陳瑤，黃孝明，潘琳琳，張兆涵

土壤中多環(huán)芳烴分析測(cè)定方案優(yōu)化

陳瑤，黃孝明2，潘琳琳1，張兆涵1

（1. 黑龍江省齊齊哈爾生態(tài)環(huán)境監(jiān)測(cè)中心，黑龍江 齊齊哈爾 161005；2. 齊齊哈爾大學(xué) 教學(xué)實(shí)驗(yàn)設(shè)備管理中心，黑龍江 齊齊哈爾 161006）

以土壤中16種多環(huán)芳烴（PAHs）為研究對(duì)象，通過萃取、濃縮和凈化方法比較，對(duì)相關(guān)參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化．最佳條件為：快速溶劑萃取法，60目硅藻土作為基質(zhì)分散劑，正己烷-丙酮（1∶1）為萃取劑，萃取溫度100℃，15 min循環(huán)萃取2次，40℃濃縮，丙酮-正己烷（40∶60）洗脫，經(jīng)弗羅里硅土凈化柱凈化，結(jié)合氣相色譜-質(zhì)譜．該方法檢出限為0.04～0.73 μg/kg，相關(guān)系數(shù)?0.992，精密度2.9%～7.2%，平均加標(biāo)回收率85.1%～112.3%，實(shí)驗(yàn)效果顯著．該法不僅適用于土壤中PAHs的檢測(cè)，同時(shí)也為其他環(huán)境介質(zhì)中應(yīng)用提供了參考．

快速溶劑萃取；氣相色譜-質(zhì)譜；土壤；多環(huán)芳烴；優(yōu)化

多環(huán)芳烴（Polycyclic Aromatic Hydrocarbons，PAHs）是廣泛存在于水質(zhì)、大氣和土壤等環(huán)境要素中的一類持久性有機(jī)污染物（Persistent Organic Pollutants，POPs），可致癌、致畸、致突變．由于PAHs進(jìn)入土壤極易吸附到有機(jī)質(zhì)或顆粒物上，長(zhǎng)期與土壤共存[1-3]．研究表明，通過土壤進(jìn)入人體的PAHs數(shù)量要遠(yuǎn)高于大氣和水等環(huán)境介質(zhì)[4-5]，因此，土壤中的PAHs已成為學(xué)術(shù)界重點(diǎn)研究的對(duì)象[6]．

牛媛媛[7]等梳理了土壤中PAHs樣品預(yù)處理及分析檢測(cè)方法．預(yù)處理方法主要有索氏提取、微波萃取、超聲萃取、超臨界流體萃取、快速溶劑萃取及協(xié)同萃取等；凈化方法有硅膠層析柱法、弗羅里硅土柱層析法、硅酸鎂小柱層析法及凝膠滲透色譜法等；分析檢測(cè)方法有氣相色譜法、液相色譜法、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法和氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法等．

《土壤污染防治行動(dòng)計(jì)劃》中明確指出，土壤中PAHs的監(jiān)測(cè)將作為未來幾年環(huán)境污染防治工作的重點(diǎn)[8]．針對(duì)土壤介質(zhì)的特殊性及PAHs的生物累積性特點(diǎn)，研究一種既簡(jiǎn)便快捷，又高效的測(cè)試方法已成為當(dāng)務(wù)之急．對(duì)不同的前處理方法進(jìn)行比較，并對(duì)萃取、濃縮和凈化條件進(jìn)行優(yōu)化，結(jié)合氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)進(jìn)行分析測(cè)試，極大地提高了土壤樣品的分析效率．

1　實(shí)驗(yàn)部分

1.1　儀器、試劑與材料

氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（GCMS QP 2010 ULTRA，日本島津公司）；HP-5毛細(xì)管柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm，美國(guó)安捷倫公司）；加速溶劑萃取儀（ASE350，美國(guó)戴安公司）；氮吹濃縮儀（TurboVapⅡ，瑞典Biotage公司）；超聲儀（SK2200H，上?？茖?dǎo)有限公司）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（Laborota 4010 digital，德國(guó)Heidolph公司）．

PAHs標(biāo)準(zhǔn)溶液（200 mg/L，美國(guó)AccuStandard Inc）；甲醇，丙酮，二氯甲烷，正己烷，乙醚（農(nóng)殘級(jí)，美國(guó)TEDIA）；無水硫酸鈉（優(yōu)級(jí)純），硅藻土（40目/60目/100目，國(guó)藥集團(tuán)）；弗羅里硅土柱（6 mL，美國(guó)安捷倫公司）；硅膠凈化柱（6 mL，日本島津公司）．

1.2　土壤樣品的采集、保存和制備

按照《土壤環(huán)境監(jiān)測(cè)技術(shù)規(guī)范》[9]要求進(jìn)行土壤樣品采集，將土壤樣品保存于潔凈具塞磨口棕色玻璃采樣瓶中，充滿裝實(shí)，全程密封，避光且在4℃下冷藏，可存放10 d．

按照《土壤和沉積物多環(huán)芳烴的測(cè)定氣相色譜-質(zhì)譜法》[10]要求，將土壤樣品置于搪瓷托盤中，除去枝棒、葉片、石子等異物，充分混勻．稱取20 g（精確至0.01 g）新鮮樣品進(jìn)行脫水，加入適量無水硫酸鈉，摻拌均勻，研磨成細(xì)粒狀．如果使用加壓流體萃取，須使用粒裝硅藻土脫水研磨．

1.3　土壤樣品前處理

1.3.1萃取方法（1）索氏提取法：利用有機(jī)溶劑回流和虹吸原理，將制備好的土壤樣品轉(zhuǎn)入濾筒并置于索氏提取器中，加入萃取劑提取17 h，回流速度控制在5次/h，冷卻后，用萃取劑沖洗提取器和土壤樣品，合并提取液．（2）超聲萃取法：利用機(jī)械振動(dòng)波來減少目標(biāo)萃取物與樣品基體之間的作用力，實(shí)現(xiàn)萃取分離，將待測(cè)的土壤樣品放于離心管中，加入萃取劑超聲抽提15 min后進(jìn)行離心，重復(fù)3次操作，合并提取液．（3）快速溶劑萃取法（ASE）：利用溶解度不同，選擇快速溶劑萃取儀及適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)溶劑，經(jīng)高溫、高壓提取待測(cè)組分，先在萃取池內(nèi)加入濾紙，稱取干燥后的土壤樣品與硅藻土混拌均勻，放入萃取池中，加蓋濾紙，將蓋旋緊，將裝好的萃取池放入加熱模塊內(nèi)，按照設(shè)定程序進(jìn)行多次萃取，合并提取液．

1.3.2濃縮方法（1）旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮：若提取液體積較大，適合選用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮待測(cè)樣品．根據(jù)有機(jī)溶劑和待測(cè)樣品設(shè)定溫度進(jìn)行濃縮，之后用有機(jī)溶劑洗滌旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶3次，合并濃縮液，定容至1 mL，待測(cè)．（2）氮吹濃縮：開啟氮?dú)庵寥軇┍砻嬗袣饬鞑▌?dòng)，避免形成氣渦及樣品飛濺造成損失，用正已烷多次洗滌露出的濃縮管壁，定容至1 mL，待測(cè)．

1.3.3凈化方法（1）硅膠凈化柱：將濃縮后的提取液轉(zhuǎn)至預(yù)洗制備好的硅膠層析柱中，打開活塞，緩緩加入洗脫液，棄去，另用混合洗脫液洗脫，并全部收集．（2）凝膠滲透凈化柱：校準(zhǔn)后，將濃縮提取液用凝膠滲透色譜的流動(dòng)相定容至定量環(huán)指定的體積，按照設(shè)置自動(dòng)凈化、收集．（3）弗羅里硅土凈化柱：將凈化小柱固定在固相萃取裝置上，用溶劑淋洗浸潤(rùn)，棄去流出液．將提取液轉(zhuǎn)移至小柱中，用溶劑分3次洗滌濃縮器皿，轉(zhuǎn)入小柱，加入混合溶劑洗脫、浸潤(rùn)，反復(fù)操作2次，合并洗脫液．

1.4　氣相色譜-質(zhì)譜分析條件

HP-5 30 m×0.25 mm×0.25 μm，溶劑延遲時(shí)間5 min；進(jìn)樣口溫度280℃，離子化能量70 eV；不分流進(jìn)樣，離子源溫度230℃；進(jìn)樣量1.0 μL，接口溫度280℃；柱流量1.0 mL/min，四級(jí)桿溫度150℃；高純氦氣（99.999%），電子轟擊源（EI）；程序升溫：柱溫80℃保持2 min，以20℃/min升至180℃保持5 min，再以10℃/min升至290℃保持5 min，全掃描（Scan）45～450 amu，選擇離子模式（SIM）．

2　結(jié)果與討論

2.1　前處理優(yōu)化

2.1.1萃取方法比較分別采用索氏提取法、ASE和超聲萃取法萃取，結(jié)果見圖1．由圖1可見，對(duì)于PAHs組分而言，回收率分別為43.5%～87.3%，66.4%～91.4%，68.6%～111.3%，萃取效果為：ASE＞超聲萃取法＞索氏提取法．鑒于快速溶劑萃取法具有省時(shí)、高效和溶劑用量少的特點(diǎn)，故采用ASE，并對(duì)其參數(shù)優(yōu)化．

圖1　萃取方法比較

2.1.2基質(zhì)分散劑比較分別選取40，60，100目硅藻土作為基質(zhì)分散劑，結(jié)果見圖2．由圖2可見，對(duì)于大多數(shù)PAHs組分而言，40目硅藻土的回收率低于60，100目硅藻土的回收率；對(duì)于多數(shù)低環(huán)PAHs組分而言，60目硅藻土的回收率較高，而對(duì)于高環(huán)PAHs組分，回收率相差無幾，但考慮到硅藻土目數(shù)越大，顆粒越細(xì)，易堵塞萃取管路，導(dǎo)致萃取液體積出現(xiàn)偏差，故采用60目硅藻土作為基質(zhì)分散劑．

圖2　基質(zhì)分散劑比較

2.1.3萃取劑選擇萃取劑的選擇遵循“相似相溶”原理，由于丙酮的強(qiáng)親核性適合于萃取較大電子密度和強(qiáng)親核性的物質(zhì)，對(duì)低環(huán)PAHs有較好的萃取效果；正己烷適合萃取弱極性和高環(huán)PAHs．對(duì)于混合有機(jī)物也可選擇不同極性的混合物以適當(dāng)?shù)谋壤旌献鳛檩腿┮蕴岣咻腿⌒剩緦?shí)驗(yàn)擬采用正己烷、丙酮、正己烷-丙酮（1∶1）作為萃取溶劑，結(jié)果見圖3．由圖3可見，3種萃取劑的回收率分別為49.6%～76.5%，61.5%～90.2%，71.9%～91.3%．對(duì)于多數(shù)PAHs組分而言，萃取效果為：正己烷-丙酮（1∶1）＞丙酮＞正己烷，故選取正己烷-丙酮（1∶1）作為萃取劑．

圖3　萃取劑與回收率關(guān)系

2.1.4萃取溫度優(yōu)化通常ASE的萃取溫度升高，利于土壤樣品的潤(rùn)濕，提高有機(jī)溶劑擴(kuò)散和穿透能力，進(jìn)而提高萃取效率．本實(shí)驗(yàn)擬采用80，100，120℃作為ASE的萃取溫度，正己烷-丙酮（1∶1）作為萃取劑，結(jié)果見圖4．由圖4可見，回收率分別為62.4%～93.4%，76.3%～103.0%，65.7%～104.3%，萃取溫度對(duì)低環(huán)芳烴影響較大，在100，120℃高環(huán)芳烴的回收率沒有顯著變化，故選擇最佳萃取溫度為100℃．

圖4　萃取溫度與回收率關(guān)系

2.1.5萃取時(shí)間優(yōu)化分別選取10，15，20 min進(jìn)行萃取，結(jié)果見圖5．由圖5可見，回收率分別為64.8%～111.2%，66.6%～111.6%，63.2%～110.8%．對(duì)于多數(shù)PAHs組分而言，回收率隨時(shí)間的延長(zhǎng)先升高后降低，萃取時(shí)間過短萃取不充分，而萃取時(shí)間過長(zhǎng)，部分組分損失降低回收率，故選擇最佳萃取時(shí)間為15 min．

圖5　萃取時(shí)間與回收率關(guān)系

2.1.6萃取次數(shù)優(yōu)化ASE遵循少量多次的原則，利用溶劑對(duì)土壤樣品進(jìn)行多次靜態(tài)循環(huán)，以提高萃取效率，通常2～3次循環(huán)效果較好，結(jié)果見圖6．由圖6可見，回收率分別為65.9%～82.5%，72.6%～104.2%，73.0%～101.4%，73.6%～106.6%，其中2，3，4次循環(huán)的回收率明顯好于1次循環(huán)，2次循環(huán)后，回收率沒有顯著變化，故最佳循環(huán)次數(shù)為2次．

圖6　萃取次數(shù)與回收率關(guān)系

2.1.7濃縮條件優(yōu)化選取氮吹儀水浴溫度分別為30，40，50℃，結(jié)果見圖7．由圖7可見，回收率分別為67.8%～110.6%，68.0%～113.8%，63.4%～112.0%．在30，40℃時(shí)，回收率沒有顯著變化，當(dāng)溫度升至50℃時(shí)，部分回收率降低，故最佳水浴溫度為40℃．

圖7　氮吹儀水浴溫度與回收率關(guān)系

2.1.8凈化柱選擇選擇硅膠凈化柱、凝膠滲透凈化柱和弗羅里硅土凈化柱對(duì)土壤樣品進(jìn)行凈化處理，結(jié)果見圖8．由圖8可見，回收率分別為62.4%～108.5%，60.9%～100.7%，68.9%～116.8%，凈化效果為：弗羅里硅土凈化柱?硅膠凈化柱?凝膠滲透凈化柱，故選取弗羅里硅土凈化柱．

圖8　凈化柱與回收率關(guān)系

2.1.9洗脫劑優(yōu)化選取二氯甲烷-正己烷、丙酮-正己烷和乙醚-正己烷作洗脫劑，結(jié)果見圖9．由圖9可見，洗脫率分別為68.9%～111.2%，72.9%～115.7%，70.5%～100.4%，二氯甲烷-正己烷和乙醚-正己烷洗脫率線性較差，洗脫效果弱于丙酮-正己烷混合洗脫劑，故選擇最優(yōu)洗脫劑為丙酮-正己烷．

圖9　洗脫劑與洗脫率關(guān)系

2.1.10洗脫劑梯度配比優(yōu)化選取丙酮-正己烷作為洗脫劑，不同梯度配比為：20∶80，30∶70，40∶60，50∶50，結(jié)果見圖10．由圖10可見，洗脫率分別為68.6%～96.9%，72.5%～109.3%，75.7%～116.6%，72.9%～115.7%，洗脫效果為：40∶60?50∶50?30∶70?20∶80，隨著丙酮比例增加洗脫率提升，當(dāng)比例增至40%時(shí)，洗脫率達(dá)到最高，隨后下降，故選擇最佳洗脫劑為丙酮-正己烷（40∶60）．

圖10　不同配比與洗脫率關(guān)系

2.2　特征離子的選擇與總離子流圖

16種PAHs的定量離子與參考離子見表1．

表1　16種PAHs選擇離子掃描特征離子

16種PAHs混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的總離子流圖見圖11．

圖11　16種PAHs組分總離子流圖

2.3　性能指標(biāo)

將配制好的標(biāo)準(zhǔn)溶液和實(shí)際土壤樣品用優(yōu)化條件萃取后進(jìn)行測(cè)定，性能指標(biāo)見表2．由表2可見，檢測(cè)限為0.04～0.73 μg/kg，相關(guān)系數(shù)?0.992，精密度2.9%～7.2%，平均加標(biāo)回收率85.1%～112.3%，16種PAHs性能指標(biāo)較為理想．

表2　16種PAHs性能指標(biāo)

3　結(jié)論

實(shí)驗(yàn)以土壤中16種多環(huán)芳烴（PAHs）為研究對(duì)象，通過對(duì)索氏提取法、超聲提取法和ASE進(jìn)行比較，最終選定快速溶劑萃取法，并對(duì)各參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化．結(jié)果表明，將ASE與氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)結(jié)合，能夠建立出測(cè)定土壤中PAHs分析方法，實(shí)驗(yàn)效果比較顯著．該法不僅適用于土壤環(huán)境中PAHs的檢測(cè)，同時(shí)也為其他環(huán)境介質(zhì)中的應(yīng)用提供了參考．

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[9] 國(guó)家環(huán)境保護(hù)總局科技標(biāo)準(zhǔn)司．土壤環(huán)境監(jiān)測(cè)技術(shù)規(guī)范：HJ/T166—2004[S]．北京：中國(guó)環(huán)境科學(xué)出版社，2004：19-20．

[10] 環(huán)境保護(hù)部科技標(biāo)準(zhǔn)司．土壤和沉積物多環(huán)芳烴的測(cè)定氣相色譜-質(zhì)譜法：HJ805—2016[S]．北京：中國(guó)環(huán)境科學(xué)出版社，2016：3．

Optimization of analysis and determination of polycyclic aromatic hydrocarbons in soil

CHEN Yao1，HUANG Xiaoming2，PAN Linlin1，ZHANG Zhaohan1

（1. Qiqihar Ecological Environment Monitoring Center of Heilongjiang Province，Qiqihar 161005，China；2. Teaching and Experimental Equipment Management Center，Qiqihar University，Qiqihar 161006，China）

16 kinds of polycyclic aromatic hydrocarbons（PAHs）in soil were studied，the relative parameters were optimized by comparing extraction，concentration and purification methods．The optimal conditions were as follows，rapid solvent extraction method，60 mesh diatomite as the dispersant，hexan-acetone（1∶1）as the extractant，extraction temperature 100℃，15 min cycle extraction twice，40℃ concentration，acetone-hexane（40∶60）elidation，purification by Flori silica column，combined with gas chromatography and mass spectrometry．The detection limit of this method is 0.04～0.73 μg/kg，correlation coefficient was greater than 0.992，precision 2.9%～7.2%，average recoveries 85.1%～112.3%，the experimental effect is significant．This method is not only suitable for the detection of PAHs in soil，but also provides a reference for other environmental media．

ASE；GC-MS；soil；PAHs；optimization

1007-9831（2023）07-0052-07

X833

A

10.3969/j.issn.1007-9831.2023.07.011

2023-03-02

齊齊哈爾市科技計(jì)劃創(chuàng)新激勵(lì)項(xiàng)目（CSFGG-2022292）；黑龍省省屬高等學(xué)?；究蒲袠I(yè)務(wù)費(fèi)科研項(xiàng)目面上項(xiàng)目（135409315）

陳瑤（1980-），女，黑龍江齊齊哈爾人，高級(jí)工程師，碩士，從事生態(tài)環(huán)境監(jiān)測(cè)、污染防治研究．E-mail：chenyao58600@163.com

黃孝明（1983-），男，黑龍江綏化人，高級(jí)實(shí)驗(yàn)師，碩士，從事環(huán)境化學(xué)及材料化學(xué)研究．E-mail：hxm9311@163.com