段艷鴿

開(kāi)封市第二中醫(yī)院檢驗(yàn)科，河南 開(kāi)封 475000

艾滋?。ˋIDS）是人體感染人類免疫缺陷病毒（HIV）后導(dǎo)致的具有極強(qiáng)傳染性的感染性疾病，患者感染后表現(xiàn)為盜汗、虛弱、全身淋巴結(jié)腫大、持續(xù)性發(fā)熱等癥狀，且隨著疾病發(fā)展到晚期，能誘發(fā)嚴(yán)重感染和惡性腫瘤，無(wú)法治愈［1-2］。研究發(fā)現(xiàn)，HIV 能直接攻擊人體免疫系統(tǒng)，損害淋巴細(xì)胞，致使免疫功能減弱甚至喪失，出現(xiàn)反復(fù)感染，是社會(huì)和醫(yī)學(xué)高度關(guān)注的嚴(yán)重公共衛(wèi)生問(wèn)題［3］。AIDS 具有潛伏期長(zhǎng)和高死亡率、危害范圍廣、高傳播性等特點(diǎn)，可經(jīng)血液或是血制品、性接觸、母嬰傳播，人群普遍易感，受居民性生活提前、生活方式及性生活思想轉(zhuǎn)變等因素影響，AIDS 的發(fā)病率逐年上升，對(duì)患者生命安全危害極大［4-5］。臨床當(dāng)前針對(duì)AIDS的治療缺乏特效和有效療法，因此，及時(shí)有效、準(zhǔn)確且快速篩查HIV抗體陽(yáng)性，早發(fā)現(xiàn)、早監(jiān)測(cè)并及早開(kāi)展科學(xué)診治為臨床控制AIDS 病情發(fā)展和防控HIV 病毒廣泛傳播的關(guān)鍵，在改善AIDS 患者生活質(zhì)量中意義重大，對(duì)提升患者預(yù)后存在重要作用。蛋白印跡法為臨床篩查和確診AIDS“金標(biāo)準(zhǔn)”，能幫助醫(yī)師準(zhǔn)確判斷和評(píng)估AIDS病情，但檢測(cè)的操作步驟相對(duì)復(fù)雜，且檢測(cè)價(jià)格較為高昂，獲得結(jié)果所需時(shí)間較長(zhǎng)，不適用于基層醫(yī)院篩查高危群體。酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）及膠體金法作為篩查HIV 抗體陽(yáng)性的常用手段，在臨床檢測(cè)中得到較好的應(yīng)用，有助于及時(shí)檢出HIV感染，為指導(dǎo)干預(yù)提供依據(jù)［6-7］。鑒于此，本研究應(yīng)用ELISA法及膠體金法篩查AIDS中HIV抗體，旨在探究其臨床應(yīng)用價(jià)值，為臨床合理選擇篩查方法和早期診治提供依據(jù)，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇開(kāi)封市第二中醫(yī)院2018年1月—2020年5月收治的130 例疑似HIV感染者作為研究對(duì)象，本研究獲醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。其中男75 例，女55 例；年齡24～67歲，平均年齡（45.53±3.71）歲；體重52～64 kg，平均體重（56.81±2.94）kg；文化程度：初中及以下者69 例，高中/中專者38例，大專及以上者23例。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）病例資料完整；（2）入組前2～4周內(nèi)產(chǎn)生腹痛/腹瀉、惡心嘔吐、皮疹、疲乏、頭痛等相關(guān)癥狀表現(xiàn)，且有HIV感染相關(guān)高危行為；（3）HIV感染高危人群；（4）認(rèn)知正常，能正常交流；（5）均接受蛋白印跡法、ELISA法及膠體金法篩查；（6）所有患者及家屬均對(duì)本研究知情，簽署同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）存在腦部器質(zhì)性病變；（2）伴有其他系統(tǒng)惡性腫瘤、凝血功能篩查顯示異常；（3）肝、腎、心、肺功能不全；（4）原發(fā)性疾?。唬?）嚴(yán)重機(jī)體感染；（6）有其他免疫疾病者，或是正在接受免疫治療；（7）精神疾病，無(wú)法配合完成本次研究。

1.2 方法

采集所有疑似HIV 感染者空腹6 mL 肘靜脈血，以3 500 r/min 速度離心處理10 min，離心半徑為10 cm，留取上層血清，于低溫環(huán)境下保存待檢。儀器采用酶標(biāo)儀（奧地利TICAN公司生產(chǎn)的，型號(hào)為sunrise）、洗板機(jī)（鄭州安圖生物工程有限公司生產(chǎn)，型號(hào)為安圖iwo-960）、微量加樣器（上海求精生化試劑公司），蛋白印跡法檢測(cè)試劑盒由上海酶聯(lián)生物科技有限公司提供，膠體金法試劑由廣州萬(wàn)孚生物公司提供，ELISA試劑由珠海麗珠試劑公司提供。分別采用蛋白印跡法、膠體金法及ELISA檢測(cè)HIV抗體，檢測(cè)期間所有醫(yī)護(hù)人員均須保證血樣及儀器性能的良好性，均行有效校準(zhǔn)，所有操作均嚴(yán)格遵循試劑盒要求進(jìn)行。

1.3 觀察指標(biāo)

（1）統(tǒng)計(jì)并對(duì)比分析蛋白印跡檢測(cè)法、膠體金法和ELISA法對(duì)HIV抗體陽(yáng)性的檢出率。（2）以蛋白印跡檢測(cè)法結(jié)果視作HIV 抗體陽(yáng)性診斷的“金標(biāo)準(zhǔn)”，分析膠體金法、ELISA法在HIV陽(yáng)性中的診斷價(jià)值，另分析兩種方法與蛋白印跡檢測(cè)法在HIV 抗體陽(yáng)性診斷中的一致性。以n表示總例數(shù)，a 表示真陽(yáng)性，b 表示假陽(yáng)性，c 表示假陰性，d 表示真陰性。靈敏度=a/（a+c）×100%，特異度=d/（b+d）×100%，準(zhǔn)確度=（a+d）/n×100%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值=a/（a+b）×100%，陰性預(yù)測(cè)值=d/（c+d）×100%。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料以例數(shù)和百分比（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。膠體金法與ELISA法診斷HIV抗體陽(yáng)性與蛋白印跡檢測(cè)法結(jié)果的一致性使用kappa檢驗(yàn)，kappa值≥0.75表示一致性良好，0.4～0.74 表示一致性尚可，＜0.4 表示一致性不佳。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 診斷結(jié)果

經(jīng)蛋白印跡檢測(cè)法檢測(cè)共檢出HIV 抗體陽(yáng)性患者62例，陰性68 例，陽(yáng)性檢出率為47.69%（62/130）；膠體金法檢出HIV 抗體陽(yáng)性共54 例，陰性76 例，陽(yáng)性檢出率為41.54%（54/130）；ELISA 法檢出HIV 抗體陽(yáng)性共61 例，陰性69 例，陽(yáng)性檢出率為46.92%（61/130）。三種方法在HIV 抗體陽(yáng)性檢出率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=1.179，P＞0.05）。

2.2 診斷價(jià)值

ELISA 法在HIV 抗體陽(yáng)性檢出中靈敏度、準(zhǔn)確度及陰性預(yù)測(cè)值均高于膠體金法，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；兩種方法在特異度及陽(yáng)性預(yù)測(cè)值比較中，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；kappa檢驗(yàn)顯示：ELISA法與蛋白印跡檢測(cè)法結(jié)果的一致性良好（kappa 值=0.954，P＜0.001）；膠體金法與蛋白印跡檢測(cè)法的一致性尚可（kappa值=0.752，P＜0.001），見(jiàn)表1、表2。

表1 ELISA法與膠體金法在HIV抗體陽(yáng)性中的檢出結(jié)果 例

表2 ELISA法與膠體金法在HIV抗體陽(yáng)性中的診斷價(jià)值 例（%）

3 討論

目前，臨床對(duì)于HIV病毒的檢測(cè)方法較多，包括蛋白印跡檢測(cè)法、ELISA法和膠體金法等，其中蛋白印跡檢測(cè)法為臨床確診HIV病毒感染金標(biāo)準(zhǔn)，診斷準(zhǔn)確性高，常用于臨床確診試驗(yàn)，但存在操作復(fù)雜和結(jié)果等待時(shí)間相對(duì)較長(zhǎng)、價(jià)格昂貴、不適用于基層醫(yī)院廣泛篩查等局限［12-14］。膠體金法在HIV 抗體檢測(cè)中應(yīng)用頻率較高，具有操作簡(jiǎn)單、檢測(cè)迅速、便于攜帶等多種優(yōu)勢(shì)［15］。利用層析免疫技術(shù)，將膠體金作為標(biāo)記物，檢測(cè)時(shí)無(wú)需其他儀器的輔助，能夠快速獲得檢測(cè)結(jié)果［16］。但膠體金法對(duì)于HIV抗體陽(yáng)性檢出率不高，且對(duì)HIV 抗體靈敏度和準(zhǔn)確性較差。ELISA法能在抗體結(jié)合酶后，不會(huì)造成抗體免疫性反應(yīng)發(fā)生特異性改變，且對(duì)酶的活性無(wú)顯著不良影響，在補(bǔ)充底物后可引起基質(zhì)水解呈色，還可促使還原性氫體顏色發(fā)生改變，再經(jīng)呈色發(fā)現(xiàn)酶，于細(xì)胞水平上發(fā)現(xiàn)抗體部位，篩查敏感性與特異性較高［17-18］。本研究結(jié)果顯示，經(jīng)蛋白印跡檢測(cè)法檢測(cè)HIV抗體陽(yáng)性檢出率為47.69%，膠體金法HIV抗體陽(yáng)性檢出率為41.54%，ELISA 法HIV 抗體陽(yáng)性檢出率為46.92%；ELISA法在HIV抗體陽(yáng)性檢出中靈敏度、準(zhǔn)確度及陰性預(yù)測(cè)值均高于膠體金法，kappa 檢驗(yàn)顯示：ELISA法與蛋白印跡檢測(cè)法結(jié)果的一致性良好；膠體金法與蛋白印跡檢測(cè)法的一致性尚可。表明與膠體金法相比，ELISA法在AIDS 患者HIV 抗體陽(yáng)性診斷中應(yīng)用價(jià)值更高，能夠有效提高HIV抗體陽(yáng)性檢出率，并與蛋白印跡檢測(cè)法一致性較強(qiáng)，可為臨床提供可靠的診斷依據(jù)。ELISA法能夠?qū)IV抗體進(jìn)行直接檢測(cè)，不受脂血或是溶血等其他因素影響，于室溫環(huán)境下即可開(kāi)展檢測(cè)操作，不需借助其他特殊設(shè)備，且一次能對(duì)多個(gè)樣本進(jìn)行檢測(cè)，具有操作簡(jiǎn)單、窗口期短等優(yōu)勢(shì)，可早期檢測(cè)出血液及組織標(biāo)本中微量HIV抗體，使HIV抗體檢出率進(jìn)一步提高，靈敏度、特異度均較高，便于臨床廣泛篩查。但因ELISA檢測(cè)需其他設(shè)備支持，檢測(cè)時(shí)間較長(zhǎng)，適用于大批量的樣本檢測(cè)。HIV抗原與其他反轉(zhuǎn)錄病毒間存在交叉反應(yīng)，臨床應(yīng)用ELISA法檢測(cè)時(shí)若出現(xiàn)假陽(yáng)性，可采用復(fù)核的方式以降低假陽(yáng)性率。同時(shí)，在運(yùn)用ELISA法測(cè)定HIV抗體時(shí)，應(yīng)注意血液標(biāo)本為臨床檢測(cè)主體，若標(biāo)本出現(xiàn)異常，可對(duì)檢測(cè)結(jié)果可靠性及準(zhǔn)確性造成嚴(yán)重影響，出現(xiàn)假陽(yáng)性或是假陰性，故需確保血液標(biāo)本不受污染；其次，需合理選擇試劑，在檢測(cè)前需對(duì)所用試劑開(kāi)展全面且安全的預(yù)處理；再者，標(biāo)本質(zhì)量對(duì)檢測(cè)結(jié)果存在重要影響，分離血清時(shí)需確保徹底分離，預(yù)防纖維蛋白混入檢測(cè)血清樣本等狀況發(fā)生，避免假陽(yáng)性發(fā)生，而在保存血清時(shí)需選擇冷凍保存，防止反復(fù)凍融而破壞蛋白分子，避免假陰性結(jié)果出現(xiàn)，且所有檢測(cè)操作均需嚴(yán)格依據(jù)相關(guān)規(guī)范流程開(kāi)展。

綜上所述，采用ELISA法篩查HIV抗體具有較高的臨床應(yīng)用價(jià)值，可將其作為AIDS 初始篩選的方法，靈敏度、特異度均較高。