劉新穎，許向陽，曾令高，毛文星，鄭冬梅，高梓真△

（1. 江蘇恩華藥業(yè)股份有限公司藥物研究院·江蘇省中樞神經(jīng)藥物研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇 徐州 221000； 2. 重慶市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)研究院·國(guó)家藥品監(jiān)督管理局麻醉精神藥品質(zhì)量監(jiān)測(cè)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，重慶 401120）

溶出是控制藥物吸收的關(guān)鍵因素，在口服固體藥物制劑的研發(fā)與質(zhì)量控制中，體外溶出試驗(yàn)對(duì)制劑處方篩選及工藝優(yōu)化、評(píng)價(jià)質(zhì)量的一致性、預(yù)測(cè)體外溶出速率與生物利用度的相關(guān)性［1-4］有指導(dǎo)意義。目前，口服普通制劑常選擇籃法或槳法測(cè)定溶出度，隨著制藥行業(yè)的不斷發(fā)展，復(fù)雜新型制劑大量涌現(xiàn)，在評(píng)估藥物制劑的體外釋放行為時(shí)面臨更多的挑戰(zhàn)［5］。傳統(tǒng)溶出度測(cè)定方法存在一些固有局限性（尤其是對(duì)緩/控釋制劑），故常用往復(fù)筒法、流通池法等［6-8］新方法作為其必要補(bǔ)充。往復(fù)筒溶出度測(cè)定裝置具有介質(zhì)靈活（能快速、簡(jiǎn)便地改變?nèi)艹鼋橘|(zhì)組分、pH 等）、流體力學(xué)獨(dú)特（通過上下往復(fù)提供剪切力）等優(yōu)勢(shì)，能更好地模擬體內(nèi)生理環(huán)境，更具區(qū)分力，可更全面地考察制劑質(zhì)量。目前第43 版《美國(guó)藥典》中碳酸鋰緩釋片、氟西汀遲釋膠囊、硝苯地平緩釋片等品種已采用往復(fù)筒法進(jìn)行溶出度測(cè)定，《中國(guó)藥典》暫無相關(guān)方法收載品種。同時(shí)，對(duì)于體外溶出行為，除考察常規(guī)生理pH 介質(zhì)的溶出外，對(duì)于緩/控釋制劑，因其含較高活性物質(zhì)和不同的輔料，某些情況（食物或含酒精飲料）會(huì)導(dǎo)致其中的活性物質(zhì)快速釋放，從而導(dǎo)致藥物系統(tǒng)暴露量發(fā)生變化，引發(fā)用藥安全問題。故需合理地選擇體外試驗(yàn)方法，評(píng)估乙醇劑量?jī)A瀉風(fēng)險(xiǎn)［9-11］。本研究中以鹽酸羥考酮緩釋片為研究對(duì)象。鹽酸羥考酮是臨床治療中重度癌痛的常用藥物，其生物利用度高，不良反應(yīng)輕［12］。目前已上市的固體劑型有速釋膠囊、速釋片劑及緩釋片，與口服速釋制劑相比，緩釋制劑可減少給藥次數(shù)，提高患者的用藥依從性，減少血藥濃度的峰谷現(xiàn)象，減輕毒副作用，尤其適用于長(zhǎng)期用藥患者，臨床優(yōu)勢(shì)明顯［13-15］。為促進(jìn)鹽酸羥考酮緩釋片仿制藥的開發(fā)，保證臨床用藥需求，本研究中建立了制劑籃法和往復(fù)筒法溶出測(cè)定方法，并進(jìn)行含乙醇介質(zhì)的劑量?jī)A瀉評(píng)估，探討其體外釋藥特性，從而為后續(xù)仿制藥的工藝改進(jìn)及質(zhì)量控制研究提供借鑒。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

XSE205 DU 型電子天平（瑞士Mettler Toledo 公司，精度為0.01 mg）；LC - 20AD 型液相色譜儀（日本Shimadzu 公司）；FADT-1202 型自動(dòng)取樣溶出儀（上海富科思分析儀器有限公司）；DISSO Ⅲ- 7 型往復(fù)筒溶出儀（美國(guó)Logan Instruments公司）。

1.2 試藥

鹽酸羥考酮對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)為171271 - 201501，含量94.9%）；鹽酸羥考酮緩釋片（奧施康定，Purdue Pharma LP 公司，批號(hào)為WF1T4，規(guī)格為每片40 mg）；庚烷磺酸鈉、甲醇、乙腈均為色譜純，其余試劑均為分析純，水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent Eclipse XDB C8柱（150 mm×4.6 mm，5μm）；流動(dòng)相：1.1 g/L 庚烷磺酸鈉溶液（用磷酸調(diào)pH至2.0）- 甲醇- 乙腈（750∶150∶100，V/V/V）；流速：1.5 mL/ min；檢測(cè)波長(zhǎng)：230 nm；柱溫：45 ℃；進(jìn)樣量：50μL。

2.2 溶液制備

溶出介質(zhì)：根據(jù)人體內(nèi)吸收部位的pH 環(huán)境（胃腸液pH 為1.2～6.8）配制。取氯化鈉2.0 g、鹽酸7 mL，精密稱定，加水至1 000 mL，即得pH 1.2 氯化鈉鹽酸溶液；取乙酸鈉2.99 g，冰醋酸1.68 g，精密稱定，加水至1 000 mL，即得pH 4.5醋酸鹽溶液；精密量取0.2 mol/L磷酸二氫鉀溶液250 mL、0.2 mol/L氫氧化鈉溶液118 mL，加水至1 000 mL，即得pH 6.8 磷酸鹽溶液。分別記為介質(zhì)1，2，3（下文順序同）。

對(duì)照品溶液：取鹽酸羥考酮對(duì)照品適量，精密稱定，用甲醇溶解，制成質(zhì)量濃度為1 mg/mL 的對(duì)照品貯備液；精密量取適量，用溶出介質(zhì)稀釋成質(zhì)量濃度為40μg/mL的對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

專屬性考察：取2.2 項(xiàng)下介質(zhì)1，2，3 及對(duì)照品溶液各適量，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。結(jié)果介質(zhì)1，2，3 在與對(duì)照品溶液保留時(shí)間相同處無干擾峰，表明專屬性良好。詳見圖1。

圖1 高效液相色譜圖Fig.1 HPLC chromatograms

線性關(guān)系考察：分別精密量取2.2項(xiàng)下對(duì)照品貯備液適量，用介質(zhì)1，2，3稀釋制成系列對(duì)照品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。以鹽酸羥考酮質(zhì)量濃度（C，μg/mL）為橫坐標(biāo)、峰面積（A）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程A1=45 405C1-3 677.5（r=1.000 0），A2= 45 331C2- 2 235.4（r= 1.000 0），A3= 45 863C3-2 992.1（r= 1.000 0）。結(jié)果表明，介質(zhì)1，2，3 中鹽酸羥考酮質(zhì)量濃度均在0.5～80μg/mL 范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn)：取2.2項(xiàng)下對(duì)照品溶液適量，按2.1項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次，記錄峰面積。結(jié)果的RSD分別為0.28%，0.34%，0.05%（n=6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取2.2 項(xiàng)下對(duì)照品溶液適量，分別于室溫下放置0，8，16，24，36，48 h時(shí)按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果的RSD分別為0.09%，0.11%，0.21%（n= 6），表明對(duì)照品溶液在室溫下放置48 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

加樣回收試驗(yàn)：取樣品適量，精密稱定，共9 份，分別精密加入低、中、高質(zhì)量濃度的對(duì)照品溶液，制備待測(cè)溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，并計(jì)算加樣回收率。結(jié)果平均加樣回收率分別為99.78%，99.16%，100.04%，RSD分別為1.76%，1.32%，1.18%（n=9），表明方法準(zhǔn)確度較高。

2.4 體外溶出測(cè)定

2.4.1 籃法

照2020 年版《中國(guó)藥典（四部）》通則0931“溶出度與釋放度測(cè)定法”第一法（籃法）測(cè)定，取樣品適量，分別以3種介質(zhì)各900 mL為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為100 r/min，依法操作，分別于0.5，1，2，4，6，8，10，12 h 時(shí)取樣5 mL（同時(shí)補(bǔ)充等溫等體積的相同釋放介質(zhì)），濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液；取適量，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖，計(jì)算不同時(shí)間的累積釋放量，并繪制體外釋放量（溶出量）-pH-時(shí)間三維釋放特性圖，結(jié)果見圖2 A和圖3。

圖2 鹽酸羥考酮緩釋片不同條件下溶出曲線Fig.2 Dissolution profiles of Oxycodone Hydrochloride Sustained-Release Tablets under different conditions

圖3 鹽酸羥考酮緩釋片的三維釋放特性Fig.3 Three-dimensional release characteristics of Oxycodone Hydrochloride Sustained-Release Tablets

2.4.2 體外釋放機(jī)制及模型擬合

按2020 年版《中國(guó)藥典（四部）》指導(dǎo)原則9013“緩釋、控釋和遲釋制劑指導(dǎo)原則”規(guī)定，采用Origin 軟件，對(duì)介質(zhì)1的體外釋藥曲線分別按零級(jí)釋放模型、一級(jí)釋放模型、Higuchi方程和Rigter-Peppas方程擬合［16-19］，用相關(guān)系數(shù)（R2）判斷其擬合程度，并分析擴(kuò)散指數(shù)，研究釋藥規(guī)律和機(jī)制，結(jié)果見表1（其中，Q為平均累積釋放量，t為時(shí)間）。

表1 溶出曲線擬合結(jié)果Tab.1 Results of model fitting of dissolution profiles

2.4.3 往復(fù)筒法

體外溶出測(cè)定結(jié)果顯示樣品無明顯pH 依賴性，且美國(guó)食品和藥物管理局（FDA）溶出數(shù)據(jù)庫(kù)收載的溶出介質(zhì)為pH 1.2 氯化鈉鹽酸溶液，故選取該溶液為代表介質(zhì)進(jìn)行研究。采用往復(fù)筒測(cè)定裝置，設(shè)定水浴溫度為（37 ± 0.5）℃，介質(zhì)體積為250 mL，行程為10 cm，滴水時(shí)間為10 s，浸入時(shí)間均為10 s。往復(fù)頻率和篩網(wǎng)孔徑是影響往復(fù)筒法溶出速率的關(guān)鍵因素。其考察參數(shù)中，往復(fù)頻率分別為10，20，30 次/分，篩網(wǎng)規(guī)格分別為上20目、下30目，上30目、下30目，上40目、下30目。將樣品置往復(fù)筒內(nèi)管中，在第1 排介質(zhì)1 中往復(fù)，分別在0.5，1，2 h時(shí)取樣5 mL；2 h后，自動(dòng)移至第2排，在介質(zhì)3中繼續(xù)往復(fù)至實(shí)驗(yàn)結(jié)束，分別于0.5，1，2，3，4，6，8 h時(shí)（已到平臺(tái)，后續(xù)不再檢測(cè)）取樣5 mL，濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。

往復(fù)頻率考察：分別采用往復(fù)頻率10，20，30次/分，上、下篩網(wǎng)目數(shù)均設(shè)為30 目。取各時(shí)間點(diǎn)的溶出液測(cè)定，繪制溶出曲線。結(jié)果見圖2 B?？梢?，隨往復(fù)頻率加快，溶出速率逐漸增加，且均基本在6 h 時(shí)達(dá)平臺(tái)。往復(fù)頻率為10 次/ 分時(shí)部分片劑一直黏附在玻璃筒內(nèi)部，影響往復(fù)狀態(tài)，而20，30 次/ 分時(shí)幾乎無上述現(xiàn)象發(fā)生，再考慮低往復(fù)頻率可保持方法的適度區(qū)分力，因此優(yōu)選往復(fù)頻率為20次/分。

篩網(wǎng)規(guī)格考察：往復(fù)筒溶出度測(cè)定裝置的上篩網(wǎng)規(guī)格一般在20～100目（或部分品種不加），下篩網(wǎng)常用目數(shù)為20～40 目，本研究中選擇前述3 種上下篩網(wǎng)組合，溶出曲線見圖2 C?？梢?，隨著上篩網(wǎng)目數(shù)的增加，篩網(wǎng)孔徑減小，介質(zhì)在制劑表面形成的剪切力減小，釋放速率后期有減緩趨勢(shì)，但整體區(qū)別不明顯?？紤]往復(fù)筒上下運(yùn)行過程中，筒內(nèi)外水能快速、平穩(wěn)、完全地進(jìn)行交換，篩網(wǎng)上下目數(shù)均選擇30目。

2.5 劑量?jī)A瀉試驗(yàn)

照2020 年版《中國(guó)藥典（四部）》通則0931“溶出度與釋放度測(cè)定法”第一法（籃法）測(cè)定，取樣品適量，分別以pH 1.2 鹽酸溶液及含5%，20%，40% 乙醇的pH 1.2 鹽酸溶液（V/V）各900 mL 為釋放介質(zhì)。設(shè)定溫度為（37 ± 0.5）℃，調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)速為100 r/ min，于15，30，45，60，75，90，105，120 min 時(shí)分別取溶液5 mL（同時(shí)補(bǔ)充等溫、等體積的釋放介質(zhì)），濾過，取續(xù)濾液2 mL，作為供試品溶液1；取適量，按2.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算累積溶出度。溶出曲線見圖4。結(jié)果顯示，與pH 1.2 鹽酸溶液比較，隨著乙醇體積分?jǐn)?shù)的增加，各時(shí)間點(diǎn)溶出量逐漸減少，表明乙醇不會(huì)導(dǎo)致劑量?jī)A瀉。

圖4 含不同體積分?jǐn)?shù)乙醇pH 1.2鹽酸介質(zhì)中鹽酸羥考酮溶出曲線Fig.4 Dissolution profiles of Oxycodone Hydrochloride Sustained-Release Tablets in hydrochloric acid（pH 1.2）containing ethanol with different volume fractions

3 討論

預(yù)試驗(yàn)中分別對(duì)比離心法和濾膜過濾法棄去不同體積濾液方式制備的對(duì)照品溶液測(cè)定結(jié)果，結(jié)果表明，棄去初濾液2 mL時(shí)，吸附達(dá)飽和，與離心方式處理的溶液峰面積基本一致，因此采用濾過方式時(shí)需棄去初濾液2 mL，取續(xù)濾液測(cè)定。

樣品在3種不同pH 介質(zhì)中的體外溶出曲線結(jié)果顯示，鹽酸羥考酮累積釋放量隨時(shí)間延長(zhǎng)逐漸增加，10 h起達(dá)溶出平臺(tái)，12 h 藥物基本溶出完全。溶出量-pH-時(shí)間三維釋放圖顯示，各pH 介質(zhì)中鹽酸羥考酮的釋放量無明顯差異，表明pH 的變化對(duì)輔料的特性釋放基本無影響。

口服緩控釋制劑按其結(jié)構(gòu)以及其釋藥機(jī)理，大致分為骨架型、膜控型與滲透泵型，主要釋藥原理有溶出、擴(kuò)散、溶蝕、滲透泵與離子交換等。鹽酸羥考酮緩釋片的體外溶出曲線擬合結(jié)果顯示，平均累積釋放量（Q）與時(shí)間（t）呈一定關(guān)系，以一級(jí)方程為最佳擬合模型（R2最大為0.997 6）。按Ritger - Peppas 模型描述其體外溶出曲線［R2= 0.969 6，釋放參數(shù)（n）為0.47］，0.45 ＜n＜0.89，顯示其釋藥機(jī)制為藥物擴(kuò)散和骨架溶蝕協(xié)同作用。

往復(fù)頻率是裝載制劑的玻璃筒在溶出杯中每分鐘往復(fù)的次數(shù)，可反映不同的流體動(dòng)力學(xué)變化，且不同往復(fù)頻率對(duì)藥品的體外溶出可能有影響?！睹绹?guó)藥典》目前收載的品種往復(fù)筒溶出度方法的往復(fù)頻率一般規(guī)定在6～30次/分，有研究表明，往復(fù)頻率在10～20次/分時(shí)，更貼合人體生理?xiàng)l件［20-21］。本研究中采用往復(fù)筒溶出度裝置測(cè)定鹽酸羥考酮緩釋片溶出度，對(duì)往復(fù)頻率、篩網(wǎng)規(guī)格等因素進(jìn)行考察，結(jié)果顯示，往復(fù)頻率（10，20，30 次/分）與溶出速率呈正相關(guān)。篩網(wǎng)規(guī)格在20～40 目考察范圍內(nèi)，隨著上篩網(wǎng)目數(shù)的增加，篩網(wǎng)孔徑減小，溶出速率略有減緩，但差異不顯著，表明篩網(wǎng)孔徑在上述范圍內(nèi)變化時(shí)，筒內(nèi)外介質(zhì)交換受影響較小。但篩網(wǎng)孔徑小到一定程度時(shí)，可能出現(xiàn)介質(zhì)交換不暢情況，導(dǎo)致溶出速率明顯降低。結(jié)合試驗(yàn)過程溶出現(xiàn)象及結(jié)果，最終確定往復(fù)筒溶出度裝置測(cè)定關(guān)鍵參數(shù)為，往復(fù)頻率20次/分，篩網(wǎng)上下目數(shù)均為30目。該方法考察樣品在酸性溶出介質(zhì)中及緩沖溶出介質(zhì)中的溶出情況，該過程模擬了緩釋制劑在胃腸道中不同滯留時(shí)間和pH環(huán)境變化，與籃法相比，吸水膨脹后的藥物制劑不會(huì)黏附在籃的內(nèi)部，且?guī)缀鯚o流體動(dòng)力學(xué)死角，影響溶出結(jié)果的穩(wěn)定性及準(zhǔn)確性，該溶出方法能更真實(shí)地反映本品的釋放特性，更好地預(yù)測(cè)體內(nèi)的釋藥情況，在仿制藥工藝改進(jìn)方面具有一定的參考價(jià)值。

劑量?jī)A瀉試驗(yàn)結(jié)果表明，隨著介質(zhì)乙醇體積分?jǐn)?shù)的增加，各時(shí)間點(diǎn)溶出量逐漸減少，表明乙醇不會(huì)引導(dǎo)產(chǎn)生劑量?jī)A瀉。這種現(xiàn)象可能與處方中的關(guān)鍵輔料聚氧乙烯在乙醇中的溶脹速率變緩有關(guān)。

綜上所述，本研究中建立了鹽酸羥考酮緩釋片溶出度測(cè)定的籃法和往復(fù)筒法，可為本品體外溶出度測(cè)定方法的選擇提供依據(jù)；對(duì)溶出曲線進(jìn)行模型擬合，考察其藥物釋放動(dòng)力學(xué)及釋藥機(jī)制；為工藝改進(jìn)提供支持；測(cè)定在含不同體積分?jǐn)?shù)乙醇鹽酸介質(zhì)中的釋放曲線，對(duì)劑量?jī)A瀉的風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行評(píng)估，進(jìn)而為本品的仿制藥開發(fā)及體內(nèi)外評(píng)價(jià)提供更多參考。