果表明，包衣增重14%時(shí)的樣品比包衣增重16%（1 h）時(shí)的釋放更快，比包衣增重12%時(shí)的釋放得更平緩，最符合速釋階段迅速達(dá)到藥物起效濃度，控釋階段能維持有效血藥濃度的要求。藥物體外釋放曲線(xiàn)見(jiàn)圖2。

圖2 藥物體外釋放曲線(xiàn)Fig.2 Drug release profiles in vitro

2.4 處方優(yōu)化

試驗(yàn)設(shè)計(jì)：由單因素試驗(yàn)結(jié)果可知，速釋層總質(zhì)量（因素A，mg）、速釋層硬脂酸鎂質(zhì)量占比（因素B，%）和控釋層包衣增重（因素C，%）是影響藥物釋放行為的主要因素。采用Box- Behnken 響應(yīng)面法設(shè)計(jì)三因素三水平試驗(yàn)，以1 h 累積釋放度Y1（%）、16 h 累積釋放度Y2（%）和硬度Y3（N）為評(píng)價(jià)指標(biāo)。因素與水平見(jiàn)表4，試驗(yàn)設(shè)計(jì)及各指標(biāo)測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表5。

表4 因素與水平Tab.4 Factors and their levels

表5 Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果Tab.5 Design and results of Box - Behnken test

模型擬合：經(jīng)Design-Expert軟件分析，以3個(gè)考察指標(biāo)為因變量對(duì)各因素進(jìn)行二次多項(xiàng)式擬合。結(jié)果速釋層總質(zhì)量（Y1）= 19.51 - 0.51 ×A+ 0.055 ×B-2.02×C-0.018×A×B+5×10-3×A×C+7×10-3×B×C+0.27×A2-0.20×B2-1.23×C2（R2=0.989 8，P＜0.000 1）；速釋層硬脂酸鎂質(zhì)量占比（Y2）=86.49-8.84×A+3.55×B-7.99×C-0.26×A×B-4.12×A×C+ 2.27 ×B×C+ 0.54 ×A2- 0.17 ×B2- 2.22 ×C2（R2= 0.976 7，P＜0.000 1）；控釋層包衣增重（Y3）=42.54+11.76×A-3.36×B-0.45×C-0.18×A×B+1.40×A×C+ 2.90×B×C- 1.48×A2+ 0.067×B2-2.01×C2（R2=0.851 4，P＜0.000 1）。

方差分析：將模型的回歸參數(shù)進(jìn)行方差分析，結(jié)果見(jiàn)表6。速釋層總質(zhì)量及速釋層硬脂酸鎂質(zhì)量占比影響因素排序均為因素C ＞因素A ＞因素B，控釋層包衣增重影響因素排序?yàn)橐蛩谹 ＞因素B ＞因素C。

表6 回歸模型的方差分析結(jié)果Tab.6 Results of the ANOVA of regression model

響應(yīng)面預(yù)測(cè)：隨著速釋層總質(zhì)量的減小，控釋層包衣增重減小，1 h累積釋放度逐漸增大。隨著速釋層總質(zhì)量的增大，控釋層包衣增重增大，16 h累積釋放度逐漸減少。隨著速釋層總質(zhì)量的減小，硬脂酸鎂質(zhì)量占比增大，硬度逐漸減小。詳見(jiàn)圖3。由圖可知，最優(yōu)處方為速釋層總質(zhì)量320 mg，速釋層硬脂酸鎂質(zhì)量4.4 mg，控釋層包衣增重14.4%。

圖3 響應(yīng)面圖Fig.3 Response surface diagrams

2.5 驗(yàn)證試驗(yàn)

依據(jù)優(yōu)化處方：按上述處方工藝制備3批酮咯酸氨丁三醇控釋片進(jìn)行處方驗(yàn)證。結(jié)果表明，1 h累積釋放度為（19.15±0.26）%，16 h累積釋放度為（93.58±0.74）%，雙相控釋片硬度為（47±0.7）N，與各指標(biāo)預(yù)測(cè)值較接近，表明建立的模型具有良好的預(yù)測(cè)效果。詳見(jiàn)表7。

表7 最優(yōu)處方的實(shí)測(cè)值與預(yù)測(cè)值Tab.7 Measured and predicted values of the optimal prescription

3 討論

本研究結(jié)果表明，速釋層總質(zhì)量、速釋層包衣增重、速釋層硬脂酸鎂質(zhì)量占比對(duì)藥物的成型性和累積釋放度有顯著影響，速釋層總質(zhì)量會(huì)影響雙相控釋片的硬度和成型性，過(guò)大或過(guò)小均會(huì)導(dǎo)致藥物在壓片過(guò)程中出現(xiàn)裂片。速釋層微晶纖維素的種類(lèi)對(duì)雙相控釋片的成型性及脆碎度有很大影響，選擇合適的種類(lèi)的微晶纖維素，才能成功制得雙相控釋片。在壓制雙相控釋片的過(guò)程中，發(fā)現(xiàn)在將速釋層壓制包衣于控釋片時(shí)，需先將速釋層總質(zhì)量的50%置沖模底部鋪平，將控釋片置于其中心，再將另50%速釋層覆蓋其上進(jìn)行壓制包衣，這樣才能盡量保證雙相控釋片在壓制過(guò)程中不出現(xiàn)裂片，壓制包衣過(guò)程中需要?jiǎng)蛩龠M(jìn)行，這樣才能盡量排盡粉末內(nèi)的空氣，減少裂片的風(fēng)險(xiǎn)。包衣增重對(duì)控釋片的釋放速率有很大的影響，包衣增重越大，控釋片的釋放就越慢，若要藥物既能快速達(dá)到起效濃度，又能長(zhǎng)久維持有效濃度，就需要平衡速釋層藥物的含量及控釋片的包衣增重，使其能較平穩(wěn)地釋放藥物，延長(zhǎng)藥物的作用時(shí)間。

本研究所制得的酮咯酸氨丁三醇雙相控釋片的1 h及16 h 累積釋放度符合預(yù)期效果，既能迅速釋藥迅速鎮(zhèn)痛，又能長(zhǎng)時(shí)間恒速釋放藥物長(zhǎng)效鎮(zhèn)痛，更符合臨床需要，可為臨床提供一種起效更快、安全性更高、鎮(zhèn)痛時(shí)間更長(zhǎng)的鎮(zhèn)痛藥物。