劉 麒，要緯玉，戎 暢，房思遠(yuǎn)，劉 瑩，史萬玉

河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，河北保定 071000

1 病原學(xué)

雞滑液囊支原體(MS)屬于厚壁菌門，柔膜菌綱，支原體目，支原體科，是一種可自我復(fù)制的原核生物。MS 無細(xì)胞壁，直徑介于0.2 ～0.4 μm，在電子顯微鏡下觀察可見MS 大部分為圓形或者橢圓形，具有多形性。MS 可以被吉姆薩染色，革蘭氏染色為革蘭氏陰性。MS 細(xì)胞結(jié)構(gòu)包括莢膜、單位膜、粘附蛋白以及內(nèi)含物，其內(nèi)含物又包括核糖體、核質(zhì)、轉(zhuǎn)座子以及質(zhì)粒等。莢膜不僅包含抵抗宿主吞噬的粘性物質(zhì)，還是重要的毒力因子。MS 可以發(fā)酵葡萄糖及麥芽糖產(chǎn)生酸不產(chǎn)氣體，不能發(fā)酵乳糖、水楊苷或蕈糖。由于MS 生長(zhǎng)所必需的很多營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)無法自身合成，如脂肪酸和膽固醇等，可以用改良的Frey 培養(yǎng)基對(duì)其進(jìn)行體外培養(yǎng)。在培養(yǎng)基中接種MS 后，在8%的CO2下37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3 ～5 d，可見“煎蛋”狀菌落。MS 只有一種血清型但存在多種不同的基因型。

2 流行病學(xué)

MS 的自然宿主是雞和火雞，各個(gè)日齡均易感，相對(duì)于成年雞，雛雞更容易感染，此外鴿子、鴨等其它禽類也可以感染，哺乳動(dòng)物不易感。病雞和隱性感染雞是其主要的傳染源，傳播方式有垂直傳播和水平傳播，包括種蛋傳播、飛沫傳播、接觸各種被污染的物品傳播，如被污染過的飼料、羽毛、水源等。雞感染本病后造成飼料利用率下降、生長(zhǎng)發(fā)育受阻、死亡率上升，當(dāng)與大腸桿菌、新城疫病毒、傳染性支氣管炎病毒等混合感染時(shí)，還可導(dǎo)致更加嚴(yán)重的疾病。雞滑液囊支原體病在一年四季都可以發(fā)生，無明顯的種群特異性，在氣候驟變或換季時(shí)更易傳播。疾病剛開始在雞群中傳播時(shí)，往往只有個(gè)別雞發(fā)病，病死率較低，若不加以控制，會(huì)快速擴(kuò)散至整個(gè)雞群。近年來，MS 在全球各國(guó)都有不同程度的暴發(fā)，在我國(guó)MS 的發(fā)病率也越來越高。Sui 等人通過對(duì)來自我國(guó)中部地區(qū)的258 只雞進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)，蛋雞的MS 感染率高達(dá)74.1%。MS 在我國(guó)的高感染率給各個(gè)家禽養(yǎng)殖企業(yè)造成了巨大損失。

3 臨床癥狀

雞滑液囊支原體病由急性向慢性發(fā)展，雞在感染MS 之初可以觀察到雞冠發(fā)白、跛行及生長(zhǎng)發(fā)育遲緩，后逐漸發(fā)展為羽毛粗亂、雞冠萎縮。常見病雞關(guān)節(jié)及胸部腫脹，附關(guān)節(jié)和爪墊是MS 的主要病變組織，但也偶見病雞有全身性感染癥狀而無明顯的附關(guān)節(jié)及爪墊腫脹。感染MS 后，病雞雖仍會(huì)進(jìn)水進(jìn)食，但體形消瘦，常伴隨不安及脫水等癥狀。度過急性期之后，機(jī)體恢復(fù)速度較為緩慢，恢復(fù)后體內(nèi)仍含有MS 并伴隨整個(gè)生命周期。偶見雞群中無急性感染病雞，僅有慢性感染的病雞。通過呼吸道感染MS 的病雞通常在一周內(nèi)出現(xiàn)輕微啰音，通過爪墊注射方法感染的病雞除爪墊、關(guān)節(jié)腫脹外，可能出現(xiàn)軟骨發(fā)育不良等癥狀。氣囊病變?cè)谌魏稳正g均有發(fā)生，常見于冬季，導(dǎo)致體重增加變慢、淘汰率增高。國(guó)外學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)蛋雞感染MS 后平均每日產(chǎn)蛋量下降11%，蛋殼頂端異常占總產(chǎn)蛋數(shù)的24.5%，產(chǎn)出部分軟殼蛋，蛋殼表面出現(xiàn)少量氣孔。

4 剖檢變化

在MS 感染早期，滑液囊、關(guān)節(jié)、龍骨滑膜囊出現(xiàn)少量炎性滲出物。隨著病情的加重，在病雞的肌肉、關(guān)節(jié)、氣囊中滲出物增加，逐漸渾濁甚至發(fā)展為干酪樣滲出物。肝、脾腫大，腎臟腫大并伴有顏色發(fā)白斑駁等癥狀。部分病雞有呼吸道癥狀，氣囊渾濁嚴(yán)重者有干酪樣滲出物，但上呼吸道無明顯病變。

5 診斷

5.1 病原分離

在MS 感染早期可采集病雞的咽拭子、氣管拭子、關(guān)節(jié)及爪墊的滲出物后用改良的Frey 氏培養(yǎng)基在8%的CO2下37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。慢性感染的病雞其關(guān)節(jié)及爪墊等病變組織中MS 含量減少，但在呼吸道仍有大量MS，建議使用無菌棉采集咽拭子和氣管拭子進(jìn)行分離培養(yǎng)。由于該病在感染后期機(jī)體病變組織不再含有MS，應(yīng)在雞群中盡可能多采集樣本進(jìn)行分離培養(yǎng)。采集樣本后應(yīng)在最短時(shí)間內(nèi)進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行操作或者用干冰保存。病原分離是較為可靠的鑒定方法，但其耗時(shí)長(zhǎng)、難度較大，在生產(chǎn)實(shí)踐中較少采用病原分離作為診斷MS 的方法。

5.2 血清學(xué)診斷

平板凝集試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)和血凝抑制試驗(yàn)是常用的血清學(xué)診斷MS 的方法。SPA 是生產(chǎn)實(shí)踐中最常用的檢測(cè)方法之一，將0.02 mL 血清和同等劑量的抗原在板上混合后觀察，操作較為簡(jiǎn)單便捷，但用SPA 法檢測(cè)MS 時(shí)，可能會(huì)出現(xiàn)非特異性反應(yīng)，需要與其他檢測(cè)方法配合使用。ELISA 作為另一種常用的血清學(xué)診斷方法，主要用于對(duì)雞群感染的常規(guī)監(jiān)控。由于沒有商業(yè)化的抗原，不同菌株之間差異較為顯著，HI 法檢測(cè)MS 時(shí)并不常用。

5.3 分子生物學(xué)診斷

分子生物學(xué)檢測(cè)方法是通過檢測(cè)MS 的遺傳物質(zhì)來對(duì)機(jī)體是否已感染作出判斷。對(duì)比其他檢測(cè)方法，分子生物學(xué)檢測(cè)方法更加敏感，有更強(qiáng)的特異性，可以免去大量干擾因素，檢測(cè)結(jié)果具有較強(qiáng)的說服力。通常使用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增MS 特異性可變脂蛋白和凝血素A（vlha）基因或16SrRNA 片段，再采用瓊脂糖凝膠電泳的方法來檢測(cè)MS 的感染，這種檢測(cè)方法具有強(qiáng)特異性，可信度高。

6 致病機(jī)制

6.1 通過與宿主細(xì)胞表面受體結(jié)合侵入細(xì)胞

MS 細(xì)胞膜上的蛋白能夠結(jié)合宿主細(xì)胞的受體，分泌產(chǎn)生的有毒物質(zhì)能夠穿過宿主細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞并對(duì)其造成損傷，使宿主細(xì)胞喪失原本功能。

6.2 影響機(jī)體鈣物質(zhì)代謝

MS 可以影響蛋雞和肉雞的鈣代謝，造成產(chǎn)蛋量下降、蛋殼頂端異常等問題，使雞蛋品質(zhì)下降，但并不會(huì)對(duì)雞蛋的重量及蛋殼厚度造成嚴(yán)重影響。

6.3 掠奪宿主細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)

由于MS 本身基因組較小且對(duì)生長(zhǎng)環(huán)境要求較高，一些自身生長(zhǎng)繁殖所需要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)不能自己合成，需要從宿主細(xì)胞內(nèi)掠奪，如維生素、氨基酸、脂肪酸、膽固醇等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，這種掠奪的過程會(huì)對(duì)宿主細(xì)胞造成損傷。

6.4 產(chǎn)生有毒代謝產(chǎn)物

MS 的生長(zhǎng)繁殖過程中會(huì)分泌大量有毒代謝產(chǎn)物，如神經(jīng)毒素、過氧化氫酶、溶細(xì)胞酶等，損傷宿主細(xì)胞或造成宿主細(xì)胞死亡。

6.5 逃避免疫應(yīng)答

MS 表面膜蛋白中的vlha 蛋白及可變脂蛋白可以幫助MS 逃避宿主的免疫應(yīng)答。vlha 可以通過突變多個(gè)位點(diǎn)、改變抗原決定簇以及粘附結(jié)構(gòu)域來逃避宿主的免疫系統(tǒng)，造成機(jī)體慢性感染。

7 防控

7.1 綜合措施

應(yīng)保持合適的飼養(yǎng)密度，確保雞舍內(nèi)通風(fēng)合理，溫度濕度適宜，減少雞的應(yīng)激反應(yīng)。雞場(chǎng)應(yīng)當(dāng)加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，切實(shí)做好雞場(chǎng)的衛(wèi)生消毒工作，定期消毒并清理糞便，嚴(yán)格管控進(jìn)出車輛，貨車進(jìn)出應(yīng)做好消毒工作。堅(jiān)持從陰性雞場(chǎng)引種，嚴(yán)格把控雞苗質(zhì)量，從源頭防止MS 進(jìn)入雞場(chǎng)。飼養(yǎng)過程中應(yīng)提供全價(jià)飼料，做好MS 的定期檢疫工作，盡量做到全進(jìn)全出的飼養(yǎng)模式，防止與野鳥接觸。在這些管理措施基礎(chǔ)上結(jié)合疫苗注射與藥物防治兩種方法，可有效預(yù)防滑液囊支原體病。

7.2 藥物防治

由于支原體沒有細(xì)胞壁，故常用的作用于細(xì)胞壁的藥物不能應(yīng)用于MS 的防治。一般選用泰樂菌素、氟苯尼考、泰萬菌素、泰妙菌素等藥物進(jìn)行治療。在治療雞滑液囊支原體病時(shí)一般采取間歇用藥的方法，用藥一周停藥一周，再用藥一周。除常規(guī)給藥方法外，針對(duì)呼吸系統(tǒng)癥狀較為嚴(yán)重的病雞還可以用噴霧的方法給藥，可以取得較好的治療效果。治療時(shí)不能在應(yīng)用恩諾沙星的同時(shí)使用氟苯尼考，二者會(huì)產(chǎn)生拮抗作用，可以選用恩諾沙星加替米考星或者恩諾沙星加泰樂菌素聯(lián)合用藥的方法提升治療效果。由于只有少量藥物能夠通過血液循環(huán)達(dá)到靶器官，且不同雞場(chǎng)存在的毒株耐藥性不同，對(duì)藥物的敏感程度不同，單純使用藥物治療的方法不能有效根除MS，只能使癥狀減輕，故應(yīng)采用藥物防治與疫苗預(yù)防相結(jié)合的方法防治雞滑液囊支原體病。

7.3 疫苗預(yù)防

藥物防治是應(yīng)對(duì)MS 感染的手段之一，但由于生產(chǎn)實(shí)踐中缺乏規(guī)范使用，容易造成病菌耐藥性問題和藥物殘留問題。接種疫苗的方法更加經(jīng)濟(jì)、安全、有效，已成預(yù)防MS 感染最重要的手段之一。當(dāng)前對(duì)于MS 疫苗的研究主要集中在弱毒疫苗、滅活疫苗和基因工程疫苗。弱毒疫苗MS-H 株有較強(qiáng)的保護(hù)性和安全性，可通過滴鼻點(diǎn)眼的方式免疫。保護(hù)期能達(dá)到40 周左右，可使蛋雞的產(chǎn)蛋率有一定提升，提高雞蛋的重量和品質(zhì)，但對(duì)于已經(jīng)感染MS 的雞并不能起到保護(hù)效果。MS 滅活疫苗在臨床上有較好的免疫保護(hù)效果，可以刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫反應(yīng)，顯著降低感染率。王昆將實(shí)驗(yàn)中分離到的4種疫苗株滅活處理后，配以相應(yīng)的佐劑制備成滅活疫苗，均有較好的疫苗保護(hù)率。MS 滅活疫苗安全有效，有較高的保護(hù)率，適合在中國(guó)市場(chǎng)推廣使用。當(dāng)前對(duì)于MS基因工程疫苗的研究仍處于起步階段，相較于其他種類疫苗來說，基因工程疫苗成本更低，更易于大規(guī)模生產(chǎn)，能夠?yàn)槠髽I(yè)帶來較好的經(jīng)濟(jì)效益，有較好的發(fā)展前景，因此基因工程疫苗是MS疫苗未來的發(fā)展方向之一。