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        在艾滋病檢驗(yàn)中人類免疫缺陷病毒抗體酶聯(lián)免疫吸附法篩查結(jié)果的研究及臨床價(jià)值分析

        2023-08-23 08:26:52段艷鴿
        黑龍江醫(yī)藥 2023年15期
        關(guān)鍵詞:膠體金檢測(cè)法印跡

        段艷鴿

        開封市第二中醫(yī)院檢驗(yàn)科,河南 開封 475000

        艾滋?。ˋIDS)是人體感染人類免疫缺陷病毒(HIV)后導(dǎo)致的具有極強(qiáng)傳染性的感染性疾病,患者感染后表現(xiàn)為盜汗、虛弱、全身淋巴結(jié)腫大、持續(xù)性發(fā)熱等癥狀,且隨著疾病發(fā)展到晚期,能誘發(fā)嚴(yán)重感染和惡性腫瘤,無法治愈[1-2]。研究發(fā)現(xiàn),HIV 能直接攻擊人體免疫系統(tǒng),損害淋巴細(xì)胞,致使免疫功能減弱甚至喪失,出現(xiàn)反復(fù)感染,是社會(huì)和醫(yī)學(xué)高度關(guān)注的嚴(yán)重公共衛(wèi)生問題[3]。AIDS 具有潛伏期長(zhǎng)和高死亡率、危害范圍廣、高傳播性等特點(diǎn),可經(jīng)血液或是血制品、性接觸、母嬰傳播,人群普遍易感,受居民性生活提前、生活方式及性生活思想轉(zhuǎn)變等因素影響,AIDS 的發(fā)病率逐年上升,對(duì)患者生命安全危害極大[4-5]。臨床當(dāng)前針對(duì)AIDS的治療缺乏特效和有效療法,因此,及時(shí)有效、準(zhǔn)確且快速篩查HIV抗體陽(yáng)性,早發(fā)現(xiàn)、早監(jiān)測(cè)并及早開展科學(xué)診治為臨床控制AIDS 病情發(fā)展和防控HIV 病毒廣泛傳播的關(guān)鍵,在改善AIDS 患者生活質(zhì)量中意義重大,對(duì)提升患者預(yù)后存在重要作用。蛋白印跡法為臨床篩查和確診AIDS“金標(biāo)準(zhǔn)”,能幫助醫(yī)師準(zhǔn)確判斷和評(píng)估AIDS病情,但檢測(cè)的操作步驟相對(duì)復(fù)雜,且檢測(cè)價(jià)格較為高昂,獲得結(jié)果所需時(shí)間較長(zhǎng),不適用于基層醫(yī)院篩查高危群體。酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)及膠體金法作為篩查HIV 抗體陽(yáng)性的常用手段,在臨床檢測(cè)中得到較好的應(yīng)用,有助于及時(shí)檢出HIV感染,為指導(dǎo)干預(yù)提供依據(jù)[6-7]。鑒于此,本研究應(yīng)用ELISA法及膠體金法篩查AIDS中HIV抗體,旨在探究其臨床應(yīng)用價(jià)值,為臨床合理選擇篩查方法和早期診治提供依據(jù),現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

        1 資料與方法

        1.1 一般資料

        選擇開封市第二中醫(yī)院2018年1月—2020年5月收治的130 例疑似HIV感染者作為研究對(duì)象,本研究獲醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。其中男75 例,女55 例;年齡24~67歲,平均年齡(45.53±3.71)歲;體重52~64 kg,平均體重(56.81±2.94)kg;文化程度:初中及以下者69 例,高中/中專者38例,大專及以上者23例。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)病例資料完整;(2)入組前2~4周內(nèi)產(chǎn)生腹痛/腹瀉、惡心嘔吐、皮疹、疲乏、頭痛等相關(guān)癥狀表現(xiàn),且有HIV感染相關(guān)高危行為;(3)HIV感染高危人群;(4)認(rèn)知正常,能正常交流;(5)均接受蛋白印跡法、ELISA法及膠體金法篩查;(6)所有患者及家屬均對(duì)本研究知情,簽署同意書。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)存在腦部器質(zhì)性病變;(2)伴有其他系統(tǒng)惡性腫瘤、凝血功能篩查顯示異常;(3)肝、腎、心、肺功能不全;(4)原發(fā)性疾??;(5)嚴(yán)重機(jī)體感染;(6)有其他免疫疾病者,或是正在接受免疫治療;(7)精神疾病,無法配合完成本次研究。

        1.2 方法

        采集所有疑似HIV 感染者空腹6 mL 肘靜脈血,以3 500 r/min 速度離心處理10 min,離心半徑為10 cm,留取上層血清,于低溫環(huán)境下保存待檢。儀器采用酶標(biāo)儀(奧地利TICAN公司生產(chǎn)的,型號(hào)為sunrise)、洗板機(jī)(鄭州安圖生物工程有限公司生產(chǎn),型號(hào)為安圖iwo-960)、微量加樣器(上海求精生化試劑公司),蛋白印跡法檢測(cè)試劑盒由上海酶聯(lián)生物科技有限公司提供,膠體金法試劑由廣州萬(wàn)孚生物公司提供,ELISA試劑由珠海麗珠試劑公司提供。分別采用蛋白印跡法、膠體金法及ELISA檢測(cè)HIV抗體,檢測(cè)期間所有醫(yī)護(hù)人員均須保證血樣及儀器性能的良好性,均行有效校準(zhǔn),所有操作均嚴(yán)格遵循試劑盒要求進(jìn)行。

        1.3 觀察指標(biāo)

        (1)統(tǒng)計(jì)并對(duì)比分析蛋白印跡檢測(cè)法、膠體金法和ELISA法對(duì)HIV抗體陽(yáng)性的檢出率。(2)以蛋白印跡檢測(cè)法結(jié)果視作HIV 抗體陽(yáng)性診斷的“金標(biāo)準(zhǔn)”,分析膠體金法、ELISA法在HIV陽(yáng)性中的診斷價(jià)值,另分析兩種方法與蛋白印跡檢測(cè)法在HIV 抗體陽(yáng)性診斷中的一致性。以n表示總例數(shù),a 表示真陽(yáng)性,b 表示假陽(yáng)性,c 表示假陰性,d 表示真陰性。靈敏度=a/(a+c)×100%,特異度=d/(b+d)×100%,準(zhǔn)確度=(a+d)/n×100%,陽(yáng)性預(yù)測(cè)值=a/(a+b)×100%,陰性預(yù)測(cè)值=d/(c+d)×100%。

        1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

        采用SPSS 22.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料以例數(shù)和百分比(%)表示,組間比較采用χ2檢驗(yàn)。膠體金法與ELISA法診斷HIV抗體陽(yáng)性與蛋白印跡檢測(cè)法結(jié)果的一致性使用kappa檢驗(yàn),kappa值≥0.75表示一致性良好,0.4~0.74 表示一致性尚可,<0.4 表示一致性不佳。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1 診斷結(jié)果

        經(jīng)蛋白印跡檢測(cè)法檢測(cè)共檢出HIV 抗體陽(yáng)性患者62例,陰性68 例,陽(yáng)性檢出率為47.69%(62/130);膠體金法檢出HIV 抗體陽(yáng)性共54 例,陰性76 例,陽(yáng)性檢出率為41.54%(54/130);ELISA 法檢出HIV 抗體陽(yáng)性共61 例,陰性69 例,陽(yáng)性檢出率為46.92%(61/130)。三種方法在HIV 抗體陽(yáng)性檢出率比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=1.179,P>0.05)。

        2.2 診斷價(jià)值

        ELISA 法在HIV 抗體陽(yáng)性檢出中靈敏度、準(zhǔn)確度及陰性預(yù)測(cè)值均高于膠體金法,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);兩種方法在特異度及陽(yáng)性預(yù)測(cè)值比較中,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);kappa檢驗(yàn)顯示:ELISA法與蛋白印跡檢測(cè)法結(jié)果的一致性良好(kappa 值=0.954,P<0.001);膠體金法與蛋白印跡檢測(cè)法的一致性尚可(kappa值=0.752,P<0.001),見表1、表2。

        表1 ELISA法與膠體金法在HIV抗體陽(yáng)性中的檢出結(jié)果 例

        表2 ELISA法與膠體金法在HIV抗體陽(yáng)性中的診斷價(jià)值 例(%)

        3 討論

        目前,臨床對(duì)于HIV病毒的檢測(cè)方法較多,包括蛋白印跡檢測(cè)法、ELISA法和膠體金法等,其中蛋白印跡檢測(cè)法為臨床確診HIV病毒感染金標(biāo)準(zhǔn),診斷準(zhǔn)確性高,常用于臨床確診試驗(yàn),但存在操作復(fù)雜和結(jié)果等待時(shí)間相對(duì)較長(zhǎng)、價(jià)格昂貴、不適用于基層醫(yī)院廣泛篩查等局限[12-14]。膠體金法在HIV 抗體檢測(cè)中應(yīng)用頻率較高,具有操作簡(jiǎn)單、檢測(cè)迅速、便于攜帶等多種優(yōu)勢(shì)[15]。利用層析免疫技術(shù),將膠體金作為標(biāo)記物,檢測(cè)時(shí)無需其他儀器的輔助,能夠快速獲得檢測(cè)結(jié)果[16]。但膠體金法對(duì)于HIV抗體陽(yáng)性檢出率不高,且對(duì)HIV 抗體靈敏度和準(zhǔn)確性較差。ELISA法能在抗體結(jié)合酶后,不會(huì)造成抗體免疫性反應(yīng)發(fā)生特異性改變,且對(duì)酶的活性無顯著不良影響,在補(bǔ)充底物后可引起基質(zhì)水解呈色,還可促使還原性氫體顏色發(fā)生改變,再經(jīng)呈色發(fā)現(xiàn)酶,于細(xì)胞水平上發(fā)現(xiàn)抗體部位,篩查敏感性與特異性較高[17-18]。本研究結(jié)果顯示,經(jīng)蛋白印跡檢測(cè)法檢測(cè)HIV抗體陽(yáng)性檢出率為47.69%,膠體金法HIV抗體陽(yáng)性檢出率為41.54%,ELISA 法HIV 抗體陽(yáng)性檢出率為46.92%;ELISA法在HIV抗體陽(yáng)性檢出中靈敏度、準(zhǔn)確度及陰性預(yù)測(cè)值均高于膠體金法,kappa 檢驗(yàn)顯示:ELISA法與蛋白印跡檢測(cè)法結(jié)果的一致性良好;膠體金法與蛋白印跡檢測(cè)法的一致性尚可。表明與膠體金法相比,ELISA法在AIDS 患者HIV 抗體陽(yáng)性診斷中應(yīng)用價(jià)值更高,能夠有效提高HIV抗體陽(yáng)性檢出率,并與蛋白印跡檢測(cè)法一致性較強(qiáng),可為臨床提供可靠的診斷依據(jù)。ELISA法能夠?qū)IV抗體進(jìn)行直接檢測(cè),不受脂血或是溶血等其他因素影響,于室溫環(huán)境下即可開展檢測(cè)操作,不需借助其他特殊設(shè)備,且一次能對(duì)多個(gè)樣本進(jìn)行檢測(cè),具有操作簡(jiǎn)單、窗口期短等優(yōu)勢(shì),可早期檢測(cè)出血液及組織標(biāo)本中微量HIV抗體,使HIV抗體檢出率進(jìn)一步提高,靈敏度、特異度均較高,便于臨床廣泛篩查。但因ELISA檢測(cè)需其他設(shè)備支持,檢測(cè)時(shí)間較長(zhǎng),適用于大批量的樣本檢測(cè)。HIV抗原與其他反轉(zhuǎn)錄病毒間存在交叉反應(yīng),臨床應(yīng)用ELISA法檢測(cè)時(shí)若出現(xiàn)假陽(yáng)性,可采用復(fù)核的方式以降低假陽(yáng)性率。同時(shí),在運(yùn)用ELISA法測(cè)定HIV抗體時(shí),應(yīng)注意血液標(biāo)本為臨床檢測(cè)主體,若標(biāo)本出現(xiàn)異常,可對(duì)檢測(cè)結(jié)果可靠性及準(zhǔn)確性造成嚴(yán)重影響,出現(xiàn)假陽(yáng)性或是假陰性,故需確保血液標(biāo)本不受污染;其次,需合理選擇試劑,在檢測(cè)前需對(duì)所用試劑開展全面且安全的預(yù)處理;再者,標(biāo)本質(zhì)量對(duì)檢測(cè)結(jié)果存在重要影響,分離血清時(shí)需確保徹底分離,預(yù)防纖維蛋白混入檢測(cè)血清樣本等狀況發(fā)生,避免假陽(yáng)性發(fā)生,而在保存血清時(shí)需選擇冷凍保存,防止反復(fù)凍融而破壞蛋白分子,避免假陰性結(jié)果出現(xiàn),且所有檢測(cè)操作均需嚴(yán)格依據(jù)相關(guān)規(guī)范流程開展。

        綜上所述,采用ELISA法篩查HIV抗體具有較高的臨床應(yīng)用價(jià)值,可將其作為AIDS 初始篩選的方法,靈敏度、特異度均較高。

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